專利名稱：：用于提供谷氨酰胺的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及通過口服有效量的N-乙?；?L-谷氨酰胺、或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽來提供谷氨酰胺補(bǔ)充的方法。
背景技術(shù)：
：谷氨酰胺是人體中最豐富的氨基酸。它占位于骨骼肌中的游離氨基酸的60％以上以及占總循環(huán)氨基酸的20％以上。谷氨酰胺牽涉很多機(jī)體功能，包括糖原異生、核苷酸合成、酸堿平衡以及其它關(guān)鍵的代謝過程。研究表明，谷氨酰胺是迅速?gòu)?fù)制各種細(xì)胞尤其是胃腸道和粘膜細(xì)胞所使用的重要代謝底物。谷氨酰胺在人活體內(nèi)空腸(小腸的一部分)中可以被有效吸收。由于谷氨酰胺實(shí)際上可以由機(jī)體的所有組織合成得到，因此它并未被認(rèn)為是必需氨基酸。據(jù)信當(dāng)機(jī)體處于正常的生理狀態(tài)時(shí)，它可以產(chǎn)生足以維持機(jī)體所需量(也就是消耗谷氨酰胺的組織)的谷氨酰胺。然而眾多研究顯示，在異常的生理狀態(tài)下(也就是疾病和代謝困難)，谷氨酰胺的生產(chǎn)變得不足以滿足機(jī)體的需要。因此，可以更確切地把谷氨酰胺看作是一種有條件的必需氨基酸。例如，多項(xiàng)研究已經(jīng)將谷氨酰胺歸類到腸損傷的情形中。Souba，W.W.；Smith，R.J.；和Wilmore，D.J.GlutamineMetabolismbytheIntestinalTract.JPEN9(5)608-617(1985)；Furst，P.；Albers，S和Stehle，P.Evidenceforanutritionalneedforglutamineincatabolicpatients.KidneyIntl.36(Suppl.27)S-287-S-292(1989)；Klimberg，V.S.，等人Oralglutamineaccelerateshealingofthesmallintestineandimprovesoutcomeafterwholeabdominalradiation。已經(jīng)表明谷氨酰胺是用于培養(yǎng)海拉細(xì)胞的主要能量來源。Reitzer，L.J.；Wice，B.M.；和Kennell，D.Evidencethatglutamine，notsugar，isthemajorenergysourceforculturedHeLacells.J.Biol.Chem.254(8)2669-2676(1979)。另外，還表明谷氨酰胺可以優(yōu)先被腫瘤細(xì)胞利用，導(dǎo)致谷氨酰胺在癌癥患者中被逐漸損耗。Souba，W.W.glutamineandCancer.Ann.Surg.218(6)715-728(1993)。過去已經(jīng)開始在各種營(yíng)養(yǎng)配方食品中補(bǔ)充谷氨酰胺。補(bǔ)充就意味著向該配方食品中加入額外的谷氨酰胺(可以是游離氨基酸，也可以是其它相對(duì)濃縮的形式，例如水解后的小麥麩質(zhì))。作為天然存在的氨基酸，谷氨酰胺以一定的含量存在于所有的蛋白質(zhì)中，因而在含有蛋白質(zhì)的任何營(yíng)養(yǎng)配方食品中它都具有一定的含量。然而，谷氨酰胺僅僅含有一定的少量最天然存在的蛋白質(zhì)，因此為了制備含量超過一定水平的谷氨酰胺配方食品，必須加入補(bǔ)充形式的谷氨酰胺。這些補(bǔ)充了谷氨酰胺的配方食品中的一些在市場(chǎng)上是面向那些代謝困難的患者、GI功能受損的患者(例如由嚴(yán)重的多發(fā)性損傷、腹瀉、炎性腸病、GI手術(shù)引起的GI功能受損、由于化學(xué)療法或放射療法引起的嚴(yán)重?zé)齻驌p傷)、具有吸收不良癥狀和/或急性損傷的患者(例如克羅恩氏病)。制備這種富含谷氨酰胺的補(bǔ)充制劑的最簡(jiǎn)便的方法是通過麩質(zhì)的水解，麩質(zhì)作為多肽的復(fù)合物的混合物，其特征在于含有大量的谷氨酰胺。由于其中麩質(zhì)被水解成碎片的形式，因此這些產(chǎn)品在操作上被認(rèn)為不含麩質(zhì)。然而，使用這類富含谷氨酰胺的“無麩質(zhì)”化合物存在潛在的危險(xiǎn)，這是因?yàn)辂熧|(zhì)是腹腔疾病的啟動(dòng)環(huán)境因子，已經(jīng)表明麩朊的小碎片對(duì)于腹腔患者具有毒性作用。腹腔疾病是一種自體免疫腸病，在易感個(gè)體中它通過攝取含麩質(zhì)的谷類而被引發(fā)。小麥麩質(zhì)中的麩朊部分以及其它谷類中的類似的醇溶性蛋白質(zhì)是引起腸道損傷的環(huán)境因子。目前已經(jīng)證實(shí)，腹腔疾病是對(duì)麩質(zhì)攝取進(jìn)行不適當(dāng)T細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的結(jié)果。該疾病還與主要的組織相容性復(fù)合物中的人類白細(xì)胞抗原(HLA)有關(guān)。并且在持續(xù)存在麩質(zhì)的條件下，這種疾病能夠使自身長(zhǎng)期存在。典型的腸道損傷的特征在于吸收性絨毛減少以及小囊增生，這完全可以通過從患者進(jìn)食中排除含麩質(zhì)的谷類而得到解決。最近統(tǒng)計(jì)表明，在全球人口中通常每100-300個(gè)個(gè)體中就有多達(dá)1個(gè)可能受到這種狀況影響。腹腔疾病的特征進(jìn)一步還在于一連串的明顯妨礙生活質(zhì)量的并發(fā)癥，這些并發(fā)癥在多數(shù)情形下還會(huì)威脅生命，例如粘膜淋巴瘤。由于具有上述的醫(yī)學(xué)優(yōu)勢(shì)，因此人們采取各種努力以將谷氨酰胺摻入營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中。困惱這種努力的一個(gè)問題在于谷氨酰胺在水溶液中的穩(wěn)定性有限。已知游離的谷氨酰胺在含水介質(zhì)中降解形成焦谷氨酸和谷氨酸。許多研究表明，焦谷氨酸是嚙齒動(dòng)物體內(nèi)的神經(jīng)毒素。C.F.deMello等人NeurochemicaleffectsofL-pyroglutamicacid.Neurochem.Res.20(12)1437-1441(1995)；McGreer，E.G.和Singh，E.Neurotoxiceffectsofendogenousmaterialsquinolinicacid，L-pyroglutamicacid，andthyroidreleasinghormone(TRH).Exp.Neurol.16(3-4)410-413(1984)；Rieke，G.K.等人L-PyroglutamateanalternativeneurotoxinforarodentmodelofHuntington′sdisease.Exp.Neurol.104(2)147-154(1989)。當(dāng)進(jìn)食這種營(yíng)養(yǎng)配方食品時(shí)，這種降解既生成焦谷氨酸，同時(shí)還減少了體內(nèi)可利用的谷氨酰胺含量。因此，游離谷氨酰胺作為營(yíng)養(yǎng)源中的補(bǔ)充谷氨酰胺來源的用途主要局限于粉狀配方食品，這種粉狀配方食品在進(jìn)食之前可以用水立即或者幾乎立刻(24-48小時(shí))再水化，并且再水化后最好在冰凍條件下儲(chǔ)存。這類粉狀配方食品包括Alitra(RossProductsDivisionofAbbottLaboratories)、Nu-Immu(EnjoyFoods)、和VivonexPlus(Sandoz)。這些制劑可以分別提供大約25.4、20.1和14.5g谷氨酰胺/1500千卡熱量(根據(jù)分析)。另外，Mawatari等人的歐洲專利申請(qǐng)EP1097646公開了含有谷氨酰胺和/或含有谷氨酰胺的肽的改良奶粉組合物的用途。雖然這類產(chǎn)品對(duì)于患者的保健具有重要作用，但是粉狀制品被美國(guó)多數(shù)衛(wèi)生保健部門認(rèn)為并不是最好的。由于在很多美國(guó)社區(qū)中缺乏經(jīng)過培訓(xùn)的私人醫(yī)生，因此衛(wèi)生保健部門仍然非常希望現(xiàn)成進(jìn)食的營(yíng)養(yǎng)配方食品(RTF)。另外，這類營(yíng)養(yǎng)配方食品必須具有至少12個(gè)月的貯藏壽命以被市場(chǎng)接受。因此，游離的谷氨酰胺因其穩(wěn)定性有限而不適合于這類RTF產(chǎn)品。研究人員繼續(xù)尋找在溶液中具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性的谷氨酰胺來源。例如，Guerrant等人在標(biāo)題為“StableGlutamineDerivativesforOralandIntravenousRehydrationandNutritionTherapy”的美國(guó)專利5,561,111中公開了丙氨酸-谷氨酰胺扮演這種角色的用途?？偟膩碚f，Guerrant等人認(rèn)為可以在谷氨酰胺上安置酰基保護(hù)基，但是并沒有提供生物學(xué)數(shù)據(jù)以證明這種主張。另外，該文獻(xiàn)也沒有提供任何有關(guān)含有一定量的這類衍生物的口服或靜脈內(nèi)化合物的特殊制劑的指導(dǎo)。正如Gandini等人在“HPLCDeterminationofPyroglutamicAcidasaDegradationProductinParenteralAminoAcidFormulations”Chromatographia，vol.36，pp.75-78(1993)中所指出的那樣，這種疏忽對(duì)于這類溶液所存在的配制問題而言非常重要。在該文中，作者認(rèn)為，為了解決谷氨酰胺降解為焦谷氨酸的問題，已經(jīng)有人建議過使用二肽，但是問題在于這樣導(dǎo)致所得到的溶液的氨基酸含量在質(zhì)量上不均衡。作者還認(rèn)為谷氨酰胺衍生物即乙酰基-谷氨酰胺具有低的生物利用度。Gurrant等人缺乏生物學(xué)數(shù)據(jù)與該領(lǐng)域其它研究人員的工作非常相關(guān)。Palmerini等人給小鼠口服用放射性同位素標(biāo)記的N-乙?；?L-谷氨酰胺?！癠ptakeofDoubly-LabeledN-Acetyl-L-GlutamineinRatBrainandIntestinalMucosainVivo”，F(xiàn)armaco，vol.36(7)，pp.347-355(1981年7月)。Palmerini等人證實(shí)N-乙?；鵏-谷氨酰胺(NAQ)是跨腸內(nèi)粘膜被完整吸收的。由于谷氨酰胺的基本活性之一是營(yíng)養(yǎng)內(nèi)臟的上皮細(xì)胞，因此乙?；倌軋F(tuán)未被腸水解將會(huì)使本領(lǐng)域技術(shù)人員不把NAQ作為營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中谷氨酰胺的來源。這種官能團(tuán)主要出現(xiàn)在氨基酸的腸內(nèi)吸收過程中。Magnusson等人在“UtilizationofIntravenouslyAdministeredN-Acetyl-L-GlutamineinHumans”Metabolism，vol.38(8)，suppl.1(8月)，pp.82-88(1989)中討論了使用營(yíng)養(yǎng)配方食品中的N-乙?；?L-谷氨酰胺所存在的問題，他們發(fā)現(xiàn)在尿中排出了20-40％的通過靜脈內(nèi)給予的N-乙?；?L-谷氨酰胺的劑量。Wallace等人也提到過尤其在小鼠中可能存在的其它問題，他們最后認(rèn)為可能存在食欲不振以及不能充分利用乙?；碾念惱鏝-乙?；?(丙氨酸)2的問題。“Uptakeofacetylatedpeptidesfromthesmallintestineinsheepandtheirnutritivevalueinrats”BritishJournalofNutrition，v.80，pp.101-108(1998)。發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)N-乙?；鵏-谷氨酰胺具有作為人口服谷氨酰胺補(bǔ)充劑的效用。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)人體的腸組織可以利用作為N-乙?；鵏-谷氨酰胺谷氨酰胺的來源。因此，可以將N-乙酰基-L-谷氨酰胺摻入計(jì)劃供人體消耗的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品中。這些組合物具有長(zhǎng)期的穩(wěn)定性，并且可以以人體可生物利用的形式提供N-乙?；?L-谷氨酰胺。該N-乙酰基L-谷氨酰胺可以以酸或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的形式給予。根據(jù)在非人類的其它動(dòng)物身上完成的早期研究成果，上述發(fā)現(xiàn)是預(yù)先所預(yù)料不到的?？梢詫-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽摻入適合人體消耗的任意一種液態(tài)組合物中。適宜的組合物的實(shí)例包括含水溶液例如口服的再水化溶液、以及液體營(yíng)養(yǎng)配方食品(包括腸配方食品、口服配方食品、成人用配方食品、兒科患者用配方食品和嬰兒用配方食品)。N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的用量可以隨意變化，但是通常所述組合物應(yīng)該含有足以獲得至少10mg總谷氨酰胺/kg體重/天的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。附圖描述圖1以圖表形式描述了N-乙?；?L-谷氨酰胺在不同pH值和環(huán)境溫度下的穩(wěn)定性。對(duì)于pH5.0至pH8.0的樣本，所有的值相同。圖2以圖表形式描述了當(dāng)在室溫下保存N-乙?；?L-谷氨酰胺水溶液180天之后，在該溶液中在2.0-8.0的pH范圍內(nèi)形成的降解產(chǎn)物。圖3以圖表形式描述了在本文所述內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)中在向分離的豬腸環(huán)中加入谷氨酰胺或N-乙?；?L-谷氨酰胺后殘留在腸腔中的該物質(zhì)作為時(shí)間的函數(shù)。殘留的被分析物以占計(jì)時(shí)起點(diǎn)時(shí)的被分析物的百分?jǐn)?shù)表示。圖4以圖表形式描述了在本文所述內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)中在向分離的豬腸環(huán)中引入該物質(zhì)后所加入的葡萄糖殘留在腸腔中的量作為時(shí)間的函數(shù)。殘留的葡萄糖以占計(jì)時(shí)起點(diǎn)時(shí)的量的百分?jǐn)?shù)表示。圖5以圖表形式描述了豬袢門血液中的谷氨酰胺含量(mcg/mL)作為給藥后時(shí)間的函數(shù)，其中向這些豬的分離的腸環(huán)中引入不同的物質(zhì)(葡萄糖鹽水對(duì)照、谷氨酰胺的葡萄糖鹽水溶液或者N-乙?；?L-谷氨酰胺的葡萄糖鹽水溶液)。圖6以圖表形式描述了在本文所述的內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)之后所測(cè)得的豬腸空腸粘膜中的谷氨酰胺和谷氨酸鹽的含量(以mcg/克濕粘膜表示)。圖7示出了來自進(jìn)食了ENSUREPLUS配方食品的健康豬(A、B組)以及進(jìn)食了補(bǔ)充有酪蛋白酸鹽(C、D組)、谷氨酰胺(E、F組)或NAQ(G、H組)的配方食品30天的蛋白質(zhì)能量營(yíng)養(yǎng)不良的豬的空腸的腸細(xì)胞的電子透射顯微圖，對(duì)其炎癥信號(hào)例如清晰的細(xì)胞質(zhì)間隙和淋巴細(xì)胞滲透現(xiàn)象進(jìn)行了分析。圖8示出了來自進(jìn)食ENSUREPLUS配方食品的健康豬(A、B組)以及進(jìn)食補(bǔ)充有酪蛋白酸鹽(C、D組)、谷氨酰胺(E、F組)或NAQ(G、H組)的相同配方食品30天的蛋白質(zhì)能量營(yíng)養(yǎng)不良的豬的回腸腸細(xì)胞的電子透射顯微圖，對(duì)其炎癥信號(hào)例如清晰的細(xì)胞質(zhì)間隙和淋巴細(xì)胞滲透現(xiàn)象進(jìn)行了分析。圖9示出了不同產(chǎn)品/化合物對(duì)于在未接受治療的腹腔疾病患者的粘膜上出現(xiàn)細(xì)胞凋亡和發(fā)炎的幾率的影響。圖10示出了接受N-乙?；劝滨０?A)和P5(B)治療的粘膜樣本的上皮TUNEL表達(dá)模式。圖11示出了接受N-乙?；劝滨０?A)和P5(B)治療的粘膜樣本的上皮下區(qū)室中的CD25表達(dá)模式。詳細(xì)描述在本申請(qǐng)中使用的下述術(shù)語具有下面指定的含義a)“總谷氨酰胺”是指來自任意來源的被表述為谷氨酰胺的可生物利用或可潛在利用的谷氨酰胺的總量。其可能包括以游離的谷氨酰胺形式提供的谷氨酰胺、作為肽或完整蛋白質(zhì)的一部分的谷氨酰胺存在的谷氨酰胺以及其它可生物利用的谷氨酰胺來源，例如N-乙?；?L-谷氨酰胺。不包括谷氨酰胺降解的副產(chǎn)物(例如焦谷氨酸等)。作為這種計(jì)算的實(shí)例，如下描述了一種假定的產(chǎn)品。一種含有60克/升含完整和輕微水解蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)體系的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品，它包括i.1.1克/升的游離谷氨酰胺，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法測(cè)量。ii.含有50.0克/升蛋白質(zhì)的完整和輕微水解的蛋白質(zhì)的混合物，它通過已經(jīng)公開的方法分析(例如通過如Fouques等人，“StudyoftheConversionofAsparagineandGlutamineofproteinsintoDiaminopropionicandDiaminobutyricAcidsUsing[Bis(trifluoroacetoxy)iodo]benzenePriortoAminoAcidDetermination.”Analyst，Volume116，(May)，pp529-531(1991)的方法)，含有3.4克谷氨酰胺/100克蛋白質(zhì)。iii.11.6克/升的N-乙?；?L-谷氨酰胺，它含有9.0克根據(jù)下式計(jì)算的谷氨酰胺因此，“總谷氨酰胺”為這三種來源的總和，即1.1克/L(游離)+(3.4g/100g蛋白質(zhì)×50g蛋白質(zhì)/L)+9.0克/L(NAQ)＝11.8克。b)“mmole”是指毫摩爾(也就是1摩爾的1/1000)c)術(shù)語“營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽”是指適合用于適合對(duì)人口服給藥的液體組合物中的N-乙酰基-L-谷氨酰胺的鹽。N-乙酰基-L-谷氨酰胺的營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽是其中羧基上的氫被另一陽離子替代的鹽。這類鹽可以在N-乙?；?L-谷氨酰胺的最終分離和純化過程中制備得到或者單獨(dú)地通過將羧基與適宜的堿例如金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽、或碳酸氫鹽或者與氨水或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)制備得到。營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽可以基于堿金屬或堿土金屬例如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、和鋁以及無毒的季氨和季胺陽離子例如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基苯基胺、1-麻黃胺(1-ephenamine)、以及N，N′-二芐基乙二胺?？捎糜谛纬蓧A式加成鹽的其它代表性的有機(jī)胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。d)說明書或權(quán)利要求書中涉及電解質(zhì)用量的地方應(yīng)該被解釋為指電解質(zhì)在口服的再水化溶液中的最終濃度。自來水通常含有殘留的鈉、氯等。在本申請(qǐng)中，鈉值為40mEq是指存在于口服的再水化溶液中的全部鈉等于40mEq，包括加入的鈉以及用于制備口服的再水化溶液的水中所存在的鈉。e)本申請(qǐng)中涉及數(shù)字范圍的地方應(yīng)該被理解為其被形容詞“大約”修飾。另外，任何數(shù)字范圍均應(yīng)該被認(rèn)為給涉及該范圍子集的權(quán)利要求提供了支持。例如，公開了1-10的范圍應(yīng)該被認(rèn)為在說明書和權(quán)利要求書中給該范圍內(nèi)的任意子集提供了支持(也就是范圍2-9、3-6、4-5、2.2-3.6、2.1-9.9等)。本發(fā)明提供了通過口服有效量的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽向人提供谷氨酰胺補(bǔ)充的方法和組合物。適合用于該營(yíng)養(yǎng)配方食品中的N-乙酰基-L-谷氨酰胺可以利用眾所周知的常規(guī)化學(xué)合成手段制備，例如在適宜的堿催化劑(例如吡啶)存在下用乙酸酐孵育游離的L-谷氨酰胺，接著進(jìn)行合成，通過重結(jié)晶進(jìn)行適當(dāng)?shù)募兓?，這樣可以得到適宜的食品級(jí)的純化合物。實(shí)際上，很多精通氨基酸化學(xué)的化學(xué)公司都可以提供食品級(jí)的N-乙?；?L-谷氨酰胺(例如KyowaHakkoKogyoCo，Ltd.，Tokyo，Japan或Flamma，s.p.a.，Italy)?；蛘?，也可以利用其它方法(例如微生物發(fā)酵，參見JP51038796、JP57001994、JP57016796)制備適宜的食品級(jí)N-乙?；?L-谷氨酰胺。N-乙?；?L-谷氨酰胺的營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽為其羧基上的氫被另一陽離子替代的鹽。這類鹽可以在N-乙?；?L-谷氨酰胺的最終分離和純化過程中制備得到或者單獨(dú)地通過將羧基與適宜的堿例如金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽、或碳酸氫鹽或者與氨水或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)制備得到。營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽可以基于堿金屬或堿土金屬例如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、和鋁以及無毒的季氨和季胺陽離子例如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基苯基胺、1-麻黃胺(1-ephenamine)、以及N，N′-二芐基乙二胺?？捎糜谛纬蓧A式加成鹽的其它代表性的有機(jī)胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、和哌嗪。如果需要的話，可以使用來自Sigma的適宜的藥品級(jí)N-乙?；?谷氨酰胺。向人提供谷氨酰胺補(bǔ)充的方法包括口服有效量的N-乙?；?谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。通常，N-乙?；?L-谷氨酰胺可以以液體的形式服用，例如作為口服的再水化溶液、運(yùn)動(dòng)飲料、或者腸配方食品的一部分。有效量的N-乙?；?谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽優(yōu)選為足以提供大約10-50g總谷氨酰胺/天或者至少大約140mg總谷氨酰胺/kg體重/天的量、更優(yōu)選為至少250mg總谷氨酰胺/kg體重/天(mg/kg/天)的量。N-乙酰基-L-谷氨酰胺可以由來自大約1-100％的患者每日基本消耗的總谷氨酰胺提供，優(yōu)選由來自大約10-95％、更優(yōu)選為大約75-90％的患者每日基本消耗的總谷氨酰胺提供。如果N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽作為提供供患者消耗的谷氨酰胺的唯一來源，那么N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽的優(yōu)選量?jī)?yōu)選為至少大約0.7毫摩爾/kg/天。更優(yōu)選地，有效量的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽可以為至少大約1.0毫摩爾/kg/天。尤其更優(yōu)選有效量的N-乙?；?L-谷氨酰胺可以為至少大約1.5毫摩爾/kg/天。如上所述，為了提供250mg/kg/天的總谷氨酰胺所需要的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的用量隨患者所消耗的所有其它蛋白質(zhì)組分中的谷氨酰胺含量的改變而改變。作為一個(gè)總的原則，為了充分獲得本發(fā)明的益處，患者應(yīng)該消耗至少大約0.7至大約4.0毫摩爾的N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽/kg/天。更低的用量可能也是有益的，這取決于蛋白質(zhì)體系中其它組分的總谷氨酰胺含量?？偟膩碚f，應(yīng)該向患者提供足夠的N-乙?；?L-谷氨酰胺，其遞送量為至少大約140mg的總谷氨酰胺/kg體重/天，更優(yōu)選為至少大約250mg總谷氨酰胺/kg體重/天。可以采取方法向成人、兒童和嬰兒提供谷氨酰胺補(bǔ)充。術(shù)語兒童是指年齡為1歲至大約16歲的(即成人期)人。術(shù)語嬰兒是指包括所有年齡小于1歲的人，還包括早熟嬰兒和輕微早產(chǎn)嬰兒。術(shù)語早熟嬰兒是指在懷孕的37周之前出生和/或出生時(shí)少于2500克的嬰兒，術(shù)語輕微早產(chǎn)嬰兒是指在懷孕的23-28周出生的嬰兒。本文所使用的術(shù)語未成年人包括兒童和嬰兒。給成人、兒童和嬰兒進(jìn)食的谷氨酰胺等價(jià)物的濃度可以不同。其原因之一在于在不同應(yīng)力環(huán)境下對(duì)熱密度的需求存在很大變化。這種情形的實(shí)例是在例如患嚴(yán)重外傷的患者或者早熟嬰兒只能承受極小體積的腸營(yíng)養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生的。在這類情形中，大部分營(yíng)養(yǎng)在最初可以通過腸道外進(jìn)食的方式提供。在這些情形中，極小量的腸營(yíng)養(yǎng)是可以接受的，這對(duì)于供應(yīng)盡可能多的谷氨酰胺等價(jià)物是有好處的。因此，可以使用極高濃度的N-乙?；?谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。在另一應(yīng)用中，為了支撐臟器功能，可以給標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方食品補(bǔ)充N-乙?；?谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽，在這種情形中可以使用實(shí)質(zhì)上較低的濃度。對(duì)于其中谷氨酰胺是有利的任何狀況，都可以使用N-乙?；?L-谷氨酰胺。這類狀況至少包括促進(jìn)從胃腸道手術(shù)、胃腸道切除術(shù)、小腸移植恢復(fù)、以及其它術(shù)后的創(chuàng)傷中恢復(fù)、饑餓、急性疾病和損傷例如多發(fā)性外傷、短腸綜合癥、燒傷、骨髓移植、AIDS、口腔潰瘍、腹腔疾病、克羅恩氏病、壞死性小腸結(jié)腸炎、臟器早熟，以及預(yù)防或降低隨機(jī)感染例如膿血癥的嚴(yán)重程度。谷氨酰胺補(bǔ)充還有助于預(yù)防與某些特定治療(例如化學(xué)療法或放射療法)相關(guān)的臟器退化或者在某些口服進(jìn)食受嚴(yán)重限制的情形中(例如極度早熟)也有用。另外還包括上面所述狀況的組合。本發(fā)明的N-乙?；?L-谷氨酰胺可以使用任意適合于人體消耗的液體溶液給藥。例如，可以簡(jiǎn)單地將N-乙?；?L-谷氨酰胺溶解于水中。如果需要的話，可以將其摻入經(jīng)過調(diào)味的飲料中以改善其可口性。例如，可以將其摻入Kool-Aid、或蘇打水例如百事或可樂中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以將N-乙?；?L-谷氨酰胺摻入運(yùn)動(dòng)飲料例如Gator-Aid中。然而，N-乙?；?L-谷氨酰胺通?？梢酝ㄟ^口服的再水化溶液(ORS)或者液體營(yíng)養(yǎng)配方食品進(jìn)行給藥。摻入含水溶液例如ORS中的N-乙?；?L-谷氨酰胺用量可以隨意變化。通常ORS可以含有至少大約5.0mmole的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽/升溶液，另外還含有少量的水、葡萄糖和鈉。更優(yōu)選的是，ORS可以含有大約20至大約300mmole/升的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽，更優(yōu)選為大約25至大約200mmole。如果使用液體例如Kool-Aid或Gator-Aid的話，則N-乙酰基-L-谷氨酰胺的用量應(yīng)該與針對(duì)ORS所描述的用量相當(dāng)。口服的再水化溶液是本領(lǐng)域眾所周知的。用于本發(fā)明中的ORS通常應(yīng)該含有FDA對(duì)于在美國(guó)銷售的口服的再水化制劑所要求的符合其濃度的所有電解液。除了鈉(Na+)、鉀(K+)、氯(Cl-)和檸檬酸離子之外，該口服的再水化溶液還含有碳水化合物源，例如葡萄糖、果糖和右旋糖。典型的是，該ORS含有水、糖類、鈉離子、鉀離子、氯離子、和檸檬酸離子。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，在ORS中使用的鈉離子量可以隨意變化。通常，ORS應(yīng)該含有大約30mEq/L至大約95mEq/L的鈉。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，鈉含量可以為大約30mEq/L至大約70mEq/L，更優(yōu)選為大約40mEq/L至大約60mEq/L。適宜的鈉源包括但并不僅僅限于氯化鈉、檸檬酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、及其混合物。本文所使用的一毫當(dāng)量(mEq)是指溶液中的離子數(shù)目，其通過在給定體積中的離子濃度來測(cè)量。測(cè)量值以毫當(dāng)量/升(mEq/L)的數(shù)目表示。通過將mEq乘以無機(jī)離子的原子量然后用該數(shù)值除以無機(jī)離子的化合物，可以將毫當(dāng)量轉(zhuǎn)化為毫克。ORS還應(yīng)該含有鉀離子來源。鉀的用量可以隨意變化。然后，作為一個(gè)總的原則，ORS通常應(yīng)該含有大約10mEq/L至大約30mEq/L的鉀。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，它們含有大約15mEq/L至大約25mEq/L的鉀。適宜的鉀源包括但并不僅僅限于檸檬酸鉀、氯化鉀、碳酸氫鉀、碳酸鉀、氫氧化鉀、及其混合物。ORS還應(yīng)該含有碳水化合物源。如上所述，所用碳水化合物的用量非常重要。其用量必須保持在小于大約3％w/w，更優(yōu)選小于大約2.5％w/w。處于大約3％w/w至大約2.0％w/w之間的用量是適宜的。過量的碳水化合物會(huì)加劇與腹瀉相關(guān)的液體和電解液損失。可以使用現(xiàn)有技術(shù)中在口服的再水化溶液中所使用的任何碳水化合物。適宜的碳水化合物包括但并不僅僅限于簡(jiǎn)單和復(fù)雜的碳水化合物、葡萄糖、右旋糖、果糖低聚糖、果糖和葡萄糖聚合物、玉米糖漿、高果糖玉米糖漿、蔗糖、麥芽糖糊精、及其混合物。ORS通常還應(yīng)該包括用于替換腹瀉損失的堿來源。通常為了獲得上述結(jié)果，應(yīng)該將檸檬酸鹽摻入口服的再水化溶液中。檸檬酸鹽被代謝成當(dāng)量的碳酸氫鹽，它有助于保持酸堿平衡。盡管檸檬酸鹽是優(yōu)選的堿來源，但是也可以使用通常被摻入再水化溶液中的任意堿。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，檸檬酸鹽的用量可以不同。通常，檸檬酸鹽為大約10mEq/L至大約40mEq/L，更優(yōu)選為大約20mEq/L至大約40mEq/L，最優(yōu)選為大約25mEq/L至大約35mEq/L。適宜的檸檬酸鹽來源包括但并不僅僅限于檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸及其混合物。ORS通常還應(yīng)該含有氯化物來源。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，氯化物的用量可以不同。通常，ORS應(yīng)該含有用量為大約30mEq/L至大約80mEq/L的氯化物，更優(yōu)選為大約30mEq/L至大約75mEq/L，最優(yōu)選為大約30mEq/L至大約70mEq/L。適宜的氯化物來源包括但并不僅僅限于氯化鈉、氯化鉀及其混合物。任選地，可以將不易消化的寡糖合摻ORS中。不易消化的寡糖可以給胃腸道中的微生物菌群帶來有益影響。它們有助于抑制致病性有機(jī)體例如艱難梭菌的生長(zhǎng)。這些寡糖選擇性地促進(jìn)了非致病性微生物菌群的生長(zhǎng)。這類口服的再水化溶液已經(jīng)描述在登記于1995年4月5日的美國(guó)專利5,733,759中，再次將其內(nèi)容引入作為參考。通常，寡糖應(yīng)該是果糖低聚糖、菊粉例如raftilose、或木糖寡糖。其用量可以隨意變化，可以為1-100克/升含水溶液，更優(yōu)選為3-30克/升含水溶液。ORS通常還應(yīng)該包括用于改善其可口性的調(diào)味劑，尤其是對(duì)兒科患者而言。調(diào)味劑可以掩蓋該含水溶液的咸味。可使用的調(diào)味劑包括但并不僅僅限于桃、黃油桃、越橘、香蕉、櫻桃、桔、葡萄、果汁、泡泡糖、蘋果、懸鉤子和草莓?？梢约尤肴嗽焯鹞秳┮匝a(bǔ)充味道和掩蓋咸味?？墒褂玫娜嗽焯鹞秳┌ㄌ蔷I(yíng)養(yǎng)甜、糖精苷、acesulfane-K(ace-K)等。為了有助于延長(zhǎng)貯存期，可以加入防腐劑。本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員能夠選擇適當(dāng)用量的適宜防腐劑以實(shí)現(xiàn)上述目的。典型的防腐劑包括但并不僅僅限于山梨酸鉀和苯甲酸鈉。除了上述碳水化合物之外，ORS還可以含有米粉，或者有利于腹瀉治療的米中的其它成分。現(xiàn)有文獻(xiàn)中已經(jīng)描述了很多種補(bǔ)充有米的口服的再水化溶液。使用這類補(bǔ)充有米的口服的再水化溶液的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知的。這類補(bǔ)充有米的口服復(fù)水溶液的實(shí)例包括描述在公布于1996年2月6日的美國(guó)專利號(hào)5,489,440中的溶液。ORS可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所眾所周知的技術(shù)制備得到。作為一個(gè)總的原則，可以將所有的組分干燥混合在一起；攪拌分散于水中；然后任選地加熱至適當(dāng)?shù)臏囟纫匀芙馑械慕M分。然后將該ORS進(jìn)行封裝滅菌至本領(lǐng)域已知的食品級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，ORS可以以不同的劑型給藥，這取決于患者的偏好。例如，如果冰凍的話例如以冰棒的形式，可能某些兒童更容易進(jìn)食這種口服的再水化溶液。口服的再水化溶液冰棒詳細(xì)描述在美國(guó)專利號(hào)5,869,459中。為了改善患者尤其是兒科患者的順從性，還可以將口服的再水化溶液制成凝膠的形式。凝膠體的再水化組合物描述在登記于1999年8月4日的美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)09/368,388中。這種凝膠還描述在PCT申請(qǐng)?zhí)?9/15862中?？偟膩碚f，可以將含水溶液制成可流動(dòng)凝膠的形式?；蛘?，也可以將其制成能自己支撐的凝膠結(jié)構(gòu)。通過將適宜的膠凝劑摻入該含水溶液中，可以實(shí)現(xiàn)上述目的。用于該含水溶液中的適宜膠凝劑包括但并不僅僅限于瓊脂、褐藻酸和鹽、涂膠、阿拉伯樹膠、塔哈膠、纖維素衍生物、凝膠多糖、發(fā)酵樹膠、帚叉藻聚糖膠、明膠、結(jié)冷膠、印度膠、瓜耳樹膠、阿歐塔角叉菜膠、愛爾苔蘚、卡帕角叉菜膠、魔芋粉、刺梧桐樹膠、萊姆達(dá)角叉菜膠、松膠/阿拉伯半乳聚糖、刺槐豆膠、果膠、羅望子膠、塔拉豆膠、黃蓍膠、天然和改性淀粉、黃原膠及其混合物。所述膠凝劑的使用比例為大約0.05至大約50重量/重量％。如上所述，N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽可以通過液體營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品的形式給藥。摻入液體營(yíng)養(yǎng)配方食品中的N-乙酰基-谷氨酰胺可以隨意變化，但應(yīng)符合上述的劑量指南。用于液體營(yíng)養(yǎng)配方食品中的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的用量應(yīng)當(dāng)取決于各種因素，包括該制劑是否提供了大部分或主要的營(yíng)養(yǎng)源、該制劑是否含有其它的谷氨酰胺來源、每天消耗的配方食品的量、以及打算施用該制劑的患者類型(其對(duì)每天消耗的制劑量也有影響)。當(dāng)與包含在其它蛋白質(zhì)組分中的谷氨酰胺進(jìn)行合并時(shí)，為了獲得至少140mg的總谷氨酰胺/kg體重/天，這種配方食品優(yōu)選含有足夠量的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的用量還可以表示為提供蛋白質(zhì)熱量的百分?jǐn)?shù)形式。根據(jù)這種表達(dá)方式，營(yíng)養(yǎng)配方食品可以含有大約1至大約100％的蛋白質(zhì)熱量的N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽。該百分?jǐn)?shù)是根據(jù)N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的蛋白質(zhì)部分(也就是谷氨酰胺部分)計(jì)算得到的，沒有考慮任何由N-乙?；?谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽中的非蛋白質(zhì)部分(也就是乙酸酯或鹽部分)貢獻(xiàn)的熱量在內(nèi)。優(yōu)選地，對(duì)于成人用營(yíng)養(yǎng)配方食品，可以含有足以提供大約10至大約95％的蛋白質(zhì)熱量的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽。如果該營(yíng)養(yǎng)配方食品打算用于未成年人的話，那么N-乙?；?L-谷氨酰胺應(yīng)當(dāng)以足以提供大約1至大約12％的蛋白質(zhì)熱量的用量存在。液體營(yíng)養(yǎng)配方食品包括腸制劑、口服配方食品、成人用配方食品、兒科患者用配方食品和嬰兒用配方食品。例如，腸配方食品和營(yíng)養(yǎng)配方食品是急性保健院和長(zhǎng)期保健場(chǎng)所(即療養(yǎng)院)中患者保健的重要部分。盡管補(bǔ)充這些配方食品通常是用于改善營(yíng)養(yǎng)未達(dá)標(biāo)的狀態(tài)，但是它們也可以作為常人長(zhǎng)期使用的唯一營(yíng)養(yǎng)來源。因此，如果這類配方食品是為了滿足預(yù)防營(yíng)養(yǎng)不良的主要目的的話，那么它們必須含有足夠量的蛋白質(zhì)、脂肪、無機(jī)元素、電解液等。這些配方食品通常以液體的形式施用給患者，這是因?yàn)榻^大部分目標(biāo)患者不能進(jìn)食固體食物。盡管有些患者能夠飲服制劑，但是也有很多患者通過鼻吸管(NG管或者進(jìn)食管)服用腸制劑。液體營(yíng)養(yǎng)配方食品含有提供占該配方食品總含熱量的14-35％的蛋白質(zhì)組分、提供占總含熱量的36-76％的碳水化合物組分、以及提供占總含熱量的6-51％的脂質(zhì)組分。液體營(yíng)養(yǎng)配方食品可以是成人配方食品、小兒科配方食品或嬰兒配方食品(正如該含水溶液可以向成人、兒科患者或嬰兒施用那樣)。對(duì)于高谷氨酰胺應(yīng)用，優(yōu)選液體營(yíng)養(yǎng)配方食品可以提供營(yíng)養(yǎng)的至少大部分來源。當(dāng)然，本文所述的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品也可以不是用作營(yíng)養(yǎng)的至少大部分來源，特別是在那些大部分非腸道配方食品并非實(shí)踐標(biāo)準(zhǔn)的情形中(在相當(dāng)多的早熟嬰兒中，它們?cè)诿撾x子宮的最早數(shù)周內(nèi)慢慢脫奶以口服進(jìn)食)。術(shù)語營(yíng)養(yǎng)的至少大部分來源是指打算進(jìn)食的配方食品以足以提供服用該配方食品的患者所需的總熱量和營(yíng)養(yǎng)的至少一半的量進(jìn)食。落入該定義內(nèi)的是作為營(yíng)養(yǎng)唯一來源的配方食品及其進(jìn)食方法，通過這樣提供了服用該配方食品的患者所需的全部總熱量和營(yíng)養(yǎng)。所需熱量和營(yíng)養(yǎng)的量可以隨患者的不同而不同，這取決于各種變量例如年齡、體重、和身體情況。維持適當(dāng)量的熱量和營(yíng)養(yǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)配方食品的用量可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定，正如要向這類配方食品中摻入適當(dāng)量的熱量和營(yíng)養(yǎng)那樣。舉例來說，如果該配方食品為成人用配方食品，其蛋白質(zhì)組分可以含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的總含熱量的大約14至大約35％；碳水化合物組分可以含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的總含熱量的大約36至大約76％；脂質(zhì)組分可以含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的總含熱量的大約6至大約41％。該營(yíng)養(yǎng)配方食品可以是用于口服進(jìn)食的配方食品或者用于腸道進(jìn)食的配方食品。再舉一個(gè)例子，如果該制劑為未成年人用制劑，其蛋白質(zhì)組分可以含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的總含熱量的大約8至大約25％；碳水化合物組分可以含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的總含熱量的大約39至大約44％；脂質(zhì)組分可以含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的總含熱量的大約45至大約51％。這些范圍僅僅是用于舉例說明，并不意味著構(gòu)成限制。由于客觀原因，這類產(chǎn)品應(yīng)該含有足以提供總谷氨酰胺含量的大約一半或更多的用量的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽?；蛘?，也可以將N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的有效量表達(dá)為毫摩爾/1000千卡的形式。根據(jù)這種表達(dá)方式，如果谷氨酰胺的目標(biāo)用量為大約300mg谷氨酰胺每天/kg/天的話，那么對(duì)于成人而言，營(yíng)養(yǎng)配方食品應(yīng)該優(yōu)選含有至少大約35毫摩爾的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品，對(duì)于兒童、嬰兒或早熟嬰兒(未成年人)而言，應(yīng)該含有至少大約5.0毫摩爾的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品。更優(yōu)選地，這類制劑對(duì)于成人而言應(yīng)該含有大約35至大約160毫摩爾的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品，對(duì)于兒童而言應(yīng)該含有大約5.0至大約32毫摩爾的N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品，對(duì)于嬰兒或早熟嬰兒而言含有大約5.0至大約26毫摩爾的N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽/1000營(yíng)養(yǎng)配方食品。除了N-乙?；?谷氨酰胺之外，該營(yíng)養(yǎng)配方食品還應(yīng)該含有對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的制備營(yíng)養(yǎng)配方食品的適宜碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。適宜的碳水化合物包括但并不僅僅限于蠟狀或非蠟狀形式的來源于玉米、木薯、米或馬鈴薯的水解后的、完整的、天然的和/或化學(xué)改性的淀粉；碳水化合物例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、富含果糖的玉米糖漿、玉米糖漿干粉、以及它們的混合物。麥芽糖糊精是由淀粉(例如來自玉米或大米的淀粉)進(jìn)行酸或酶水解后得到的多糖。根據(jù)水解的程度對(duì)其進(jìn)行分級(jí)，以右旋糖當(dāng)量(DE)表示。該營(yíng)養(yǎng)配方食品中所用的任何麥芽糖糊精的DE優(yōu)選為低于大約18-20。適宜的脂質(zhì)包括但并不僅僅限于椰子油、大豆油、玉米油、橄欖油、紅花油、富油性紅花油、MCT油(中鏈甘油三酸酯)、向日葵油、富油性向日葵油、棕櫚油、棕櫚油精、低芥酸菜子油、魚油、棕櫚仁油、鯡油、豆油、棉籽油、卵磷脂、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的脂質(zhì)來源、及其混合物?；ㄉ南┧岷投剂┧岬闹|(zhì)來源包括但不僅僅限于海生動(dòng)植物油(Marineoil)、蛋黃油、和真菌或海藻油。很多商品來源的脂肪是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知并可很方便得到的。例如，大豆和可可油可由ArcherDanielsMidlandofDecatur，Illinois得到。玉米、椰子、棕櫚和棕櫚仁油可由Portland，Organ的PremierEdibleOilsCorporation得到。分餾后的椰子油可由LaGrange，Illinois的HenkelCorporation得到。富油性紅花油和富油性向日葵油可由Eastlake，Ohio的SVOSpecialtyProducts得到。海生動(dòng)植物油可由日本東京的MochidaInternational得到。橄欖油可由美國(guó)的OilsofNorthHumberside得到。向日葵和棉籽油可由明尼阿波利斯的Cargil得到。紅花油可由加利福尼亞的Richmond的CaliforniaOilsCorporation得到。除了這些食品級(jí)的油類之外，如果需要的話還可以摻入結(jié)構(gòu)脂質(zhì)。結(jié)構(gòu)脂質(zhì)是本領(lǐng)域已知的。有關(guān)結(jié)構(gòu)脂質(zhì)的簡(jiǎn)要描述可參見INFORM，Vol..8，no.10，page1004，標(biāo)題為Structuredlipidsallowfattailoring(1997年10月)。另外還可參見美國(guó)專利號(hào)4,871,768。結(jié)構(gòu)脂質(zhì)優(yōu)選在相同的甘油分子上含有中鏈和長(zhǎng)鏈脂肪酸混合物的三?；视?。結(jié)構(gòu)脂質(zhì)及其在腸制劑中的用途還描述在美國(guó)專利號(hào)6,194,37和6,160,007中。適宜的蛋白質(zhì)來源包括但并不僅僅限于奶、乳清和乳餾分、大豆、大米、肉類(例如牛肉)、動(dòng)植物(例如豌豆、馬鈴薯)、雞蛋(雞蛋白)、明膠和魚。適宜的天然蛋白質(zhì)來源包括但并不僅僅限于大豆基質(zhì)、奶基質(zhì)、酪蛋白、乳清蛋白、米蛋白質(zhì)、牛肉膠原質(zhì)、豌豆蛋白、馬鈴薯蛋白、及其混合物。適宜的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物包括但并不僅僅限于大豆蛋白水解產(chǎn)物、酪蛋白水解產(chǎn)物、乳清蛋白水解產(chǎn)物、米蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、馬鈴薯蛋白水解產(chǎn)物、魚蛋白水解產(chǎn)物、雞蛋白水解產(chǎn)物、明膠蛋白水解產(chǎn)物、動(dòng)植物蛋白水解產(chǎn)物的組合、以及它們的混合物。水解后的蛋白質(zhì)(蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物)是指已經(jīng)水解或者斷裂成更短的肽碎片和氨基酸的蛋白質(zhì)。這類水解肽碎片和游離氨基酸更容易消化。在廣義上說，當(dāng)一個(gè)或多個(gè)酰胺鍵斷裂后蛋白質(zhì)就已經(jīng)被水解。酰胺鍵的斷裂可以例如由于加熱或剪切而有意或無意地發(fā)生在制造過程中。出于公開的目的，水解的蛋白質(zhì)是指已經(jīng)經(jīng)過按照斷裂酰胺鍵的方式進(jìn)行加工或者處理過的蛋白質(zhì)?？梢杂心康牡剡M(jìn)行水解，例如通過用酶或酸處理天然蛋白質(zhì)。本文所述的優(yōu)選用于該液體營(yíng)養(yǎng)配方食品中的水解蛋白質(zhì)為水解至下述程度的蛋白質(zhì)，其中氨基氮(AN)與總氮的比值為大約0.1AN比大約1.0TN至大約0.4AN比大約1.0TN，優(yōu)選為大約0.25AN比大約1.0TN至大約0.4AN比大約1.0TN。(AN∶TN比值是指單獨(dú)的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，不表示最終營(yíng)養(yǎng)配方食品中的AN∶TN比值)。蛋白質(zhì)還可以以游離氨基酸的形式提供。為了獲得在營(yíng)養(yǎng)上更完全和平衡的配方食品，可以給營(yíng)養(yǎng)配方食品補(bǔ)充各種氨基酸。適宜的游離氨基酸的實(shí)例包括但并不僅僅限于通常被認(rèn)為是蛋白質(zhì)體系中的一部分的所有游離的L-氨基酸，但是尤其包括那些從營(yíng)養(yǎng)學(xué)角度考慮被認(rèn)為是必需或者在一定條件下為必需氨基酸的氨基酸，也就是色氨酸、酪氨酸、絲氨酸、蛋氨酸、精氨酸、亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、以及組氨酸。通常向營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)物中加入的其它(非蛋白質(zhì))氨基酸包括肉毒堿和氨基乙磺酸。在某些情形中，氨基酸的D-形式被認(rèn)為與L-形式在營(yíng)養(yǎng)學(xué)上是相當(dāng)?shù)?，為了降低成本可以使用異?gòu)體混合物(例如D、L-蛋氨酸)。該營(yíng)養(yǎng)配方食品優(yōu)選還含有用量足以維持服用該配方食品的患者日常營(yíng)養(yǎng)需要的維生素和無機(jī)元素。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為，營(yíng)養(yǎng)配方食品通常需要強(qiáng)化某些維生素和無機(jī)元素以保證它們?cè)诋a(chǎn)品貯存期間能夠滿足日常的營(yíng)養(yǎng)需要。本領(lǐng)域技術(shù)人員還認(rèn)為，考慮到一些潛在的疾病或者患者所患的疾病，某些微量組分對(duì)于人群也具有潛在的好處。例如，例如鉻、肉毒堿、?；撬?、和維生素E對(duì)于糖尿病患者有益。配方食品優(yōu)選包括但并不僅僅限于下面的維生素和無機(jī)元素鈣、磷、鈉、氯、鎂、錳、鐵、銅、鋅、硒、碘、鉻、鉬、肌醇、肉毒堿、?；撬?、維生素A、C、D、E、K和B絡(luò)合物、以及它們的混合物。如果該營(yíng)養(yǎng)配方食品打算用于嬰兒的話，那么具體的營(yíng)養(yǎng)指南可參見InfantFormulaAct，21U.S.C.section350(a)。在該法令中的營(yíng)養(yǎng)指南隨著有關(guān)營(yíng)養(yǎng)要求的進(jìn)一步研究被完成而不斷進(jìn)行修訂。權(quán)利要求中所請(qǐng)求保護(hù)的營(yíng)養(yǎng)配方食品意味著包括含有那些并未在此列出的維生素和無機(jī)元素的配方食品在內(nèi)。該液體營(yíng)養(yǎng)配方食品還可以含有纖維和穩(wěn)定劑。適宜的纖維和/或穩(wěn)定劑來源包括但并不僅僅限于黃原膠、瓜耳樹膠、阿拉伯樹膠、刺梧桐樹膠、黃蓍膠、瓊脂、帚叉藻聚糖膠、結(jié)冷膠、刺槐豆膠、果膠、甲氧基含量高和低的果膠、燕麥葡聚糖、角叉菜膠、psyllium、明膠、微晶纖維素、CMC(羧甲基纖維素鈉)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、DATEM(甘油單酯和甘油二酯的二乙酰基酒石酸酯)、右旋糖苷、角叉菜膠、FOS(果糖低聚糖)、以及它們的混合物。很多商品來源的可溶性可食用纖維是可得到的。例如阿拉伯樹膠、水解羧甲基纖維素、瓜爾樹膠、果膠和甲氧基含量高和低的果膠可由馬里蘭Belcamp的TICGums，Inc.得到。燕麥葡聚糖可由內(nèi)布拉斯加州奧馬哈的MountainLakeSpecialtyIngredients，Inc.得到。Psyllium可由新澤西NorthBergen的MeerCorporation得到，而角叉菜膠可由賓夕法尼亞州費(fèi)城的FMCCorporation得到。摻入的纖維還可以是可溶性的可食用纖維，其代表性實(shí)例包括燕麥果實(shí)纖維、豌豆纖維、大豆纖維、大豆子葉纖維、糖用甜菜纖維、纖維素和玉米麩?？扇苄缘目墒秤美w維的很多來源也是可得到的。例如。玉米麩可由伊利諾斯州芝加哥的QuakerOats得到；燕麥果實(shí)纖維可由明尼蘇達(dá)州劍橋的CanadianHarvest得到；豌豆纖維可由加拿大溫尼伯湖的WoodstoneFoods得到；大豆纖維可由馬里蘭LaVale的FibradGroup得到；大豆子葉纖維可由密蘇里州St.Louis的ProteinTechnologiesInternational得到；糖用甜菜纖維可由明尼蘇達(dá)州明尼阿波利斯的DeltaFiberFoods得到；纖維素可由新澤西SaddleBrook的JamesRiverCorp.得到。關(guān)于纖維以及將其摻入配方食品中的實(shí)例的詳細(xì)討論可以參見Garleb等人的美國(guó)專利號(hào)5,085,883。用于該配方食品中的纖維用量可以不同。所使用的具體類型的纖維并不重要?？梢允褂萌魏蔚倪m合人體消耗的且在營(yíng)養(yǎng)配方食品基質(zhì)中保持穩(wěn)定的纖維。除了纖維之外，該營(yíng)養(yǎng)配方食品還可以含有低聚糖例如果糖低聚糖(FOS)或葡萄糖低聚糖(GOS)。將低聚糖進(jìn)行快速和充分的發(fā)酵以通過抑制大腸的厭氧性微生物縮短脂肪酸鏈。這些低聚糖是大多數(shù)雙歧桿菌類的優(yōu)選能量來源，但是并未被致病性生物體例如產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難酸菌、或者E.coli.所利用。該液體營(yíng)養(yǎng)配方食品還可以含有芳香劑以改善其可口性?？墒褂玫姆枷銊┌ǖ⒉粌H僅限于巧克力、香草、咖啡、桃、黃油桃、越橘、香蕉、櫻桃、桔、葡萄、果汁、泡泡糖、蘋果、懸鉤子和草莓?？梢约尤肴嗽焯鹞秳┮匝a(bǔ)充芳香和掩蓋咸味?？墒褂玫娜嗽焯鹞秳┌ㄌ蔷?、營(yíng)養(yǎng)甜、糖精苷、acesulfane-K(ace-K)等。液體營(yíng)養(yǎng)配方食品可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法制備。已知很多種不同的制備方法。通常，這些方法包括由一種或多種含有水的溶液與一種或多種碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、維生素和無機(jī)元素形成漿狀物。將該漿狀物進(jìn)行乳化、勻化并冷卻。在處理之前、之后或者在這兩個(gè)時(shí)間段都可以向該漿狀物中加入各種其它的溶液。然后將處理后的配方食品滅菌，可以進(jìn)一步稀釋供現(xiàn)成進(jìn)食用或者以濃縮的液體形式儲(chǔ)存。如果所得到的配方食品打算制成供現(xiàn)成進(jìn)食用或者濃縮的液體的話，可以在滅菌之前加入適宜量的水。本發(fā)明還涉及一種減輕患有腹腔疾病的患者的腸內(nèi)粘膜炎癥的方法，它通過施用被摻入上述含水溶液和液體營(yíng)養(yǎng)配方食品中的NAQ。在實(shí)施例5中，發(fā)明者利用TUNEL標(biāo)記物監(jiān)測(cè)上皮凋亡現(xiàn)象、利用CD25監(jiān)測(cè)上皮下炎癥、他們發(fā)現(xiàn)了誘導(dǎo)一種或者兩種標(biāo)記物的化合物/產(chǎn)品，認(rèn)為這些化合物/產(chǎn)品對(duì)腹腔疾病患者的粘膜具有毒性。然而，N-乙?；?谷氨酰胺對(duì)于未經(jīng)治療的腹腔疾病患者的活組織切片具有明顯的營(yíng)養(yǎng)效果。通過對(duì)特別是上皮細(xì)胞中的粘膜的改善情況來定義這種營(yíng)養(yǎng)作用，相對(duì)于其它樣本而言上皮細(xì)胞中的粘膜得到顯著改善。N-乙?；?谷氨酰胺的這種出人意料的營(yíng)養(yǎng)活性使得粘膜的整體情況相對(duì)于甚至陰性對(duì)照(只有介質(zhì))而言均有所改善。實(shí)施例制備液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的方法通過下面的步驟可以制備得到落入本發(fā)明權(quán)利要求書范圍內(nèi)的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品。例舉這些實(shí)施例僅僅是用于解釋說明，而不應(yīng)該被理解為限制。只要不偏離本發(fā)明的范圍，其它的碳水化合物、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、穩(wěn)定劑、維生素和無機(jī)元素也是可以使用的。實(shí)施例1制備含有N-乙?；?L-谷氨酰胺的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品的方法使用表1所列出的原料制備得到含有N-乙?；?L-谷氨酰胺的供現(xiàn)成進(jìn)食的液體產(chǎn)品。用于制備該產(chǎn)品的步驟如下所述。表1用于加香草產(chǎn)品的原料單1.維生素D、E、K預(yù)混物包括在椰子油(146.77克)載體中的維生素D3(0.0980克)、d-α-生育酚基乙酸酯(55.93克)、和維生素K1(0.0338克)。2.微量無機(jī)元素預(yù)混物(每1000kg終產(chǎn)品)輸送硫酸鋅(46.3克)、硫酸鐵(39.2克)、硫酸鎂(11.4克)、硫酸銅(3.89克)。3.水溶性維生素預(yù)混物包括在右旋糖(17.29克)載體中的煙酰胺(33.07克)、d-泛酸鈣(21.43克)、葉酸(0.742克)、硫胺氯化物HCL(5.47克)、核黃素(4.27克)、pyroxidineHCL(5.26克)、維生素B12(0.0147克)和維生素H(0.644克)。步驟通過制備三種混合在一起的預(yù)混物，然后與海產(chǎn)動(dòng)植物油/MCT結(jié)構(gòu)脂質(zhì)混合，加熱處理，定型，封裝并滅菌制備得到上述的液體營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品。下面詳細(xì)描述其制備方法。通過首先將適宜量的水?dāng)嚢杓訜嶂链蠹s65℃至大約71℃的溫度，制備得到碳水化合物/無機(jī)元素的漿狀物。然后在劇烈攪拌下加入定單中所需量的無機(jī)元素檸檬酸鈉、微量無機(jī)元素預(yù)混物、檸檬酸鉀、氯化鎂、磷酸三鈣和碘化鉀。接下來，在劇烈攪拌下向該漿狀物中加入所需量的麥芽糖糊精(MaltringM-100，由GrainProcessingCorporationofMuscatine，Iowa提供)，在溫度保持大約71℃的同時(shí)使其溶解。然后在劇烈攪拌下加入所需量的蔗糖和果糖低聚糖(Nutriflora-PS果糖低聚糖粉末，由GoldenTechnologiesCompanyofGolden，Colorado提供)。隨后將所需量的結(jié)冷膠(KelcogelW，由Kelco，DivisionofMerck和CompanyIncorporatedofSanDiego，California提供)與蔗糖按照1∶5(結(jié)冷膠/蔗糖比例)進(jìn)行干混，在劇烈攪拌下加入至漿狀物中。接下來，在攪拌下將已經(jīng)溶解于溫水中的亞硒酸鈉加入至漿狀物中。所得到的碳水化合物/無機(jī)元素漿狀物在溫度為大約65℃至大約71℃下保持劇烈攪拌不超過氣小時(shí)，直其與其它漿狀物進(jìn)行混合。通過將所需量的大豆油和低芥酸菜子油在溫度為大約55℃至大約65℃下劇烈攪拌進(jìn)行混合得到油混物。然后在劇烈攪拌下加入所需量的乳化劑、單二甘油酸酯的二乙?；剖狨?Panodan，由GrindstedProductsIncorporatedofNewCentury，Kansas提供)，使其溶解。然后攪拌加入維生素D、E、K預(yù)混物、55％維生素A棕櫚酸酯、D-α-a-生育酚基乙酸酯(R、R、R形式)、維生素K和30％β-胡蘿卜素。所得到的油混物在溫度為大約55℃至大約65℃下溫和攪拌不超過12小時(shí)，直其與其它漿狀物進(jìn)行混合。通過首先將適宜量的水?dāng)嚢杓訜嶂链蠹s65℃至大約71℃的溫度，制備得到蛋白質(zhì)在水中的漿狀物。攪拌加入大豆蛋白水解產(chǎn)物(由MDFoodsofVibyJ.，Denmark提供)。攪拌加入所需量的N-乙酰基-L-谷氨酰胺(來自Ajinomoto)。加入氫氧化鉀溶液(45％)提高pH至大約5.6。慢慢攪拌加入L-精氨酸，溶液攪拌至澄清(pH＞6.2)。然后再漿狀物中混合入所需量的部分水解的酪蛋白酸鈉(Alanate167，由NewZealandMilkProductsIncorporatedofSantaRosa，California提供)。所得到的油混物在溫度為大約60℃至大約71℃下溫和攪拌不超過2小時(shí)，直到與其它漿狀物進(jìn)行混合。將在水中的蛋白質(zhì)漿狀物與油混物攪拌混合，所得到的混合漿狀物保持在大約55℃至大約65℃的溫度下。放置至少一小時(shí)后，攪拌加入碳水化合物/無機(jī)元素漿狀物，所得到的混合漿狀物保持在大約55℃至大約65℃的溫度下。然后將海生動(dòng)植物油/MCT結(jié)構(gòu)脂質(zhì)攪拌加入至該混合的漿狀物中。理想的是，將海生動(dòng)植物油/MCT結(jié)構(gòu)脂質(zhì)按照恒定速率通過導(dǎo)管作為混合物形式計(jì)量加入產(chǎn)物中。放置不少于一分鐘不多于兩小時(shí)之后，將該混合漿狀物按照本領(lǐng)域已知的方法脫氧，紫外線高溫處理，勻化。然后冷卻至大約1℃至大約7℃的溫度，在大約1℃至大約7℃的溫度下攪拌儲(chǔ)存。優(yōu)選地，在完成上述步驟之后，進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆治鰷y(cè)試以控制質(zhì)量?；谠撡|(zhì)量控制的分析結(jié)果，向樣本中攪拌加入適量的水達(dá)到最終的稀釋度(標(biāo)定)。通過將少量水?dāng)嚢杓訜嶂链蠹s43℃至大約66℃的溫度，然后攪拌加入下述組分抗壞血酸、45％氫氧化鉀、?；撬帷⑺苄跃S生素預(yù)混物、維生素B氯化物、和L-camitine，制備得到維生素溶液。然后向上述混合漿狀物中攪拌加入該維生素漿狀物。通過向適宜量的水中攪拌加入天然和人造的香草料以及人造焦糖料制備得到芳香劑溶液。然后向上述混合漿狀物中攪拌加入該芳香劑漿狀物。可以調(diào)節(jié)產(chǎn)物的pH以獲得最佳的產(chǎn)物穩(wěn)定性。然后將所得到的產(chǎn)品置于適宜的容器中(在該情形中使用8oz.金屬罐)接受最后的滅菌(在該情形中使用蒸餾滅菌)。實(shí)施例2含水N-乙?；?L-谷氨酰胺的穩(wěn)定性研究進(jìn)行下述研究以評(píng)價(jià)含水N-乙酰基-谷氨酰胺經(jīng)加熱后在不同pH值下以及在類似于液體營(yíng)養(yǎng)類型產(chǎn)品所使用的基質(zhì)中的穩(wěn)定性。含水N-乙?；?L-谷氨酰胺和谷氨酰胺的熱穩(wěn)定性為了測(cè)試含水N-乙?；?谷氨酰胺在加熱后的穩(wěn)定性，進(jìn)行下述步驟。不調(diào)節(jié)pH，制備得到N-乙酰基-L-谷氨酰胺(來自Sigma，目錄號(hào)A-9125)和谷氨酰胺(來自Aldrich，目錄號(hào)G-320-2)的大約1mg/mL(分別為5.3mM和6.8mM)的含水溶液。所得到的N-乙?；?L-谷氨酰胺溶液的pH為2.9，谷氨酰胺溶液的pH為6.0。溶液在100℃下使用具有密封的4mL導(dǎo)管的Reacti-ThermTM攪拌加熱塊進(jìn)行加熱，每個(gè)導(dǎo)管對(duì)應(yīng)一個(gè)時(shí)間點(diǎn)15分鐘、30分鐘、1小時(shí)和2小時(shí)。樣本從加熱塊移走后立即置于冰水中直到冷卻。每份樣本的適量部分通過0.45微米過濾器(MilliporeMillex)-HV，25mm)過濾進(jìn)行HPLC測(cè)定。使用InertsilC8，5微米，4.6×250mm柱(來自KeystoneScientific，Inc.，Bellefonte，PA)進(jìn)行HPLC分析。移動(dòng)相為水，用HCl調(diào)節(jié)pH為2.2(等時(shí)1mL/分鐘)。注射體積為10微升。在214nm處進(jìn)行紫外線檢測(cè)。結(jié)果如表2所示。谷氨酰胺在2小時(shí)的100℃下孵育過程中不穩(wěn)定。煮沸該pH為6.0的谷氨酰胺溶液1小時(shí)之后，主要的降解產(chǎn)物是焦谷氨酸。煮沸該谷氨酰胺溶液2小時(shí)之后，焦谷氨酸仍然是主要的降解產(chǎn)物，但是還檢測(cè)到谷氨酸。N-乙?；?L-谷氨酰胺比谷氨酰胺更穩(wěn)定。通過保留時(shí)間鑒定，主要的降解產(chǎn)物是N-乙酰基-谷氨酸；該鑒定通過質(zhì)譜(MS)和核磁共振譜(NMR)確認(rèn)。通過MS和NMR鑒定的第二最高峰為2，6-二氧代哌啶基乙酰胺。在N-乙?；?L-谷氨酰胺溶液中，只在2小時(shí)的樣本中檢測(cè)到焦谷氨酸，而且只是具有極低的濃度，為0.2面積百分比。表2在100℃加熱谷氨酰胺和N-乙?；?L-谷氨酰胺的含水溶液1谷氨酰胺；2谷氨酸鹽；1焦谷氨酸；4N-乙酰基-L-谷氨酰胺；52，6-二氧代哌啶基乙酰胺；6N-乙?；?L-谷氨酸。含水N-乙酰基-L-谷氨酰胺和谷氨酰胺在不同pH值下的穩(wěn)定性為了測(cè)定N-乙?；?L-谷氨酰胺的水溶液在不同pH值下的穩(wěn)定性，進(jìn)行下述步驟。制備得到pH為2.0-8.0且逐漸遞增1個(gè)pH單位的N-乙酰基-L-谷氨酰胺水溶液。視需要，在最終的稀釋之前，使用鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的pH(最終濃度＝1mg/mL或者5.3mMN-乙?；?L-谷氨酰胺)。唯一一份谷氨酰胺溶液不調(diào)節(jié)pH(所測(cè)得的pH＝6.0)，制成含有1mg/mL或者6.8mM的谷氨酰胺。所有溶液經(jīng)過濾滅菌(MilliporeMillex-GS，25mm，0.22微米孔徑，無菌)進(jìn)入自動(dòng)取樣器中，在室溫下(17-25℃)儲(chǔ)存。N-乙酰基-L-谷氨酰胺樣本通過HPLC在1-180天的不同時(shí)間點(diǎn)上進(jìn)行測(cè)量。谷氨酰胺樣本通過HPLC在類似的1-45天的時(shí)間點(diǎn)上進(jìn)行測(cè)量。發(fā)現(xiàn)N-乙?；?L-谷氨酰胺的穩(wěn)定性取決于pH。結(jié)果匯總在圖1和2中。在所有的pH值下，N-乙?；?L-谷氨酰胺在7天內(nèi)未顯示出降解現(xiàn)象。在pH5.0-8.0下，N-乙?；?L-谷氨酰胺在六個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定，超過99.6％的N-乙?；?L-谷氨酰胺保持不變。始終檢測(cè)到的降解產(chǎn)物是N-乙?；?谷氨酸，其在六個(gè)月內(nèi)低于0.5％。在pH4.0下，經(jīng)過六個(gè)月放置，均檢測(cè)到N-乙?；?谷氨酸和2，6-二氧哌啶基乙酰胺，殘留有97.9％的N-乙?；?L-谷氨酰胺。在pH3.0下，N-乙?；?L-谷氨酰胺經(jīng)過90天放置，在第4個(gè)月降至94.2％，在第6個(gè)月降至90.4％。在pH3.0的樣本中，檢測(cè)到N-乙酰基-谷氨酸和2，6-二氧哌啶基乙酰胺具有大致相當(dāng)?shù)臐舛龋_始在第15天為大約0.15％，在第30天升至大約1％，在第6個(gè)月升至大約5％。在第6個(gè)月，檢測(cè)到焦谷氨酸為0.5％。在pH為2.0時(shí)，N-乙?；?L-谷氨酰胺在第15天為97.0％，在第6個(gè)月僅升至55.7％。N-乙?；?谷氨酸是pH為2.0的樣本中的主要降解產(chǎn)物，在第15天為2.5％，在第6個(gè)月為37.2％，2，6-二氧哌啶基乙酰胺由第15天的0.5％升至第6個(gè)月的4.9％。pH為2.0時(shí)的N-乙?；?L-谷氨酰胺樣本是唯一的顯示出焦谷氨酸增加的樣本在第30天為0.2％，在第6個(gè)月升至2.2％。在谷氨酰胺溶液(pH6.0)中，發(fā)現(xiàn)該樣本在室溫下放置3天后焦谷氨酸為0.2％。45天后，發(fā)現(xiàn)其為3.3％，谷氨酰胺為96.7％。HPLC分析結(jié)果以高度百分比表示記錄在表3中。表3谷氨酰胺在室溫下pH為6.0、濃度為1mg/mL的水溶液中的穩(wěn)定性1谷氨酰胺；2焦谷氨酸。N-乙酰基-L-谷氨酰胺和谷氨酰胺在液體營(yíng)養(yǎng)類型產(chǎn)品中的穩(wěn)定性為了測(cè)定N-乙?；?L-谷氨酰胺在類似于液體營(yíng)養(yǎng)類型產(chǎn)品所用基質(zhì)中的穩(wěn)定性，進(jìn)行下述步驟。制備得到三種分析產(chǎn)品，一種含有N-乙酰基-L-谷氨酰胺(N-乙?；?L-谷氨酰胺來自Ajinomoto)，一種含有谷氨酰胺(來自Ajinomoto)(理論濃度分別為16.5mg/mL和12.8mg/mL，以重量為單位替代部分蛋白質(zhì))、和對(duì)照組(Optimental，RossProductsDivision，AbbottLaboratories)。根據(jù)實(shí)施例1所述的步驟制備得到含有N-乙?；?L-谷氨酰胺的產(chǎn)品。根據(jù)與其相類似的方法制備得到含有谷氨酰胺的產(chǎn)品，除了用谷氨酰胺(7.79kg)替代N-乙?；?L-谷氨酰胺之外。在蒸餾滅菌之前和之后測(cè)量它們的降解產(chǎn)物，蒸餾滅菌是液體營(yíng)養(yǎng)配方食品常用的處理方法(本文使用在128℃下持續(xù)5分鐘)。產(chǎn)品在室溫下(20-22℃)儲(chǔ)存，測(cè)量在第1、2和3個(gè)月時(shí)的降解產(chǎn)物。將谷氨酰胺、N-乙?；?L-谷氨酰胺和焦谷氨酸(如果存在的話)在各方法和時(shí)間點(diǎn)上進(jìn)行量化。為了通過HPLC分析谷氨酰胺、N-乙?；?L-谷氨酰胺和焦谷氨酸，將樣本按照下述方法進(jìn)行過濾。將5.0mL樣本轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中。加入20滴1M鹽酸，用去離子水將樣本稀釋至一定體積。樣本通過0.45微米過濾器(Millipore，Millexg-HV，25mm)過濾。樣本按照上述方法進(jìn)行HPLC分析(熱穩(wěn)定性部分)。通過下述方法測(cè)定存在于該蛋白制劑中焦谷氨酸總量，包括游離焦谷氨酸和N-末端焦谷氨酸。首先，將樣本制成水溶液形式，濃度為大約18g總蛋白質(zhì)/L。20毫升的所制備得到的樣本原料置于1.5mL螺帽小瓶中，加入980毫升新鮮酶溶液(0.05MTris、0.005M二硫代蘇糖醇、0.001M乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)，pH8.0，含有11單元的果糖葡萄糖氨基肽酶/mL)。小瓶緊緊密封，在室溫下(21-24℃)孵育24小時(shí)。然后溶液按照下面詳述的方法通過C-18SPE藥筒加工。為了測(cè)量游離的焦谷氨酸，將該最初的樣本溶液稀釋至總蛋白質(zhì)含量在去離子水中為2-3g/L，然后通過C-18SPE藥筒加工。C-18SPE(固相萃取)藥筒(100mg/1mL大小)來自Burdick&Jackson，Muskegon，MI。用2×5體積的甲醇制備得到SPE藥筒供使用，然后用2×5體積的去離子水清洗。慢慢加入1mL樣本，將通過的材料收集在1克螺帽小瓶中。通過加入2×500毫升去離子水，手機(jī)通過相同小瓶中的體積完成洗提。混合洗出液，然后一部分樣本在HPLC分析之前通過0.45毫米過濾器(25mm，0.45毫米過濾器，來自Gelman，AnnArbor，MI)過濾。所用HPLC系統(tǒng)具有下述參數(shù)泵處理器G1312A，自動(dòng)進(jìn)樣處理器G1313A，溫度調(diào)節(jié)裝置柱室處理器G1316A，二極管陣列檢測(cè)器處理器G1315A，峰綜合器/數(shù)據(jù)加工處理器G2170AA，均來自AgilentTechnologies，PaloAlto，CA.柱子6.5×150mmION-310，8毫米，來自InteractionChromatography，SanJose，CA。使用之前，系統(tǒng)預(yù)先在流動(dòng)相(5mNH2SO4)中、40℃下、0.3mL/min平衡。為了進(jìn)行分析，注入10毫升樣本或者標(biāo)準(zhǔn)品，柱子用0.3mL/min的移動(dòng)相在40℃下洗脫。通過UV吸收在210nm和220nm處檢測(cè)洗脫材料。流動(dòng)時(shí)間為45分鐘。通過與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照確定未知的樣本濃度。三種焦谷氨酸的水溶液通常足以用作標(biāo)準(zhǔn)品，即10、20、和40mg/L(焦谷氨酸來自Fluka，Milwaukee，WI)。N-乙?；?L-谷氨酰胺在營(yíng)養(yǎng)類型產(chǎn)品中在滅菌期間或者室溫儲(chǔ)存3個(gè)月以后沒有顯示出降解產(chǎn)物。結(jié)果匯總在表4中。在所有時(shí)間點(diǎn)上都檢測(cè)到對(duì)應(yīng)于N-乙?；?谷氨酸的小峰，但是始終保持大約相同的濃度，這表明對(duì)于N-乙?；?谷氨酸而言不存在可測(cè)出的降解產(chǎn)物。在谷氨酰胺補(bǔ)充產(chǎn)品中，經(jīng)過滅菌步驟，谷氨酰胺降低至最初濃度的1/3；在2個(gè)月后檢測(cè)到?jīng)]有谷氨酰胺。在該產(chǎn)品種，檢測(cè)到焦谷氨酸的濃度與谷氨酰胺的完全轉(zhuǎn)化相一致。表4對(duì)比液體營(yíng)養(yǎng)配方食品中的N-乙?；?L-谷氨酰胺和谷氨酰胺在加工過程和室溫下儲(chǔ)存3個(gè)月之后的穩(wěn)定性。*根據(jù)谷氨酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)因子計(jì)算。在試驗(yàn)后期沒有獲得合適的標(biāo)準(zhǔn)品。**根據(jù)焦谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)因子計(jì)算。實(shí)施例3谷氨酰胺和N-乙?；?L-谷氨酰胺的生物利用度進(jìn)行下面的研究以N-乙?；?L-谷氨酰胺相對(duì)于谷氨酰胺在豬模型中的生物利用度比例。腸袢模型使用了離體腸的一部分以評(píng)價(jià)N-乙?；?L-谷氨酰胺和谷氨酰胺的吸收和機(jī)理。該進(jìn)食模型評(píng)價(jià)了在與往常一樣進(jìn)食之后對(duì)N-乙?；?L-谷氨酰胺和谷氨酰胺的吸收情況。腸環(huán)模型在4天內(nèi)使22只稱重為15-20kg的馴養(yǎng)豬適應(yīng)試驗(yàn)條件。隨意給豬進(jìn)食滿足適合這些動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需求(NutrientRequirementsofSwine，第9版，1998，SubcommitteeonSwineNutrition，NationalResearchCouncil)的標(biāo)準(zhǔn)豬食和水。隨機(jī)將這些動(dòng)物分成C組[6只豬，服用葡萄糖鹽水溶液(BrauncatNo622647)、5％葡萄糖、0.9％NaCl]、G組[8只豬，服用相同的用8g/lGln(SigmacatNoG-3126)加強(qiáng)的葡萄糖鹽水溶液]、以及N組[8只豬，服用相同的用10g/lNAQ(SigmacatNoA-9125)加強(qiáng)的葡萄糖鹽水溶液]。在手術(shù)之前，讓動(dòng)物絕食15小時(shí)。試驗(yàn)當(dāng)天，給動(dòng)物稱重，用Stresnil和penthotal麻醉。通過中腹矢狀切割手術(shù)剖開麻醉后的豬。在大約1米的近空腸片段，大約1米的Treitz韌帶，以50-75mL/min的速度填入125mL分析溶液。通過在第0、15、30、60、90、120、150和180分鐘穿刺輸注腸得到腸輸注溶液樣本。樣本在液氮中冷凍，保持在-80℃下直到進(jìn)行分析。通過在第0、15、30、60、90、120、150和180分鐘穿刺門靜脈在含有抗凝血?jiǎng)┑脑嚬苤蝎@得門靜脈血樣本。樣本保持在4℃下直到在1500xg下離心15分鐘以分離血漿和紅血細(xì)胞。血漿在-20℃冷凍直到進(jìn)行分析。通過在第0、60、120和180分鐘穿刺在含有抗凝血?jiǎng)┑脑嚬苤蝎@頸靜脈血樣本。3小時(shí)后，豬死亡，從25cm輸注腸片段獲得粘膜樣本。該部分使用冰冷的鹽水溶液充分洗滌，沿長(zhǎng)度方向攤開。通過使用玻璃刮刀刮擦腸內(nèi)表面除去粘膜，然后在液氮中于-80℃下儲(chǔ)存。按照下面的方法對(duì)N-乙?；?L-谷氨酰胺進(jìn)行分析。對(duì)于腸輸注溶液樣本和血漿樣本，將部分樣本用0.05％全氯乙酸(PCA)的水溶液稀釋1∶10(w/v)。對(duì)于粘膜樣本，將0.2mg濕樣本用5mL的0.05％PCA水溶液勻化。離心(15,000xg，3分鐘，環(huán)境溫度)后，樣本通過0.45毫米過濾器過濾，注入由2690SeparationModule、PDA監(jiān)測(cè)器和LichroCart250-4藥筒(PurospherRP18e，250×4mm，5毫米)組成的HPLC色譜系統(tǒng)中。移動(dòng)相由磷酸鹽緩沖液0.1M、pH為2.7組成，流速為1mL/分鐘。在210nm處檢測(cè)N-乙?；?L-谷氨酰胺的質(zhì)量。按照下面的方法對(duì)谷氨酰胺進(jìn)行分析。除了樣本用0.05％PCA水溶液稀釋1∶400(w/v)之外，按照上面的方法制備得到用于N-乙?；?L-谷氨酰胺腸分析的輸注溶液樣本和血漿樣本。樣本通過0.45毫米過濾器過濾之后，20毫升混合物根據(jù)AccQ-Tag方法(WatersCorp.)衍化，用水稀釋至1mL。將樣本簡(jiǎn)單地用硼酸鹽溶液緩沖，用20毫升反反應(yīng)活性物質(zhì)衍化。1分鐘后，樣本稀釋至1mL，注入HPLC體系中，其由2690SeparationModule、熒光監(jiān)測(cè)器和SupelcoSilLC-18柱(250×4mm，3毫升)組成。移動(dòng)相由磷酸鹽緩沖液0.1M、pH為7.5以及0.25％三乙胺和9％乙腈組成，流速為1mL/分鐘。使用250nm的激發(fā)波長(zhǎng)、在395nm監(jiān)測(cè)激發(fā)，完成對(duì)谷氨酸酯和谷氨酰胺的檢測(cè)和量化。使用已經(jīng)建立的耦合酶測(cè)定法對(duì)葡萄糖進(jìn)行分析。簡(jiǎn)單地將樣本葡萄糖用己糖激酶和ATP(三磷酸腺苷)磷酸化，所得到的葡萄糖-6-磷酸鹽用葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶轉(zhuǎn)化為6-膦酰基葡萄糖酸鹽。在后者反應(yīng)期間，NAD(煙堿腺嘌呤二核苷酸)轉(zhuǎn)化為NADH(NAD的還原形式)，導(dǎo)致在340nm處的吸收增加，其為原樣中重葡萄糖濃度的一部分。該測(cè)定法可作為臨床化學(xué)試劑盒由SigmaChemicalCompany，St.Louis，MO(currentcatalognumber16-20)購(gòu)買得到。結(jié)果殘留在腸內(nèi)腔中的谷氨酰胺或N-乙?；?L-谷氨酰胺比引入輸注溶液之后的時(shí)間。殘留在輸注入含有等量谷氨酰胺或N-乙?；?L-谷氨酰胺的豬腸內(nèi)腔中谷氨酰胺或N-乙酰基-L-谷氨酰胺的殘留百分比在最初的90分鐘內(nèi)非常相似。各組在120和180分鐘時(shí)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。在t1/2(大約在45分鐘時(shí))，在谷氨酰胺或N-乙?；?L-谷氨酰胺之間無顯著性差異。圖3以圖表形式描述了所加入的谷氨酰胺或N-乙?；?L-谷氨酰胺殘留在腸腔中的量作為在本文所述內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)中向離體豬腸環(huán)中引入該物質(zhì)后的時(shí)間的函數(shù)。殘留的分析物以占計(jì)時(shí)起點(diǎn)時(shí)的分析物的百分?jǐn)?shù)表示。圖6以圖表形式描述了在本文所述的內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)之后所測(cè)得的豬腸空腸粘膜中的谷氨酰胺和谷氨酸鹽的含量(以mcg/克濕粘膜表示)。殘留在腸內(nèi)腔中的葡萄糖比引入輸注溶液之后的時(shí)間。在任何時(shí)間C和G組之間均無顯著性差異。除了在第15分鐘之外，C和N組之間無顯著性差異。G和N組從時(shí)間第120分鐘后開始出現(xiàn)差異，盡管通過Bonferroni′s校準(zhǔn)，其唯一差異出現(xiàn)在180分鐘。圖4以圖表形式描述了所加入的葡萄糖殘留在腸腔中的量作為在本文所述內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)中向離體豬腸袢中引入該物質(zhì)后的時(shí)間的函數(shù)。殘留的葡萄糖以占計(jì)時(shí)起點(diǎn)時(shí)的量的百分?jǐn)?shù)表示。在向腸袢中引入測(cè)試溶液之后入口血液中的谷氨酰胺。如果將結(jié)果表達(dá)為初濃度的百分?jǐn)?shù)形式，那么在對(duì)照組(C)和(G)以及C和N-乙?；?L-谷氨酰胺(N)組之間出現(xiàn)差異(在90和150分鐘，C對(duì)G；以及在90、120、150和180分鐘，C對(duì)N)。在G和N之間不存在顯著性差異。如果結(jié)構(gòu)表達(dá)為絕對(duì)值的形式的話，那么除了在120分鐘之外，C和N之間不存在顯著性差異。一起考慮，G和N從120分鐘開始至試驗(yàn)結(jié)束不同于C。圖5以圖表形式描述了袢門血液中的谷氨酰胺含量(mcg/mL)作為向腸環(huán)中引入測(cè)試溶液之后的時(shí)間的函數(shù)。在各組袢門血液中的葡萄糖以及外周血液中的谷氨酰胺或葡萄糖方面不存在顯著性差異。在試驗(yàn)過程中，在袢門血液或外周血液中檢測(cè)到的完整N-乙酰基-L-谷氨酰胺濃度在任何時(shí)刻只是存在可忽略不計(jì)的差異(百萬分之幾)?？漳c粘膜中的谷氨酸(GLU)和谷氨酰胺(GLN)在N和C組中的谷氨酸鹽濃度比G組中高，同時(shí)在N和G組的粘膜中還顯示出更高的谷氨酰胺，G組基本上高于N組。然而，谷氨酰胺+谷氨酸鹽濃度的加和與G和N組中相似，這表明采用這兩種食物向粘膜代謝系統(tǒng)遞送谷氨酰胺碳骨架是相當(dāng)?shù)摹Ｔ谡衬颖局袡z測(cè)不到完整的N-乙?；?L-谷氨酰胺。圖6以圖表形式描述了在本文所述的內(nèi)科手術(shù)試驗(yàn)之后所測(cè)得的豬腸空腸粘膜中的谷氨酰胺和谷氨酸鹽的含量(以mcg/克濕粘膜表示)?？偠灾?，N-乙酰基-L-谷氨酰胺顯示出與葡萄糖相似的生物利用度，但略微低于谷氨酰胺。在吸收后的利用方面，似乎N-乙?；?L-谷氨酰胺非常類似于谷氨酰胺。被吸收后，N-乙?；?L-谷氨酰胺迅速通過腸內(nèi)酰基轉(zhuǎn)移酶水解，進(jìn)入正常的谷氨酰胺代謝系統(tǒng)，從而在粘膜中獲得與進(jìn)食等量谷氨酰胺所獲得到的谷氨酰胺+谷氨酸鹽濃度同樣高的濃度。過量的谷氨酰胺被排泄至袢門血液中，此處的谷氨酰胺濃度與進(jìn)食相等劑量的谷氨酰胺后所得到的濃度相當(dāng)。袢門血液中的N-乙?；?L-谷氨酰胺濃度僅有幾個(gè)ppm，這表明很少被血液完整吸收。N-乙?；?L-谷氨酰胺的高吸收比例以及與谷氨酰胺相似的代謝機(jī)理表明，在有機(jī)體分解代謝期各種營(yíng)養(yǎng)成分具有相同的生物學(xué)作用。進(jìn)食豬模型由指定農(nóng)場(chǎng)提供15只重15-20kg的豬。讓這些豬在2天內(nèi)適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件。隨意提供標(biāo)準(zhǔn)豬食和水。適應(yīng)后，將這些豬隨機(jī)分成C組[5只豬，服用標(biāo)準(zhǔn)豬食加3g/kgCr2O3，(MerckcatNo1.02483)]、G組[5只豬，服用食物C加8g/kgGln，(Ajimoto)]、和N組[5只豬，服用食物C加10.5g/kgN-乙?；?L-谷氨酰胺，(Flamma)]。在試驗(yàn)研究期間，各組中的每只動(dòng)物服用1000克與其相應(yīng)的食物/天，分成3份進(jìn)食，隨意提供水。進(jìn)食試驗(yàn)期持續(xù)5天。在試驗(yàn)當(dāng)天，給動(dòng)物稱重，然后在上午7:00服用標(biāo)準(zhǔn)攝入量的食物(每只動(dòng)物333g食物)。進(jìn)食后3小時(shí)，給動(dòng)物稱重，服用鎮(zhèn)靜劑，通過刺破頸靜脈取血。通過中腹矢狀切割手術(shù)迅速將豬剖開，取出十二指腸、空腸(大約2米的Treitz片斷)和回腸(30cm回盲瓣)中的內(nèi)容物，在液氮中冷凍，水解，儲(chǔ)存于-80℃下直到分析。除去肝臟和腎臟樣本，切開可看得見的脂肪和連接組織，在液氮中迅速冷凍并儲(chǔ)存在-80℃下直到分析。按照在離體腸環(huán)試驗(yàn)中描述的方法，得到腸粘膜樣本，在分析之前儲(chǔ)存。分析腸內(nèi)容物的谷氨酰胺、N-乙?；?L-谷氨酰胺和氧化鉻(III)。為了分析N-乙?；?L-谷氨酰胺，將水解后的腸內(nèi)容物以1∶20(w/v)溶解于0.05％PCA的水溶液中，然后按照在上述腸環(huán)中描述的方法進(jìn)行HPLC分析。為了分析谷氨酰胺，將水解后的腸內(nèi)容物進(jìn)行處理，然后按照在上述腸環(huán)中描述的方法進(jìn)行分析。將鉻摻入食物中以得到反映內(nèi)容物/kg最初食物的校正因子。為了分析氧化鉻(III)，進(jìn)行下述步驟。將代表性的水解腸內(nèi)容物稱量入鎳坩鍋中，至于馬弗爐中。溫度升至500℃，繼續(xù)保持2小時(shí)。冷卻后，在樣本灰的大約10倍重量加入熔融混合物(Na2CO3、K2CO3、KNO3，10∶10∶4w/w/w)，充分混和。在加入額外量的熔融混合物在表面上形成薄層，在明火上使用煤氣灶熔融30分鐘，直到得到透明的熔融物。從火爐上除去坩鍋，冷卻，通過用大約20mL水洗滌鍋壁，然后在平板電爐上輕微加熱大約30分鐘，從而充分提取出熔融物。當(dāng)外殼充分松散時(shí)，將坩鍋用水洗滌四次，所有的洗液加入至100mL容量瓶中，稀釋至全體積。通過利用對(duì)0、50、100、200和500毫升標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液(2.9034gK2Cr2O7/L，相當(dāng)于1.5g/LCr2O3)進(jìn)行分析得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將讀取的吸光度轉(zhuǎn)化為Cr2O3的mg數(shù)。結(jié)果吸收度數(shù)據(jù)如下表5所示。十二指腸樣本含有不足以進(jìn)行測(cè)定的氧化鉻(II)含量。分析結(jié)果不能被校準(zhǔn)以反映出內(nèi)容物/kg最初食物。中空腸含有基本上相當(dāng)?shù)墓劝滨０窛舛?在食物G的情形中)和N-乙?；?L-谷氨酰胺(在食物N中)，這表明在十二指腸和近空腸中具有相似的吸收情況。然而，這些食物還含有完整的蛋白質(zhì)，正如對(duì)照食物的分析結(jié)果所表明的那樣，這些蛋白質(zhì)的消化物可能也產(chǎn)生明顯的游離谷氨酰胺。這表明，最初食物中的游離谷氨酰胺含量在中回腸之前幾乎被完全吸收。對(duì)髂骨末梢的內(nèi)容物進(jìn)行分析，表明，盡管游離谷氨酰胺的吸收可以在中回腸和髂骨末梢之間持續(xù)，但是沒有觀察到N-乙?；?谷氨酰胺的吸收。然而，所有的吸收數(shù)據(jù)表明，在該模型中大約有77％的N-乙?；?L-谷氨酰胺被吸收。表5作為豬食物組分的N-乙酰基-L-谷氨酰胺和谷氨酰胺的吸收情況*對(duì)于谷氨酰胺和對(duì)照食物，數(shù)據(jù)是指谷氨酰胺(毫摩爾/kg最初食物)。對(duì)于N-乙酰基-L-谷氨酰胺食物，數(shù)據(jù)是指N-乙酰基-L-谷氨酰胺(毫摩爾/kg最初食物)。最初食物是(谷氨酰胺＝54.8毫摩爾谷氨酰胺/kg食物、N-乙?；?L-谷氨酰胺＝55.8毫摩爾N-乙?；?L-谷氨酰胺/kg食物)。**N/D＝未檢測(cè)到。氧化鉻(II)值低于該測(cè)定方法的數(shù)值極限，沒有得到校正值。在粘膜、肝臟和腎臟中的?；D(zhuǎn)移酶活性—在對(duì)照豬的幾個(gè)感興趣組織(就營(yíng)養(yǎng)可能具有的重要性而言)中測(cè)量了?；D(zhuǎn)移酶的活性。測(cè)得了在所有測(cè)試組織包括空腸粘膜、肝臟和腎臟中的?；D(zhuǎn)移酶活性。所測(cè)得濃度為在空腸粘膜中為948+300IU/g濕組織(17.3+7.0IU/mg蛋白質(zhì))，在肝臟中為12,770+1110IU/g濕組織(159+30IU/mg蛋白質(zhì))，在腎臟中為19,630+3020IU/g濕組織(302+47IU/mg蛋白質(zhì))。總而言之，N-乙酰基-L-谷氨酰胺主要是在十二指腸和空腸上部吸收，上述部位吸收了至少77％的劑量。在N-乙?；?L-谷氨酰胺和谷氨酰胺之間存在兩個(gè)主要差異N-乙?；?L-谷氨酰胺攝取飽和出現(xiàn)較早而回腸吸收較低。實(shí)施例4N-乙?；?L-谷氨酰胺對(duì)于因營(yíng)養(yǎng)不良而引起的腸損傷的作用進(jìn)行下面的研究以評(píng)價(jià)N-乙?；?L-谷氨酰胺與游離谷氨酰胺相比，對(duì)于豬中因蛋白質(zhì)-能量營(yíng)養(yǎng)不良而引起的腸損傷的作用。在本研究中，由指定農(nóng)場(chǎng)提供了5周大的馴養(yǎng)豬。將這些豬隨機(jī)分成1-2組。第三組隨意進(jìn)食ENSUREPLUS(RossProductsDivision，AbbottLaboratories)，持續(xù)30天。在第二組中，9只豬也進(jìn)食了ENSUREPLUS，但僅僅是第一組日攝取量的20％。將第二組分為3個(gè)小組，每組6只，均服用酪蛋白鈣或者谷氨酰胺或N-乙?；?L-谷氨酰胺作為日常補(bǔ)充。在研究初期，日平均能量和供給給對(duì)照組的蛋白質(zhì)為3300千卡、138g蛋白質(zhì)，到研究結(jié)束時(shí)為4500千卡、187g蛋白質(zhì)。在第二組中，酪蛋白酸鹽、谷氨酰胺和N-乙?；?L-谷氨酰胺的補(bǔ)充提供了附加的1.32克氮當(dāng)量/天(基本上每天補(bǔ)充6.89克L-谷氨酰胺、或8.87克N-乙?；?L-谷氨酰胺或者8.42克酪蛋白質(zhì))。30天后，所有的豬絕食16小時(shí)。然后給這些動(dòng)物稱重，服鎮(zhèn)靜劑，麻醉，最后頸靜脈穿刺使其死亡。迅速除去整個(gè)小腸片段。來自Treitz韌帶的60cm長(zhǎng)小腸片段被認(rèn)為是空腸近端。為了對(duì)空腸進(jìn)行組織學(xué)分析，選擇來自Treitz韌帶的5cm長(zhǎng)片段。最靠近盲腸瓣的60cm長(zhǎng)度被認(rèn)為是回腸末梢。為了對(duì)回腸進(jìn)行組織學(xué)分析，選擇來自盲腸瓣的5cm長(zhǎng)片段。將這些腸片段用冰冷的鹽水溶液充分洗滌，沿長(zhǎng)度方向攤開。通過使用玻璃刮刀刮擦腸內(nèi)表面除去粘膜，然后在液氮中于-80℃下儲(chǔ)存直到進(jìn)行生化分析。將空腸和回腸粘膜在10mM磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中施用機(jī)械Potter勻漿器勻化進(jìn)行蛋白質(zhì)和DNA測(cè)定。為了測(cè)定受損、功能性和抗氧化劑防御系統(tǒng)的酶標(biāo)記物，將粘膜勻漿在3000g下離心10分鐘。所得到的上清液用于酶測(cè)定。為了測(cè)定總谷胱甘肽，漿粘膜在5％三氯乙酸中勻化，在8000g下離心5分鐘。在上述樣本上進(jìn)行生化分析和免疫學(xué)分析。分別采用Bradford方法(AnalyticalBiochemistry，Volume72，pages248-254，1976)和Labarca和Paigen方法(AnalyticalBiochemistry，Volume102(2)，pages344-352，1980)測(cè)得腸粘膜和DNA的濃度。因營(yíng)養(yǎng)不良引起的腸損傷程度通過采用Goldstein方法(R.Goldstein，T.Klein，S.Freier和J.Menczel.AmericanJournalofClinicalNutrition241224-1231，1970)測(cè)量堿性磷酸酶活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過測(cè)量谷胱甘肽還原酶(GR)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GPOX)的活性以及非蛋白質(zhì)巰基(主要是還原的谷胱甘肽(GSH))的濃度評(píng)價(jià)對(duì)抗氧化性損傷的防御系統(tǒng)。通過Carlberg和Mannervik的方法(I.Carlberg和B.Mannervik，MethodsinEnzymology，Volume113，pp484-490，1985)評(píng)價(jià)谷胱甘肽還原酶的活性。采用Habig等人的方法(W.H.Habig，M.J.Pabst和W.B.Jakoby，JournalofBiologicalChemistry.2947130-7139，1984)測(cè)定谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶。通過Flohe和Gunzler的方法(L.Flohe和W.A.Gunzler，MethodsinEnzymology，Volume105，pp114-121，1984)測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶的活性，非蛋白質(zhì)巰基含量(報(bào)道為還原的谷胱甘肽等價(jià)物)通過Anderson方法(M.E.Anderson，MethodsinEnzymology，133548-554，1985)測(cè)量。如下面所詳細(xì)描述的那樣，按照Gautreaux等人的步驟(M.D.Gautreaux，E.A.Deitch和R.D.Berg，InfectionandImmunity62(7)2874-2884，1994)離體腸淋巴細(xì)胞。將分別來自空腸和回腸的小腸片段分離開，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，SigmaSt.Louis，MO，USA)洗脫掉鎮(zhèn)靜劑含量。切除掉可看得見的Peyer′s斑點(diǎn)，沿著長(zhǎng)度方向?qū)⒛c剖開，切成小塊。為了分離小腸上皮細(xì)胞，將這些小塊在37℃下的振搖水浴(每分鐘搖動(dòng)120次)中、在含有5mMdithiotreitol(DTT；RocheMolecularBiochemicals，Indianapolis，IN，USA)、2mMEDTA(Sigma，St.Louis，MO，USA)和25mMTris緩沖液(Sigma，St.Louis，Mo，USA)的25mlHanks平衡鹽溶液(HBSS；Sigma，St.Louis，MO，USA)中孵育30分鐘；輕輕倒出上清液，加入新鮮的HBSS-DTT-EDTA-Tris，重復(fù)上述孵育步驟。合并來自進(jìn)行兩次孵育得到的含有上皮細(xì)胞的上清液，細(xì)胞通過用含有5％(v/v)對(duì)熱不敏感的胎腸血漿(Sigma，St.Louis，MO，USA)、20mMHEPES(Sigma，St.Louis，MO，USA)、2mML-谷氨酰胺、500U青霉素以及100FLg/ml鏈霉素(Sigma，St.Louis，MO，USA)的rpmi1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)洗滌。通過將腸碎片置于40ml含有膠原酶0.05U/ml、dispase0.30U/ml(Sigma，St.Louis，MO，USA)和脫氧核糖核酸酶I500U/ml(RocheMolecularBiochemicals，Indianapolis，IN，USA)的完全培養(yǎng)基中于37℃的搖動(dòng)水浴(每分鐘搖動(dòng)120次)中從殘余沉淀物中分離得到纖層本體淋巴細(xì)胞(LPL)。切除掉的Peyer′s補(bǔ)丁置于完全培養(yǎng)基中，用解剖刀切開。然后將潔凈的Peyer′s補(bǔ)丁用膠原酶按照在前面分離LPL釋放出Peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞(PPL)中的方法處理(還原孵育時(shí)間60分鐘)。將由表皮細(xì)胞、纖層本體和Peyer′s補(bǔ)丁分離得到的所有類型細(xì)胞經(jīng)過不連續(xù)的PercollTM(Sigma，St.Louis，MO，USA)密度梯度離心以富集淋巴細(xì)胞。該商購(gòu)得到的PercollTM溶液用9％NaCl稀釋9∶10，得到等滲的PercollTM溶液，將其用完全培養(yǎng)基稀釋得到3種區(qū)別在于PercollTM濃度百分比的溶液(75％、40％和30％)，它們按照逐漸減少的順序使用。將這些細(xì)胞再次懸浮于4ml完全培養(yǎng)基中，余下30％部分。在650g下離心20分鐘后，除去75和40％層之間的界面，細(xì)胞通過在25ml完全培養(yǎng)基中離心進(jìn)行洗滌。然后再次將細(xì)胞懸浮于4ml40％PercollTM中，在650g下離心。收集到富集淋巴細(xì)胞(IEL、LPL和PPL)的細(xì)胞球，通過用PBS離心進(jìn)行洗滌。分離得到的淋巴細(xì)胞用按照下述方法進(jìn)行流式血細(xì)胞計(jì)數(shù)的單克隆抗體標(biāo)記將100μl的各淋巴細(xì)胞制備液(2×106cel/ml)置于具有不同濃度的單克隆抗體(AntiCD1FITC、AntiCD3sFITC、AntiCD4aPE、AntiCD8aPE、AntiCD1lb/Mac-1APC、AntiCD21APC)的3-ml試管中，在暗處于4℃下孵育30分鐘。細(xì)胞用PBS洗滌，通過離心(500g，5分鐘)形成球狀，再次懸浮于350ulPBS中。在FACScaliburTM流式血細(xì)胞計(jì)數(shù)器(BectonDickinson)上對(duì)細(xì)胞制備液進(jìn)行熒光活化的細(xì)胞分類(FACS)分析。對(duì)于每種細(xì)胞制備液，通過3組對(duì)照(熒光素異硫代氰酸酯-FITC、藻紅蛋白-PE和異種藻藍(lán)蛋白-APC)測(cè)定非特異性熒光。小腸樣本的組織學(xué)分析通過電子透射顯微鏡完成。將空腸和回腸的樣本固定在30g/L戊二醛的0.1mol/L甲次砷酸鈉緩沖溶液中，pH7.3，然后再固定在15g/L四氧化鋨中。然后樣本在丙酮中脫水，植于Epon812樹脂中。極薄部分用乙酸鈾酰和檸檬酸鉛雙層標(biāo)記，在Zeiss902電子透射顯微鏡(Zeiss，Oberkochen，Germany)下檢查。生化結(jié)果進(jìn)食攝取量減少至對(duì)照組的20％導(dǎo)致完全不能生長(zhǎng)。這些營(yíng)養(yǎng)不良的豬總的體重平均損失2-3kg，而對(duì)照組在30天的實(shí)驗(yàn)期間增長(zhǎng)18kg。肝臟重量以及每長(zhǎng)度的空腸和粘膜重量也因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)不良而明顯減輕(表6)。表6對(duì)照和蛋白質(zhì)能量不足組的肝臟和小腸重量*對(duì)對(duì)照組的顯著性差異(p＜0.05)。相對(duì)于對(duì)照組(數(shù)據(jù)未示出)，營(yíng)養(yǎng)不良豬中的DNA和粘膜單位長(zhǎng)度的蛋白質(zhì)含量明顯低(2-3倍)。然而，在任何腸片段中蛋白質(zhì)/DNA的比例不受PEM影響。該結(jié)果表明，在營(yíng)養(yǎng)不良豬的小腸中，整個(gè)蛋白質(zhì)和DNA合成受到削弱。腸中的蛋白質(zhì)(回腸和空腸)和DNA(回腸)含量在進(jìn)食NAQ補(bǔ)充的營(yíng)養(yǎng)不良豬中比在進(jìn)食酪蛋白酸鹽或谷氨酰胺的豬種高。該結(jié)果表明，在營(yíng)養(yǎng)不良期間NAQ部分保護(hù)了蛋白質(zhì)和DNA的合成過程。作為腸損傷標(biāo)記物的堿性磷酸鹽片段的活性在營(yíng)養(yǎng)不良豬中顯著地比在對(duì)照空腸片段(數(shù)據(jù)未示出)中低(2-3倍)。在回腸片段中，堿性磷酸鹽較少受營(yíng)養(yǎng)不良的影響。此外，進(jìn)食谷氨酰胺或者NAQ補(bǔ)品的營(yíng)養(yǎng)不良豬在回腸中具有比進(jìn)食添加了酪蛋白酸鹽的豬高的AP活性。谷胱甘肽是整個(gè)抗氧化性防御系統(tǒng)的中心部分。它是有效的自由基清道夫，同時(shí)也與其它代謝功能相關(guān)，包括維持還原態(tài)的蛋白質(zhì)巰基、GT和GPX共促因子、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)、以及蛋白質(zhì)和DNA合成。在營(yíng)養(yǎng)不良豬和對(duì)照組的腸片段中的總谷胱甘肽濃度顯著降低。然而，在進(jìn)食NAQ的營(yíng)養(yǎng)不良豬的腸粘膜中的GSH含量略微比在進(jìn)食酪蛋白酸鹽或谷氨酰胺補(bǔ)品的豬中的高，當(dāng)然這種差異還未構(gòu)成顯著性差異。發(fā)現(xiàn)分別負(fù)責(zé)醛解毒和谷胱甘肽還原的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽還原酶在小腸中的活性因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)不良的緣故均有所降低(又是2-3倍)。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性的降低可能通過醛類、環(huán)氧化物以及其它含有親電子中心的產(chǎn)物堆積在粘膜中而使腸功能進(jìn)一步惡化。發(fā)現(xiàn)這種活性在進(jìn)食添加了N-乙酰基-L-谷氨酰胺的豬中較少受營(yíng)養(yǎng)不良的影響。谷胱甘肽還原酶以及谷胱甘肽過氧化物酶的活性在小腸片段中由于營(yíng)養(yǎng)不良均降低了2-3倍。谷胱甘肽還原酶還與谷胱甘肽由其氧化形式再生有關(guān)。谷胱甘肽過氧化物酶氧化兩個(gè)還原谷胱甘肽分子來解毒過氧化物。還原谷胱甘肽在進(jìn)食N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)品的豬的腸粘膜中具有較高的趨勢(shì)，這與在相同組中谷胱甘肽過氧化物酶活性較高有一定關(guān)系?？偠灾?，營(yíng)養(yǎng)不良對(duì)于抗氧化劑防御系統(tǒng)的不利作用在進(jìn)食N-乙酰基-L-谷氨酰胺補(bǔ)充的動(dòng)物中似乎比在進(jìn)食酪蛋白酸鹽或谷氨酰胺補(bǔ)品的動(dòng)物中更不明顯。免疫學(xué)結(jié)果作為營(yíng)養(yǎng)不良結(jié)果的小腸peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞總數(shù)目有所減少。在回腸中，peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞總數(shù)目在補(bǔ)充酪蛋白酸鹽和谷氨酰胺的豬中顯著比在補(bǔ)充N-乙?；?谷氨酰胺或者對(duì)照組中的總數(shù)目低。在空腸中，也出現(xiàn)這樣一種趨勢(shì)，那就是peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞總數(shù)目在補(bǔ)充N-乙酰基-谷氨酰胺也顯著比在補(bǔ)充酪蛋白酸鹽和谷氨酰胺的豬中的總數(shù)目高。另一方面，空腸外表皮淋巴細(xì)胞的總數(shù)目在所有營(yíng)養(yǎng)不良組中顯著比對(duì)照組中的高。對(duì)于所有實(shí)驗(yàn)組而言，沒有發(fā)現(xiàn)在小腸纖層中的淋巴細(xì)胞數(shù)目方面存在差異。在所有營(yíng)養(yǎng)不良組中，表達(dá)B細(xì)胞標(biāo)志物(CD1和CD21)的peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞比在健康組中的低，尤其是在CD1+淋巴細(xì)胞的情形中。CD21+peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞數(shù)目在回腸中有所降低，其在對(duì)照組與酪蛋白酸鹽和谷氨酰胺補(bǔ)充組之間出現(xiàn)顯著性差異，而不是N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)充組。在空腸中也出現(xiàn)相同的趨勢(shì)，但沒有達(dá)到顯著性差異。在空腸和回腸中的CD1lb+peyer′s補(bǔ)丁淋巴細(xì)胞數(shù)目降低也顯示出這樣一種趨勢(shì)，那就是N-乙酰基-L-谷氨酰胺補(bǔ)充組比酪蛋白酸鹽或谷氨酰胺補(bǔ)充組低?？漳c和回腸peyer′s斑點(diǎn)淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞(CD3+細(xì)胞)由于營(yíng)養(yǎng)不良有所減少。這種減少是因?yàn)橹?CD4+)和細(xì)胞毒素(CD8+)T細(xì)胞。然而這種T細(xì)胞的減少具有這樣一種趨勢(shì)，那就是N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)充組比酪蛋白酸鹽或谷氨酰胺補(bǔ)充組低。在有些情形例如回腸中的CD4+和CD8+細(xì)胞中，在對(duì)照組和酪蛋白酸鹽或谷氨酰胺補(bǔ)充組之間而不是對(duì)照組和N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)充組之間觀察到出現(xiàn)顯著性差異。如上所述，營(yíng)養(yǎng)不良促使了空腸中上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的總數(shù)增加。這種增加在兩類人群B細(xì)胞(CD21+)和T細(xì)胞(CD3+)中均觀察到。在B細(xì)胞中，CD1+淋巴細(xì)胞數(shù)目在N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)充組中顯著高于其它組。在T細(xì)胞中，T細(xì)胞毒素亞人群(CD8+)在營(yíng)養(yǎng)不良組中顯著高于對(duì)照組。然而，T協(xié)助子(CD4+)亞人群在谷氨酰胺和N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)充組中(而不是酪蛋白補(bǔ)充組)顯著高于對(duì)照組。這表明，谷氨酰胺和N-乙?；?L-谷氨酰胺對(duì)于T協(xié)助子(CD4+)亞人群具有選擇性作用。對(duì)于回腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的所有淋巴細(xì)胞亞人群，沒有觀察到存在顯著性差異。沒有觀察到在纖層本體淋巴細(xì)胞方面由于營(yíng)養(yǎng)不良出現(xiàn)較明顯的重要變化。相對(duì)于對(duì)照組而言，CD21+細(xì)胞(B細(xì)胞)在酪蛋白酸鹽補(bǔ)充組中有所降低，但這種降低在谷氨酰胺或者N-乙?；?L-谷氨酰胺補(bǔ)充組中均沒有觀察到。此外，N-乙酰基-L-谷氨酰胺補(bǔ)充組而不是谷氨酰胺補(bǔ)充組顯著不同于酪蛋白酸鹽補(bǔ)充組?？偠灾?，N-乙酰基-L-谷氨酰胺補(bǔ)充組表現(xiàn)均比谷氨酰胺或者酪蛋白酸鹽補(bǔ)充組好，顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的差異，可以降低因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)不良而引起的小腸免疫學(xué)變化，尤其是在B和T協(xié)助子亞人群的總細(xì)胞數(shù)目方面。組織學(xué)結(jié)果來自健康豬和營(yíng)養(yǎng)不良豬的空腸腸細(xì)胞的電子透射顯微圖如圖7所示。在對(duì)照豬(A、B組)，空腸腸細(xì)胞顯示出規(guī)則的微絨毛、狹窄的細(xì)胞間隙、規(guī)則的核以及含有高濃度粘液素的小球突細(xì)胞。在進(jìn)食補(bǔ)充有酪蛋白酸鹽的ENSUREPLUS配方食品的營(yíng)養(yǎng)不良豬的腸粘膜中(C、D組)，顯示出嚴(yán)重的萎縮現(xiàn)象和微絨毛減少、細(xì)胞間隙敞開、規(guī)則的核以及具有多泡體的清晰細(xì)胞質(zhì)區(qū)帶。在該組中，細(xì)胞脫落和材料擠入腸內(nèi)腔的現(xiàn)象也是明顯的。在營(yíng)養(yǎng)不良期間進(jìn)食補(bǔ)充有谷氨酰胺的ENSUREPLUS配方食品的營(yíng)養(yǎng)不良豬的空腸粘膜(E、F組)中，顯示出縮短的微絨毛、膨脹的細(xì)胞間隙、以及規(guī)則的小碎片核。在營(yíng)養(yǎng)不良的谷氨酰胺豬的空腸粘膜中還發(fā)現(xiàn)存在豐富的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞。進(jìn)食補(bǔ)充有NAQ的ENSUREPLUS配方食品的豬空腸粘膜(G、H組)更不易受蛋白質(zhì)能力營(yíng)養(yǎng)不良的影響。在該組中，空腸腸細(xì)胞顯示出微絨毛大小、核形狀、以及與對(duì)照豬空腸粘膜相接近的細(xì)胞間隙。與營(yíng)養(yǎng)不良的酪蛋白酸鹽和谷氨酰胺組相比，在營(yíng)養(yǎng)不良的NAQ組的空腸粘膜中出現(xiàn)的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞滲透現(xiàn)象是罕見的。圖8示出了來自健康豬和營(yíng)養(yǎng)不良豬的回腸腸細(xì)胞的電子透射顯微圖。在對(duì)照豬(A、B組)中，回腸淋巴細(xì)胞顯示出規(guī)則分布的微絨毛、具有不可見膨脹的細(xì)胞間隙、均勻且稠密的細(xì)胞質(zhì)以及具有大量分泌顆粒的小球突細(xì)胞。進(jìn)食補(bǔ)充有酪蛋白酸鹽的ENSUREPLUS配方食品的豬回腸粘膜(C、D組)顯示出微絨毛減少、某些細(xì)胞間隙膨脹、具有多泡體的處于擠出過程中的清晰細(xì)胞質(zhì)區(qū)帶。在該組中，寬的淋巴細(xì)胞滲透現(xiàn)象在回腸上皮細(xì)胞中也是明顯的。在營(yíng)養(yǎng)不良期間進(jìn)食補(bǔ)充有谷氨酰胺的ENSUREPLUS配方食品的豬回腸粘膜(E、F組)顯示出微絨毛減少、寬的細(xì)胞間隙、以及強(qiáng)烈的淋巴細(xì)胞滲透現(xiàn)象。與空腸粘膜一樣，進(jìn)食補(bǔ)充有NAQ的ENSUREPLUS配方食品的豬回腸粘膜(G、H組)更不易受蛋白質(zhì)能量不足的影響。其顯示出低的微絨毛變形、無可見膨脹的細(xì)胞間隙、在腸上皮細(xì)胞頂端部分發(fā)現(xiàn)罕見的淋巴細(xì)胞滲透現(xiàn)象以及豐富的含有高含量分泌顆粒的杯狀細(xì)胞。結(jié)論在正常生理?xiàng)l件下，在氧衍生的游離基的生成及其對(duì)細(xì)胞抗氧化體系的貢獻(xiàn)之間存在穩(wěn)態(tài)。在本研究中，由于蛋白質(zhì)能量營(yíng)養(yǎng)不良使得腸平衡被打破，導(dǎo)致谷胱甘肽減少。此外，腸內(nèi)免疫應(yīng)答應(yīng)為蛋白質(zhì)能量營(yíng)養(yǎng)不良而大受削弱。盡管在預(yù)防因小腸營(yíng)養(yǎng)不良而引起的生化和免疫學(xué)變化方面，沒有觀察到谷氨酰胺具有明顯的效果，這可能是因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)不良非常嚴(yán)重，但是N-乙?；?L-谷氨酰胺對(duì)于降低這種變化的嚴(yán)重程度具有積極作用。本研究表明，N-乙酰基-L-谷氨酰胺對(duì)于小腸細(xì)胞具有積極作用，甚至超過谷氨酰胺。另外，如圖7所示的來自健康和營(yíng)養(yǎng)不良豬的電子透射顯微圖表明，N-乙?；?L-谷氨酰胺在預(yù)防胃腸道上皮內(nèi)層發(fā)炎方面比谷氨酰胺更有效。實(shí)施例5利用未接受治療的腹腔疾病患者的組織培養(yǎng)物測(cè)試富含谷氨酰胺制劑對(duì)于本文所述腹腔疾病的毒性本研究的目的在于評(píng)價(jià)幾種不含麩質(zhì)的富含谷氨酰胺產(chǎn)品對(duì)于具有胃蛋白酶-胰蛋白酶的麩質(zhì)制劑的潛在毒性，已知具有胃蛋白酶-胰蛋白酶的麩質(zhì)制劑可以誘導(dǎo)腹腔疾病中的粘膜病變。另外還對(duì)由麩質(zhì)得到的富含谷氨酰胺或者谷氨酰胺改良產(chǎn)品進(jìn)行研究，以評(píng)價(jià)后者是否能夠誘導(dǎo)對(duì)腹腔疾病患者的粘膜破壞作用。本研究以隨機(jī)方式進(jìn)行。使用腹腔的組織培養(yǎng)模型進(jìn)行該研究。為了實(shí)現(xiàn)該項(xiàng)目目的，使用了未曾治療的腹腔疾病患者的小腸活組織碎片。招募十二名被診斷為潛在的未治療腹腔疾病患者的成年患者。它們的疾病通過出現(xiàn)大量的抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的臨床癥狀以及對(duì)小腸活組織切片的組織學(xué)分析加以確認(rèn)。有關(guān)組織培養(yǎng)終點(diǎn)的描述采用描述在Maiuri，L.等人，Gastroenterology110，1368-1378.(1996)中的標(biāo)準(zhǔn)方法制備組織培養(yǎng)物。簡(jiǎn)單地將小片活組織切片(大約1mm×1mm)裝在不銹鋼篩網(wǎng)上在補(bǔ)充有不同化合物的介質(zhì)中培養(yǎng)24小時(shí)。在本研究中采用了標(biāo)準(zhǔn)陽性和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照為1mg/ml的麩朊胃蛋白酶-胰蛋白酶。陰性對(duì)照為單獨(dú)的介質(zhì)。所使用的所有測(cè)試化合物的最終濃度為40μg/ml。測(cè)試化合物/產(chǎn)品為N-丙氨?；?谷氨酰胺；N-乙?；?谷氨酰胺；來自Nutricia，BocaRaton，F(xiàn)lorida的Stresson(P1)；來自FreseniusKabi，Runcorn，Cheshire，UK的Reconvan(P2)；來自B.Braun，Bethleham，PA的NutricompImmun(P3)；來自HormelHealthLabs，Plymouth，MN的Glutasorb(P4)；來自Novartis，WhitePlains，NY的Impact(P5)；來自RossProducts，Columbus，Ohio的Optimental加NAQ(P6)；來自RossProducts，Columbus，Ohio的Optimental加水解小麥麩質(zhì)(P7)。24小時(shí)后，停止培養(yǎng)，給活組織切片植入O.C.T.化合物(TissueTek，MilesLaboratories，Elkhart，IN，USA)，迅速在液氮中冷凍，儲(chǔ)存于-70℃直到低溫吸附。使用低溫態(tài)制備得到5微米切片。免疫組織化學(xué)使用下述標(biāo)記物進(jìn)行本研究TUNEL用于監(jiān)測(cè)上皮凋亡，CD25用于監(jiān)測(cè)上皮內(nèi)炎癥。按照下述步驟使用下述試劑。檢測(cè)DNA碎片按照描述在Maiuri，L.等人.DNAfragmentationisafeatureofcysticfibrosisepithelialcellsadiseasewithinappropriateapoptosis？FEBSLetter408，225-31(1997)以及Maiuri，L.等人.FASengagementdrivesapoptosisofenterocytesofceliacpatients.Gut48，418-24(2001)中的方法測(cè)定組織切片中的DNA碎片。檢測(cè)CD25+細(xì)胞通過免疫組織化學(xué)按照描述在Maiuri，L.等人.BlockageofT-cellcostimulationinhibitsT-cellactioninCeliacdisease.Gastroenterology115，564-72.(1998)中的方法在冷凍的組織切片上進(jìn)行抗原檢測(cè)，使用mAbs抗-CD25(Dako1∶30)，采用根據(jù)前面在該相同參開文獻(xiàn)中描述的堿性磷酸鹽著色技術(shù)。對(duì)于每個(gè)樣本，對(duì)至少5個(gè)玻片進(jìn)行肓性評(píng)估。利用針對(duì)不合適的血液組抗原的小鼠IgG或IgM進(jìn)行特異性對(duì)照試驗(yàn)，同時(shí)分析屬于同一個(gè)體的不同的培養(yǎng)樣本。形態(tài)學(xué)分析TUNEL+腸細(xì)胞的總數(shù)目是指腸細(xì)胞的百分比。測(cè)量落入1mm2范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域內(nèi)的CD25+纖層本體中的細(xì)胞總數(shù)。在后面對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果如圖9所示，這些化合物誘導(dǎo)了由上皮下區(qū)室中TUNEL和CD25上調(diào)所定義的上皮細(xì)胞損傷的不同模式。某些制劑同時(shí)誘導(dǎo)了在上皮內(nèi)隔室中CD25表達(dá)的增加以及細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)。這些化合物因而可作為陽性對(duì)照(按照1mg/ml使用的胃蛋白酶-胰蛋白酶麩質(zhì)制劑)。其它化合物誘導(dǎo)了對(duì)上皮細(xì)胞凋亡或者上皮細(xì)胞隔室中的CD25的誘導(dǎo)的某些選擇性改變。其它與在僅僅暴露于單獨(dú)的介質(zhì)(陰性對(duì)照)中的培養(yǎng)物中所觀察到的凋亡模式或者CD25誘導(dǎo)沒有區(qū)別。在圖10a和b中顯示了使用化合物N-乙?；?谷氨酰胺或者含有谷氨酰胺(p5)的產(chǎn)品Impact誘導(dǎo)上皮細(xì)胞凋亡的實(shí)例。圖11a和b描述了通過相同化合物誘導(dǎo)CD25的模式。結(jié)論本研究的結(jié)果表明，很多測(cè)試化合物在未接受治療的腹腔疾病患者的小腸中產(chǎn)生了顯著的變化。有些能夠誘導(dǎo)上皮細(xì)胞凋亡和促進(jìn)表皮內(nèi)發(fā)炎，而其它的化合物在誘導(dǎo)粘膜發(fā)炎方面更有效?？梢哉T導(dǎo)兩種或者一種標(biāo)記物的化合物被認(rèn)為是對(duì)于腹腔疾病患者的粘膜具有毒性。這些化合物中的某些并不誘導(dǎo)任何效應(yīng)，尤其是化合物N-乙?；?L-谷氨酰胺。該化合物對(duì)于未接受治療的腹腔疾病患者的活組織還具有明顯的營(yíng)養(yǎng)作用。這種營(yíng)養(yǎng)效果通常表現(xiàn)為使得粘膜尤其是上皮細(xì)胞粘膜得到改善，相對(duì)于其它樣本而言其獲得明顯改善。本研究清楚地表明，大多數(shù)測(cè)試化合物給未接受治療的腹腔疾病患者的粘膜帶來了一定變化。最令人感興趣的，也是最出人意料的在于N-乙?；?L-谷氨酰胺具有營(yíng)養(yǎng)活性。在該產(chǎn)品的第一實(shí)施例中，甚至相對(duì)于單獨(dú)的介質(zhì)，它使得粘膜的整體情況有所改善。前面已經(jīng)對(duì)落入按照權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明范圍之內(nèi)的各種具體實(shí)施方案進(jìn)行了描述。這些實(shí)施方案并不意味著將本發(fā)明范圍限定于所公開的具體形式。本發(fā)明應(yīng)該覆蓋落入本發(fā)明的主旨和范圍之內(nèi)的所有各種修飾和替代。權(quán)利要求1.一種向人提供谷氨酰胺補(bǔ)充的方法，它包括口服有效量的N-乙?；鵏-谷氨酰胺、或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中給所述的人服用至少0.7毫摩爾/kg/天的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中給所述的人服用至少1.0摩爾/kg/天的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽。4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中給所述的人服用至少1.5毫摩爾/kg/天的N-乙酰基-L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽選自鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、和鋁、銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基苯乙胺、1-麻黃胺(1-ephenamine)、N，N′-二芐基乙二胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪、以及它們的混合物。6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述人罹患選自下述的病癥胃腸道手術(shù)、胃腸道切除術(shù)、小腸移植、手術(shù)后創(chuàng)傷、饑餓、嚴(yán)重疾病和損傷、多發(fā)性外傷、短腸綜合癥、燒傷、骨髓移植、AIDS、口腔粘膜炎、癌癥、腹腔疾病、克羅恩氏病、壞死性小腸結(jié)腸炎、臟器早熟、隨機(jī)感染、與特定治療相關(guān)的臟器退化、口服進(jìn)食受限、以及它們的組合。7.一種含水溶液，它含有a)每升30mEq至95mEq的鈉；b)每升10mEq至30mEq的鉀；c)每升10mEq至40mEq的檸檬酸鹽；d)少于3.0重量/重量％的一種碳水化合物；以及e)每升溶液至少5.0毫摩爾的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上的等價(jià)鹽。8.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，每升溶液含有20毫摩爾至300毫摩爾的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上的等價(jià)鹽。9.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，每升溶液含有25毫摩爾至200毫摩爾的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上的等價(jià)鹽。10.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽選自鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、和鋁、銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基苯基胺、1-麻黃胺(l-ephenamine)、N，N＇-二芐基乙二胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪、以及它們的混合物。11.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述含水溶液進(jìn)一步含有氯化物。12.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述碳水化合物為右旋糖和葡萄糖的混合物。13.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述碳水化合物以少于3.0重量/重量％的量存在。14.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述鈉以30mEq/L至95mEq/L的量存在。15.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述鈉選自氯化鈉、檸檬酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉及其混合物。16.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述鉀以10mEq/L至30mEq/L的量存在。17.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述鉀選自檸檬酸鉀、氯化鉀、碳酸氫鉀、碳酸鉀、氫氧化鉀及其混合物。18.根據(jù)權(quán)利要求11的含水溶液，其中所述氯化物以30mEq/L至80mEq/L的量存在。19.根據(jù)權(quán)利要求11的含水溶液，其中所述氯化物選自氯化鉀、氯化鈉、和氯化鋅。20.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述檸檬酸鹽以20mEq/L至40mEq/L的量存在。21.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，其中所述檸檬酸鹽選自檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、和檸檬酸。22.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，它進(jìn)一步含有至少一種調(diào)味劑。23.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，它進(jìn)一步含有至少一種人造甜味劑。24.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，它進(jìn)一步含有至少一種選自瓊脂、褐藻酸和鹽、金合歡膠、阿拉伯樹膠、塔哈膠、纖維素衍生物、凝膠多糖、發(fā)酵樹膠、帚叉藻聚糖膠、明膠、結(jié)冷膠、印度膠、瓜耳樹膠、阿歐塔角叉菜膠、愛爾蘭苔蘚、卡帕角叉菜膠、魔芋粉、刺梧桐樹膠、菜角叉菜膠、松膠/阿拉伯半乳聚糖、刺槐豆膠、果膠、羅望子膠、塔拉豆膠、黃蓍膠、天然的和改性的淀粉、黃原膠的膠凝劑，其含量足以支撐自身的三維結(jié)構(gòu)。25.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，它進(jìn)一步含有米粉。26.根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液，它進(jìn)一步含有不易消化的寡糖。27.一種液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，它含有a)蛋白質(zhì)組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的8-35％；b)碳水化合物組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的36-76％；c)脂質(zhì)組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的6-51％；以及占蛋白質(zhì)組分的熱量的1-23％的N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽形式。28.一種成人液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，它含有a)蛋白質(zhì)組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的14-35％；b)碳水化合物組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的36-76％；c)脂質(zhì)組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的6-51％；以及至少35毫摩爾的N-乙?；鵏-谷氨酰胺、或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品。29.如權(quán)利要求28中定義的營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述配方食品含有35毫摩爾至160毫摩爾N-乙?；?L-谷氨酰胺、或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品。30.一種非成年病人用液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，它含有a)蛋白質(zhì)組分，其含有所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的8-25％；b)碳水化合物組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的39-44％；c)脂質(zhì)組分，其占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的45-51％；以及至少5.0毫摩爾N-乙?；鵏-谷氨酰胺、或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品。31.如權(quán)利要求30中定義的營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述制劑含有5.0毫摩爾至32毫摩爾N-乙酰基-L-谷氨酰胺、或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽/1000千卡營(yíng)養(yǎng)配方食品。32.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽選自鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、和鋁、銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二乙胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基苯基胺、1-麻黃胺(1-ephenamine)、N，N′-二芐基乙二胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪、以及它們的混合物。33.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，它含有少于1.0g焦谷氨酸/1500千卡配方食品。34.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述配方食品為成人配方食品，并且蛋白質(zhì)組分占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的14-35％；碳水化合物組分占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的36-76％；脂質(zhì)組分占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的6-41％；該N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽占蛋白質(zhì)熱量的1-25％。35.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述配方食品用于未成年人，并且蛋白質(zhì)組分占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的8-25％；碳水化合物組分占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的39-44％；脂質(zhì)組分占所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品總含熱量的45-51％；該N-乙?；?L-谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽占蛋白質(zhì)熱量的1-12％。36.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品是通過口服給藥的。37.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述液體營(yíng)養(yǎng)配方食品是通過腸道給藥的。38.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，它進(jìn)一步含有選自鈣、磷、鈉、氯、鎂、錳、鐵、銅、鋅、硒、碘、鉻、鉬、肌醇、肉毒堿、?；撬帷⒕S生素A、C、D、E、K和B配合物、以及它們的混合物的維生素和無機(jī)元素。39.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述脂質(zhì)組分選自椰子油、醬油、玉米油、橄欖油、紅花油、富油性紅花油、MCT油(中鏈甘油三酸酯)、向日葵油、富油性向日葵油、棕櫚油、棕櫚油精、低芥酸菜子油、魚油、棕櫚仁油、鯡油、豆油、棉籽油、卵磷脂、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的脂質(zhì)源、結(jié)構(gòu)脂質(zhì)、以及它們的混合物。40.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述蛋白質(zhì)組分含有選自豆油基蛋白、奶基蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、米蛋白、牛肉膠原、豌豆蛋白、馬鈴薯蛋白、以及它們的混合物的完整蛋白質(zhì)。41.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述蛋白質(zhì)組分含有選自大豆蛋白水解產(chǎn)物、酪蛋白水解產(chǎn)物、乳清蛋白水解產(chǎn)物、米蛋白水解產(chǎn)物、馬鈴薯蛋白水解產(chǎn)物、魚蛋白水解產(chǎn)物、雞蛋白水解產(chǎn)物、明膠蛋白水解產(chǎn)物、動(dòng)植物蛋白水解產(chǎn)物的組合、以及它們的混合物的水解蛋白質(zhì)。42.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述蛋白質(zhì)組分含有選自色氨酸、酪氨酸、絲氨酸、蛋氨酸、精氨酸、亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、組氨酸、肉毒堿、?；撬?、甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸胱氨酸、甲狀腺氨酸天門冬氨酸、天門冬氨酸谷氨酸谷氨酰胺羥基賴氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸以及它們的混合物的游離氨基酸。43.根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品，其中所述碳水化合物組分選自蠟狀或非蠟狀形式的來源于玉米、木薯、米或馬鈴薯的水解后的、完整的、天然的和化學(xué)改性的淀粉；糖類例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、富含果糖的玉米糖漿、玉米糖漿干粉、以及它們的混合物。44.一種通過向患有腹腔疾病的患者施用根據(jù)權(quán)利要求7的含水溶液來減輕所述患者的腸內(nèi)粘膜炎癥的方法。45.一種通過向患有腹腔疾病的患者施用根據(jù)權(quán)利要求27的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品來減輕所述患者的腸內(nèi)粘膜炎癥的方法。46.一種通過向患有腹腔疾病的患者施用根據(jù)權(quán)利要求28的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品來減輕所述患者的腸內(nèi)粘膜炎癥的方法。47.一種通過向患有腹腔疾病的患者施用根據(jù)權(quán)利要求30的液體營(yíng)養(yǎng)配方食品來減輕所述患者的腸內(nèi)粘膜炎癥的方法。全文摘要本發(fā)明涉及通過口服有效量的N－乙?；璍－谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽向人提供谷氨酰胺補(bǔ)充的方法和組合物?？梢詫－乙酰基－L－谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽摻入適合人體消耗的任意一種液體組合物中。適宜的組合物實(shí)例包括含水溶液例如用作口服的再水化溶液以及液體營(yíng)養(yǎng)配方食品(包括腸配方食品、口服配方食品、成人用配方食品、兒童用配方食品和嬰兒用配方食品)。N－乙?；璍－谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受鹽的用量可以隨意變化，但是通常所述組合物應(yīng)該含有足以獲得至少140mg總谷氨酰胺/kg體重/天的N－乙?；璍－谷氨酰胺或其營(yíng)養(yǎng)上可接受的鹽。文檔編號(hào)A61K31/195GK1717184SQ02829976公開日2006年1月4日申請(qǐng)日期2002年10月8日優(yōu)先權(quán)日2002年10月8日發(fā)明者J·H·巴西特,J·M·洛佩滋,R·魯伊達(dá)申請(qǐng)人:艾博特公司