專利名稱：一種總香豆素的提取方法及所提取的總香豆素的應(yīng)用的制作方法
一種總香豆素的提取方法及所提取的總香豆素的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從千金子種皮中提取總香豆素的提取方法，還涉及所提取的總香豆素的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
香豆素類化合物是自然界中普遍存在的次生代謝產(chǎn)物，主要含有秦皮乙素、秦皮甲素、 瑞香素等成分，秦皮甲素能降低高尿酸血癥動物體內(nèi)血清尿酸水平，對角叉菜膠、右旋糖酐、5-HT及組胺引起的大鼠關(guān)節(jié)炎有抑制作用，又能抑制豚鼠紫外線照射背部引起的紅斑反應(yīng)、大鼠肉芽腫得形成(棉球法)，組胺引起的毛細(xì)血管通透性增加。秦皮乙素能顯著抑制組織胺引起的毛細(xì)血管通透性增加。瑞香素具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。千金子為大戟科植物續(xù)隨子及//^orAia lathyris L.的種子，有逐水消腫，破血散結(jié)的功效，種仁中含有脂肪油、香豆素類成分如秦皮乙素、秦皮甲素、瑞香素等成分，但含量較低，在0. 04% 0. 36%。而千金子外面黑褐色的種皮(重量占種子的60%左右)過去一直是做為雜質(zhì)部分去除的，我們在研究過程中發(fā)現(xiàn)種皮中總香豆素含量較高，一般在1. 7% 3. 8%，是一種潛在的提取香豆素類成分的植物資源。高尿酸血癥表現(xiàn)為血或尿中尿酸濃度過高，其產(chǎn)生的主要原因有兩個方面，一方面由于黃嘌呤氧化酶代謝異常導(dǎo)致尿酸生產(chǎn)過多，另一方面由于腎臟疾病導(dǎo)致尿酸排泄減少。尿酸鹽沉積于關(guān)節(jié)、軟組織及腎處，導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎、尿路結(jié)石及腎疾病，導(dǎo)致痛風(fēng)反復(fù)發(fā)作。另外，高尿酸血癥與心血管等疾病的發(fā)病率和死亡率也密切相關(guān)，是一種嚴(yán)重影響公共健康的疾病。隨著生活水平的迅速提高，我國高尿酸血癥的發(fā)病率呈持續(xù)上升趨勢，對高尿酸血癥的基礎(chǔ)及藥物研究也日益成為熱點之一。目前，高尿酸血癥和痛風(fēng)的治療需要抗炎藥來緩解疾病的紅、腫、熱、痛等癥狀，并在疾病發(fā)展不同階段上選擇排尿酸藥物、黃嘌呤氧化酶抑制劑以緩解高尿酸血癥，控制病情發(fā)展。目前，臨床常用的藥物有別嘌醇(維洛林)、 苯溴馬隆(立加利仙)等。別嘌醇在預(yù)防和治療痛風(fēng)時有一定的局限性，只有當(dāng)積累的尿酸在循環(huán)中較明顯時別嘌醇阻礙尿酸生物合成作用才能得到體現(xiàn)，并且會產(chǎn)生毒副作用如皮膚過敏、肝炎、威脅生命的變態(tài)反應(yīng)綜合征等。苯溴馬隆長期使用對腎臟有毒副作用，在一定程度上限制了其安全使用。因此，從天然資源中尋找新型抗高尿酸血癥和痛風(fēng)藥物依然是藥學(xué)研究的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決以上問題，本發(fā)明提供了一種從千金子種皮中提取總香豆素的提取方法，該提取方法簡單、重復(fù)性好、提取物純度高。本發(fā)明還提供了所提取的總香豆素的應(yīng)用。本發(fā)明是通過以下方式實現(xiàn)的 一種總香豆素的提取方法，包括以下步驟
(1)脫脂將千金子種皮粉碎成粗粉，使用石油醚脫脂得殘渣；
(2)提取殘渣用乙醇或甲醇提取，濾液減壓回收乙醇或甲醇，得到總香豆素粗品。(3)純化向得到的總香豆素粗提物中加入氫氧化鉀，邊加邊攪拌，調(diào)pH為7 8，過濾，向濾液中加入鹽酸，邊加邊攪拌，調(diào)pH為2 3，3 5°C冷藏12-16小時，抽濾，棄去濾液，將得到的黃色固體真空干燥，即得總香豆素。步驟(1)中所用石油醚為30 60°C或者60 90°C沸程規(guī)格的，殘渣揮去石油醚。步驟(2)中乙醇體積百分比濃度為70 95%，每克粗粉加IOmL乙醇或甲醇。使用乙醇或甲醇加熱回 流提取或超聲提取2 3次，每次1 2小時。使用70%乙醇加熱回流提取3次，每次2h。步驟(3)中氫氧化鉀或鹽酸的濃度為l_2wt%。步驟(3)中真空干燥條件為在60 70°C、0. 07 0. 09MP壓力下干燥4小時。步驟(1)中使用石油醚脫脂為使用石油醚進(jìn)行索式脫脂。步驟(1)中千金子種皮去除雜質(zhì)后使用高速粉碎機(jī)粉碎成20 40目的粗粉，然后使用石油醚索式脫脂至石油醚提取液無色。所述的提取方法得到的總香豆素用于制備治療高血尿酸癥的藥物。本發(fā)明的有益效果
1、從千金子種皮中提取總香豆素，可以充分利用資源，提高千金子的利用率，增加收
■、Λ
M ；
2、提取方法簡單，成本低，易操作，重復(fù)性良好，得到的總香豆素純度高，純度可達(dá)80% 以上；
3、得到的總香豆素對高尿酸血癥具有很好的治療效果，有效成分含量高、藥物穩(wěn)定性好、降尿酸效果顯著、應(yīng)用范圍廣泛、毒副作用小。


附圖1為本發(fā)明測定從千金子種皮中提取的總香豆素含量所用秦皮乙素對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
附圖2為本發(fā)明從千金子種皮中提取的總香豆素TLC鑒別在日光下的檢視圖， 附圖3為本發(fā)明從千金子種皮中提取的總香豆素TLC鑒別在紫外光燈(365nm)下的檢視圖，
圖中1為瑞香素對照品，2為秦皮乙素對照品，3為秦皮甲素對照品，Γ7為本發(fā)明方法提取的總香豆素。
具體實施例方式以下實施例中所提到的乙醇濃度，都是指體積百分比濃度，其它濃度都是指重量百分比濃度。實施例1
本實施例所用提取溶媒為70%乙醇，采用熱回流提取，提取3次，每次2小時。其制備方法為
a)、將千金子種皮去除雜質(zhì)后，粉碎成20 40目的粗粉。取IOOg粉末，置索式提取器中，以30 60°C沸程規(guī)格的石油醚進(jìn)行索式脫脂3小時至石油醚提取液無色，，棄去石油醚提取液，殘渣揮去石油醚。b)、殘渣加70%乙醇IOOOmL加熱回流提取3次，每次2小時，過濾，濾液減壓回收乙醇，得到總香豆素粗品。 C)、得到的總香豆素粗提物加1%的氫氧化鉀溶液，邊加邊攪拌，調(diào)PH = 7，過濾， 棄去不溶物，濾液再加1%鹽酸，邊加邊攪拌，調(diào)pH = 3，3 5°C冷藏12小時，抽濾，棄去濾液，將得到的黃色固體在0. 09MP，60°C真空干燥4小時，即得總香豆素。實施例2
本實施例所用提取溶媒為80%乙醇，采用熱回流提取，提取2次，每次2小時。其制備方法為
a)、將千金子種皮去除雜質(zhì)后，粉碎成20 40目的粗粉。取IOOg粉末，置索式提取器中，以60 90°C沸程規(guī)格的石油醚進(jìn)行索式脫脂3小時至石油醚提取液無色，棄去石油醚提取液，殘渣揮去石油醚。b)、殘渣加80%乙醇IOOOmL加熱回流提取2次，每次2小時，過濾，濾液減壓回收
乙醇，得到總香豆素粗品。c)、得到的粗提物加2%的氫氧化鉀，邊加邊攪拌，調(diào)pH = 8，過濾，棄去不溶物，濾液再加2%鹽酸，邊加邊攪拌，調(diào)pH = 2，3 5°C冷藏16小時，抽濾，棄去濾液，將得到的黃色固體在0. 07MP，70°C真空干燥4小時，即得總香豆素。實施例3
本實施例所用提取溶媒為95%乙醇，采用熱回流提取，提取3次，每次2小時。其制備方法為
a)、將千金子種皮去除雜質(zhì)后，粉碎成20 40目的粗粉。取IOOg粉末，置索式提取器中，以30 60°C沸程規(guī)格的石油醚索式脫脂3小時至石油醚提取液無色，棄去石油醚提取液，殘渣揮去石油醚。b)、脫脂后的殘渣加95%乙醇IOOOmL加熱回流提取3次，每次2小時，過濾，濾液
減壓回收乙醇，得到總香豆素粗品。c)、得到的粗提物加1%的氫氧化鉀，邊加邊攪拌，調(diào)PH = 7，過濾，棄去不溶物，濾液再加1%鹽酸，邊加邊攪拌，調(diào)PH = 3，3 5°C冷藏12小時，抽濾，棄去濾液，將得到的黃色固體在0. 09MP，60°C真空干燥4小時，即得總香豆素。實施例4
本實施例所用提取溶媒為95%乙醇，采用超聲法提取，提取3次，每次1小時。其制備方法為
a)、將千金子種皮去除雜質(zhì)后，粉碎成20 40目的粗粉。取IOOg粉末，置索式提取器中，以30 60°C沸程規(guī)格的石油醚索式脫脂3小時至石油醚提取液無色，棄去石油醚提取液，殘渣揮去石油醚。b)、殘渣加95%乙醇IOOOmL超聲提取3次，每次1小時，過濾，濾液減壓回收乙醇，
得到總香豆素粗品。c)、得到的粗提物加1%的氫氧化鉀，邊加邊攪拌，調(diào)PH = 7，過濾，棄去不溶物，濾液再加1%鹽酸，邊加邊攪拌，調(diào)PH = 3，3 5°C冷藏16小時，抽濾，棄去濾液，將得到的黃色固體在0. 07MP，70°C真空干燥4小時，即得總香豆素。一、提取工藝條件的選擇
1. 1確定提取方法的理論依據(jù)依據(jù)千金子有關(guān)文獻(xiàn)及香豆素類成分的化學(xué)性質(zhì)，經(jīng)反復(fù)試驗確定了其提取工藝。1. 2正交實驗優(yōu)選提取工藝
經(jīng)預(yù)試，乙醇回流法比超聲法提取測得的總香豆素含量高，故我們采用乙醇回流法提取。選擇主要影響提取效率的乙醇濃度(A)，提取時間(B)，提取次數(shù)(C)為考察因素，以提取物中總香豆素含量為考察指標(biāo)，采用L9G4)正交表進(jìn)行試驗，因素水平表見表1。表1因素水平表
權(quán)利要求
1.一種總香豆素的提取方法，其特征是包括以下步驟(1)脫脂將千金子種皮粉碎成粗粉使用石油醚脫脂得殘渣；(2)提取殘渣用乙醇或甲醇提取，濾液減壓回收乙醇或甲醇，得到總香豆素粗品；(3)純化向得到的總香豆素粗提物中加入氫氧化鉀，邊加邊攪拌，調(diào)pH為7 8，過濾，向濾液中加入鹽酸，邊加邊攪拌，調(diào)pH為2 3，3 5°C冷藏12-16小時，抽濾，棄去濾液，將得到的黃色固體真空干燥，即得總香豆素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(1)中所用石油醚為30 60°C 或者60 90°C沸程規(guī)格的，殘渣揮去石油醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(2)中乙醇體積百分比濃度為 70 95%，每克粗粉加IOmL乙醇或甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于使用乙醇或甲醇加熱回流提取或超聲提取2 3次，每次1 2小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取方法，其特征在于使用70%乙醇加熱回流提取3次，每次2h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(3)中氫氧化鉀或鹽酸的濃度為 l-2wt%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(3)中真空干燥條件為在60 70°C、0. 07 0. 09MP壓力下干燥4小時。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(1)中使用石油醚脫脂為使用石油醚進(jìn)行索式脫脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(1)中千金子種皮去除雜質(zhì)后使用高速粉碎機(jī)粉碎成20 40目的粗粉，然后使用石油醚索式脫脂至石油醚提取液無色。
10.權(quán)利要求1-7中任一項所述的提取方法得到的總香豆素用于制備治療高血尿酸癥的藥物。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，從千金子種皮中提取總香豆素的提取方法將千金子種皮粉碎成粗粉使用石油醚脫脂得殘渣；殘渣用乙醇或甲醇提取，得到總香豆素粗品；加入氫氧化鉀，調(diào)pH7～8，過濾，加入鹽酸，調(diào)pH2～3，3～5℃冷藏12-16小時，抽濾，棄去濾液，真空干燥得總香豆素。得到的總香豆素用于制備治療高血尿酸癥的藥物。從千金子種皮中提取總香豆素，可以充分利用資源，提高千金子的利用率，增加收益；提取方法簡單，成本低，易操作，重復(fù)性良好，得到的總香豆素純度高，純度可達(dá)80%以上；得到的總香豆素對高尿酸血癥具有很好的治療效果，有效成分含量高、藥物穩(wěn)定性好、降尿酸效果顯著、應(yīng)用范圍廣泛、毒副作用小。
文檔編號A61K131/00GK102293811SQ201110217029
公開日2011年12月28日 申請日期2011年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月1日
發(fā)明者侯立靜, 劉瑾, 曲永勝, 李曉晶, 李英霞 申請人:山東省中醫(yī)藥研究院