專利名稱：25－羥基－16－烯－26,27－雙高－膽鈣化甾醇的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式I的25-羥基-16-烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇衍生物
其中A是具有E或Z立體化學(xué)構(gòu)型的C-C雙鍵，或者A是-C-C叁鍵，Et是乙基，而R是羥基且R1是氫或＝CH2，或R是氫或氟而R1是＝CH2。
式I的化合物刺激HL-60細(xì)胞的分化，因而是治療腫瘤疾病如白血病的有用的藥物。
這里所使用的術(shù)語“低級(jí)烷基”代表含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基等。術(shù)語“芳基低基烷基”是對(duì)甲苯基、芐基、苯基乙基、苯基丙基等。術(shù)語“芳基”代表可被一個(gè)或更多個(gè)低級(jí)烷基取代或未取代的從芳烴衍生的基團(tuán)。典型的芳基是苯基和對(duì)甲苯基。
本發(fā)明還涉及一包含式I化合物，或兩種或多種式I化合物的混合物的組合物，以及用這些化合物生產(chǎn)刺激HL-60細(xì)胞分化和治療腫瘤疾病如白血病的藥物的用途。
本發(fā)明還涉及作為治療上述疾病狀態(tài)的藥物的式I的化合物。本發(fā)明還涉及一種制備式I化合物和其中出現(xiàn)的中間體的方法。
優(yōu)選的式I化合物，其中R是羥基而R1是＝CH2，例如具體的化合物A、B和C1，25-二羥基-16-烯-23-炔-26，27-雙高-膽鈣化甾醇；1，25-二羥基-16，23Z-二烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇；1，25-二羥基-16，23E-二烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇；其中A是-C≡C-的式I化合物的制備如下文敘述，具體參閱結(jié)構(gòu)式流程圖I和下面的實(shí)施例。
結(jié)構(gòu)式流程圖I
其中R1是如上所述，B是-C≡CC(Et)2-，Y是-OSi(R4，R5，R6)，Et是乙基，R4和R6是低級(jí)烷基，而R5是低級(jí)烷基、芳基或芳基低基烷基。
在上面的結(jié)構(gòu)式流程圖I中，通過在室溫下用氧化劑如氯鉻酸2，2′-雙吡啶鎓或重鉻酸吡啶鎓，在非質(zhì)子傳遞溶劑如無水四氫呋喃、或者更優(yōu)選無水二氯甲烷中處理把式II的化合物轉(zhuǎn)化成式III的化合物。用常規(guī)的方法例如萃取、隨后色譜法處理式III的化合物。
式III的化合物通過與，例如，(三烷基甲硅烷基)咪唑如1-(三甲基甲硅烷基)咪唑在非質(zhì)子傳遞有機(jī)溶劑如無水四氫呋喃、或者更優(yōu)選無水二氯甲烷中反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式IV的化合物。用常規(guī)的方法例如萃取，隨后色譜法處理式IV的化合物。
式IV的化合物通過與相應(yīng)的式VI的化合物反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式Va、Vb、IVc或Vc的化合物，
其中Ph是苯基；R7是氫、氟或Y；而Y和R1如上所述。
反應(yīng)在-60℃到-90℃，優(yōu)選-78℃，在極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑如無水乙醚，或者更優(yōu)選無水四氫呋喃中，在強(qiáng)堿如像丁基鋰一樣的烷基鋰的存在下進(jìn)行。通過常規(guī)的方法如萃取、隨后色譜法處理式Va、Vb或Vc的化合物。
式VI的化合物是已知的，或可根據(jù)已知的方法制備。
通過與氟鹽如四丁基氟化銨在極性有機(jī)溶劑如無水乙醚，或更優(yōu)選無水四氫呋喃中反應(yīng)去除式Va、Vb或Vc的化合物的保護(hù)基，產(chǎn)生相應(yīng)的式Ia、Ib或Ic的化合物。
如上所述的式II的中間體的制備在下文敘述，具體參閱結(jié)構(gòu)式流程圖II和下面的實(shí)施例。
結(jié)構(gòu)式流程圖II
其中Y和B如上所述。
在上面的結(jié)構(gòu)式流程圖II中，式VII的化合物通過與3-戊酮的反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式VIII的化合物。反應(yīng)在-60℃到-90℃，優(yōu)選-78℃，在極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑如無水乙醚或者更優(yōu)選無水四氫呋喃中，在強(qiáng)堿如丁基鋰一樣的烷基鋰的存在下進(jìn)行。通過常規(guī)的方法如萃取、隨后色譜法處理式VIII的化合物。
式VII的化合物是已知的美國專利號(hào)5,087,619和美國專利號(hào)5,145,846，這兩篇專利通過文獻(xiàn)并入本發(fā)明。
式VIII的化合物通過與氟鹽，如四丁基氟化銨，在極性有機(jī)溶劑如無水乙醚或者更優(yōu)選四氫呋喃中反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式II的化合物。通過常規(guī)方法如萃取、隨后色譜法處理式II的化合物。
其中A是一具有E構(gòu)型的C-C雙鍵的式I的化合物，其制備在下文敘述，具體參閱結(jié)構(gòu)式流程圖III和下面的實(shí)施例。
結(jié)構(gòu)式流程圖III
其中Y、B和R1如上所述。
在上面的結(jié)構(gòu)式流程圖III中，式II的化合物通過與還原劑如氫化鋁鋰反應(yīng)，部分還原得到式IX的化合物，優(yōu)選在堿金屬烷氧化物，如甲醇鈉的存在下，在非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如無水乙醚，或更優(yōu)選無水四氫呋喃中在回流溫度(對(duì)四氫呋喃大約80℃)下24小時(shí)，并冷卻至大約0℃。通過常規(guī)的方法如萃取，隨后色譜法處理式IX的化合物。
產(chǎn)生的式IX的化合物通過用氧化劑如氯鉻酸2，2′-二吡啶鎓，或重鉻酸吡啶鎓，在室溫，在非質(zhì)子溶劑如無水四氫呋喃或更優(yōu)選無水二氯甲烷中處理，氧化成式X的化合物。通過常規(guī)的方法如萃取、隨后色譜法處理式X的化合物。
式X的化合物通過與例如(三烷基甲硅烷基)咪唑，如1-(三甲基甲硅烷基)咪唑，在非質(zhì)子有機(jī)溶劑如無水四氫呋喃或更優(yōu)選無水二氯甲烷中反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式XI的化合物。通過常規(guī)的方法如萃取，隨后色譜法處理式XI的化合物。
式XI的化合物通過與相應(yīng)的式VI的化合物反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式VIIa、VIIb或VIIc的化合物。反應(yīng)在-60℃到-90℃，優(yōu)選-78℃，在極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如無水乙醚或更優(yōu)選無水四氫呋喃中，在強(qiáng)堿如丁基鋰這樣的烷基鋰的存在下進(jìn)行。通過常規(guī)的方法如萃取、隨后色譜法處理式VIIa、VIIb或VIIc的化合物。
通過與氟鹽，如四丁基氟化銨，在有機(jī)溶劑如無水乙醚或更優(yōu)選四氫呋喃中反應(yīng)去除式VIIa、VIIb或VIIc的化合物的保護(hù)基，產(chǎn)生相應(yīng)的式Id、Ie或If的化合物。
其中A是Z構(gòu)型的C-C雙鍵的式I的化合物，其制備在下文敘述，具體參閱結(jié)構(gòu)式流程圖IV和下面的實(shí)施例。
結(jié)構(gòu)式流程圖IV
其中Y、B和R1如上所述，而D是Z構(gòu)型的基團(tuán)-CH＝CHC(Et)2-，Et是乙基。
在上面的結(jié)構(gòu)式流程圖IV中，式II的化合物通過與氫和林德拉催化劑在有機(jī)溶劑如乙酸乙酯、己烷和乙醇相混合，在喹啉的存在下氫化形成式XIII的化合物。通過常規(guī)的方法如萃取、隨后色譜法處理式XIII的化合物。
產(chǎn)生的式XIII的化合物通過用氧化劑如氯鉻酸2，2′-二吡啶鎓或重鉻酸吡啶鎓，在室溫，在非質(zhì)子溶劑如無水四氫呋喃或更優(yōu)選無水二氯甲烷中處理，氧化成式XIV的化合物。通過常規(guī)的方法如萃取、隨后色譜法處理式XIV的化合物。
式XIV的化合物通過與例如(三烷基甲硅烷基)咪唑如1-(三甲基甲硅烷基)咪唑在非質(zhì)子有機(jī)溶劑如無水四氫呋喃或更優(yōu)選無水二氯甲烷中反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式XV的化合物。式XV的化合物通過常規(guī)的方法如萃取，隨后色譜法處理。
式XV的化合物通過與相應(yīng)的式VI的化合物反應(yīng)轉(zhuǎn)化成式XVIa、XVIb或XVIc化合物。反應(yīng)在-60℃到-90℃，優(yōu)選-78℃，在極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑如無水乙醚或更優(yōu)選無水四氫呋喃中，在強(qiáng)堿，如丁基鋰這樣的烷基鋰的存在下進(jìn)行。式XVIa、XVIb或XVIc的化合物通過常規(guī)方法如萃取、隨后色譜法處理。
通過與氟鹽如四丁基氟化銨在有機(jī)溶劑如無水乙醚或更優(yōu)選四氫呋喃中反應(yīng)去除式XVIIa、XVIIb和XVIIc的化合物的保護(hù)基，產(chǎn)生相應(yīng)的式Ig，Ih或Ii的化合物。
如上所述的式I的化合物可向需要這種治療的溫血?jiǎng)游锟诜o藥，用來治療腫瘤疾病如白血病。更特別地，如上所述的式I的化合物可向成人口服給藥，劑量在約每天0.05到50μg的范圍，用來治療腫瘤疾病如白血病。
作為用來治療腫瘤疾病的藥物的式I的化合物的有用的活性可通過下面的試驗(yàn)步驟證明。HL-60細(xì)胞的分化通過還原氮藍(lán)四唑(NBT)測量它們的氧化突變電位來測定HL-60細(xì)胞分化的誘導(dǎo)。
在添加有10％胎牛血清(FCS)，2mML-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，1％非必需氨基酸，50U/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)HL-60細(xì)胞。把HL-60細(xì)胞(在90μlRPMI補(bǔ)充培養(yǎng)基中的30,000細(xì)胞)接種到平底微升孔中。接種后，立即將10μl在RPMI補(bǔ)充培養(yǎng)基中稀釋的下表I所列試驗(yàn)化合物加到各孔中，使最終濃度在10-11和10-6M之間(自10-2M乙醇儲(chǔ)備液開始并于-20℃避光貯存)。3天后，用多道吸量管從孔中除去培養(yǎng)基，并用100μlNBT溶液(含200nM肉豆寇酸佛波醇酯乙酸鹽的1mg/ml磷酸鹽緩沖液)置換。于37℃再培養(yǎng)1小時(shí)后，除去NBT溶液，加入100μl10％十二烷基硫酸鈉的0.01NHCl溶液。用自動(dòng)平板讀數(shù)器于540nm以光度計(jì)法定量測定還原的NBT量。計(jì)算3個(gè)孔的平均值。S.E.M在5和10％之間。在用100-1000nm鈣化三醇(化合物X)進(jìn)行的相同實(shí)驗(yàn)中將值表示成最大分化的百分?jǐn)?shù)。用圖譜法確定達(dá)到最大值的50％的濃度(nM)，在表I中以ED50給出。
從上面的結(jié)果可看出式I的化合物誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的分化，并因此阻止這些腫瘤細(xì)胞的生長。因此，式I的化合物可用于治療腫瘤疾病如白血病。在小鼠中的鈣耐受性試驗(yàn)體內(nèi)鈣平衡的大幅度改變強(qiáng)烈地影響小鼠體重的增長。
小鼠(25-30g體重)每天皮下給藥試驗(yàn)化合物，連續(xù)4天。記錄5天治療周期開始前和之后的體重?！白罡吣褪軇┝俊盚TD是在這一治療周期中導(dǎo)致零增重的劑量。結(jié)果示于上面的表中。
從上面的結(jié)果可以看出，式I的化合物比1，25-二羥基膽鈣化甾醇更好地被耐受。
包含發(fā)明的式I的化合物的口服劑型可與藥物可接受的載體物質(zhì)一起加到膠囊、片劑等之內(nèi)?？杉拥侥z囊中的，諸如此類的說明性的藥物可接受的載體物質(zhì)如下粘合劑，如黃蓍膠、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，如磷酸二鈣；崩解劑，如玉米淀粉，馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑，如硬脂酸鎂，甜味劑，如蔗糖、乳糖或糖精；調(diào)味劑，如薄荷、冬青油或櫻桃油。其它各種物質(zhì)可作為包衣或者用來改變劑量單位的物理形式。例如，片劑可用紫膠、糖或兩者包衣。糖漿和酏劑可含活性化合物、作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的羥苯甲酸甲酯和對(duì)羥苯甲酸丙酯、顏料和一種如櫻桃或橙子香料的調(diào)味劑。
下面的實(shí)施例用作進(jìn)一步敘述發(fā)明，而且無論如何不是想局限它。
實(shí)施例1[1(R*)、3aR*(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-4-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3H-茚向在-78℃在10ml無水四氫呋喃中的1.02g(3.51mmol)的[3aS-[1(R*)，3aβ，7β，7aα]-3α，4，5，6，7，7a-六氫-3-[1-甲基-3-丁炔基]-3a-甲基-7-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-1H-茚的溶液中慢慢加在己烷中的2.5ml(3.861mmol)的1.6M的正丁基鋰。在-78℃攪拌一小時(shí)后，加2.5ml的3-戊酮并繼續(xù)攪拌15分鐘。反應(yīng)混合物用水稀釋并用4×50ml己烷萃取。合并的萃取液用水和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法純化得273mg回收的初始原料和1g(75％)的標(biāo)題化合物?！銱-NMR(CDCl3)δ0.06(S，9H，3CH3)，1.02(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3)，1.02(s，3H，CH3)，1.10(d，3H，J＝6Hz，CH3)，1.62(m，4H，2CH2)，2.08-2.57(m，4H，CH，CH2，CH of CH2)，4.08(brs，1H，CH)，5.32(brs，1H，CH).
實(shí)施例2[1(R*)，3aR*(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-3H-茚-4-醇向攪拌的在15ml無水四氫呋喃中的1.178g(3.12mmol)的[1(R*)，3aR*(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-[1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-4-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3H-茚的溶液中加6ml(6mmol)的1M的四丁基氟化銨。反應(yīng)混合物在氬氣氛下室溫?cái)嚢柽^夜。然后用150ml的水—生理鹽水1∶1稀釋，并用乙酸乙酯充分萃取。合并的萃取液用2×30ml水洗滌，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法純化給出900mg(94.5％)的標(biāo)題化合物，為一白色的晶狀固體。[α]D25-20.5°(c0.2，EtOH)；1H-NMR(CDCl3)δ1.01(t，6H，J＝7.3Hz，2CH3)，1.07(s，3H，CH3)，1.10(d，3H，J＝6Hz，CH3)，140(dt，1H，Jvic＝3.5and 12.5Hz，Jgem＝12.5Hz，CH of CH2)，1.63(m，4H，2CH2)，1.98(ddd，1H，Jvic＝3.5 and 5.5Hz，Jgem＝15Hz，CH of CH2)，2.20-2.45(m，4H，CH2，2CH of CH2)，4.19(brs，1H，CH)，5.39(s，1H，CH).分析C20H32O2計(jì)算值C78.90，H10.59，實(shí)測值C78.92，H10.30。
實(shí)施例3[1(R*)、3aR*(3aα，7aβ)]-3a，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮在室溫氬氣氛下向在攪拌的15ml無水二氯甲烷中的253mg(0.83mmol)的[1(R*)、3aR*(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-3H-茚-4-酚的溶液中加1g(2.65mmol)的重鉻酸吡啶鎓。反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，加0.5g 3A分子篩，繼續(xù)攪拌一小時(shí)。加25ml乙醚并攪拌15分鐘后，濾過硅藻土填料。用3×50ml乙酸乙酸洗滌填料。合并的濾液用2N碳酸氫鉀、水、和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法純化給出157mg(62％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例4[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3-庚炔基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮向在10ml無水二氯甲烷中的223mg(0.737mmol)的[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，4，5，6，7，7a-六氫-1(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮的溶液中加0.67ml(4.42mmol)的1-(三甲基甲硅烷基)咪唑。反應(yīng)混合物于室溫氬氣氛下攪拌過夜。用水使反應(yīng)淬火并用己烷萃取。用水和鹽水洗滌己烷萃取物，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法用己烷一乙酸乙酯10∶1純化給出272mg(98％)的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ0.15(s，9H，3CH3)，0.83(s，3H，CH3)，0.91(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3)，1.16(m，3H，CH3)，1.57(q，4H，J＝7.5，2CH2)，2.85(dd，1H，Jvic＝7Hz，Jgem＝10Hz，CH of CH2)，5.37(brs，1H，CH).
實(shí)施例51，25-二羥基-16-烯-23-炔-26，27-雙高-膽鈣化甾醇向在-78℃攪拌的在10ml無水四氫呋喃中的694mg(1.19mmol)的[3S-(1Z，3α，5β)-[2-[3，5-雙[[1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧代]-2-亞甲基-亞環(huán)己基]乙基]二苯基氧化膦的溶液中加0.75ml(1.2mmol)的1.6M的在己烷中的正丁基鋰。反應(yīng)混合物立刻變紅，并且在加在8ml的無水四氫呋喃中的270mg(0.72mmol)的[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3-庚炔基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮的過程中保持此顏色。反應(yīng)混合物在-78℃攪拌90分鐘，然后用鹽水淬火并用乙酸乙酯萃取。用水和鹽水洗滌合并的萃取物，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗中間體經(jīng)閃式色譜法用己烷-乙酸乙酯40∶1純化給出498mg的三甲硅烷基化的中間體。
向在10mg的無水四氫呋喃中的三甲硅烷基化的中間體(498mg)的溶液中加5.04ml(5.04mmol)的1M的四丁基氟化銨。反應(yīng)混合物在室溫氬氣氛下攪拌48小時(shí)，然后用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。用水和鹽水洗滌合并的萃取液，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酸1∶3和制備性HPLC用己烷—乙酸乙酸1∶4純化給出267mg(84.5％)的標(biāo)題化合物，[α]D25+6°(c0.2，EtOH)；UVλmax262/3nm(ε19，100)；1H-NMR(CDCl3)δ0.72(s，3H，CH3)，1.01(t，6H，J＝6.8Hz，2CH3)，1.14(d，3H，J＝6.2Hz，CH3)，1.62(m，4H，2CH2)，1.92(ddd，1H，Jvic＝3.5 and 8.5Hz，Jgem＝12.5Hz，CH of CH2)，2.61(br dd，1H，Jvic＝3.5Hz，Jgem＝12.5Hz，CHof CH2)，2.82(dd，1H，Jvic＝4Hz，Jgem＝12Hz，CH of CH2)，4.24(brm，1H，CH)，4.45(brm，1H，CH)，5.02，5.34(2s，2H，CH2)，5.38(s，1H，CH)，6.11，6.38(AB；2H，J＝11.4Hz，CH CH).
實(shí)施例6[1(R*)、3aR*(3aα，4β，7aβ)]-3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3E-庚烯基)-7a-甲基-3H-茚-4-醇向在攪拌的冰浴中冷卻的在15ml的無水四氫呋喃中的190mg(5mmol)的氫化鋁鋰的懸浮液中小心地先加270mg(5mmol)的固體甲醇鈉，隨后加252mg(0.852mmol)的[1(R*)，3aR*-(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-3H-茚-4-酚，反應(yīng)混合物回流加熱24小時(shí)。經(jīng)冰浴冷卻后，反應(yīng)經(jīng)小心地加1ml水淬火，隨后加1ml2N NaOH。在加20ml乙醚后，攪拌0.5小時(shí)；加2.2g MgSO4并再攪拌0.5小時(shí)。然后過濾，用乙醚洗滌，合并的乙醚濾液蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法和制備性HPLC用己烷—乙酸乙酯2∶1純化給出133mg(53％)的標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CDCl3)δ0.84(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3)，0.99(d，3H，J＝6Hz，CH3)，1.03(s，3H，CH3)，1.51(q，4H，J＝7.5Hz，2CH2)，4.17(brs，1H，CH)，5.32(brs，1H，CH)，5.38(d，1H，Jtrans＝16.5Hz，CH)，5.52(dt，1H，Jvic＝6.5Hz，Jtrans＝16.5Hz，CH).
實(shí)施例7[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3E-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮在室溫氬氣氛下向在攪拌的4ml的無水二氯甲烷中的133mg(0.434mmol)的[1(R*)，3aR*(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3E-庚烯基)-7a-甲基-3H-茚-4-酚中加950mg(2.527mmol)的重鉻酸吡啶鎓。反應(yīng)混合物攪拌5小時(shí)。然后，加25ml乙醚并攪拌15分鐘，濾過硅藻土填料，并用3×40ml乙酸乙酯洗滌填料。合并的濾液蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酸5∶2純化給出111mg(84％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例8[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3E-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮向在4ml無水二氯甲烷中的111mg(0.365mmol)的[1(R*)，3aR*-(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3E-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮的溶液中加0.375ml(2.56mmol)的1-(三甲基甲硅烷基)咪唑。反應(yīng)混合物在氬氣氛下攪拌23小時(shí)。然后通過加10ml水淬火，攪拌15分鐘，加20ml鹽水并用3×90ml乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水-鹽水1∶1洗滌五次，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酯10∶1純化給出131mg(95％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例91，25-二羥基-16，23E-二烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇向在-78℃的攪拌的在5ml的無水四氫呋喃中的405mg(0.695mmol)的[3S-(1Z，3α，5β)]-[2-[3，5-雙[[1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧代]-2-亞甲基—亞環(huán)己基]乙基]二苯基氧化膦的溶液中在氬氣氛下滴加0.434ml(0.694mmol)的在己烷中的1.6M的正丁基鋰。攪拌5分鐘后，在10分鐘內(nèi)向這樣得到的紅色溶液中滴加在4ml的無水四氫呋喃中的131mg(0.348mmol)的[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3E-庚炔基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮的溶液。然后反應(yīng)混合物在-78℃攪拌2小時(shí)。通過加10ml 2N的羅謝爾鹽淬火，并加溫至室溫，然后用3×90ml乙酸乙酸萃取。用鹽水洗滌合并的萃取液三次，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。殘余物經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酯30∶1純化給出220mg的三甲硅烷基化中間體。
向在3ml的無水四氫呋喃中的三甲硅烷基化中間體(220mg)的溶液中加在3.2ml(3.2mmol)在四氫呋喃中的1M四丁基氟化銨，這種反應(yīng)混合物在室溫氬氣氛下攪拌19小時(shí)。然后加5ml水，攪拌15分鐘，用20ml鹽水稀釋并用3×90ml乙酸乙酯萃取。用水—鹽水1∶1洗滌合并的萃取液，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法和制備性HPLC用己烷—乙酸乙酯1∶5純化給出126mg(82％)的晶狀標(biāo)題化合物；m.p.133-135℃(從4∶6的四氫呋喃—甲酸甲酯中)。D25+26°(c0.2，EtOH)；UVλmax(EtOH)263nm(ε18,200)；1H-NMR(CDCl3)δ0.69(s，3H，CH3)，0.85(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3)，1.02(d，3H，J＝6，7Hz，CH3)，1.52(m，4H，2CH2)，1.68(m，1H，CHof CH2)，1.91(ddd，1H，Jvic＝3.5 and 8.5Hz，Jgem＝12.5Hz，CH ofCH2)，2.60(dd，1H，Jvic＝3.5Hz，Jgem＝12.5Hz，CH of CH2)，2.82(m，1H，CH of CH2)，4.24(m，1H，CH)，4.45(m，1H，CH)，5.02，5.34(2s，2H，CH2)，5.32(brs，1H，CH)，5.38(d，1H，Jtrans＝15.5Hz，CH)，5.52(dt，1H，Jvic＝7Hz，Jtrans＝15.5Hz，CH)，6.11，6.38(AB，2H，J＝11.5Hz，CH CH)；分析C29H44O3計(jì)算值C79.04，H10.06；實(shí)測值C78.78，H10.21實(shí)施例10[1(R*)，3aR*-(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3Z-庚烯基)-7a-甲基-3H-茚-4-醇215mg(0.71mmol)的[1(R*)，3aR*-(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3-庚炔基)-7a-甲基-3-茚-4-醇，5ml的乙酸乙酯，12.5ml的己烷，0.35ml的無水乙醇，0.0175ml的喹啉和35mg的林德拉催化劑的混合物在室溫和常壓下氫化1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物濾過硅藻土填料，用乙酸乙酯洗滌填料。用1N HCl、水、2N碳酸氫鉀、水和鹽水洗滌合并的濾液，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)制備性HPLC(YMC柱)純化給出200mg(92.5％的標(biāo)題化合物)。1H-NMR(CDCl3)δ0.90(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3，1.01(d，3H，J＝6.5Hz，CH3)，1.05(s，3H，CH3)，1.57(q，4H，J＝7.5Hz，2CH2)，4.17(brs，1H，CH)，5.22(brdt，1H，Jvic＝1.5Hz，Jcis＝12Hz，CH)，5.38(dt，1H，Jvic＝7Hz，Jcis＝12Hz，CH).
實(shí)施例11[1(R*)，3aR*-(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3Z-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮向攪拌的在10ml的無水二氯甲烷中的200mg(0.652mmol)的[1(R*)，3aR*-(3aα，4β，7aβ)]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3Z-庚烯基)-7a-甲基-3H-茚-4-醇的溶液中在室溫氬氣氛下加1.286g(3.301mmol)的重鉻酸吡啶鎓。攪拌反應(yīng)混合物6小時(shí)。加25ml乙醚并攪拌15分鐘，濾過硅藻土填料，用3×25ml乙酸乙酯洗滌填料。合并的濾液蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酯3∶1純化給出182mg(91.5％)的標(biāo)題化合物?！銱-NMR(CDCl3)0.81(S，3H，CH3)，0.88(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3)，1.06(d，3H，J＝6.5Hz，CH3)，1.56(q，4H，J＝7.5Hz，2CH2)，2.84(dd，1H，Jvic＝6.5Hz，Jgem＝10Hz，CH of CH2)，5.22(d，1H，Jcis＝12Hz，CH)，5.33(s，1H，CH)，5.35(dt，1H，Jvic＝6.5Hz，Jcis＝12Hz，CH).
實(shí)施例12[1(R*)，3aR*-(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-[(三甲基甲硅烷基)氧代-3Z-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮向在10ml的無水二氯甲烷中的182mg(0.597mmol)的[1(R*)，3aR*-(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5-羥基-3Z-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮的溶液中加0.542ml(3.58mmol)的1-(三甲基甲硅烷基)味唑。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。然后反應(yīng)混合物用己烷稀釋，用水和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酸10純化給出218mg(97％)的標(biāo)題化合物?！銱-NMR(CDCl3)δ0.12(S，9H，3CH3)，0.80(S，3H，CH3)，0.86(t，6H，J＝7.5Hz，2CH3)，1.05(d，3H，J＝6.5Hz，CH3)，1.55(q，4H，J＝7.5Hz，2CH2)，2.84(dd，1H，Jvic＝6.5Hz，Jgem＝10Hz，CH of CH2)，5.08(br dt，1H，Jvic＝1.5Hz，Jcis＝11.5Hz，CH)，5.25(dt，1H，Jvic＝6.5Hz，Jcis＝11.5Hz，CH)，5.31(brs，1H，CH).
實(shí)施例131，25-二羥基-16，23Z-二烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇向在-78℃的攪拌的在8ml無水四氫呋喃中的578mg(0.992mmol)的[3S-(1Z，3α，5β)]-[2-[3，5-雙[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧代]-2-亞甲基-亞環(huán)己基]乙基]二苯基氧化膦的溶液中在氬氣氛下滴加0.62ml(0.992mmol)的在己烷中的1.6M正丁基鋰。反應(yīng)混合物變紅而且在加入在8ml的無水四氫呋喃中的218mg(0.578mmol)的[1(R*)，3aR*(3aα，7aβ)]-3，3a，5，6，7，7a-六氫-1-(1-甲基-5-乙基-5[(三甲基甲硅烷基)氧代]-3Z-庚烯基)-7a-甲基-4H-茚-4-酮溶液的過程中保持該顏色。反應(yīng)混合物在-78℃攪拌2小時(shí)，然后用水淬火并用乙酸乙酯徹底地萃取。用水和鹽水洗滌合并的萃取液，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗中間體經(jīng)閃式色譜法用己烷—乙酸乙酯20∶1純化給出328mg的三甲硅烷基化中間體。
向在10ml的無水四氫呋喃中的三甲硅烷基化中間體(328mg)的溶液中加4ml(4mmol)的在四氫呋喃中的1M的四丁基氟化銨，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。然后用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。用水和鹽水洗滌合并的萃取液，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)制備性HPLC(YMC柱)用己烷—乙酸乙酸1∶4純化給出191mg(75％)的白色泡沫狀的標(biāo)題化合物。[α]D25+20.5°(c0.2，EtOH)；UVλ(EtOH)262-263nm(ε＝14450)；1H-NMR(CDCl3)；δ0.7(s，3H，CH3)，0.9(t，6H，J＝7.3Hz，2CH3)，1.05(d，3H，J＝6.8Hz，CH3)，1.57(m，4H，2CH2)，1.91(ddd，1H，Jvic＝3.5 and 8.5Hz，Jgem＝12.5Hz，CHof CH2)，2.48(m，2H，CH2)，2.61(brd，1H，Jgem＝12.5Hz，CH of CH2)，2.82(br m，1H，CH of CH2)，4.24(br m，1H，CH)，4.45(br m，1H，CH)，5.02，5.34(2s，2H，CH2)，5.23(d，1H，Jcis＝12.3Hz，CH)，5.35(s，1H，CH)，5.37(dt，1H，Jvic＝7Hz，Jcis＝12.3Hz，CH)，6.11，6.38(AB，2H，J＝11.3Hz，CH CH).
實(shí)施例a口服劑型的軟明膠膠囊
<p>實(shí)施例b口服劑型的軟明膠膠囊
1.懸浮BHT和BHA(實(shí)施例a)或α-生育酚(實(shí)施例b)于Myglyol-812中。加溫至約50℃，并攪拌至到溶解。
2.溶解化合物C于來自步驟1的溶液中。
3.填充來自步驟2的溶液于軟的明膠膠囊。
所有步驟在氮?dú)夥蘸捅芄庀逻M(jìn)行。
權(quán)利要求
1.式I的25-羥基-16-烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇衍生物
其中A是具有E或Z立體化學(xué)構(gòu)型的C-C雙鍵，或者A是-C-C叁鍵，Et是乙基，而R是羥基且R1是氫或＝CH2，或R是氫或氟而R1是＝CH2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種化合物，其中A是E構(gòu)型的C-C雙鍵，尤其地其中R是羥基，特別地其中R1是＝CH2，優(yōu)選1，25-二羥基-16，23E-二烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種化合物，其中A是Z構(gòu)型的C-C雙鍵，尤其地其中R是羥基，特別地其中R1是＝CH2，優(yōu)選1，25-二羥基-16，23Z-二烯-26，27-雙高-膽鈣化甾醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的一種化合物，其中A是C-C叁鍵，尤其地R是羥基，特別地其中R1是＝CH2，優(yōu)選1，25-二羥基-16-烯-23-炔-26，27-雙高-膽鈣化甾醇。
5.一種下式的化合物
6.一種藥物組合物，尤其對(duì)治療腫瘤疾病如白血病，包括有效劑量的如在權(quán)利要求1，2，3或4中的一種、二種或者更多種式I的化合物，和一種惰性載體。
7.如在權(quán)利要求1，2，3或4中的化合物，用作HL-60細(xì)胞分化的刺激劑，尤其用于治療腫瘤疾病，如白血病。
8.使用如在權(quán)利要求1，2，3或4中的化合物，用來生產(chǎn)治療腫瘤疾病如白血病的藥物。
全文摘要
發(fā)明涉及一種式(Ⅰ)的化合物,其中A是具有E或Z立體化學(xué)構(gòu)型的C－C雙鍵,或者A是C－C叁鍵,Et是乙基,而R是羥基以及R
文檔編號(hào)A61K31/00GK1202885SQ96198479
公開日1998年12月23日 申請(qǐng)日期1996年11月13日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月22日
發(fā)明者J·A·艾科比利, M·R·尤斯科克維奇 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司