專利名稱：一種姜辣素脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是一種透皮性能優(yōu)良的姜辣素脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
隨著科學(xué)技術(shù)、儀器和方法學(xué)的迅速發(fā)展，人們對(duì)于自身的認(rèn)識(shí)越來越深刻，對(duì)于皮膚生理病理的研究已經(jīng)深入到基因和分子生物學(xué)水平，對(duì)相關(guān)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生了巨大的推動(dòng)作用，許多具有生物活性的動(dòng)植物成分和生物高分子成分已經(jīng)應(yīng)用到生物醫(yī)藥行業(yè)，取得了巨大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。但是，如何將這些具有生物活性的成分應(yīng)用到生物醫(yī)藥領(lǐng)域中，面臨著許多難題，主要表現(xiàn)在以下方面1、這些生物活性物質(zhì)的穩(wěn)定性問題，除了由其自身的結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象決定外，外界環(huán)境因素的影響也不容小視，例如表皮活性因子溶液，在外界環(huán)境中的活性持續(xù)時(shí)間有短短的數(shù)小時(shí)，在其被皮膚吸收發(fā)揮作用之前就基本失活了，根本不能發(fā)揮其應(yīng)有的作用和效果。2、高分子成分難于被人體皮膚吸收的問題，通常來說，活性物分子量越小，越容易透過皮膚，一旦分子量大于600，活性物就很難被皮膚吸收了，而近年來應(yīng)用的具有特定皮膚活性功能的物質(zhì)大多數(shù)是肽類等高分子物質(zhì)，其分子量少則數(shù)千，多則數(shù)十萬，·這就決定了它們很難透過皮膚從而被有效吸收。3、生物活性物質(zhì)的可溶性問題，大部分有效成分不能溶于水被皮膚表層吸收，很難發(fā)揮其作用。姜辣素能夠加速血液流動(dòng)，促使排汗，帶走體內(nèi)多余的熱量，具有排毒、養(yǎng)顏、減肥的作用，但是由于上述原因，很難被皮膚吸收，難以發(fā)揮其應(yīng)有的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種設(shè)計(jì)合理、透皮性能優(yōu)良的姜辣素脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采取以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的—種姜辣素脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、磷酸鹽緩沖液70 120份。而且，所述的磷酸鹽緩沖液的pH值為7. 2 7. 5。一種姜辣素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解；⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡；⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用；
⑷將磷酸鹽緩沖液加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液；(5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到步驟⑵含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液；(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀；(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。 一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、凍干保護(hù)劑O. 5 3份，磷酸鹽緩沖液70 120份。而且，所述的凍干保護(hù)劑為低濃度甘氨酸。一種姜辣素凍干脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解；⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡；⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用；⑷將磷酸鹽緩沖液及凍干保護(hù)劑加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液；(5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液；(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀；(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素凍干脂質(zhì)體。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是本發(fā)明以姜辣素為模型成分，并以大豆磷脂、膽固醇作為脂質(zhì)體原料，采用擠出-凍干法制備出透皮性能優(yōu)良的姜辣素脂質(zhì)體，通過姜辣素脂質(zhì)體的外觀、pH、粒徑、表面電荷等基本數(shù)據(jù)，以及包封率和載藥量檢測(cè)、體外釋放和透皮吸收試驗(yàn)表明，本發(fā)明的姜辣素脂質(zhì)體具有非常強(qiáng)的體外透皮吸收性能，為姜辣素脂質(zhì)體技術(shù)應(yīng)用于生物醫(yī)藥行業(yè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。一種姜辣素脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、PBS緩沖鹽(pH 7. 2 7. 5) 70 120 份。
一種姜辣素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟(I)按比例精密稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解。(2)將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥過夜，使溶劑除盡。(3)按姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用。(4)將磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7. 2 7. 5)加入到步驟(3)制得的姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液，磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7. 2 7. 5)與姜辣素溶液的體積比為7 8 ··O. 3 O. 8。 (5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液。(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于磨口圓底燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀。(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、凍干保護(hù)劑O. 5 3份，PBS緩沖鹽(pH 7. 2 7. 5) 70 120份。姜辣素凍干脂質(zhì)體與前述姜辣素脂質(zhì)體的區(qū)別在于加入了凍干保護(hù)劑，該凍干保護(hù)劑采用低濃度甘氨酸，由于氨基酸離子具有酸、堿兩性，可抑制磷酸緩沖鹽結(jié)晶，在冷凍干燥過程中抑制pH值的改變而阻止蛋白質(zhì)藥物變性。一種姜辣素凍干脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟(I)按比例精密稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解。(2)將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥過夜，使溶劑除盡。(3)按姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用。(4)按比例將磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7. 2 7. 5)及凍干保護(hù)劑(低濃度甘氨酸)力口入到步驟(3)制得的姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液。(5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液。(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于磨口圓底燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀。(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素凍干脂質(zhì)體。
下面對(duì)姜辣素脂質(zhì)體(姜辣素凍干脂質(zhì)體)的理化性質(zhì)說明(I)外觀性質(zhì)。目測(cè)姜辣素脂質(zhì)體混懸液為均勻淡黃色；姜辣素脂質(zhì)體(未加凍干保護(hù)劑)為淡黃色海綿狀松散粉末或塊狀；姜辣素凍干脂質(zhì)體(加入凍干保護(hù)劑)為流動(dòng)性良好的白色粉末。在電鏡下觀察制備的脂質(zhì)體為小多室脂質(zhì)體；掃描電鏡下，未加凍干保護(hù)劑的脂質(zhì)體為白色蠟塊狀，加凍干保護(hù)劑的脂質(zhì)體為白色球狀。(2) 一般理化性質(zhì)(pH、粒徑和表面電荷)姜辣素脂質(zhì)體的pH為7. 08，粒徑70. 16nm, Zeta電位為-63. 9mV (陽(yáng)離子表面吸附的緩沖液中的陰離子的表現(xiàn))。下面通過HPLC方法對(duì)姜辣素脂質(zhì)體的姜辣素含量進(jìn)行檢測(cè) 樣品處理精密量取樣品500 μ 1，加入100 μ I 10%TritonX_100，渦旋混合2min，IOOOOrpm離心4min,取上清液20 μ I進(jìn)樣,在色譜條件下分析,記錄峰面積,用外標(biāo)法計(jì)算姜辣素含量。色譜固定相WatersSYMMETRY C18 5 μ m 色譜柱(250_Χ4· 6mm);流動(dòng)相甲醇-水(58:42V/V)，流速11111/1^11;檢測(cè)波長(zhǎng)20511111;柱溫351;進(jìn)樣量2(^1。姜辣素保留時(shí)間約為8. 8min。特異性空白脂質(zhì)體+10%Tri tonX-100、姜辣素對(duì)照品+10%Tri tonX-100分別進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)成分和TritonX-IOO對(duì)姜辣素檢測(cè)無干擾，本方法具有良好的特異性。精密度在空白脂質(zhì)體中加入不同量的姜辣素配置成低、中、高(30、200、700. O μ g/ml)不同濃度PBS (1_10)溶液，每個(gè)濃度各6個(gè)樣品，按上述分別測(cè)定日內(nèi)、日間變異，結(jié)果見表I。表I HPLC測(cè)定空白脂質(zhì)體PBS (1_10)溶液中姜辣素的精密度
權(quán)利要求
1.一種姜辣素脂質(zhì)體，其特征在于其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、磷酸鹽緩沖液70 120份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種姜辣素脂質(zhì)體，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液的PH值為7. 2 7. 5。
3.—種如權(quán)利要求I或2所述姜辣素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟 ⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解； ⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡； ⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用； ⑷將磷酸鹽緩沖液加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液； (5)將占O.05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到步驟⑵含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液； (6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀； ⑴將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。
4.一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其特征在于其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、凍干保護(hù)劑O. 5 3份，磷酸鹽緩沖液70 120份。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液的pH值為7. 2 7. 5。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其特征在于所述的凍干保護(hù)劑為低濃度甘氨酸。
7.—種如權(quán)利要求4至6任一項(xiàng)所述姜辣素凍干脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟 ⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解； ⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡； ⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解,制得姜辣素溶液備用； ⑷將磷酸鹽緩沖液及凍干保護(hù)劑加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液； (5)將占O.05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液； (6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀；⑴ 將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素凍干脂質(zhì)體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種姜辣素脂質(zhì)體及其制備方法，姜辣素脂質(zhì)體的構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65～70份、膽固醇30～35份、姜辣素0.5～30份、無水乙醇1000～1500份、磷酸鹽緩沖液70～120份；其制備方法為⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中并使用無水乙醇使其溶解；⑵將茄形瓶減壓蒸發(fā)溶劑；⑶制得姜辣素溶液；⑷形成姜辣素磷酸鹽溶液；⑸制備姜辣素脂質(zhì)體混懸液；⑹采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體；⑺通過冷凍干燥儀抽真空5～10min，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。本發(fā)明設(shè)計(jì)合理，制備出的姜辣素脂質(zhì)體具有非常強(qiáng)的體外透皮吸收性能，為姜辣素脂質(zhì)體技術(shù)應(yīng)用于生物醫(yī)藥行業(yè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
文檔編號(hào)A61P43/00GK102895189SQ20121038019
公開日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月9日
發(fā)明者李歡, 孟剛 申請(qǐng)人:天津蕓熙生物技術(shù)有限公司