專利名稱：知母總皂苷在制備治療或預防糖尿病的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及知母總皂苷的新的醫(yī)藥用途，具體地涉及知母總皂苷在制備治療或預防糖尿病的藥物中的應用。
背景技術：
知母是百禾科(liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根莖。大量研究證明，知母總皂苷是其主要活性成分，17種單體皂苷已見報道，但尚未見有關知母總皂苷抑制α-葡萄糖苷酶活性，降低餐后血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩(wěn)定的藥物的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了知母總皂苷在制備治療或預防糖尿病的藥物中的應用。
本發(fā)明提供了知母總皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩(wěn)定方面的應用。
本發(fā)明所述的知母總皂苷，其中100％＞知母總皂苷的含量≥50％，100％＞菝蕷皂苷元的含量≥30％，其可以通過如下方法制備知母藥材粉碎成粗粉，加乙醇浸泡，然后常溫超聲提取，提取液合并過濾，濾液濃縮，濃縮液上大孔吸附樹脂，不同醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至濃膏，干燥得知母總皂苷；但不限于此。
具體實施例方式
制備例1制備知母總皂苷知母藥材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小時，然后常溫超聲提取三次，溶劑倍數(shù)為4∶4∶3，提取時間每次3小時，提取液合并過濾，濾液減壓濃縮至乙醇含量30％左右，濃縮液上處理好的AB-8大孔吸附樹脂，上樣后的AB-8大孔吸附樹脂分別用30％乙醇洗脫2個柱體積，50％乙醇洗脫1個柱體積，95％乙醇洗脫2個柱體積，95％乙醇洗脫液減壓濃縮至濃膏，將濃膏真空干燥得知母總皂苷；其總皂苷含量54％，菝蕷皂苷元的含量32.3％。
制備例2制備知母總皂苷知母藥材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小時，然后常溫超聲提取三次，溶劑倍數(shù)為4∶4∶3，提取時間每次3小時，提取液合并過濾，濾液減壓濃縮至乙醇含量30％左右，濃縮液上處理好的AB-8大孔吸附樹脂，上樣后的AB-8大孔吸附樹脂分別用30％乙醇洗脫2個柱體積，50％乙醇洗脫1個柱體積，95％乙醇洗脫2個柱體積，95％乙醇洗脫液減壓濃縮至濃膏，將濃膏真空干燥得知母總皂苷；其總皂苷含量84％，菝蕷皂苷元的含量52.3％。
試驗例一對α-葡萄糖苷酶的體外抑制實驗1.材料知母總皂苷按制備例1制備；大鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供拜糖蘋德國拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號1011812.方法取大白鼠上端小腸20g，加4℃預冷的PH6.8磷酸緩沖液60ml，勻漿，4℃、4000rpm離心20min，取上清分裝入試管中，-20℃冷凍保存?zhèn)溆茫蝗∶敢?小腸勻漿液)0.2ml加PH6.8磷酸緩沖液0.7ml，37℃水浴10min，加入0.5mol/L蔗糖0.1ml，反應20min后，加入1ml0.1mol/LNaCO3終止反應；酶法測定葡萄糖濃度，分3組，空白對照組，知母總皂苷組和拜糖蘋組，每組三管，平行測定；將在37℃，每分鐘1L溶液中生成0.01mmol葡萄糖定義為一個酶活力單位，見表1。
表1知母總皂苷對α-葡萄糖苷酶活性的體外抑制

試驗例二對正常小鼠血糖的影響實驗1.材料小白鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供；知母總皂苷按制備例2方法制備；2.方法取小白鼠50只，雌雄各半，體重24-28g，測空腹血糖，隨機分為5組正常對照組，知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)。連續(xù)灌胃7天，末次給藥7h后斷尾采血，測血糖濃度；然后斷頭處死小鼠，取血液離心分離血清，置-20℃冰箱保存，做胰島素放射免疫測定備用；小鼠剖腹，自肝內(nèi)門靜脈按10ml/只的劑量，用注射器將生理鹽水緩慢注入肝臟，將肝臟中殘留血液沖洗掉，取出肝臟，稱重，按1g肝加入PH7.4等滲磷酸鹽緩沖液50ml用組織研磨器制備勻漿，取勻漿液0.5ml，加入4％的磺基水楊酸溶液0.5ml，充分混勻，離心，棄沉淀，蒽酮法測定肝糖原含量，見表2。
表2知母總皂苷對正常小鼠血糖、血胰島素水平和肝糖原含量的影響

與正常對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01試驗例三對糖尿病模型小鼠血糖的影響實驗1.材料小白鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供；知母總皂苷按制備例方法制備；優(yōu)降糖天津力生制藥廠產(chǎn)品，批號9903042.方法取小白鼠150只，雌雄各半，體重24-28g，10只為正常對照組，其余尾靜脈注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h后測空腹血糖，選取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠60只，按血糖高低隨機分為6組糖尿病模型對照組、優(yōu)降糖組和知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg，150mg/Kg，450mg/Kg，1350mg/Kg)，使各組的血糖無顯著性差異。灌胃給藥10d，于末次給藥后7h，斷尾采血，測血糖濃度；然后斷頭處死小鼠，取血液離心分離血清，置-20℃冰箱保存，做胰島素放射免疫測定備用；小鼠剖腹，自肝內(nèi)門靜脈按10ml/只的劑量，用注射器將生理鹽水緩慢注入肝臟，將肝臟中殘留血液沖洗掉，取出肝臟，稱重，按1g肝加入PH7.4等滲磷酸鹽緩沖液50ml用組織研磨器制備勻漿，取勻漿液0.5ml，加入4％的磺基水楊酸溶液0.5ml，充分混勻，離心，棄沉淀，蒽酮法測定肝糖原含量，見表3。
表3知母總皂苷對四氧嘧啶高血糖小鼠血糖、血胰島素水平和肝糖原含量的影響

與正常對照組相比△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01試驗例四對正常小鼠糖耐量的影響實驗1.材料知母總皂苷按制備例1制備；大鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供拜糖蘋德國拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號1011812.方法取小白鼠60只，雌雄各半，體重24-28g，測空腹血糖，隨機分為6組正常對照組、拜糖蘋組和知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各組的血糖無顯著性差異。給藥后，以10g/Kg劑量淀粉灌胃，分別于給淀粉后0.5h、1h、2h測血糖，見表4。
表4知母總皂苷對正常小鼠糖耐量的影響

與正常對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01
試驗例五對糖尿病小鼠糖耐量的影響實驗1.材料知母總皂苷按制備例1制備；大鼠山東省天然藥物工程技術研究中心提供拜糖蘋德國拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號1011812.方法取小白鼠150只，雌雄各半，體重24-28g，10只作為正常對照組，其余尾靜脈注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h后測空腹血糖，選取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠50只，隨機分為5組拜糖蘋組和知母總皂苷4個劑量組(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各組的血糖無顯著性差異。給藥后，以10g/Kg劑量淀粉灌胃，分別于給淀粉后0.5h、1h、2h測血糖，見表5。
表5知母總皂苷對四氧嘧啶模型小鼠糖耐量的影響

與模型對照組相比*P＜0.05，**P＜0.0權利要求
1.知母總皂苷在制備治療或預防糖尿病的藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求1所述的應用，知母總皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩(wěn)定方面的應用。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的應用，其中知母總皂苷中100％＞知母總皂苷含量≥50％，100％＞菝蕷皂苷元含量≥30％。
4.一種知母總皂苷的制備方法將知母藥材粉碎，加70％乙醇浸泡4小時，常溫超聲提取三次，溶劑倍數(shù)為4，4，3，提取時間為3小時，合并濾液，過濾后減壓濃縮至醇含量為30％，上處理好的AB-8大孔樹脂，用30％乙醇洗脫2個柱體積，50％乙醇洗脫1個柱體積，95％乙醇洗脫2個柱體積，收集95％乙醇洗脫液，濃縮至膏，真空干燥即得。
全文摘要
本發(fā)明提供了知母總皂苷在制備治療或預防糖尿病的藥物中應用，具體地提供了知母總皂苷在抑制α－葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促進糖代謝，平衡血糖，降低血脂，促進胰島素分泌，保持血糖長期穩(wěn)定方面的應用。
文檔編號A61K31/7042GK1679866SQ20051005463
公開日2005年10月12日 申請日期2005年3月7日 優(yōu)先權日2004年3月8日
發(fā)明者劉志峰, 李春梅, 雷慶忠, 李大磊, 李慎軍 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司