專利名稱：黃花草木犀總皂苷及其制備方法和藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種從黃花草木犀中提取獲得的總皂苷，及該總皂苷制備方法和其藥物用途。
背景技術(shù)：
黃花草木犀(Melilotus. officinalis. L.)是豆科草木犀屬的一年生或二年生草本植物，又名黃香草木犀。目前，對(duì)黃花草木犀中香豆素類化合物研究較多，并就富含香豆素類化合物的草木犀提取物及富含黃酮、多酚和香豆素類物質(zhì)的草木犀提取物在鎮(zhèn)痛、止血及消炎等方面申報(bào)了專利。皂苷(saponins)是一類以三萜或留體為苷元具有較高分子量的糖苷類化合物，皂苷類化合物廣泛分布于植物之中，是許多中藥的重要生物活性成分， 已成國(guó)內(nèi)外研究的熱門課題。而目前國(guó)內(nèi)外對(duì)黃花草木犀總皂苷類化學(xué)成分分離純化技術(shù)及藥理活性研究的還是空白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種黃花草木犀總皂苷及其制備方法和藥物用途。本發(fā)明黃花草木犀總皂苷是由下列制法得到的(1)取黃花草木犀干燥全草，加入40 90%有機(jī)溶劑提取2 4次，每次0. 5 3小時(shí)，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂柱，先用水洗至中性，再以10% 20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50% 80%乙醇洗脫，收集50% 80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，得含量20% 90%黃花草木犀總皂苷。有機(jī)溶劑采用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮；提取方法包括加熱回流法、超聲提取法、超臨界提取法、浸漬法、微波法；大孔樹脂采用SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100, DlOU DM301、 DM130。本發(fā)明在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所指的腫瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、腸癌及骨肉瘤。本發(fā)明還提供用本發(fā)明的草木犀總皂苷以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制備的藥物制劑。這些藥物制劑選自以下劑型片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、泡騰片劑、舌下片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、微球劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、散劑、 膏劑、口服液、混懸齊 、溶液齊 、氣霧齊 、注射劑，注射乳齊 、凍干粉針，還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑。本發(fā)明的含有草木犀總皂苷的藥物制劑，在制備藥物制劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體來自抗氧劑、鏊合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、濕潤(rùn)劑、 溶劑、緩釋材料、腸溶材料、PH調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用載體如甘露糖醇、右旋糖苷、 乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化鈉、硅衍生物、纖維素、纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、聚乙二醇、環(huán)糊精、磷脂類材料、 滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣等。本發(fā)明通過對(duì)黃花草木犀各有效部位的研究，發(fā)現(xiàn)富含總皂苷的草木犀提取物 總皂苷含量為20% 90%，具有較好的抗炎、消腫、止血、抑制腫瘤乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、腸癌及骨肉瘤活性。本發(fā)明的有益效果填補(bǔ)了制備草木犀總皂苷的空白并擴(kuò)展了其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用范圍，從而提高了該類制劑在國(guó)際市場(chǎng)的況競(jìng)爭(zhēng)力。口服一次200mg 600mg，每日兩次。


圖1是樣品最大吸收?qǐng)D2是標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3是CMX-M對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用圖4是CMX-M對(duì)PC3M細(xì)胞增殖的抑制作用圖5是CMX-M對(duì)ACC細(xì)胞增殖的抑制作用圖6A是乳腺癌MCF-7對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)圖6B是乳腺癌MCF-7經(jīng)CMX組作用后細(xì)胞形態(tài)圖7A是腮腺癌ACC對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)圖7B是腮腺癌ACC經(jīng)CMX組作用后細(xì)胞形態(tài)圖8A是前列腺癌PC3M對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)圖8B是前列腺癌PC3M經(jīng)CMX組作用后細(xì)胞形態(tài)圖
圖9A是腸癌SW620對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)圖9B是腸癌SW620經(jīng)CMX組作用后細(xì)胞形態(tài)圖IOA是肺癌A549對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)圖IOB是肺癌A549經(jīng)CMX組作用后細(xì)胞形態(tài)圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(1)取黃花草木犀干燥全草，加入40%乙醇加熱回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂DlOl，先用水洗至中性，再以10%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50 %乙醇洗脫，最后收集50 %乙醇洗脫液濃縮干燥，得到含量 20% 90%的黃花草木犀總皂苷。實(shí)施例2(1)取黃花草木犀干燥全草，加入65%乙醇加熱回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂D201，先用水洗至中性，再以15%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用65 %乙醇洗脫，最后收集65 %乙醇洗脫液濃縮干燥，得到含量 20% 90%的黃花草木犀總皂苷。
實(shí)施例3(1)取黃花草木犀干燥全草，加入90%乙醇加熱回流提取4次，每次0. 5小時(shí)，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物，(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂AB8，先用水洗至中性，再以20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用80 %乙醇洗脫，最后收集80 %乙醇洗脫液濃縮干燥，得到含量 20% 90%的黃花草木犀總皂苷。在實(shí)施例中，有機(jī)溶劑還可選取甲醇、乙酸乙酯、丙酮，提取方法采取超聲提取法、 超臨界提取法、浸漬法、微波法，大孔樹脂選取SP825、DS401、DS100、HPD600、HPD100、DM301、 DM130。下面通過實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)驗(yàn)例一、黃花草木犀總皂苷的提取方法的研究實(shí)驗(yàn)儀器與材料超聲提取器(KQ-250B型)、超臨界萃取器(HA420-40-96-EX型)、滲漉器、電子天平(DT100型)、UV-1700(日本島津)、HWC3L-1型微波萃取器(天水華圓制藥設(shè)備廣州分公司)、圓底燒瓶、冷凝管、其余試劑均為分析級(jí)。實(shí)驗(yàn)方法1、總皂苷提取方法的研究(1)加熱回流提取法取黃花草木犀干燥全草(粉碎2 如m) 4份，每份各50g，分別加入40 90%有機(jī)溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，加熱回流提取2 4次，每次0. 5 3小時(shí)。合并提取液，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計(jì)算收率，結(jié)果見表1。(2)超聲法提取法取黃花草木犀干燥全草(粗粉)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機(jī)溶劑 (乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，超聲(30 60KHZ)提取2 4次，每次0. 5 1小時(shí)。合并提取液，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計(jì)算收率，結(jié)果見表2。(3)超臨界提取法取黃花草木犀干燥全草(粗粉)50g，投入萃取釜中，設(shè)置分離釜I溫度40°C、分離釜I壓力7. OMPa、分離釜II壓力6MPa，溫度!35°C，在萃取壓力20 50Mpa，萃取溫度30 50°C，萃取時(shí)間1 3小時(shí)，C02流量20 30L · h，萃取級(jí)數(shù)1 2，乙醇夾帶劑濃度25 70%條件提取總皂苷。萃取達(dá)到預(yù)定時(shí)間后，收集提取物，除去水分稱其質(zhì)量，計(jì)算得率，結(jié)果見表3。(4)浸漬提取法取黃花草木犀干燥全草(20 60目)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機(jī)溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，浸泡提取2 4次，每次12 48小時(shí)。合并提取液，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計(jì)算收率，結(jié)果見表4。(5)滲漉提取法
取黃花草木犀干燥全草(40 100目)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機(jī)溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)50 IOOml (溶劑量為藥材量的1 2倍)浸泡2 4小時(shí)，裝入滲漉器中，緩緩從滲漉器頂部加40 90%有機(jī)溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，放置M 48小時(shí)后打開下口開關(guān)，使?jié)B漉液緩緩流出。60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計(jì)算收率，結(jié)果見表5。(6)微波提取法取黃花草木犀干燥全草(40 100目)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機(jī)溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)4000 5000ml使用微波提取器提取，微波功率 (190 250W)提取2 4次，每次5 25min。合并提取液，過濾，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計(jì)算收率，結(jié)果見表6。2、測(cè)定方法(1)最大吸收波長(zhǎng)的確定①標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取黃花草木犀苷A對(duì)照品(自制)4. 40mg于25ml量瓶中，加甲醇超聲使其完全溶解，并定容至刻度，使?jié)舛葹?. 176mg/ml。②樣品溶液的制備取加熱回流提取法所得干膏1. 0g，精密稱定，用50ml水使其充分溶解，過濾，濾液置分液漏斗中，用等量的水飽和正丁醇萃取三次，合并萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜罥OOml容量瓶中，定容至刻度，為樣品溶液。③最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定分別取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液及樣品溶液各0. 5ml，分別置于IOml具塞試管中，沸水浴中揮干，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.細(xì)1，高氯酸1. 6ml，密塞，于65°C水浴中加熱20min，取出，冰水浴中冷卻后加入冰醋酸8ml，混勻，分別為對(duì)照品與樣品液。以相應(yīng)試劑為空白，在400 900nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定其吸收波長(zhǎng)。結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)品與樣品溶液在Mlnm處均有最大吸收，所以將測(cè)定波長(zhǎng)設(shè)為541nm，結(jié)果見圖1。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于IOml具塞試管中，沸水浴中揮干，照2. 2. 3項(xiàng)下自“加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 4ml, ”起，在Mlnm下測(cè)定其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 15. 602x+0. 0877, r = 0. 9995 (n =幻。表明黃花草木犀苷 A 在 0. 0088 0. 044mg/ml 范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線形關(guān)系。結(jié)果見圖2。(3)總皂苷含量測(cè)定取上述樣品溶液各0. :3ml，置于IOml具塞試管中，沸水浴中揮干，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.細(xì)1，高氯酸1. 6ml，密塞，于65°C水浴中加熱20min，取出，冰水浴中冷卻后加入冰醋酸8ml，混勻，以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照，在Mlnm處測(cè)定吸光度，計(jì)
笪弁。計(jì)算公式
6黃花草木犀總皂苷含量
權(quán)利要求
1.一種黃花草木犀總皂苷，其特征在于是由下列制法得到的(1)取黃花草木犀干燥全草，加入40 90%有機(jī)溶劑提取2 4次，每次0.5 3小時(shí)，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂柱，先用水洗至中性，再以10% 20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50% 80%乙醇洗脫，收集50% 80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，得含量20% 90%黃花草木犀總皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃花草木犀總皂苷，其特征在于有機(jī)溶劑采用乙醇、甲醇、 乙酸乙酯、丙酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃花草木犀總皂苷，其特征在于提取方法包括加熱回流法、超聲提取法、超臨界提取法、浸漬法或微波法。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃花草木犀總皂苷，其特征在于大孔樹脂采用SP825、D201、 DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301 或 DM130。
5.如權(quán)利要求1所述的黃花草木犀總皂苷的制備方法。
6.如權(quán)利要求1所述的黃花草木犀總皂苷在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求6所述的黃花草木犀總皂苷在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于腫瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、腸癌及骨肉瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及黃花草木犀總皂苷及其制備方法和藥物用途，屬于中藥領(lǐng)域。取黃花草木犀干燥全草，加入40～90%有機(jī)溶劑提取2～4次，每次0.5～3小時(shí)，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂柱，先用水洗至中性，再以10%～20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50%～80%乙醇洗脫，收集50%～80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，得含量20%～90%黃花草木犀總皂苷。本發(fā)明在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明填補(bǔ)了制備草木犀總皂苷的空白并擴(kuò)展了其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用范圍。
文檔編號(hào)A61P7/04GK102178725SQ20111011917
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者嚴(yán)銘銘, 于紅威, 吳巖, 周媛, 張銀玲, 楊智, 王醫(yī)術(shù), 趙大慶 申請(qǐng)人:長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)