專利名稱：一類具酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥領域，具體地說涉及從中藥桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的化合物及其制備方法和制藥用途。
背景技術：
桑葉，又名“鐵扇子”，屬于?？粕僦参锷Morus alba L.)。桑葉作為藥用始載于《神農本草經》，其味苦、性寒，具有補血、疏風、散熱、益肝通氣、降壓利尿等功效?，F(xiàn)代大量的藥理學研究證明了桑葉具有降血糖、降血壓、降血脂、清除自由基、抗衰老、抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌等諸多藥理作用。桑葉化學成分有黃酮、留體、香豆素、揮發(fā)油、生物堿、氨基酸、有機酸、維生素和多糖等。 酪氨酸酶作為黑色素合成的關鍵酶，其異常過量表達可導致人體的色素沉著性疾病及黑色素瘤等。因此，酪氨酸酶抑制劑可作為黑色素抑制劑應用于醫(yī)藥等領域。本發(fā)明涉及從桑葉中提取分離具有顯著酪氨酸酶抑制活性的化合物及其制劑，能夠有效預防和治療黑色素合成異常導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病癥。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，是從桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的六種多酚類化合物，包括(2S)-Euchrenone a7，桑辛素M-6-β-D-批喃葡萄糖苷[Moracin M 6- ( β -D-glucopyranoside) ] , (2S)-7-輕基-8-輕乙基-4’ -甲氧基黃燒-2’ -O- β -D-卩比喃葡萄糖苷[(2S) -7-hydroxyl-8-hydroxyethyl_4’ -methoxylflavane-2' -O- β -D-glucopyranoside], (2S) ~1~ 甲氧基 _8_ 輕乙基-4’ -輕基黃燒-2’ -O- β -D-卩比喃葡萄糖苷[(2S) -7-methoxyl-8-hydroxyethyl-4’ -hydroxyIf Iavane-2’ -O- β -D-glucopyranoside]， (2S) -8-輕乙基-7, 4’ - 二甲氧基黃燒-2’ -O- β -D-批喃葡萄糖苷[(2S) -8-hydroxyethyl-7, 4，-dimethoxylf lavane-2' -O- β -D-glucopyranoside]，桑辛素D (Moracin D)，其結構如下
權利要求
1.一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)(I)將桑葉用70%乙醇溶液回流提取，提取物減壓濃縮至浸膏；(2)將浸膏混懸于適量水中，用石油醚脫脂，乙酸乙酯萃取；(3)將乙酸乙酯萃取部分用正相硅膠分離，洗脫劑為體積比為100:(Γ 90:10的石油醚和乙酸乙酯，體積比為82:18的石油醚和乙酸乙酯，體積比為78:22飛5:35的石油醚和乙酸乙酯，體積比為60:40的石油醚和乙酸乙酯及乙酸乙酯；(4)分別收集體積比為82:18的石油醚和乙酸乙酯洗脫液、體積比為60:40的石油醚和乙酸乙酯洗脫液及乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的化合物；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和甲醇，梯度洗脫； 所述化合物包括(2S)-Euchrenone a7，桑辛素D，桑辛素Μ_6_β-D-吡喃葡萄糖苷，(2S)-7-羥基-8-羥乙基-4’-甲氧基黃烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，(2S)_7_甲氧基-8-羥乙基-4’ -羥基黃烷_2’ -Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷。
2.根據權利要求I所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，(2S)-Euchrenone a7化合物通過以下步驟獲得步驟(4)收集體積比為60:40的石油醚和乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μπι,流動相為水A 和甲醇 B，梯度洗脫程序如下0 min,30%B ；20 min,50%B ；27 min,50%B ；28 min,60%B ；35min，60%B ；36 min,70%B ；50 min,70%B ；60 min,80%B ;流速10ml/min，檢測波長:210nm，收集48. 5 min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
3.根據權利要求I所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，桑辛素D化合物通過以下步驟獲得步驟(4)收集體積比為82:18的石油醚和乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μ m,流動相為水A和甲醇B,梯度洗脫程序如下0 min,5%B ；5 min,30%B ；27 min,30%B ；40 min,35%B ；41 min,67%B ；65 min,67%B ；80 min,80%B ;流速10ml/min，檢測波長210nm，收集72. 5min的色譜峰，減壓回收溶齊U，即得。
4.根據權利要求I所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，桑辛素M-6-i3-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X2L2 mm, 7 μ m,流動相為水A和甲醇B,梯度洗脫程序如下0 min,25%B ；32 min,44%B ；47 min,44%B ；48 min,55%B ；71 min,60%B ；75 min,100%B ;流速10ml/min，檢測波長210nm，收集31. 9min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
5.根據權利要求I所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，(2S)-7-羥基-8-羥乙基-4’ -甲氧基黃烷-2，-Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7P m,流動相為水A和甲醇B,梯度洗脫程序如下0 min, 25%B ；32 min,44%B ；47 min, 44%B ；48 min,55%B ；71 min,60%B ；75 min，100%B，流速10ml/min，檢測波長210nm ;收集 58. Omin的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
6.根據權利要求I所述的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，其特征在于，(2S)-7-甲氧基-8-羥乙基-4’ -羥基黃烷_2’ -Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通過以下步驟獲得步驟(4)收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱Agilent Zorbax 513_(18柱250X21.2 mm, 7P m,流動相為水A和甲醇B,梯度洗脫程序如下0 min, 25%B ；32 min,44%B ；47 min, 44%B ；·48 min,55%B ；71 min，60%B ；75 min, 100%B ;流速10ml/min,檢測波長210nm,收集 64. 7min的色譜峰，減壓回收溶劑，即得。
7.根據權利要求I所述方法制備的一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物在制備預防和治療黑色素合成異常導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病癥藥物中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述藥物由(2S)-Euchrenonea7、桑辛素D、桑辛素M-6-i3-D-卩比喃葡萄糖苷、(2S)-7-羥基-8-羥乙基-4’-甲氧基黃烷-2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖苷、(2S) -7-甲氧基-8-羥乙基-4’ -羥基黃烷_2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖苷、(2S)-8-羥乙基-7，4’- 二甲氧基黃烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷中的一種加入藥劑學上可接受的輔料，按照藥劑學上記載的制劑制備方法制成。
全文摘要
本發(fā)明提供一類具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制備方法，包括六種從桑葉中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚類化合物。通過將藥材經乙醇水溶液加熱提取，濃縮，硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用制備液相色譜繼續(xù)分離，收集溶液，溶液濃縮干燥后得到樣品并進行結構鑒定。本發(fā)明還提供了從桑葉中分離上述多酚類化合物的方法。本發(fā)明提供的六種多酚類化合物具有較強的酪氨酸酶抑制活性，能夠有效預防和治療黑色素合成異常導致的人體色素沉著性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病癥，可用于制備治療此類疾病的藥物。
文檔編號A61K31/352GK102924421SQ20121043301
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月4日 優(yōu)先權日2012年11月4日
發(fā)明者程翼宇, 張玉峰, 范驍輝, 邵青 申請人:浙江大學