專(zhuān)利名稱(chēng)：增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法。
復(fù)方磷酸萘酚喹是由具有增效抗瘧作用價(jià)值的抗瘧藥磷酸萘酚喹(簡(jiǎn)稱(chēng)萘酚喹)(I)和具有同樣增效抗瘧作用價(jià)值的青蒿素類(lèi)抗瘧化合物(II)按一定劑量比例組合而成。
磷酸萘酚喹在抗瘧藥領(lǐng)域是一個(gè)尚未被廣泛應(yīng)用的四氫萘酚類(lèi)抗瘧化合物，是一種新結(jié)構(gòu)類(lèi)型的瘧原蟲(chóng)血液裂殖體(無(wú)性體)的殺滅劑。該藥具有如下特點(diǎn)①對(duì)多種抗藥性瘧原蟲(chóng)株引起的惡性瘧和間日瘧均有明顯療效；②臨床用藥量較小(成人治療總量0.8-1.0克，預(yù)防量為0.4-0.5克)；③有持效抗瘧作用，病人治愈率高(在上述劑量下，治愈率達(dá)98-100％)；④有增效抗瘧作用價(jià)值(與其它抗瘧藥、尤其是與青蒿素類(lèi)抗瘧藥伍用有明顯的增效抗瘧作用)；其不足之處是殺瘧原蟲(chóng)速度較青蒿素類(lèi)緩慢，若給與大劑量或超過(guò)治療量(1克以上)時(shí)可產(chǎn)生一過(guò)性肝損傷。
青蒿素類(lèi)化合物(II)，包括從黃花蒿(Artemisia amua L)分離提取出來(lái)的青蒿素(R＝O)以及半合成衍生物青蒿琥酯(R為-O-(C＝O)(CH2)2COONa)、蒿甲醚(R為O)(CH3)蒿乙醚(R為O-CH2CH3)和二氫青蒿素(R為OH)，均為同一類(lèi)含有過(guò)氧基團(tuán)倍半萜酯的新結(jié)構(gòu)，是瘧原蟲(chóng)血液內(nèi)裂殖體(無(wú)性體)的殺滅劑。該類(lèi)化合物的抗瘧特點(diǎn)是①對(duì)抗氯喹惡性瘧疾有效；②對(duì)瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期無(wú)性體殺滅速度快，因此控制瘧疾癥狀快；③有增效抗瘧作用價(jià)值(與萘酚喹伍用有明顯的增效抗瘧作用)，其缺點(diǎn)是在一般治療劑量和短療程(3天)時(shí)殺蟲(chóng)不徹底，原蟲(chóng)復(fù)燃率高(達(dá)50％以上)，需加大劑量和延長(zhǎng)療程(5-7天)才能徹底殺滅瘧原蟲(chóng)而提高治愈率，但是往往由于劑量的增加和療程的延長(zhǎng)而導(dǎo)致藥物毒性的增加，因此在臨床應(yīng)用上受到了極大的限制。
此外，當(dāng)前占世界瘧疾發(fā)病總數(shù)80％的惡性瘧疾對(duì)常用抗瘧藥已產(chǎn)生抗藥性蟲(chóng)株并迅速傳播蔓延，雖然各國(guó)都在研制防治抗藥性蟲(chóng)株的抗瘧新藥，但是瘧原蟲(chóng)對(duì)新藥產(chǎn)生抗藥性的速度遠(yuǎn)比研制新藥的速度快，以致新藥的使用壽命大大縮短。有鑒于此，對(duì)于抗瘧新藥的研究必須采用兩種或兩種以上有增效作用價(jià)值的藥物組成增效復(fù)方的研究渠道。
本發(fā)明提出的復(fù)方是經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)證明相互有增效抗瘧作用價(jià)值的萘酚喹與青蒿素類(lèi)化合物中的青蒿素、或其衍生物青蒿琥酯、蒿甲醚、蒿乙醚或二氫青蒿素相配伍，按一定劑量比例組成復(fù)方，制成片劑，用于治療和預(yù)防各種瘧疾(包括抗藥性的惡性瘧及間日瘧)。
鑒于萘酚喹具有對(duì)瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期無(wú)性體有持效殺滅作用的特點(diǎn)以及青蒿素類(lèi)化合物(包括蒿琥酯、蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿素以及二氫青蒿素)均有對(duì)瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期無(wú)性體快速殺滅的優(yōu)勢(shì)，其目的在于發(fā)揮兩類(lèi)抗瘧藥各具不同的優(yōu)點(diǎn)，揚(yáng)棄各有的弱點(diǎn)(如萘酚喹殺蟲(chóng)速度較緩慢，青蒿素類(lèi)殺蟲(chóng)雖快而不徹底，原蟲(chóng)的復(fù)燃率高)，從中找出兩藥合適的劑量比例，組成有增效作用的復(fù)方，以發(fā)揮兩藥在抗瘧治療中的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)作用，既能延緩瘧原蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性的速度和時(shí)間，又可以達(dá)到較高的治愈率，而且可利用其持效作用的特點(diǎn)，作為長(zhǎng)效預(yù)防藥。
通過(guò)復(fù)方磷酸萘酚喹對(duì)鼠瘧、猴瘧以及人惡性瘧的療效和對(duì)鼠、狗的急性及長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)表明，萘酚喹和青蒿素(或青蒿琥酯、或蒿甲醚、或蒿乙醚或二氫青蒿素)對(duì)鼠瘧的增效劑量比為1∶1-50；對(duì)猴瘧和惡性瘧的增效劑量比為1∶1-50 以該比例配制的復(fù)方進(jìn)行毒性試驗(yàn)證明無(wú)增毒現(xiàn)象。
萘酚喹和青蒿素是以最佳劑量配比，在添加不影響藥效或產(chǎn)生毒性的固體輔料情況下，配制成復(fù)方片劑。
本發(fā)明復(fù)方磷酸萘酚喹的技術(shù)方案及其實(shí)施例如下實(shí)施例一復(fù)方磷酸萘酚喹的藥物劑量配比(一)通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)確定本復(fù)方萘酚喹和青蒿素類(lèi)化合物(青蒿素、或青蒿琥酯、或蒿甲醚、或蒿乙醚、或二氫青蒿素)的劑量配比關(guān)系和兩藥增效作用用伯氏瘧原蟲(chóng)(Plasmodium berghei)感染的小白鼠為試驗(yàn)?zāi)Ｐ停哉辉囼?yàn)設(shè)計(jì)和4日抑制試驗(yàn)法，測(cè)定各相加劑量組瘧原蟲(chóng)抑制率，并以直線(xiàn)回歸方程計(jì)算法分別求出各系列相加劑量的ED50和ED90。
(二)用相加線(xiàn)圖示法分析復(fù)方的作用類(lèi)型在縱坐標(biāo)和橫坐標(biāo)線(xiàn)上分別標(biāo)出兩個(gè)單藥的ED90，并將其連成線(xiàn)作為相加線(xiàn)。凡兩藥相加劑量組ED90的點(diǎn)位于相加線(xiàn)附近者為藥物間呈相加作用；位于相加線(xiàn)下方、并遠(yuǎn)離此線(xiàn)者為藥物間有增效作用；位于相加線(xiàn)上方，且遠(yuǎn)離此線(xiàn)者為藥物間的拮抗作用。
(三)增效指數(shù)的計(jì)算和復(fù)方中兩個(gè)單藥最佳配比的確定以相加線(xiàn)以下或靠近相加線(xiàn)的點(diǎn)進(jìn)行藥物對(duì)比試驗(yàn)，并以復(fù)方中的單藥ED50-ED90，分別與復(fù)方ED50、ED90中的單藥劑量之比值為增效指數(shù)。選擇復(fù)方中單藥的增效指數(shù)均大于2以上較高者的復(fù)方兩單藥劑量比為最佳劑量比。
按此公式求出該復(fù)方抗鼠瘧兩藥最佳劑量配比及增效指數(shù)。
實(shí)施例二復(fù)方磷酸萘酚喹的藥效評(píng)價(jià)(一)鼠瘧藥效評(píng)價(jià)采用“4日抑制試驗(yàn)”方法，在感染伯氏瘧原蟲(chóng)的小白鼠中測(cè)定復(fù)方磷酸萘酚喹及其單藥口服給藥(灌胃)，每天一次，連續(xù)四天，測(cè)定伯氏鼠瘧正常株和抗氯喹株的ED50、ED90(mg/kg/day.MKD)，并以抗氯喹株ED50或ED90除以正常株ED50或ED90求出抗性指數(shù)(或稱(chēng)抗性倍數(shù))I50、I90。
(二)猴瘧藥效評(píng)價(jià)用Davidson氏方法，設(shè)定萘酚喹和青蒿素不同三個(gè)劑量比例配伍組和兩個(gè)單藥劑量組，每組3只猴子。以諾氏猴瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期無(wú)性體感染恒河猴，當(dāng)瘧原蟲(chóng)紅細(xì)胞寄生率升至較高時(shí)，口服(灌胃)一次給藥。觀(guān)察各猴原蟲(chóng)24小時(shí)下降率、轉(zhuǎn)陰時(shí)間及105天內(nèi)有無(wú)再現(xiàn)(或稱(chēng)復(fù)燃)情況，以判斷凡是萘酚喹與青蒿素配伍取得最佳療效者，也即取得復(fù)方兩藥的最佳劑量配比。
(三)對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)的藥效評(píng)價(jià)采用氯喹敏感性體內(nèi)試驗(yàn)(觀(guān)察28天)方法，以萘酚喹、青蒿素片劑設(shè)定不同四個(gè)劑量比伍用，以及兩個(gè)單藥，一次口服給藥，治療無(wú)合并癥瘧疾病人。以退熱時(shí)間、瘧原蟲(chóng)24小時(shí)下降率、轉(zhuǎn)陰時(shí)間和28天內(nèi)瘧原蟲(chóng)無(wú)性體有無(wú)再現(xiàn)(或復(fù)燃)來(lái)判斷藥效。凡是取得最佳療效者，也是萘酚喹和青蒿素伍用所取得的最佳劑量配比。
實(shí)施例三復(fù)方磷酸萘酚喹殺蟲(chóng)速度的測(cè)試采用已感染鼠瘧正常株高密度原蟲(chóng)血癥的小白鼠一次灌胃給藥治療后，觀(guān)察原蟲(chóng)數(shù)量變化，測(cè)定瘧原蟲(chóng)下降90％、轉(zhuǎn)陰時(shí)間及轉(zhuǎn)陰率或復(fù)燃時(shí)間，并比較復(fù)方和單藥的殺蟲(chóng)效果。
實(shí)施例四、復(fù)方磷酸萘酚喹對(duì)瘧疾的治愈效果試驗(yàn)采用一次給藥，連續(xù)觀(guān)察30天的方法，對(duì)感染瘧原蟲(chóng)正常株的小鼠一次灌胃給藥后，間隔3-4天檢查瘧原蟲(chóng)血癥情況，直至30天血中不出現(xiàn)原蟲(chóng)者為完全治愈。
實(shí)施例五復(fù)方磷酸萘酚喹抗藥性觀(guān)察(一)交叉抗藥性以Peters氏“4日抑制試驗(yàn)”法，將復(fù)方及其組分單藥萘酚喹和青蒿素分別對(duì)抗氯喹(RCQ)、抗萘酚喹(RNQ)和抗青蒿素(RQ)株及敏感株的鼠瘧進(jìn)行藥物敏感性測(cè)試。以各藥對(duì)于抗藥株原蟲(chóng)與敏感株原蟲(chóng)的ED90之比，求出抗性指數(shù)(即抗性倍數(shù))I90，從而判斷瘧原蟲(chóng)對(duì)復(fù)方藥物的抗藥性程度，其標(biāo)準(zhǔn)是I90＝1為敏感I90＝2-10為輕度抗性I90＝11-100為中度抗性I90＞100為重度抗性(二)延緩抗性以口服(灌胃)給藥，藥物劑量遞增法培育藥物敏感的伯氏鼠瘧原蟲(chóng)，使之產(chǎn)生藥物抗性株，然后測(cè)定其抗性出現(xiàn)的時(shí)間及抗性強(qiáng)度。
實(shí)施例六復(fù)方磷酸萘酚喹藥理毒理學(xué)評(píng)價(jià)(一)一般藥理學(xué)試驗(yàn)以小白鼠、大白鼠和貓為試驗(yàn)動(dòng)物模型，藥物劑量以復(fù)方對(duì)鼠瘧敏感株藥效ED90(MKD)的1、10倍；另設(shè)不給藥對(duì)照組。動(dòng)物一次口服(灌胃)給藥后，進(jìn)行各項(xiàng)藥理指標(biāo)觀(guān)察和測(cè)定，即小白鼠自發(fā)性活動(dòng)次數(shù)及其對(duì)熱板致痛作用反應(yīng)和大鼠體溫以及貓的血壓、心率、心電和呼吸頻率的變化情況判斷藥物對(duì)神經(jīng)、心血管和呼吸系統(tǒng)的影響。
(二)毒理學(xué)試驗(yàn)按照國(guó)家《新藥審批辦法》條例進(jìn)行復(fù)方急性毒性和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，以了解該復(fù)方有無(wú)增毒作用1.急性毒性試驗(yàn)(1)小白鼠急性毒性試驗(yàn)將小白鼠按體重隨機(jī)分為10組，每組10只，雌雄各半，按萘酚喹與青蒿素合適劑量比例分別設(shè)計(jì)一次口服或腹控注射兩種給藥途徑各5個(gè)劑量組，連續(xù)觀(guān)察14天用Bliss法計(jì)算LD50、LD5，并以L(fǎng)D50與ED50，LD5與ED95分別算出化療指數(shù)和安全系數(shù)。
另設(shè)萘酚喹、青蒿素單藥各5個(gè)劑量組，一次口服給藥，測(cè)定LD50，按Finney公式計(jì)算復(fù)方的混合毒力。混合毒力值＞2.7為增毒作用，＜0.4為毒力拮抗作用，0.5-2.6為毒力相加作用。
(2)大白鼠急性毒性試驗(yàn)用Wistar大鼠，按萘酚喹與青蒿素設(shè)定比例設(shè)定5個(gè)劑量組，每組10只，雌雄各半，一次口服(灌胃)給藥，觀(guān)察14天，記錄動(dòng)物反應(yīng)和死亡數(shù)，計(jì)算LD50、LD95。
(3)狗急性毒性試驗(yàn)選6只健康雄性比格狗，用萘酚喹與青蒿素按設(shè)定比例的復(fù)方片劑，按Diechman50％計(jì)量遞增法設(shè)6個(gè)劑量，每個(gè)劑量1只狗，一次口服給藥，觀(guān)察14天。記錄中毒表現(xiàn)持續(xù)或消失時(shí)間，特點(diǎn)和死亡時(shí)間。未出現(xiàn)中毒表現(xiàn)的最高劑量為最大耐受劑量(MTD)，引起死亡最小劑量為近似致死劑量(ALD)。試驗(yàn)死亡狗需作尸檢。
2.長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(1)大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)以萘酚喹與青蒿素按設(shè)定比例設(shè)3個(gè)劑量組，用Wistar大白鼠隨機(jī)分組，每個(gè)劑量組和正常對(duì)照(不給藥)組各24只，雌雄各半，每天口服給藥一次，連續(xù)14天。每天觀(guān)察動(dòng)物表現(xiàn)，停藥后24小時(shí)，每組隨機(jī)活殺2/3(雌雄各8只)，剩余1/3(雌雄各4只)繼續(xù)觀(guān)察至28天活殺。
觀(guān)察項(xiàng)目動(dòng)物精神行為、活動(dòng)、皮毛等變化情況，首藥后每7天測(cè)每只鼠體重及攝食量一次；作血液學(xué)、血液生化學(xué)和病理組織學(xué)及骨髓涂片、切片檢查，對(duì)各項(xiàng)檢查數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和顯著性測(cè)定，綜合分析各項(xiàng)檢查結(jié)果，為復(fù)方對(duì)大鼠的中毒致死劑量、中毒劑量和基本安全劑量及中毒靶器官、病變的可逆性情況提供分析依據(jù)。
(2)狗的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)用健康比格狗，以萘酚喹和青蒿素按設(shè)定配比的復(fù)方片劑分3個(gè)劑量組另設(shè)不給藥的正常對(duì)照組，每組6只狗，雌雄各半，每天口服給藥一次，連續(xù)14天。停藥后24小時(shí)活殺2/3(雌雄各2只)，余下1/3(雌雄各1只)繼續(xù)觀(guān)察至28天活殺。
觀(guān)察項(xiàng)目生理指標(biāo)及臨床表現(xiàn)包括食欲、惡心、嘔吐、大小便行動(dòng)步態(tài)、精神狀態(tài)、活動(dòng)、抽搐，死亡狀態(tài)等，每天逐項(xiàng)記錄一次。體重、心率、食量、呼吸、體溫等，每周測(cè)一次。
血液學(xué)試驗(yàn)、血液生化分析，尿液分析、心電圖、眼底、骨髓涂片及切片和病理組織學(xué)檢查等，所有檢查數(shù)據(jù)均經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和顯著性測(cè)定。
綜合各項(xiàng)檢查和觀(guān)察結(jié)果，。確定復(fù)方對(duì)狗的中毒致死劑量、中毒劑量和基本安全劑量及中毒靶器官，病變的可逆性情況等。
權(quán)利要求
1.一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法，該復(fù)方是由抗瘧化合物磷酸萘酚喹(I)的增效劑量與青蒿素類(lèi)抗瘧化合物(II)增效劑量的組合制成復(fù)方片劑，
2.如權(quán)利要求1所述，一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法，其特征在于該復(fù)方是由具有增效作用價(jià)值的磷酸萘酚喹(I)和有同樣增效作用價(jià)值的青蒿素類(lèi)化合物(II)中的青蒿素(R為O)共同組成，
3.如權(quán)利要求1.所述，一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法，其特征在于具有增效抗瘧作用價(jià)值的磷酸萘酚喹(I)還可以與(1)具有同樣增效抗瘧作用價(jià)值的青蒿素類(lèi)化合物(II)中的青蒿琥酯(R為O-(C＝O)(CH2)2COONa)組成復(fù)方，(2)或與具有同樣增效抗瘧作用價(jià)值的青蒿素類(lèi)化合物(II)中的蒿甲醚(R為O-CH3)組成復(fù)方，(3)或與具有同樣增效抗瘧作用價(jià)值的青蒿素類(lèi)化合物(II)中的蒿乙醚(R為O-CH2CH3)組成復(fù)方，(4)或與具有同樣增效作用價(jià)值的青蒿素類(lèi)化合物(II)中的二氫青蒿素(R為OH)組成復(fù)方
4.如權(quán)利要求1所述，一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法，其特征在于該復(fù)方對(duì)鼠瘧有效配伍劑量比是由1分磷酸萘酚喹(I)和1-50份青蒿素類(lèi)化合物(II)中的任何一種化合物(如青蒿素或青蒿琥酯或蒿甲醚或蒿乙醚或二氫青蒿素)組成，
5.如權(quán)利要求1所述一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法，其特征在于該復(fù)方對(duì)猴瘧和人惡性瘧的有效配伍劑量比是由1份磷酸萘酚喹(I)和1-50份青蒿素類(lèi)化合物(II)中的青蒿素或蒿琥酯、或蒿甲醚、或蒿乙醚、或二氫青蒿素)組成，
6.如權(quán)利要求1所述一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法，其特征在于該復(fù)方可在添加不影響藥效的固體輔料情況下按組份單藥的最佳劑量配比制成復(fù)方片劑。
全文摘要
一種增效抗瘧藥復(fù)方磷酸萘酚喹的制備方法,由一個(gè)有增效作用價(jià)值的化合物磷酸萘酚喹和另一個(gè)有同樣增效作用價(jià)值的化合物青蒿素及其衍生物(或蒿琥酯、蒿甲醚、蒿乙醚、二氫青蒿素)以及添加符合藥物學(xué)規(guī)定的添加劑混合制成復(fù)方,以提高該復(fù)方對(duì)瘧疾的治療效果。
文檔編號(hào)A61K31/675GK1203078SQ97111840
公開(kāi)日1998年12月30日 申請(qǐng)日期1997年6月24日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月24日
發(fā)明者丁德本 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所