專利名稱：一種抽提蛋黃抗體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于禽、畜免疫抗體及制法。
利用免疫抗體防治人畜，或禽類的某些傳染性疾病，已有相當(dāng)長(zhǎng)的歷史，傳統(tǒng)的抗血清生產(chǎn)是利用小白鼠、免、馬、牛、羊和豬等動(dòng)物通過一定的免疫和加強(qiáng)免疫后，收集其血清而制得的。由于經(jīng)疫苗免疫接種后的禽群中，相應(yīng)疾病仍時(shí)有發(fā)生，作為疫苗的補(bǔ)充，國(guó)內(nèi)在80年代后期，開始普通使用高免蛋黃液，但這類高免蛋黃液均由非SPF母雞蛋制備，因而其廣泛使用的結(jié)果，不可避免的帶來人為播散病源，經(jīng)蛋垂直傳染性病原的傳播，如沙氏桿菌、大腸桿菌、白血病毒等，同蛋黃本身含有的大量脂肪、蛋白質(zhì)等成份，注入禽體后也可能引起類似過敏反應(yīng)的“蛋黃病”問題，因此抽提蛋黃抗體液的研究就提到日程上來了，國(guó)內(nèi)外對(duì)蛋黃抗體抽提方法大部分目的是想尋找血清的TgG替代品，要求純度高，因而一般產(chǎn)量低，有一小部分蛋黃抗體的抽提方法也是需在低溫下進(jìn)行，操作繁雜，設(shè)備要求較高，成本較高，雖然有些在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用，但因設(shè)備、操作及成本問題而不能推廣。
本發(fā)明的目的是根據(jù)蛋黃抗體的特點(diǎn)，提出一種適于大量生產(chǎn)、操作簡(jiǎn)便、成本低的蛋黃抽提抗體的制備方法，并取得滿意結(jié)果。
本發(fā)明所提供的抽提方法的實(shí)施過程是這樣的常規(guī)清潔消毒高免蛋殼表面后，去殼取蛋黃，盡可能除去粘附于蛋黃膜上的蛋白，反復(fù)用滅菌水漂洗蛋黃三次，瀝干后剌破蛋黃膜，收集蛋黃，按蛋黃∶稀釋液＝1∶5(體積比)的比例加入0.1M、PH為5.5的NaCl溶液，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，邊攪拌，邊緩慢加?0％的聚乙二醇的貯備液，使終濃度為3.5％，充分混勻后，于室溫18-20℃下靜置過夜，用棉花和紗布過濾，除去游離脂肪及沉渣，收集濾液用濾膜孔徑分別為0.8μm和0.45μm組成的正壓雙聯(lián)過濾器過濾上述濾液以除去細(xì)小雜質(zhì)和細(xì)菌，最后使用截留分子量為10000的超濾器除去殘留的聚乙二醇和其它鹽類，并適當(dāng)濃縮，然后作常規(guī)抗體活性檢查，微生物檢查和安全性試驗(yàn)，產(chǎn)品分裝后得到合格成品。本發(fā)明提供的抗體抽提方法與現(xiàn)有技術(shù)中沿用的抽提方法具有如下的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)1、蛋黃抗體的有效提取率約為83.5％-95％抽提物的總蛋白濃度為3.70％-4.23克％，其中球蛋白約占總蛋白的43.9％-52.9％(采用雙縮脲法測(cè)定)，抗體活性符合要求。
2、產(chǎn)品不含活的病原微生物，安全性高，無任何毒、副作用。
3、該方法全過程都可在室溫下操作，設(shè)備要求不高，操作簡(jiǎn)便，成本較低，易于組織大批量生產(chǎn)。
實(shí)施例取雞蛋去殼取黃，盡可能除去附粘于蛋黃膜上的蛋白，然后將蛋黃置于滅菌蒸餾水中，反復(fù)洗滌三次，以除去蛋黃膜上的蛋白，瀝干后刺破蛋黃膜，收集蛋黃，將蛋黃充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅尤氲包S勻槳5倍體積的0.1M、PH為5.5的NaCl稀釋液，制成稀釋蛋黃液，然后緩慢加入60％聚乙二醇貯備液，使終濃度為3.5％，充分混勻后于室溫18-20℃下靜置過夜，然后用棉花和紗布過濾，除去沉渣，收集濾液，再用濾膜孔往分別0.8μm和0.45μm的正壓雙聯(lián)過濾器，過濾上述濾液，除去細(xì)小雜質(zhì)和細(xì)菌，再用截留分子量為10000的超濾器除去殘留的聚乙二醇和其它鹽類，并適當(dāng)濃縮，進(jìn)行抗體活性檢查和分裝成為產(chǎn)品，經(jīng)用雙縮脲法測(cè)定，產(chǎn)品中抗體有效提取率平均為90％以上，抽提物總蛋白濃度平均為3.97％，球蛋白占總蛋白平均48.46％，抗體活性符合要求。
權(quán)利要求
1.一種禽畜蛋黃免疫抗體的抽提方法，該方法由蛋黃制成稀釋液，其特征在于蛋黃勻漿中加入勻漿體積5倍的0.1MPH5.5氯化鈉稀釋液，然后加入60％濃度的聚乙二醇使終濃度為3.5％于室溫下靜置24小時(shí)，然后通過三次過濾除去沉渣和細(xì)菌，便得到抗體成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的抗體抽提方法，其特征在于過濾的步驟為先用棉花或紗布過濾沉渣，再用0.8μm和0.45μm組成的正壓雙聯(lián)過濾器，除去細(xì)小雜質(zhì)和細(xì)菌，最后，使用截留分子量為10000的超濾器除去殘留的聚乙二醇和其鹽類，過濾全過程均于室溫下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明屬于禽、畜免疫抗體制法。國(guó)內(nèi)外抽提蛋黃抗體的方法大部分是以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的免疫學(xué)試驗(yàn)為目的,而抽提其中的IgG,因而要求純度高,操作繁雜,且產(chǎn)量低,要求在低溫下操作,因而難以生產(chǎn)推廣。本發(fā)明提供的蛋黃抗體抽提方法,可在常溫下,使用常規(guī)稀釋液和置換液,操作簡(jiǎn)便。因而易于組織規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K39/395GK1196957SQ9710888
公開日1998年10月28日 申請(qǐng)日期1997年4月18日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月18日
發(fā)明者凌育燊, 郭予強(qiáng), 楊連楷, 李健東, 羅映霞, 詹樂群, 余雙祥, 邱深本, 朱國(guó)鋒 申請(qǐng)人:廣東省家禽科學(xué)研究所