專利名稱：柳川魚苷、蒙花苷及其組合物的制藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及柳川魚苷、蒙花苷或其組合物及含有10％以上的柳川魚苷、蒙花苷的大薊有效部位在制備止血和抗結(jié)核藥物的用途。柳川魚苷、蒙花苷或其組合物及含有該兩種成分的大薊有效部位可用于制備治療衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外傷出血，癰腫瘡毒以及治療或預(yù)防結(jié)核疾病的藥物。
背景技術(shù)：
大薊(Cirsium japonicum DC.)為菊科植物大薊(Cirsium japonicumFisch.ex DC．)的干燥塊根。具有涼血止血，祛瘀消腫之功效，屬于止血類中藥。藥理實(shí)驗(yàn)表明，大薊的提取物中所含的柳川魚苷、蒙花苷具有止血和抗結(jié)核作用[Pectolinarin as hemostatie[p]JP62，240，621，1987，-11-12；Chem.Pharm.Bull.1987，35(2)861-864；中藥大辭典上冊(cè) 2004，115～118]。
為了確定大薊止血和抗結(jié)核有效成分或有效部位，我們采用了活性指導(dǎo)下的靶向追蹤分離方法進(jìn)行研究，并對(duì)各分離部位進(jìn)行活性測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從大薊中分離出的柳川魚苷(Pectolinarin)、蒙花苷(Linarin)及及其組合物和含有該兩種成分的大薊有效部位均具有止血和抗結(jié)核的作用。
其中柳川魚苷的結(jié)構(gòu)為
分子式C29H34O15，m/z622.56；無色針狀結(jié)晶(甲醇)(m.p.254～5℃(分解)。UvλmaxEeOHnm(logε)275，330；溶于稀堿及吡啶，難溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚及氯仿，不溶于水。
蒙花苷的結(jié)構(gòu)為 分子式C28H32O14，m/z592.55；m.p272～274℃。[α]D9-90°(C＝0.5，吡啶)；UvλmaxMeOHnm(logε)269，325；溶于稀堿及吡啶，難溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚及氯仿，不溶于水。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供柳川魚苷、蒙花苷或其組合物以及含有10％以上的兩種成分的大薊有效部位在制備止血藥物中的新用途，其中所述的止血藥物可治療治療衄血、吐血、尿血、便血、崩漏下血、外傷出血和癰腫瘡毒疾病。
本發(fā)明的目的在于提供柳川魚苷、蒙花苷或其組合物以及含有10％以上柳川魚苷或蒙花苷的大薊有效部位在制備抗結(jié)核藥物中的新用途。
本發(fā)明所述的柳川魚苷、蒙花苷及其組合物和含有10％以上柳川魚苷或蒙花苷的大薊有效部位的制備過程如下中藥大薊細(xì)粉，用乙醇提取，合并提取液，回收乙醇至無醇味，過濾，濾液加入一定量的蒸餾水，水液上D101型大孔樹脂柱，依次用水、20％乙醇、75％乙醇和95％乙醇洗脫，75％乙醇洗脫部位經(jīng)濃縮干燥后得到含10％以上的柳川魚苷或蒙花苷的大薊有效部位。進(jìn)一步，該有效部位經(jīng)硅膠柱層析分離后分別得到柳川魚苷或蒙花苷純品。
本發(fā)明所述的組合物是由柳川魚苷和蒙花苷以1∶9～9∶1重量比組成的。優(yōu)選柳川魚苷和蒙花苷重量比為1∶1。
1.動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)(1)口服給藥健康雄性小鼠，體重18-22克，分別用柳川魚苷、蒙花苷及含有10％以上的柳川魚苷或蒙花苷的大薊有效部位或組合物(柳川魚苷和蒙花苷重量比為1∶1)配成水溶液灌胃5.0g/kg，連續(xù)一周，未見小鼠死亡。
(2)注射給藥健康雄性小鼠，體重18-22克，分別用柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位或組合物(柳川魚苷和蒙花苷重量比為1∶1)配成水溶液進(jìn)行腹腔注射，連續(xù)一周，觀察小鼠死亡情況。柳川魚苷的LD50值為4.83±0.480g/kg、蒙花苷的LD50值為4.51±0.382g/kg、大薊有效部位的LD50值為5.80±0.550g/kg、組合物的LD50值為5.10±0.410g/kg。
2.對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響采用玻片法、毛細(xì)血管法和斷尾法觀察樣品對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響，驗(yàn)證本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物的止血作用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為ICR種小鼠(18.0-22.0g)，由青龍山動(dòng)物飼養(yǎng)廠提供。
實(shí)驗(yàn)用藥物分別為本發(fā)明中實(shí)施例中所得柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物(柳川魚苷和蒙花苷重量比為1∶1)，臨用前用0.5％CMC-Na配制；對(duì)照品為酚磺乙胺注射液(江蘇國營武進(jìn)制藥廠批號(hào)001112)，臨用前用無菌注射用水配制。
2.1玻片法本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物與空白組比較具有顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)果見表1。
表1 柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(X±S)


2.2毛細(xì)血管法本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物與空白組比較具有顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)果見表2。
表2 柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(X±S)

2.3斷尾法本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物與空白組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，結(jié)果見表3。
表3柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(X±S)


1.體外對(duì)結(jié)核桿菌的抑制作用通過體外試驗(yàn)觀察樣品對(duì)結(jié)核桿菌的抑菌作用，驗(yàn)證本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物的抗結(jié)核作用。實(shí)驗(yàn)用菌株結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株H37RV，購自中國藥品生物制品研究所；臨床分離株296號(hào)，經(jīng)鑒定為結(jié)核分枝桿菌。
實(shí)驗(yàn)用藥物分別為本發(fā)明中實(shí)施例中所得柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物(柳川魚苷和蒙花苷重量比為1∶1)，臨用前用0.5％ CMC-Na配制；對(duì)照品為鏈霉素(華北制藥股份有限公司批號(hào)041003)，臨用前用無菌注射用水配制；無藥對(duì)照用等體積的生理鹽水。
2.1體外對(duì)結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌H37RV的抑制作用本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物與空白組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，結(jié)果見表4。
表4柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物對(duì)結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌H37RV的抑菌作用

注如果無藥對(duì)照瓶報(bào)警后兩天，含藥瓶仍然沒有報(bào)警，說明藥物在該濃度能抑制結(jié)核桿菌，用“S”標(biāo)識(shí)，否則用“R”。
3.2體外對(duì)結(jié)核臨床分離菌株的抑菌作用本發(fā)明中柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物與空白組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，結(jié)果見表5。
表5柳川魚苷、蒙花苷及大薊有效部位和組合物對(duì)結(jié)核臨床分離菌株的抑菌作用

從以上研究結(jié)果，可以得出本發(fā)明具有下述優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明對(duì)傳統(tǒng)中藥大薊進(jìn)行了新的發(fā)掘，發(fā)現(xiàn)了柳川魚苷、蒙花苷及其組合物和大薊有效部位(含20％以上的柳川魚苷和蒙花苷)在制藥中的新用途。
2.本發(fā)明中的柳川魚苷、蒙花苷及組合物和大薊有效部位(含10％以上的柳川魚苷和蒙花苷)毒性小，藥理作用強(qiáng)，具有良好的藥用前景。
3.本發(fā)明中的物質(zhì)原料大薊資源廣泛、價(jià)廉，制備工藝簡單。
4.本發(fā)明中還證明了由柳川魚苷和蒙花苷組成的組合物也具有相同的醫(yī)療作用。
5.本發(fā)明中的柳川魚苷或蒙花苷或含有以上一種或兩種有效成分的有效部位或組合物可與藥學(xué)上可接受的賦型劑一起，采用本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備成各種劑型，如片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、針劑等。含有本發(fā)明柳川魚苷和蒙花苷的藥物組合物的優(yōu)選劑型是口服制劑。給藥劑量為20-500mg/人/次，每天1-3次。
下面將描述本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1大薊細(xì)粉100g，用95％乙醇提取4次(生藥∶溶劑重量比為1∶8；1∶6；1∶6；1∶6)，合并提取液，回收乙醇至無醇味，加入蒸餾水至500ml，上D101型大孔樹脂柱，依次用水、20％乙醇、75％乙醇和95％乙醇洗脫，75％乙醇洗脫部位經(jīng)濃縮干燥后得含20％以上的柳川魚苷或蒙花苷混和總苷(30g)。混合總苷經(jīng)硅膠柱層析分離得到柳川魚苷(95％，7g)和蒙花苷(95％，6g)純品。經(jīng)分別與柳川魚苷或蒙花苷標(biāo)淮品的IR、UV、NMR及mmp和TLC比較，確定了以上兩純品的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例2大薊細(xì)粉1000g，用70％乙醇提取3次(生藥∶溶劑重量比為1∶8；1∶6；1∶6)，合并提取液，回收乙醇至無醇味，加入蒸餾水至500ml，上D101型大孔樹脂柱，依次用20％乙醇、75％乙醇和95％乙醇洗脫，75％乙醇洗脫部位經(jīng)濃縮干燥后得10％以上的柳川魚苷或蒙花苷(35g)。
實(shí)施例3將從大薊中提取或其它途徑獲得的柳川魚苷(1g)和蒙花苷(9g)以1∶9比例充分混合，攪拌、研磨得柳川魚苷和蒙花苷的組合物(10g)。
實(shí)施例4將從大薊中提取或其它途徑獲得的柳川魚苷(5g)和蒙花苷(5g)以1∶1比例充分混合，攪拌、研磨得柳川魚苷和蒙花苷的組合物(10g)。
實(shí)施例5將從大薊中提取或其它途徑獲得的柳川魚苷(9g)和蒙花苷(1g)以9∶1比例充分混合，攪拌、研磨得柳川魚苷和蒙花苷的組合物(10g)。
將上述實(shí)施例中得到柳川魚苷、蒙花苷、大薊有效部位或組合物與輔料按處方量混合，制粒，可制成片劑、膠囊劑等劑型，用于治療治療衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外傷出血，癰腫瘡毒以及治療或預(yù)防結(jié)核等疾病。
權(quán)利要求
1.柳川魚苷、蒙花苷或其組合物及含有10％以上的柳川魚苷、蒙花苷的大薊有效部位在制備止血藥物的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中止血藥物是治療衄血、吐血、尿血、便血、崩漏下血、外傷出血和癰腫瘡毒疾病的藥物。
3.柳川魚苷、蒙花苷或其組合物及含有10％以上的柳川魚苷、蒙花苷的大薊有效部位在制備抗結(jié)核疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了柳川魚苷、蒙花苷或其組合物及含有10％以上的柳川魚苷、蒙花苷的大薊有效部位在制備止血和抗結(jié)核藥物的應(yīng)用。柳川魚苷、蒙花苷或其組合物及含有該兩種成分的有效部位可與藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑等各種劑型，用于治療衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外傷出血，癰腫瘡毒以及結(jié)核等疾病。
文檔編號(hào)A61P7/04GK1939327SQ20051010542
公開日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2005年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日
發(fā)明者葉文才, 王廣基, 唐春山, 孫旭 申請(qǐng)人:江西天科醫(yī)藥開發(fā)有限公司