專利名稱：：益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：中藥制劑作為最具發(fā)展?jié)摿Φ乃幬镔Y源已經(jīng)被全世界所認知的情況下，我國政府已經(jīng)建立了一系列廣泛的政策來應(yīng)對傳統(tǒng)中藥制劑標準化，現(xiàn)代化的要求。其中最重要的就是如何控制中藥制劑的質(zhì)量。目前我們最常用的方法就是選擇中藥材的主要活性成分或其指標性成份，對這些成分的鑒別和含量測定以達到控制這些中藥制劑質(zhì)量的目的。但是，這種只針對中藥及中藥制劑指標性成分進行控制的方法并不能科學(xué)而全面的確保中藥的藥效。人參為滋補強壯藥，幾乎世人皆知。我國使用人參預(yù)防和治療疾病，有著悠久的歷史。其效果不僅早為古今中外無數(shù)醫(yī)學(xué)家所肯定，而且為近代科學(xué)研究所證明。最早對人參藥理功用給予高度評價的，首推《神農(nóng)本草經(jīng)》。這是我國第一部藥物學(xué)經(jīng)典。書中明確指出，人參"主補五臟，安精神，止驚悸，除邪氣，明目，開心益智"。寥寥數(shù)語，充分說明人參的補益作用是多方面的。祖國醫(yī)學(xué)認為，人參的主要作用是大補元氣。宋朝蘇頌《嘉佑圖經(jīng)本草*論人參》中就記載有這么一段話，相傳"欲試二人同走,一含人參一空口，各走三五里許，其不含人參者必大喘，含者氣息自如"以此鑒別人參的真?zhèn)蝺?yōu)劣。由此不難看出，人參具有多方面的藥理功效。益心舒中藥制劑是以人參、麥冬、五味子等七味藥經(jīng)加工制成的制劑，臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。所以在益心舒制劑中五味子的質(zhì)量直接關(guān)系到該制劑的療效，所以對于人參的藥材品質(zhì)控制方法的提高從而確保益心舒中藥制劑的療效顯得十分必要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制益心舒中藥制劑的質(zhì)量，為臨床提供一種療效確切的益心舒中藥制劑，保證用藥的安全和療效，同時能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使消費者能全面認識益心舒中藥制劑的品質(zhì)。本發(fā)明涉及益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，它包括人參的產(chǎn)地、采集、鑒別、含測項目作為該制劑中人參質(zhì)量控制的指標。本發(fā)明所述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，它是將人參的產(chǎn)地、采集、加工、鑒別、含測項目作為該制劑中人參質(zhì)量控制的指標。上述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，是采用以下方法的部分或全部(1)人參的產(chǎn)地為遼寧、吉林、黑龍江、河北等地。(2)人參的采集時間為每年的3-IO月份。(3)人參的加工方法為方法l:挖取的鮮參松土，洗刷干凈，適當日曬，再用硫磺熏蒸過曬干。方法2:挖取的鮮參松土，洗刷干凈，蒸l-4小時，取出烘干或曬干。(4)人參的鑒別為方法h采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例熙制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2—30%硫酸乙醇、或噴以1一10°/。印三酮乙醇等溶液顯色的方法；方法2:采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以人參對照藥材、人參皂苷Rgi、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；(6)含量測定方法為方法l:采用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm;方法2:采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，顯色方法包括噴以2—30%硫酸乙醇或噴以1一10%印三酮乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500750nm;方法3:以高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；上述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，采用以下方法-(1)人參的產(chǎn)地為遼寧、吉林、黑龍江。(2)人參的采集時間為每年的5-9月份。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參松土，洗刷干凈，適當日曬，再用硫磺熏蒸過曬干。(4)人參的鑒別為采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.520W,以人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷-乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，再用正丁醇、水提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以230%硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；(5)人參的含量測定方法為采用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm;，上述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，采用以下方法作為質(zhì)量控制方法-(1)人參的產(chǎn)地為遼寧、吉林、黑龍江的長白山。((2)人參的采集時間為每年的5-9月份且生長期在6年以上。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參松土，洗刷干凈，日曬1天，再用硫磺熏蒸過曬干。(4)人參的鑒別方法為采用薄層色譜法，取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液各10ul，供試品溶液15ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。(5)人參的含量測定方法為是利用HPLC法測定人參中人參皂苷Rgi和人參皂苷Re的總量色譜條件系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg,對照品12.5mg、人參皂苷fRelOmg，加甲醇分別制成每lml含人參皂苷Rgi0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品30粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2%氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Pm)濾過，即得。乂測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液相色譜儀，測定，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的、更進一步的控制一種益心舒中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全性，使用本發(fā)明后，使生產(chǎn)該產(chǎn)品的單位或檢測機構(gòu)從源頭原料人參來控制，確保該益心舒的療效，能夠保證藥物制成品的質(zhì)量；我們在進行試驗時發(fā)現(xiàn)為了達到益心舒中藥制劑的確切療效，就必須從源頭開始控制，包括人參的產(chǎn)地、采集、鑒別、含測項目。這樣更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)，讓消費者全面認識產(chǎn)品品質(zhì)、放心使用這類藥n口o為證明利用本發(fā)明提供的人參質(zhì)量控制方法能更好的控制益心舒中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進行了一系列實驗；試驗例1益心舒中藥制劑中人參產(chǎn)地的考察本實驗通過對相同采集時期的河北人參和東北人參中人參(長白山)總皂苷的含量測定來考察不同產(chǎn)地的人參的品質(zhì)。1.1儀器與藥材Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恒溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。藥材河北人參、東北人參(長白山)。1.2試驗方法1.2.1色譜條件色譜條件系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算應(yīng)不低于2500。1.2.2對照品溶液制備精密稱取人參皂苷Rg,對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別制成每lml含人參皂苷Rgl0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。1.2.3供試品溶液制備取本品30粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2y。氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml,20ml,10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45to)濾過，即得。1.2.4測定法分別吸取對照品及各供試品溶液10pl注入液相色譜儀，將峰面積及濃度均取常用對數(shù)后用外標法計算。1.3結(jié)果和討論1.3.l樣品測定結(jié)果長白山、河北人參藥材樣品，單位(mg/g),結(jié)果見表l一l樣品人參皂苷Rgi人參皂苷Re人參總皂苷河北人參0.200.220.49長白山人參0.280.310.591.3.2討論研究結(jié)果表明，長白山、河北人參中的人參皂苷成分含量差異較大，說明不同產(chǎn)地藥材的種內(nèi)變異造成藥材品質(zhì)的差異。其中以東北地區(qū)的長白山人參為佳，其總皂苷含量最高，故認為綜合評價其品質(zhì)優(yōu)良。試驗例2益心舒中藥制劑中人參采集時期的考察本實驗通過對不同采集期長白山人參中人參總皂苷的含量測定來考察的人參的品質(zhì)。2.1儀器與藥材Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恒溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。藥材東北人參(長白山)。2.2試驗方法2.2.1色譜條件色譜條件系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算應(yīng)不低于2500。2.2.2對照品溶液制備精密稱取人參皂苷R^對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別制成每lml含人參皂苷Rgl0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。2.2.3供試品溶液制備取本品30粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2y。氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Mffl)濾過，即得。2.2.4測定法分別吸取對照品及各供試品溶液10pl注入液相色譜儀，將峰面積及濃度均取常用對數(shù)后用外標法計算。2.3結(jié)果和討論2.3.1結(jié)果不同采集期人參藥材樣品，單位(mg/g)，結(jié)果見表2—1樣品人參皂苷Rgi人參皂苷Re人參總皂苷.—五年生0.16000.16260.3226^—六年生0.26710.28690.5540七年生0.27020.30100.5712八年生0.27260.30660.57922.3.2討論研究結(jié)果表明，不同采集期人參中的皂普類成分含量差異較大，說明不同采集期采集的藥材的種內(nèi)變異造成藥材品質(zhì)的差異。其中以六年以后產(chǎn)的人參為佳，七年以后產(chǎn)的人參雖然總皂苷的含量比六年期的高，但是考慮到增加的總皂苷并不明顯，所以以六年期后采集的人參為佳。試驗例3益心舒中藥制劑中人參的加工方法考察本實驗通過對長白山人參不同的加工方法，依其總皂苷的含量為指標來評價人參加工方法的考察。3.1儀器與材料Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恒溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。樣品A:挖取的新人參洗干凈，剪下塊根，洗凈泥土，除凈須根、雜質(zhì)，暴曬1天，再用硫磺熏蒸過曬干而成。樣品B:挖取的人參洗干凈，剪下塊根，除凈須根、雜質(zhì)即可。3.2試驗方法3.2.1色譜條件色譜條件系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算應(yīng)不低于2500。3.2.2對照品溶液制備精密稱取人參皂苷R^對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別制成每lml含人參皂苷Rgl0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。3.2.3供試品溶液制備取本品30粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，取4g,精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2y。氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml,10ml，10ml),合并正丁醇液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Wn)濾過，即得。3.2.4測定法'分別吸取對照品及各供試品溶液10pl注入液相色譜儀，將峰面積及濃度均取常用對數(shù)后用外標法計算。3.3結(jié)果和討論3.3.1結(jié)果不同加工方法人參藥材樣品，單位(mg/g),結(jié)果見表3—1<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>3.3.2討論研究結(jié)果表明，依照樣品A采集加工的人參以及依照樣品B采集加工的人參中的皂普類成分含量差異較大，說明不同的樣品加工方法對麥冬中的總皂苷成分影響較大，其中樣品A的加工方法為佳?？梢员ＷC人參中總皂苷的含量，所以以樣品A加工方法的人參為佳。試驗例4益心舒中藥制劑中人參鑒別的穩(wěn)定性考察本實驗通過對5批人參進行鑒別方法學(xué)考察，以確定該方法的穩(wěn)定性。4.1標準溶液的制備4.1.1供試品溶液的制備取人參藥材5g，加氯仿-乙醚(1:1)20ml,超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml,加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。4.1.2對照品溶液的制備另取人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。4.2鑒別吸取上述對照品溶液各10ul，供試品溶液15ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點清'晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。4.3結(jié)果供試品和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；同時5批樣品均比較穩(wěn)定，說明此方法可以作為人參藥材的鑒別方法來進行麥冬藥材的鑒別。試驗例5益心舒中藥制劑中人參含測的方法學(xué)考察益心舒膠囊由人參、麥冬、五味子等七味藥材組成，人參是方中君藥，據(jù)報道，人參中主要含皂苷類化合物，已鑒定了29種皂苷成分人參皂苷(Ginsenoside);丙二?；藚⒃碥?；三七皂苷(Notogindenoside);西洋參皂苷(Quinqueoside)。全部皂苷成分分成3種類型，g卩A型，包括人參皂苷Rb^Rb2、Rc、Rd，水解后生成人參萜二醇(Panaxadiol);B型，包括人參皂苷Re、Rf、Rgl、Rg2，水解后生成人參萜三醇(Panaxtriol);C型，人參皂苷Ro，是齊墩果酸(Oleanolicacid)的衍生物。人參中化學(xué)成分的含量測定，文獻報道較多的是人參皂苷Rg,、Rh、Re等皂苷類的含量測定，測定的方法多為高效液相色譜法，薄層掃描法等。本申請人對益心舒中藥制齊:i中的人參皂苷Rgh人參皂苷Re含量進行了測定，并對測定的方法學(xué)進行了研究。1.1儀器Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恒溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器。.1.2試藥甲醇(色譜純、分析純)、磷酸(分析純)、氫氧化鉀(分析純)、乙醚(分析純)、氯仿(分析純)、正丁醇(分析純)、氨水(分析純)、磷酸二氫鉀(分析純)、水為純凈水；人參皂苷Rg^人參皂苷Re對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，人參皂苷Rgi的批號0703-200221，人參皂苷Re的批號0754-200217)。樣品益心舒膠囊及陰性空白樣品(貴州信邦制藥有限公司)。1.3色譜條件色譜柱迪瑪，C18(4.6X200mm);流動相0.1%磷酸溶液-乙腈(80:20);檢測波長203nm;流速lml/min;進樣量1(￥1。1.4系統(tǒng)適用性試驗分別取人參皂苷Rgi、人參皂苷Re對照品溶液、供試品溶液和缺人參藥材的陰性空白溶液注入液相色譜儀，記錄色譜(見圖53)。從圖中可見，人參皂苷R&、人參皂苷Re的保留時間分別為44分鐘和47分鐘，陰性空白色譜圖在人參皂苷Rg,、人參皂苷Re位置處均無峰，人參皂苷Rgh人參皂苷Re和其相近的其它峰分離完全(分離度>1.5)，即本試驗條件下人參皂苷Rgl、人參皂苷Re與其他組分分離完全。理論板數(shù)對照品中人參皂苷Rg,、Re分別為7952和7836;理論板數(shù)樣品中人參皂苷Rgl、人參皂苷Re分別為7889和7451。人參皂苷Rgi、人參皂苷Re與其他組分峰的分離度大于1.5。(見圖55)故定理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于2500。1.5線性關(guān)系考察1.5.1標準溶液的制備精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇溶解，制成每lml含人參皂苷Rg".5188mg人參皂苷Re0.4268nu:;'的混合對照品溶液。1.5.2標準曲線的繪制精密吸取上述混合對照品溶液4W、8W、12W、16^1、分別注入液相色譜儀，記錄色譜(見表5-l)，以峰面積A對質(zhì)量數(shù)(Pg)進行線性回歸計算，得線性回歸方程為人參皂苷Rg"A=325872X-14655，r=0.9999(人參皂苷Rgi在2.075210.376Pg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。)人參皂苷Re:A=292726X-111543，r=0.9999(人參皂苷Re在1.70728.5360)Ltg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。)表5-1人參皂苷Rg^Re線性關(guān)系考察人參皂苷Rg,人參皂苷Re實驗次數(shù)進樣量(Pg)峰面積進樣量(Pg)峰面積-12.07526537971.707239513424.150413294823.414486850636.225620357115.1216139692948.300827033706.82881899491510.37633480978.536023783491.6供試品溶液提取時間的選擇提取方法回流提取，測定結(jié)果見表5-2。_表5-2不同提取時間的考察_提取時間(min)_^_^___100Rgi含量(mg/g)0.59050.74301.07181.01701.0578Re含量(mg/g)0,51460.64710.74280.7479_0.7393從表5-2中可見，提取時間60分鐘即可將制劑中的人參皂苷Rgl、Re提取完全，故選擇加熱回流l小時。1.7精密度試驗取人參皂苷Rg"Re對照品溶液，重復(fù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果見表5-3，人參皂苷Rgi、Re的平均峰面積分別為1632643、1142200;RSD分別為O.98%、2.2%。表5-3人參皂苷測定的精密度試驗進樣次數(shù)12345平均值RSD(%)Rgi峰面積Re峰面積16283491118262162384711613101612807117436016486731119948164953916326430.98113712011422002.191.8重復(fù)性試驗取本品(批號20020509)內(nèi)容物，按質(zhì)量標準(修訂)正文中含量測定項下供試液的制備方法，平行制備5份供試溶液測定，計算結(jié)果列入表5-4，RSD分別為2.41%、1.91%。表5-4益心舒膠囊中人參皂苷的重現(xiàn)性試驗進樣次數(shù)12345平均值RSD00Rgi含量(％)Re含量(％)0.10610.10380.07060.07010.10560.06770.10240.06880.09990.07080.10360.06962.431.891.9穩(wěn)定性試驗取本品(批號20020509)內(nèi)容物，按質(zhì)量標準(修訂)正文中含量測定項下供試液的制備方法制備供試液，分別于0、1、2、4、8、12小時進樣測定人參皂苷峰面積，結(jié)果列入表5-5，人參皂苷RgbRe平均峰面積分別為1643149、1091529，RSD分別為0.78%和0.73%,說明供試液在12小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。表5-5益心舒膠囊中人參皂苷的穩(wěn)定性試驗測定時間(h)0124812平均值RSD(90Rg,峰面積Re峰面積164163910918861648022109254216274851081204166539511056561636028164032716431490.781088358108952510915280.-731.10回收率試驗采用加樣回收法，分別精密稱取5份已測定含量的樣品(人參皂苷Rg"Re的含量分別為0.1036%和0.0696%)約2g，精密加入人參皂苷Rg!(0.5064mg/ml)、Re(0.4084mg/ml)的對照品混合溶液4.Oml，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2。/。氫氧化鉀甲醇溶液50ml，加熱回流1小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液分別用氨試液、水、1%磷酸二氫鉀溶液各洗滌1次，每次40ml，棄去洗滌液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解，并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Wn)濾過，測定，結(jié)果見表5-6、7。表5-6益心舒膠囊中人參皂苷Rgl的回收率試驗試驗樣品量含人參皂苷加入人參皂苷測得量回收率平均回收率RSD次數(shù)(g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%)12.61732.71152.02564.722999.3022.03812.11152.02564.134399.8632.30172.38462.02564.361597.6098.770.9042.00712.07942.02564.068998.2252.31242.39562.02564.398098.85表5-7益心舒膠囊中人參皂苷Re的回收率試驗試驗樣品量含人參皂苷加入人參皂苷測得量回收率平均回收率RSD次數(shù)(g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%)12.61731.82161.63363.445099.3822.03811.41851.63363.026298.4132.30171.60201.63363.219999.0498.630.7242.00711.39691.63362.990497.5452.31241.60941.63363.223098.781.11樣品測定按質(zhì)量標準(修訂)制備供試品和對照品溶液，分別進樣IOW，記錄色譜，測定峰面積，按下式計算含量W:供試品稱樣量(g)W1:平均粒重(g)a旦，,*丄、AxCsx)^含量(wg/權(quán))=-^^sx—式中Ai:供試品溶液峰面積As:對照品溶液峰面積Cs:對照品溶液濃度(mg/ml)10批樣品中人參皂苷總量測定結(jié)果見表5-8,_表5-810批樣品中人參皂苷總量測定結(jié)果_人參皂苷Rg!含量(mg/粒)人參皂苷Re含量(mg/粒)^~12平均值12平均值人參皂苷總量<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>根據(jù)10批樣品測定結(jié)果，人參皂苷Rgi與人參皂苷Re總量在0.2430.954mg/粒范圍內(nèi)，故暫定本品每粒含人參以人參皂苷Rgl(C42H72014)和人參皂苷(C48HS2018)的總量計算，不得少于0.20mg。權(quán)利要求1、益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，特征是它將人參的產(chǎn)地、采集、加工、鑒別、含測項目作為該制劑中人參質(zhì)量控制的指標。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，其特征是采用以下方法的部分或全部-(1)人參的產(chǎn)地為遼寧、吉林、黑龍江、河北等地。(2)人參的采集時間為每年的3-IO月份。(3)人參的加工方法為方法l:挖取的鮮參松土，洗刷干凈，適當日曬，再用硫磺熏蒸過曬干。方法2:挖取的鮮參松土，洗刷干凈，蒸1-4小時，取出烘干或曬干。(4)人參的鑒別為方法1:采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠6&54或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2—30%硫酸乙醇、或噴以1一10%印三酮乙醇等溶液顯色的方法；方法2:采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以人參對照藥材、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；(6)含量測定方法為方法h采用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì),然后用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm;方法2:采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠G&54或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲垸或正丁醇提取后精制再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲垸、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，顯色方法包括噴以2—30%硫酸乙醇或噴以1—10%印三酮乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500750nm;方法3:以高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，其特征在于(1)人參的產(chǎn)地為遼寧、吉林、黑龍江。(2)人參的采集時間為每年的5-9月份。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參松土，洗刷干凈，適當日曬，再用硫磺熏蒸過曬干。(4)人參的鑒別為采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.520W，以人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲垸-乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì)，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們?nèi)我饣旌先軇┨崛『笤贊饪s方法，再用正丁醇、水提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以230%硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；(5)人參的含量測定方法為:采用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質(zhì),然后用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm。4、根據(jù)權(quán)利要求13所述的益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，其特征在于-(1)人參的產(chǎn)地為遼寧、吉林、黑龍江的長白山。(2)人參的采集時間為每年的5-9月份且生長期在6年以上。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參松土，洗刷干凈，日曬1天，再用硫磺熏蒸過曬干。(4)人參的鑒別方法為采用薄層色譜法，取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉(zhuǎn)移到分液,斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液各lOiil，供試品溶液15iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3:7:2),l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105匸加熱至斑點清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。(5)人參的含量測定方法為是利用HPLC法測定人參中人參皂苷R^和人參皂苷Re的總量fi譜條件系統(tǒng)話甲件試脇用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數(shù)以人參皂苷Re峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷R^對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別制成每lml含人參皂苷Rg力.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品30粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2%氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘寧3次，合并洗液和濾液，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45陶)濾過，即得。測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液沖目色譜儀，測定，即得。全文摘要本發(fā)明是一種益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
。益心舒中藥制劑是以人參、黃芪、丹參、麥冬、五味子等七味藥組成，具有益氣復(fù)脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。本發(fā)明提供了一種益心舒中藥制劑中人參的質(zhì)量控制方法，該方法的提供直接向有關(guān)的生產(chǎn)益心舒制劑中人參的品質(zhì)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性和療效，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，為消費者提供一種品質(zhì)優(yōu)良的產(chǎn)品。文檔編號A61K36/8968GK101596275SQ200910102649公開日2009年12月9日申請日期2009年6月30日優(yōu)先權(quán)日2009年6月30日發(fā)明者張觀福申請人:貴州信邦制藥股份有限公司