專利名稱：抗癌劑和治療癌癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及癌癥的治療和用于治療癌癥的組合物。
抗癌劑的探索是全世界的醫(yī)藥工業(yè)、科研院所和政府機(jī)構(gòu)一直并且仍然是一個(gè)主要努力的方向。伴隨眾多癌癥治療中的一個(gè)主要問(wèn)題是它們對(duì)患者和非癌組織的嚴(yán)重的不良影響。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，擬莖點(diǎn)霉素真菌毒素(此后稱為擬莖點(diǎn)霉素類)和它們的衍生物表現(xiàn)出強(qiáng)的抗癌活性。此外，由于擬莖點(diǎn)霉素類特別靶向肝的趨勢(shì)，我們認(rèn)為可用擬莖點(diǎn)霉素類來(lái)提供抗肝癌的選擇性活性。應(yīng)懂得，擬莖點(diǎn)霉素類在肝癌治療中的選擇性是一個(gè)有意義的優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樗馨邢蚋伟┩瑫r(shí)使對(duì)其它組織的影響減到最小。
然而，通過(guò)選擇配方或能提高藥物對(duì)特定類型癌細(xì)胞或特定類型的癌的選擇性的擬莖點(diǎn)霉素類衍生物，還可將擬莖點(diǎn)霉素類用于除肝癌以外的癌癥的治療?？梢孕纬膳c單克隆抗體綴合的擬莖點(diǎn)霉素類衍生物?？捎梢阎椒ㄉa(chǎn)單克隆抗體而提供對(duì)癌細(xì)胞的選擇性。
擬莖點(diǎn)霉素類(phomopsins)的特征在于通常具有式I的13-元環(huán)結(jié)構(gòu) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是任選的取代基并且可獨(dú)立選自下組氫、脂族基、芳族基、肽鏈和鹵素。
X是脂族基、氫或鹵素(優(yōu)選是氫)；以及Y是脂族基、氫或鹵素(優(yōu)選是氯)；如果存在一個(gè)肽鏈的話，它可與單克隆抗體(Mab)綴合。擬莖點(diǎn)霉素類可以是式I化合物的衍生物(例如它的鹽類)。
優(yōu)選的擬莖點(diǎn)霉素類選自包含式Ia的基的化合物 及其衍生物。
在式I和Ia中，R1、R2、R3、R5、R6和R7可典型地獨(dú)立選自氫和脂族基，而R4通常是肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，R4是與抗體(特別是單克隆抗體(Mab))綴合的肽。更優(yōu)選的是，R1、R2、R5和R6是低級(jí)脂族基，而R3和R7都是氫。甚至更優(yōu)選的是，R1、R2和R6是低級(jí)烷基，而R5是低級(jí)烷基或低級(jí)烯烴。最優(yōu)選的是，R1是乙基、R2是甲基，R3是氫，R5是異丙基或異丙烯基，而R6是甲基。本文所用的術(shù)語(yǔ)低級(jí)脂族基、低級(jí)烷基和低級(jí)烯烴包括含有至多6個(gè)碳原子、最優(yōu)選至多4個(gè)碳原子的基。
式Ia的化合物優(yōu)選的立體化學(xué)如式Ib所示
優(yōu)選地，至少60wt％的擬莖點(diǎn)霉素組分將具有立體化學(xué)Ib。
基R4是肽，優(yōu)選是二肽或三肽，它可任選地與抗體(如單克隆抗體)鍵合。優(yōu)選的基R4有式II的結(jié)構(gòu)且包括所有立體異構(gòu)體 其中點(diǎn)線代表任選的雙鍵；R8和R9獨(dú)立選自氫和低級(jí)烷基，更優(yōu)選地，R8是甲基，而R9是乙基，且R11和R10都是氫或一起形成一個(gè)雙鍵；R12選自下組氨基、一取代氨基、二取代氨基和氨基酸殘基，特別是式III的基 其中，R13和R14都是氫或一起形成一個(gè)雙鍵，而R15選自下組羥基、氨基、取代氨基或抗體(特別是Mab)。
當(dāng)R15是抗體或與抗體相連時(shí)，優(yōu)選的是，R13和R14形成雙鍵來(lái)提供脫氫天冬氨酸殘基。在此例中，式III殘基中的C-N鍵相對(duì)較弱，能使式Ia的活性擬莖點(diǎn)霉素(其中，式II的基中，R12是氨基)從MAb釋放(一旦它與癌細(xì)胞結(jié)合)。這樣，脫氫天冬氨酸殘基可望通過(guò)Mab綴合物促進(jìn)擬莖點(diǎn)霉素類的送遞。
最優(yōu)選的擬莖點(diǎn)霉素化合物選自擬莖點(diǎn)霉素A、八氫擬莖點(diǎn)霉素A、異擬莖點(diǎn)霉素A和擬莖點(diǎn)霉素胺A(phomopsinamine A)。這些化合物具有下列化學(xué)式
患者可用擬莖點(diǎn)霉素類的混合物來(lái)治療，應(yīng)懂得，在說(shuō)明書和權(quán)利要求書中涉及的擬莖點(diǎn)霉素包括擬莖點(diǎn)霉素類的混合物。
一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥(優(yōu)選是肝癌)的藥物組合物，它包含擬莖點(diǎn)霉素化合物或其衍生物或者擬莖點(diǎn)霉素類或衍生物的藥物上可接受的鹽以及藥物上可接受的載體。
擬莖點(diǎn)霉素類的鹽類(如堿金屬鹽)合理地是水溶性的。水溶液可通過(guò)將擬莖點(diǎn)霉素類溶解在稀堿(如氫氧化鈉)中形成以提供中性溶液。
另一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥患者的方法，它包括對(duì)患者施用擬莖點(diǎn)霉素化合物或其衍生物或者擬莖點(diǎn)霉素或衍生物的藥物上可接受的鹽。
擬莖點(diǎn)霉素化合物可通過(guò)各種方法施用，包括以糖漿、膠囊、片劑等形式口服，通過(guò)注射或者通過(guò)靜脈內(nèi)輸注。
優(yōu)選地，以靜脈內(nèi)輸注施用所述化合物。
在又一方面，本發(fā)明提供了前文描述的擬莖點(diǎn)霉素化合物在制備用于治療癌癥(特別是肝癌)的藥物組合物中的應(yīng)用。
擬莖點(diǎn)霉素化合物是由某些真菌生產(chǎn)，包括Diaportetoxicus(以前的Phomopsis leptostromiformis)和Phomopsis emicis，或者可從這些天然產(chǎn)物得到。
認(rèn)為擬莖點(diǎn)霉素類的活性部分地是由于該化合物與微管蛋白的強(qiáng)結(jié)合的緣故。這可通過(guò)抑制微管蛋白形成而破壞細(xì)胞有絲分裂，并且使形成的微管解聚。在一些例子中，可優(yōu)選用擬莖點(diǎn)霉素類與一種或多種其它抗癌藥物或療法結(jié)合治療?？蛇x定與擬莖點(diǎn)霉素類聯(lián)用的藥物通過(guò)提供與微管結(jié)合的互補(bǔ)活性來(lái)增強(qiáng)結(jié)果。與擬莖點(diǎn)霉素類聯(lián)用的可能的藥物實(shí)例包括紫杉酚、長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春新堿。
現(xiàn)在將參照如下實(shí)施例描述本發(fā)明。應(yīng)懂得，提供實(shí)施例只是為了闡述本發(fā)明，而決不是限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例為了由美國(guó)國(guó)家癌癥研究所進(jìn)行的抗癌活性的體外和體內(nèi)評(píng)價(jià)，通過(guò)下列文獻(xiàn)中描述的方法獲得了擬莖點(diǎn)霉素A、異擬莖點(diǎn)霉素A、擬莖點(diǎn)霉素胺A和八氫擬莖點(diǎn)霉素AC.Culvenor，J.Edgar和M.Mackay，四面體(Tetrahedron)，Vol.45，No.8 pp 2351(1989)；以及J.Edgar，J.Frahn，P.Cockrum和J.Culvenor在論文“羽扇豆中毒。擬莖點(diǎn)霉素類的化學(xué)和生物化學(xué)”，真菌毒素和藻毒素(Mycotoxins and Phycotoxins)，在第六屆國(guó)際IUPAC關(guān)于真菌菌素和藻毒素的討論會(huì)提交的邀請(qǐng)論文集，Pretoria，Rep.South Africa，1985年7月22～25日，或本文描述的方法。擬莖點(diǎn)霉素A的分離背景設(shè)計(jì)提取方法使困難和花費(fèi)最小。用再循環(huán)15％甲醇∶水通過(guò)成一排的(in line)XAD(苯乙烯二乙烯基苯共聚體)柱連續(xù)提取已發(fā)酵的種子。擬莖點(diǎn)霉素A在XAD上吸附所需的時(shí)間非常長(zhǎng)，但只需最少的操作員輸入(operator input)。該步操作的時(shí)間選擇并不是關(guān)鍵的，因此可以適應(yīng)操作條件。
擬莖點(diǎn)霉素A在15％的甲醇溶液中有比較低的溶解度。操作取決于擬莖點(diǎn)霉素A在XAD樹(shù)脂上的吸附，使在發(fā)酵的種子中的擬莖點(diǎn)霉素A從溶解平衡趨于分解。該操作減少了溶劑的用量、處理的體積和易燃災(zāi)難。提取的替換方法(不用再循環(huán))在初始提取時(shí)將用150+升純甲醇，涉及進(jìn)一步濃縮步驟(或甲醇提取至900+L的稀釋)，然后在XAD上吸附?，F(xiàn)在的操作使用了12L甲醇，要求吸附相最小的操作輸入和用少得多的溶劑(總體積為85L而不是900+L)。
濃縮的擬莖點(diǎn)霉素A的從柱中洗脫是生產(chǎn)80～90％純度的結(jié)晶擬莖點(diǎn)霉素A的3步分離中的第一步。
初步用15％的甲醇水溶液洗滌后，可用100％的甲醇從柱中洗脫擬莖點(diǎn)霉素A?？蓱?yīng)用硅膠急驟柱色譜法來(lái)純化。應(yīng)用5∶95的氨∶異丙醇調(diào)節(jié)柱，將濃縮物溶于最小量的20∶65∶15氨∶異丙醇∶水中。用這種3溶劑混合物洗脫擬莖點(diǎn)霉素A。從沸騰的冰醋酸中重結(jié)晶提供了80～90％純度的擬莖點(diǎn)霉素A。異擬莖點(diǎn)霉素A的制備原料0.5M HgCl2將200mg HgCl2溶于2ml水中(+50μl 10M HCl)。0.01M擬莖點(diǎn)霉素A將18.3mg PhA溶于2ml水中(吹入NH3)。1M HCl方法將0.01M擬莖點(diǎn)霉素A(2.0ml)與0.5M HgCl2(1ml)和1MHCl(200μl)混合，總體積3.2ml，在室溫下放置5小時(shí)。用水稀釋該溶液至8ml，然后通過(guò)一個(gè)制備C18 Maxi-clean SPE柱(900mg)，用7～8ml水洗滌。再用8～9ml MeOH洗脫吸附的異擬莖點(diǎn)霉素A。來(lái)自第一個(gè)C18柱的水性洗脫液通過(guò)第二個(gè)C18柱再處理以檢驗(yàn)第一個(gè)柱是否過(guò)載。來(lái)自第二個(gè)柱的MeOH洗脫液在干燥后具有很少的殘余物，所以不包括在進(jìn)一步的處理中。
通過(guò)HPLC分析甲醇洗脫液(配成10ml)，然后蒸發(fā)至干，用制備HPLC純化。擬莖點(diǎn)霉素胺A的制備將擬莖點(diǎn)霉素A(15.3mg)溶于最小量的1M HCl中，在室溫下放置28小時(shí)。用水將反應(yīng)混合物稀釋到8ml，再通過(guò)一強(qiáng)陰離子交換柱(SAX，600mg)以移去任何未反應(yīng)的擬莖點(diǎn)霉素A(預(yù)計(jì)溶液pH值約為1.52)。然后，使未吸附的化合物的水溶液和SAX柱的水洗滌液都通過(guò)制備C18柱(900mg)。用水(10ml)洗滌C18柱，再用甲醇(10ml)洗脫擬莖點(diǎn)霉素胺A。
使甲醇洗脫液經(jīng)過(guò)HPLC分析，然后蒸發(fā)至干，用制備C18柱純化擬莖點(diǎn)霉素胺A。
該方法可通過(guò)在5～6小時(shí)，24小時(shí)和28～30小時(shí)后對(duì)反應(yīng)混合物取樣來(lái)改良?？赏ㄟ^(guò)HPLC分析所有的洗滌液和洗脫液來(lái)監(jiān)測(cè)擬莖點(diǎn)霉素A向擬莖點(diǎn)霉素胺A的轉(zhuǎn)化。擬莖點(diǎn)霉素類的抗癌活性體外篩查檢測(cè)在體外對(duì)60個(gè)人癌細(xì)胞系估測(cè)了擬莖點(diǎn)霉素A、八氫擬莖點(diǎn)霉素A、異擬莖點(diǎn)霉素A和擬莖點(diǎn)霉素胺A的抗癌活性。估測(cè)抗癌活性所用的方法是美國(guó)國(guó)家癌癥研究所作為初步篩查為發(fā)現(xiàn)具有抗癌潛能的化合物應(yīng)用的那些(Boyd和Paull，藥物開(kāi)發(fā)研究(Drug DevelopmentResearch)，34，91～109，1995)。
現(xiàn)在根據(jù)下面兩種表達(dá)式中的一種或另一種來(lái)計(jì)算化合物對(duì)于細(xì)胞系生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)的測(cè)量效果如果(平均ODtest-平均ODtzero)≥0，那么PG＝100×(平均ODtest-平均ODtzero)/(平均ODctrl-平均ODtzero)如果(平均ODtest-平均ODtzero)＜0，那么PG＝100×(平均ODtest-平均ODtzero)/平均ODtzero其中平均ODtzero＝就在細(xì)胞接觸試驗(yàn)化合物前，SRB產(chǎn)生的顏色的光密度測(cè)定平均值。平均ODtest＝在細(xì)胞接觸試驗(yàn)化合物48小時(shí)后，SRB產(chǎn)生的顏色的光密度測(cè)定平均值。平均ODctrl＝細(xì)胞沒(méi)有接觸試驗(yàn)化合物時(shí)，48小時(shí)后SRB產(chǎn)生的顏色的光密度測(cè)定平均值。結(jié)果表1a～4b中列出了關(guān)于不同濃度的試驗(yàn)化合物對(duì)60個(gè)細(xì)胞系中的每一個(gè)計(jì)算的PGs。對(duì)每種化合物進(jìn)行了兩次試驗(yàn)，這些化合物擬莖點(diǎn)霉素A(表1a和1b)、八氫擬莖點(diǎn)霉素A(表2a和2b)、iso擬莖點(diǎn)霉素A(表3a和3b)和擬莖點(diǎn)霉素胺A(表4a和4b)的試驗(yàn)結(jié)果表明，大多數(shù)測(cè)試的癌細(xì)胞系對(duì)擬莖點(diǎn)霉素A、異擬莖點(diǎn)霉素A、八氫擬莖點(diǎn)霉素A和擬莖點(diǎn)霉素胺A有劑量相關(guān)的響應(yīng)。特別是，這些數(shù)據(jù)支持了體內(nèi)試驗(yàn)的估測(cè)操作的進(jìn)展。
表1a化合物1擬莖點(diǎn)霉素AID No9502RM16Log10 濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系-6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 99 106 98 34 -24HL-60(TB)101 101 76 -17 -43K-562 97 102 87 24 -23MOLT-499 103 95 43 29RPMI-8226111 109 103 36 -5SR 118 111 53 -16 -35非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC102 103 69 31 17EKVX 102 106 85 40 11HOP-62 104 106 96 72 56HOP-92 114 116 110 91 90NCI-H226 107 121 67 -4 -26NCI-H23 105 102 101 74 36NCI-H322M102 98 94 308NCI-H460 103 111 83 169NCI-H522 103 105 100 18 -21結(jié)腸癌COLO 205 107 75 57 -54 -79HCC-2998 95 95 74 4 -46HCT-116 97 102 101 32 11HCT-1590 97 74 26 10HT29 95 97 91 145KM12 100 83 62 125SW-62096 107 101 62 44CNS癌SF-268 101 101 89 51 36SF-295 107 102 74 218SF-53994 94 69 -18 -54SNB-1993 97 92 44 22SNB-7593 77 48 -11 21U251 100 102 89 164黑素瘤LOX IMVI 90 97 82 43 20MALME-3M 101 92 65 32 25M14 98 83 64 0 -27SK-MEL-2 97 95 84 32 11SK-MEL28 94 83 68 44 37SK-MEL-5 100 87 48 30 23UACC-257 113 104 72 60 70UACC-62 101 95 79 38 26卵巢癌IGR-OV1 99 102 97 73 44OVCAR-3 102 97 64 114OVCAR-4 99 84 114 63 54OVCAR-5 101 102 78 20 27OVCAR-8 95 99 97 628SK-OV-3 104 97 70 19 11腎癌786-0105 90 86 26 18A498 96 91 67 60ACHN 101 91 89 48 36CAKI-190 88 63 37 28RXF-393 91 87 49 25 39SN12C104 104 92 64 38TK-10 94 101 85 68 53UO-31 98 94 91 64 48前列腺癌PC-3 100 89 66 20 10DU-145 108 102 66 8 -13乳腺癌MCF7 98 92 67 216MCF7/ADR-RES 99 99 90 48 13MDA-MB-231/Alcc 99 101 93 772HS 578T 104 107 101 71 75MDA-MB-43598 60 16 -46 -80MDA-N 93 71 -29 -86 -79BT-549 100 121 112 60 56T-47D 91 107 71 47 73
表1b化合物1擬莖點(diǎn)霉素AID No94O9SC89Log10濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系-6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 84 86 80 -2 -47HL-60(TB) 75 88 76 -31 -65K-562105 121 93 33 11MOLT-498 93 90 28 28RPMI-8226103 94 87 9 -27SR90 88 88 25 19非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC107 103 82 34 25EKVX 107 99 92 58 45HOP-62 100 114 99 57 35NCI-H226 87 85 96 34 -5NCI-H23 101 101 88 20 -2NCI-322M 93 93 80 27 44NCI-H460 101 95 80 12NCI-H522 102 102 93 9 -21結(jié)腸癌COLO 205 99 108 69 -27 -44HCC-2998 104 96 87 11 -37HCT-116 102 94 93 32 15HCT-15 102 99 103 35 15HT29 95 95 92 -14 -52KM12 92 87 61 -19 -52SW-620 104 104 93 34 22CNS癌SF-268 104 106 87 40 16SF-295 100 94 74 -45 -53SF-53999 102 98 32 -7SNB-19 101 98 94 56 33SNB-7583 55 28 15 16U251 103 98 91 26 9黑素瘤LOX IMVI 101 108 100 46 37M14 99 110 76 19 -31SK-MEL-2 87 92 74 32 16SK-MEL-28 96 98 69 37 51SK-MEL-5 106 101 54 22 10UACC-257 98 92 75 26 42卵巢癌IGROV1 104 119 109 57 27OVCAR-5 99 100 82 24 19OVCAR-8 105 133 104 59 30SK-OV-3 94 114 89 26 47腎癌786-0 91 97 98 38 17A498 99 100 83 17 -5ACHN 98 90 90 43 21SN12C105 100 103 59 28TK-10100 106 98 92 55前列腺癌PC-3 99 100 86 21 15DU-14599 105 83 22 20乳腺癌MCF7 98 100 76 23 12MCF7/ADR-RES 97 100 86MDA-MB-231/ATCC 99 98 96 66 30HS 578T 113 109 79 23 4MDA-MB-43590 81 34 1 -23MDA-N103 101 23 -75 -63BT-549 107 110 100 65 49T-47D 95 98 74 32 56
表2a化合物1八氫擬莖點(diǎn)霉素AID No9409SC89Log10濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系 -6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 90 96 82 8 -3HL-60(TB) 106 95 88 -25 -49K-562 100 108 92 22 14MOLT-4 103 112 105 39 20RPMI-8226 110 99 84 7 -33SR 94 96 92 27 15非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC 105 104 97 47 12EKVX 95 97 88 62 44HOP-62 103 96 105 72 43NCI-H226 85 75 85 33 -22NCI-H23 110 118 104 69 12NCI-H322M 100 99 91 49 26NCIH460 99 99 96 29 2NCIH522 99 99 88 5結(jié)腸癌COLO 205 97 100 70 1 -82HCC-2998135 -16HCT-116 104 103 100 41 14HCT-15 96 97 97 58 16HT29 93 91 90 30 6KM12108 124 139 63 -8SW-620 95 98 87 34 32CNS癌SF-268 101 100 86 43 22SF-295 88 88 72 -27 -65SF-539 101 95 95 27 -32SNB-19 100 97 99 59 38SNB-75 90 111 89 -7 27U251 96 99 90 20 -3黑素瘤LOX IMVI 97 100 92 52 39M14 101 70 94 24 -51SK-MEL-2111 109 106 38 60SK-MEL-28 105 94 69 29 41SK-MEL-5 93 105 45 3 -19UACC-257 98 97 85 36 37卵巢癌IGROV1 108 107 99 52 34OVCAR-5 102 94 96 57 24OVCAR-8 106 99 100 62 29SK-OV-3 85 98 79 27 -11腎癌786-0 104 110 127 95 54A498104 100 103 49 16ACHN 99 96 86 61 22SN12C99 96 92 63 28TK-1097 96 101 87 51前列腺癌PC-3 89 100 90 37 21DU-145 105 108 95 29 -4乳腺癌MCF7115 108 108 34 26MCF7/ADR-RES107 106 105 66 -15MDA-MB-231/ATCC 100 95 83 53 23HS 578T 90 90 72 13 -10MDA-MB-435 100 91 59 13 -14MDA-N 101 99 51 -9 -23BT-549 111 75 87 57 37T-47D95 122 89 45 48
表2b化合物1八氫擬莖點(diǎn)霉素AID No950RM16Log10濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系 -6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 99 102 93 28 -33HL-60(TB) 100 81 932 -33K-S62 104 100 99 27 -21MOLT-4 104 99 103 46 26RPMI-822694 87 96 39 -3SR 78 92 54 -9 -35非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC 104 93 101 57 21EKVX105 93 93 52 23HOP-62 89 90 85 55 21HOP9298 99 92 51 76NCI-H226108 104 102 23 -14NCI-H23 94 96 85 57 27NCI-H322M99 98 99 74 17NCI-H460105 101 104 45 15NCI-H522108 103 102 27 -13結(jié)腸癌COLO 205101 94 74 13 -13HCC-2998 97 100 104 48 -13HCT-116 105 100 101 42 17HCT-15 90 98 81 45 22HT29 97 96 101 618KM12101 96 99 40 20SW-620 100 93 92 58 36CNS癌SF-268 101 98 86 52 46SF-295 93 79 74 220SF-539 83 90 871 -55SNB-19 101 103 104 50 23SNB-75 99 102 52 -11 16U251103 96 97 309黑素瘤LOX IMVI 91 91 85 45 25MALME-3M 99 96 84 46 27M14 90 98 98 435SK-MEL-2101 96 93 40 12SK-MEL-28 106 90 76 48 43SK-MEL-5110 107 72 36 28UACC-257105 105 74 65 88UACC-62 104 96 87 31 18卵巢癌IGR-OV1 94 95 94 68 42OVCAR-3 103 99 87 31 13OVCAR-4 106 90 94 85 99OVCAR-5 107 104 105 62 26OVCAR-8 98 99 95 70 19SK-OV-3 104 90 98 43 10腎癌786-0 113 96 90 48 33A498104 96 100 51 20ACHN100 103 104 81 52CAKI-1 95 72 69 36 32RXF-393 95 93 81 52 42SN12C91 93 92 63 40TK-1092 98 83 91 59UO-31 100 92 99 75 52前列腺癌PC-3104 99 93 42 12DU-145 100 97 94 17 -1乳腺癌MCF7104 100 94 48 46MCF7/ADR-RES102 98 97 61 23MDA-MB-231/ATCC 97 67 72 64 22HS 578T 103 92 87 51 83MDA-MB-435 101 89 40 -25 -66MDA-N85 81 11 -77 -80BT-549 123 108 96 46 38T-47D99 100 86 59 77
表3a化合物1異擬莖點(diǎn)霉素AID No9409SC89Log10濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系 -6 -7 -6 5 -4白血病CCRF-CEM103 97 92 7 -43HL-60(TB) 106 98 98-29 -59K-562 128 123 112 25 5MOLT-4 97 105 106 46 5RPMI-8226 106 104 87 0 -14SR 96 99 94 28 5非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC 104 103 90 31 11EKVX103 101 98 64 58HOP-62 95 82 79 53 21NCI-H226 95 93 110 39 -15NCI-H23 99 105 93 37 16NCI-H322M95 100 85 34 51NCI-H460 95 96 85 7 -32NCI-H422100 99 95 10 -76結(jié)腸癌COLO 205102 106 76-45 -48HCC-2998 96 99 92 15 -35HCT-116 100 111 99 30 6HCT-15 100 102 102 40 16HT29 98 98 93-30 -26KM12116 98 62-33 -69SW-620 99 99 87 23 2CNS癌SF-268 102 94 87 46 31SF-295 100 93 88-36 -52SF-539 96 95 82 28 6SNB-19 100 98 89 57 37SNB-75 84 102 106 23 36U251 97 93 83 15 -20黑素瘤LOX IMVI 99 96 91 43 19M14 78 81 46 -6 -58SK-MEL-2100 95 80 18 0SK-MEL-2893 95 78 47 43SK-MEL-5117 110 41 -2 1UACC-257 98 96 85 20 27卵巢癌IGROV1 105 106 94 49 27OVCAR-5 102 100 95 30 25OVCAR-8 103 107 105 66 32SK-OV-3 105 106 86 24 35腎癌786＝0 93 94 99 40 24A498 97 93 95 21 3ACHN101 95 91 46 21SN12C 102 99 101 65 24TK10101 103 101 87 58前列腺癌PC-3101 106 85 28 18DU-145 106 111 97 16 5乳腺癌MCF7102 92 69 20 3MCF7/ADR-RES106 109 95 19 2MDA-MB-231/ATCC 102 100 107 64 26HS 578T 103 80 69 38 31MDA-MB-435 98 106 58-20 3MDA-N 103 92 42 -7 -37BT-549 116 108 123 71 32T-47D 104 96 103 42 42
表3b化合物1異擬莖點(diǎn)霉素AID No9502RM16Log10濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系-6 -7-6-5-4白血病CCRF-CEM 1031069725-21HL-60(TB) 9510083 -19-41K-562 1001049219-17MOLT-4102100 10144 24RPMI-8226 1101109719 6SR100 9641 -15-22非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC 1041007733 19EKVX 941019644 22HOP-62 94 948954 26HOP-92 96 967666 86NC-H226 11411088-6-27NCI-H23 1041058348 39NCI-H322M 106 989632 14NCI-H460 931057920 4NCI-H522 101 978815 -4結(jié)腸癌COLO20590 7644 -34-70HCC-2998 98 9782-8-64HCT-11693 887921 4HCT-15 97 988529 14HT29 991008510 6KM12 91 874715 -6SW-620 97 998340 35CNS癌SF-268 94 928852 37SF-295 951007312-11SF-539101 9776 -29-68SNB-19 971008944 20SNB-75 9710484-3 60U251 98 967711 4黑素瘤LOX IMVI 981009245 30MALME-3M 100 896426 17M14 101 80695 -26SK-MEL-2 94 997523 17SK-MEL-28 93 887740 24SK-MEL-5 99 876029 35UACC-257 84 927846 58UACC-6296 968345 29卵巢癌IGR-OV198 979358 36OVCAR-397 90463 -17OVCAR-497 927962 47OVCAR-597 996815 21OVCAR-8 106106 10674 34SK-OV-395 927623 6腎癌786-0 94 847932 16A498 82 84870 -16ACHN 101108 10156 48CAKI-1 901048247 46RXF-393 1001027542 35SN12C 95 939361 28TK-10 1011059796 71U0-31 97 969667 48前列腺癌PC-3 100 946823 23DU-14510710072-5 -9乳腺癌MCF7 99 989032 12MCF7/ADR-RES 94 958744 7MDA-MB-231/ATCC971109273 18HS 578T99 707048 58MDA-MB-435103 8734 -35-69DMDA-N103 82 -16 -84-68BT-549102 989050 48T-47D 84 907641 52
表4a化合物1擬莖點(diǎn)霉素胺AID No9409SC89Log10濃度生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系 -6-7-6-5-4白血病CCRF-CEM 979349 -13 7HL-60(TB) 104 10356 -53 -55K-562 105 10053 6 2MOLT-4 9593912617RPMI-8226 106 10365 9SR10495712612非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC 99 100531918EKVX 8996804438HOP-62105 101752934NCI-H226 828463 -12 -31NCI-H23 110 1127811-9NCI-H322M 9697613136NCI-H460 104 111374-35MNCI-H522 666240 -42 -54結(jié)腸癌COLO 205 109 10336 -22 -72HCC-2998 109 11360 -16 -59HCT-11699996314 1HCT-15 93947619 2HT29 101 10250 -53 -64KM12 110 123774740SW-620 93 100592124CNS癌SF-268101 100703213SF-295 878656 -22 -27SF-539 97 10277 -18 -44SNB-19 8694652720SNB-75 6378361122U251 878740 0 -39黑素瘤LOX IMVI 98 101733828SK-MEL-2 1029637-1-6SK-MEL-28 10093654249SK-MEL-5 10299321714UACC-257 9595663142卵巢癌IGROVI10098693719OVCAR-5 10293601115OVCAR-881 1038555 2SK-OV-3 101 107592714腎癌786-0 10098913115A498 111 101822-11ACHN 99 100774121SN12C 9693823313TK-10 98 100915031前列腺癌PC-3 9790401818DU-145 99994810 1乳腺癌MCF7 114 116381510MCF7/ADR-RES 1039987-7 -48MDA-MB-231/ATCC9596862915HS 578T878750 6-5MDA-MB-43512671 -15 -55 -32MDA-N 9387-6 -58 -49BT-549145855129 -25T-47D 99105 722668
表4b化合物1擬莖點(diǎn)霉素胺A Log10濃度ID No9502RM16 生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)細(xì)胞系 -8 -7-6-5-4白血病CCRF-CEM 1019967-7-34HL-60(TB)1069626 -37-47K-562100 10063-3-15MOLT-4 104998825 9RPMI-82261079961 6 4SR 104689-15-21非小細(xì)胞肺癌A549/ATCC 97814421 7EKVX997941 36HOP-6296 1018653 45HOP-92 128 120 10098 59NCI-H226 114 10447 -14-27NCI-H23 101947333 34NCI-H322M104 1017323 17NCI-H460 100 1023712 14NCI-H522 100 1027235-24結(jié)腸癌COLO 205 988228 -24-45HCC-2998 10343 -32-33HCT-116 93935016 8HCT-15 935922 6HT29 98 10140 4 4KM12 968126 9 1SW-62097937140 31CNS癌SF-26898946447 30SF-295 10381240SF-539 1029553 -45-60SNB-1998946130 21SNB-75 116 1103610 20U251 104894111 12黑素瘤LOX IMVI957537 21MALME-3M 100785529 25M14 999556 1 -1SK-MEL-2 99917017 16SK-MEL-28 866024 45SK-MEL-5 99683827 19UACC-257 103947364 73UACC-62 97935335 37卵巢癌IGR-OV1 95957947 30OVCAR-3 1017710 1 -6OVCAR-4 98 1028959 45OVCAR-5 99 1055025 35OVCAR-81029242 22SK-OV-3 1009751 0 4腎癌786-0108 1016926 20A498 11761-7-16ACHN 102 1017153 38CAKI-186827545 48RXF-393 88855611 50SN12C 86907948 30TK-10 100 11173 73UO-31102 1049753 53前列腺癌PC-3 102853820 10DU-145 1009335 -12 1乳腺癌MCF7 103 1064327 9MCF7/ADR-RES 97968546 21MDA-MB-231/ATCC 96907627 2HS 578T 102727062 77MDA-MB-435 6110-42 -27MDA-N 9451-58 -86 -65BT-549 1109652 4143T-47D 93 10077 5478
體內(nèi)，中空纖維篩查檢測(cè)發(fā)育治療程序的生物試驗(yàn)分支(the Biological Testing Branchof the Developmental Therapeutics Program)已采用了一個(gè)初步的體內(nèi)篩查工具來(lái)估測(cè)通過(guò)大規(guī)模體外細(xì)胞篩查鑒定的化合物的潛在抗癌活性(Hollingshead，MG etal.，生命科學(xué)(Life Sciences)，57，131～141，1995)。就這些檢測(cè)來(lái)說(shuō)，在聚偏1，1-二氟乙烯(PVDF)中空纖維中培養(yǎng)人腫瘤細(xì)胞，將每個(gè)細(xì)胞系的一個(gè)樣本移植到小鼠的兩個(gè)生理區(qū)室(腹膜內(nèi)和皮下)的每一個(gè)中。該方案鑒別具有中度至明顯抗癌活性的化合物，促進(jìn)敏感性腫瘤系的鑒定和隨后在標(biāo)準(zhǔn)體內(nèi)實(shí)體瘤模型中測(cè)試合適的治療方案的鑒定。方法每個(gè)試驗(yàn)小鼠接受代表3個(gè)不同癌細(xì)胞系的6個(gè)纖維(腹膜內(nèi)3個(gè)和皮下3個(gè))。采用QD×4治療方案用潛在的抗癌化合物以2個(gè)試驗(yàn)劑量的每個(gè)劑量通過(guò)腹膜內(nèi)途徑處理三個(gè)小鼠。6只載體對(duì)比小鼠只接受化合物稀釋劑。在處理的最后一天次日收集纖維培養(yǎng)物。為了估計(jì)抗癌效果，采用甲臘染料(MTT)轉(zhuǎn)化檢測(cè)法確定每個(gè)細(xì)胞系的存活細(xì)胞質(zhì)量。由此，可采用經(jīng)過(guò)化合物處理的樣本的平均光學(xué)密度除以載體對(duì)比物的平均光學(xué)密度來(lái)計(jì)算％T/C。此外，對(duì)每一個(gè)樣本可測(cè)定細(xì)胞質(zhì)量的凈增長(zhǎng)，因?yàn)槔w維培養(yǎng)物的樣本估測(cè)植入小鼠的那天的存活細(xì)胞質(zhì)量。這樣，可估測(cè)試驗(yàn)化合物的抑制細(xì)胞能力和殺細(xì)胞能力。
通常，對(duì)最少12個(gè)人癌細(xì)胞系測(cè)試了每種化合物。這代表共4個(gè)實(shí)驗(yàn)(由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)包括3個(gè)細(xì)胞系)。關(guān)于2個(gè)化合物劑量中的每一個(gè)對(duì)每個(gè)細(xì)胞系、分別用對(duì)于腹膜內(nèi)樣本和皮下樣本計(jì)算的值以％T/C報(bào)導(dǎo)了數(shù)據(jù)。評(píng)估基于幾個(gè)中空纖維檢測(cè)判據(jù)，用標(biāo)準(zhǔn)皮下異種移植模型選定了用于進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)的化合物。這些判據(jù)包括(1)在48個(gè)可能的試驗(yàn)組合(12個(gè)細(xì)胞系×2個(gè)位點(diǎn)×2個(gè)化合物劑量)的10個(gè)中，％T/C為50或更?。?2)在24個(gè)可能的組合中，最少4個(gè)具有遠(yuǎn)距離活性(腹膜內(nèi)藥物/皮下培養(yǎng)物)；和/或(3)在任一植入部位，1個(gè)或多個(gè)細(xì)胞系的凈細(xì)胞殺傷。為簡(jiǎn)化評(píng)估，已經(jīng)采用了使得能快速觀測(cè)給定化合物活性的點(diǎn)系。為此，賦予每種化合物劑量2個(gè)值，它可導(dǎo)致存活細(xì)胞質(zhì)量減小50％或更多。對(duì)腹膜內(nèi)樣本和皮下樣本單獨(dú)記分以便可評(píng)估判據(jù)(1)和(2)。將組合IP+SC分≥20，SC分≥8或者一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞系的凈細(xì)胞殺傷的化合物用來(lái)進(jìn)行異種移植試驗(yàn)。通過(guò)比較在中空纖維檢測(cè)和異種移植試驗(yàn)中隨意選定的化合物＞80的活性結(jié)果，這些判據(jù)是統(tǒng)計(jì)有效的。該比較表明，如果將中空纖維檢測(cè)用作最初的體內(nèi)篩查工具，遺漏活性化合物的可能性極低。除了這些判據(jù)之外，其它因素(如獨(dú)特的結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制)可導(dǎo)致安排某化合物進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)異種移植試驗(yàn)而沒(méi)有化合物符合這些判據(jù)。結(jié)果得到的關(guān)于擬莖點(diǎn)霉素A的數(shù)據(jù)闡明了顯著的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和殺細(xì)胞活性，由表5中所示的各種細(xì)胞系的％T/C結(jié)果證明了這一點(diǎn)。
表5對(duì)于擬莖點(diǎn)霉素A的中空纖維檢測(cè)(％試驗(yàn)/對(duì)比，％T/C)
數(shù)據(jù)來(lái)自對(duì)植入細(xì)胞系的重復(fù)估側(cè)IP＝腹膜內(nèi)SC＝皮下最后，應(yīng)懂得，可對(duì)前文描述的組合物和/或步驟安排進(jìn)行各種改變、修飾和/或添加而不偏離本發(fā)明的精神或范圍。
權(quán)利要求
1.一種治療癌癥患者的方法，它包括對(duì)患者施用有效量的擬莖點(diǎn)霉素。
2.權(quán)利要求1的方法，其中，用選自式I化合物及其衍生物的化合物來(lái)治療患者 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是任選取代基；X選自下組脂族基、氫和鹵素；以及Y選自下組脂族基、氫和鹵素。
3.權(quán)利要求2的方法，其中，用選自式I化合物及其衍生物和鹽的化合物來(lái)治療患者，其中，在所述的式I化合物中，取代基X是氫，Y是氯，而R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨(dú)立選自下組氫、脂族基、芳族基、肽鏈和鹵素，并且其中，可在肽鏈和單克隆抗體之間形成綴合物。
4.權(quán)利要求1的方法，其中，對(duì)患者施用有效量的式Ia化合物或其衍生物或鹽 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨(dú)立選自氫和脂族基，而R4則是任選與抗體綴合的肽。
5.權(quán)利要求4的方法，其中，R1、R2、R5和R6是低級(jí)脂族基，而R3和R7都是氫。
6.權(quán)利要求4的方法，其中，R1是乙基，R2是甲基，R3是氫，R5是異丙基或異丙烯基，R6甲基，而R7則是氫。
7.權(quán)利要求4～6任一項(xiàng)的方法，其中，式Ia的擬莖點(diǎn)霉素包括立體化學(xué)Ib化合物
8.權(quán)利要求7的方法，其中，存在的至少60wt％的擬莖點(diǎn)霉素類是立體化學(xué)Ib。
9.權(quán)利要求2～7任一項(xiàng)的方法，其中，R4是任選與抗體鍵合的二肽或三肽。
10.權(quán)利要求8的方法，其中，R4具有所有可能的立體化學(xué)排列的式II 其中，點(diǎn)線表示任選的雙鍵；R8和R9獨(dú)立地選自氫和低級(jí)烷基；而R10和R11是氫，或者一起形成一個(gè)雙鍵；R12選自氨基、一取代氨基、二取代氨基和氨基酸殘基。
11.權(quán)利要求10的方法，其中，R12具有式III 其中，R13和R14都是氫或一起形成一個(gè)雙鍵，而R15選自羥基、氨基、取代氨基和單克隆抗體。
12.權(quán)利要求1的方法，其中，用選自下組的擬莖點(diǎn)霉素治療患者擬莖點(diǎn)霉素A、八氫擬莖點(diǎn)霉素A、異擬莖點(diǎn)霉素A、擬莖點(diǎn)霉素胺A、其鹽類和它們中的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。
13.權(quán)利要求1～12任一項(xiàng)的方法，其中，所述患者患有肝癌。
14.權(quán)利要求1～13任一項(xiàng)的方法，其中，以含有藥物上可接受的載體的藥物組合物形式施用所述擬莖點(diǎn)霉素或其衍生物。
15.權(quán)利要求1～14任一項(xiàng)的方法，其中，還用一種或多種其它的抗癌藥物與擬莖點(diǎn)霉素結(jié)合治療患者。
16.權(quán)利要求1～15任一項(xiàng)的方法，其中，以產(chǎn)生抗癌活性但對(duì)正常細(xì)胞無(wú)不利的細(xì)胞毒性作用的劑量施用擬莖點(diǎn)霉素。
17.一種治療癌癥的藥物組合物，它包含式I的化合物或其衍生物和藥物上可接受的載體，于是 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是任選的取代基；X選自下組脂族基、氫和鹵素；以及Y選自下組脂族基、氫和鹵素。
18.一種治療癌癥的藥物組合物，它包含式Ia的化合物或其鹽 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨(dú)立選自氫和脂族基，而R4則是任選與抗體綴合的肽。
19.權(quán)利要求17的藥物組合物，其中，擬莖點(diǎn)霉素或其衍生物選自下組擬莖點(diǎn)霉素A、八氫擬莖點(diǎn)霉素A、異擬莖點(diǎn)霉素A、擬莖點(diǎn)霉素胺A、其鹽類和它們中的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。
全文摘要
一種治療癌癥患者的方法,它包括對(duì)患者施用有效量的擬莖點(diǎn)霉素。
文檔編號(hào)A61K38/08GK1376071SQ00813444
公開(kāi)日2002年10月23日 申請(qǐng)日期2000年9月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月29日
發(fā)明者J·A·愛(ài)德加 申請(qǐng)人:聯(lián)邦科學(xué)和工業(yè)研究組織