專利名稱：林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備方法及其產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種注射液的制備方法，尤其涉及一種林可霉素-慶大霉素復(fù)方 注射液的制備方法及由該方法制備得到的產(chǎn)品，屬于注射制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
慶大霉素又稱正泰霉素，是放線菌屬小單孢菌所產(chǎn)生的氨基糖苷類廣譜抗 生素，為繁殖期殺菌藥，可阻止細(xì)菌細(xì)胞壁合成或損傷胞漿膜，適用于耐藥性 金葡球菌、綠膿桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、鏈球菌等敏感菌所引起的各種嚴(yán) 重感染，如呼吸道、腸道、泌尿道、乳腺炎及皮膚、軟組織等部位感染和敗血
癥等病癥的治療。慶大霉素由d、 C2、 Cla、 C2a四組分組成，其抗菌活性和毒副作 用相近，四種組分都易溶于水，水溶液對熱穩(wěn)定，在酸、^喊或加熱條件下穩(wěn)定。 林可霉素又稱潔霉素，由鏈絲菌變異菌林的發(fā)酵液中提取的林可胺類抗生
素，其化學(xué)名稱是為6-(1-曱基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷曱酰氨基)-1-硫代-6， 8-二脫氧-D-蘇式-a-D-半乳辛吡喃糖苷鹽酸鹽一水合物。臨床上應(yīng)用于革蘭氏 陽性菌引起的各種感染，特別適用于耐青霉素、紅霉素菌抹的感染或?qū)η嗝顾?過敏的患畜，如肺炎、蜂窩織炎、骨髓炎和敗血癥等疾病。
慶大霉素和林可霉素主要通過抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成而達(dá)到抑殺病原微生 物的作用，二者配伍應(yīng)用具有協(xié)同增效的作用。為適應(yīng)豬場食^l下降發(fā)病豬的 臨床治療需要，可以將林可霉素-慶大霉素制成復(fù)方注射劑便于治療食^l下降的 發(fā)病豬只。但是由于林可霉素分子中含有酰胺基及甲硫基，這些基團(tuán)在水溶液 中熱穩(wěn)定性差，林可霉素在加熱條件(高于6(TC)以及酸性條件(pH低于4)下分解最快，容易發(fā)生水解或氧化反應(yīng)，會發(fā)生降解導(dǎo)致有關(guān)物質(zhì)不合格。其水解 生成物之一為曱硫醇，曱硫醇能和重金屬氧化物或鹽作用而生成不溶性的鹽， 從而使產(chǎn)品的有效成分造成不可逆的變化。但是為了使產(chǎn)品達(dá)到無菌的要求， 需要進(jìn)行高溫滅菌，因此有關(guān)物質(zhì)與無菌保證之間是矛盾關(guān)系，需要選擇合適 的生產(chǎn)工藝及滅菌工藝，保i正林可-慶大復(fù)方注射液的穩(wěn)定性和安全性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種穩(wěn)定性高、 安全性好的林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備方法。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的 一種林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備方法，包括(l)將乙二胺四乙
酸(EDTA )加入到溫?zé)岬淖⑸溆盟腥芙?，得到EDTA水溶液，備用；(2 )將慶 大霉素和林可霉素加入到溫?zé)岬淖⑸溆盟?，?半均勻，加入EDTA水溶液和無 水亞硫酸氫鈉，攪拌均勻，得到藥液；(3)調(diào)節(jié)藥液的pH值；(4)加入針用活 性炭攪拌，過濾，流通蒸汽滅菌；其中，步驟(3)中將藥液的pH值調(diào)至4. 0-6. 0; 優(yōu)選的，將藥液的pH值調(diào)至4. 0-5. 0;更優(yōu)選的，將藥液的pH值調(diào)至5. 0。
本發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨配制溫度升高，林可霉素有關(guān)物質(zhì)升高，當(dāng)配制 溫度為25-35。C的溫度范圍時，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)可控制在較低的范圍內(nèi)，綜 合考慮生產(chǎn)效率和控制有關(guān)物質(zhì)的含量，最終發(fā)現(xiàn)，配制溫度為3(TC時最為適 宜；所以，步驟(1)和步驟(2)中所述的溫?zé)嶙⑸溆盟臏囟葍?yōu)選為25-35 °C,更優(yōu)選為30°C;
本發(fā)明通過加入不同濃度的EDTA以考察林可霉素有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果發(fā) 現(xiàn)，EDTA在藥液中的終濃度在0.02-0.04% (W/V)之間，林可霉素的有關(guān)符合中國獸藥典的規(guī)定，慶大霉素的有關(guān)物質(zhì)也符合中國獸藥典的規(guī)定，所以
步驟(1 )中所述EDTA在藥液中的終濃度優(yōu)選為0. 02-0. 04% (W/V),更優(yōu)選為 0. 02%;
亞硫酸氫鈉的濃度高低與林可霉素的有關(guān)物質(zhì)含量也密切相關(guān)，當(dāng)亞硫酸 氫鈉在藥液中的終濃度為0. 1% (W/V)時，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)為5. 04%,而亞 硫酸氬鈉在藥液中的終濃度為0. 2%(W/V)時，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)為3.2°/。。 說明亞硫酸氬鈉在藥液中的終濃度為0. 2%時抗氧化作用最強(qiáng)，所以步驟(2)中 所述無水亞^J菱氫鈉在藥液中的終濃度優(yōu)選為0. 2% (W/V);
在制備林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的過程中加入活性炭，有利于降低林
可霉素的有關(guān)物質(zhì)的含量，但活性炭量增加到一定程度，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)反 而升高?；钚蕴烤哂忻撋?、吸附和助濾作用，因此加入活性炭可使有關(guān)物質(zhì)降低， 但隨活性炭量增加，活性炭吸附飽和，出現(xiàn)脫吸附現(xiàn)象，反而使有關(guān)物質(zhì)增加。本 發(fā)明通過大量的實(shí)驗(yàn)最終發(fā)現(xiàn)，當(dāng)步驟(4 )中加入占總體積0. 1 % ~ 0. 2 % ( V/V ) 的活性炭可4吏林可霉素有關(guān)物質(zhì)降低0. 3% ~ 0. 7%，更優(yōu)選的，將活性炭的加入量 控制在總體積的0. 1°/。 (V/V)為最適宜；
滅菌時間和溫度對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液中有關(guān)物質(zhì)的含量有一 定的影響，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)隨著溫度的升高，降解加快。在滅菌溫度為110 。C時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控制在25分鐘內(nèi)有關(guān)物質(zhì)合格。在滅 菌溫度為115。C時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控制在25分鐘內(nèi)有關(guān)物 質(zhì)合格。在滅菌溫度為12rC時，林可霉素降解速度較快，滅菌時間控制在15 分鐘內(nèi)有關(guān)物質(zhì)合格。綜合考慮有關(guān)物質(zhì)的含量和生產(chǎn)成本、效率等因素，最 終確定滅菌溫度為U5。C,滅菌時間為20分鐘為最佳的滅菌條件。
針對林可霉素在加熱條件以及酸性條件下分解最快，容易發(fā)生水解或氧反應(yīng)，導(dǎo)致有關(guān)物質(zhì)不合格等特點(diǎn)，本發(fā)明對林可霉素-慶大霉素注射液的制備
工藝進(jìn)行了優(yōu)選和篩選，分別考察了 pH值，配制溫度，亞硫酸氬鈉的濃度、EDTA 的濃度、活性炭的加入量以及滅菌的溫度和時間對林可霉素-慶大霉素注射液的 穩(wěn)定性和安全性的影響，最終確定了最適宜的制備工藝或條件，所制備的林可-慶大霉素復(fù)方注射液具有優(yōu)異的穩(wěn)定性和良好的安全性。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會隨著 描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何 限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對 本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā) 明的保護(hù)范圍內(nèi)。
1、 實(shí)驗(yàn)材料
鹽酸林可霉素山東新華制藥股份有限公司(0806076批)；活性炭上海活 性炭有限公司(0551068批)，亞硫酸鈉天津市長河化工有限公司，EDTA:天津市 福晨化學(xué)試劑廠。硫酸慶大霉素邯鄲滏榮原料藥公司(0805023批)。
2、 林可霉素和慶大霉素中有關(guān)物質(zhì)的含量測定方法 2. 1鹽酸林可霉素有關(guān)物質(zhì)的含量測定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 0. 05mol/L硼砂溶液(用85 %磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 0 )-曱醇(4: 6)為流動相； 檢測波長為214nm。理論板數(shù)按林可霉素峰計算應(yīng)不低于1500,林可霉素峰與林可霉素B峰的分離度應(yīng)不小于2. 6。林可霉素B峰為林可霉素峰相對保留時間 的0. 5 ~ 0. 7。
測定法取本品約20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用適量流動相溶解并 稀釋至刻度，搖勻，取10jul注入液相色譜儀，記錄色i普圖；另取鹽酸林可霉 素對照品適量，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算供試品中C18H34NAS的含量。 林可霉素B的峰面積不得過林可霉素與林可霉素B峰面積之和的5. 0%。 2. 2硫酸慶大霉素有關(guān)物質(zhì)的含量測定
用十八烷基珪烷鍵合硅膠為填充劑；水-冰乙酸-乙腈(48: 1: 51)配制的 0. 02mol/L庚烷磺酸鈉溶液。色譜柱安捷倫Eclipse XDB-C18 。檢測波長為 "Onm 。理論板數(shù)按C2組分峰計算應(yīng)不低于2000。 C2a峰和C2峰的分離度應(yīng) 符合要求。
測定法取本品適量，加水制成每lml中含O. 65mg的溶液，精密量取4. 0 ml,置10ml量瓶中，加異丙醇2ml與鄰苯二醛試液1.6ml ,用異丙醇稀釋至 刻度，搖勻，置60。C水浴中加熱15分鐘，冷卻，濾過，取續(xù)濾液10ial注入 液相色語儀，記錄色譜圖；另取慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品，同法測定。
4、 pH值的測定 按照中國藥典附錄VI pH值測定法進(jìn)行。
試驗(yàn)例1 pH值對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液穩(wěn)定性影響 1、試驗(yàn)方法
為考察pH值對注射液的穩(wěn)定性影響，按照林可霉素、慶大霉素注射液的質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的3. 0 ~ 6. 0范圍，分別按照上述方法配制pH值為2. 0、 3. 0、 4. 0、
5. 0、 6. 0的不同pH的注射液，在115。C滅菌25分鐘，測定注射液的有關(guān)物質(zhì)和pH值。
2、試驗(yàn)結(jié)果
滅菌前后酸度變化值不大，說明滅菌前后對酸度的變化影響較小。根據(jù)檢
測結(jié)果對比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可知，酸度在4. G范圍內(nèi)，隨著pH值的降低，有關(guān)物質(zhì)急 劇升高，因此配制藥液時pH值應(yīng)接近4. O為最好。考慮到工藝內(nèi)控的要求及滅 菌后酸度值變化不大的因素，因此配制藥液的最佳pH值范圍是4. 0~5. 0,工藝
控制配制pH值為4. 0 ~ 6. 0為宜。
表1不同pH值進(jìn)行滅菌15分鐘后的檢測結(jié)果(峰面積) ^^^^^^^^^^^ S^T霉素慶大霉素
關(guān)物質(zhì) 有關(guān)物質(zhì) 有關(guān)物質(zhì)
2.0 9.4% A 1.9 9.7% A
3.0 6.4% A 3. 1 7.2% A
4. 0 3. 8%_^___^_
6.0 4.8% A 6. 1 5.4。/0 A
~~A代農(nóng)C,為25% 50%, (二為15% 40%, C2。+C2為20% 50%
試驗(yàn)例2配制溫度對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液中有關(guān)物質(zhì)的影響
1、 試驗(yàn)方法取林可霉素、慶大霉素加輔料分別在1Q。C、 2Q。C、 30°C、 40 。C配制藥液,考察溫度對林可霉素、慶大霉素有關(guān)物質(zhì)的影響。
2、 試驗(yàn)結(jié)果隨配制溫度升高，林可霉素有關(guān)物質(zhì)升高，而硫酸慶大霉素 有關(guān)物質(zhì)符合中國獸藥典的規(guī)定，最終確定配制溫度控制在25-35。C左右較合 適，最優(yōu)選為控制在30°C。
試驗(yàn)例3 EDTA對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液中有關(guān)物質(zhì)的影響
1、試驗(yàn)方法取林可霉素、慶大霉素加輔料溶解，配成藥液，分別加入總 體積0%、 0.01%、 0.02%、 0. 04% (W/V)的EDTA攪拌30min，過濾，取濾液檢查有關(guān)物質(zhì)。
2、試驗(yàn)結(jié)果在0. G2y。EDTA之上，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)符合中國獸藥典的 規(guī)定，慶大霉素的有關(guān)物質(zhì)也符合中國獸藥典的規(guī)定?？紤]到生產(chǎn)成本，確定 EDTA的濃度為0. 02-0. 04% (W/V)較為適宜，最優(yōu)選為0. 02% (W/V)。
試驗(yàn)例4不同濃度亞硫酸氫鈉抗氧化劑對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液中有 關(guān)物質(zhì)的影響
1、 試驗(yàn)方法取林可霉素、慶大霉素加輔料溶解，配成藥液，分別加入總 體積0%、 0.1%、 0. 2% (W/V)的亞硫酸氫鈉攪拌30min,過濾，取濾液檢查有關(guān) 物質(zhì)。
2、 試驗(yàn)結(jié)果在O. 1%亞硫酸氫鈉中，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)為5. 04%,而在 0. 2%亞硫酸氫鈉中，林可霉素的有關(guān)物質(zhì)為3. 2%，說明0. 2%亞硫酸氫鈉的抗氧 化作用強(qiáng)。
試驗(yàn)例5活性炭對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液中有關(guān)物質(zhì)的影響
1、 試驗(yàn)方法取林可霉素、慶大霉素加輔料溶解，配成藥液，分別加入總 體積0°/。、 0.1%、 0.2%、 0. 4。/。(V/V)的活性炭攪拌30min,過濾，取濾液檢查有關(guān) 物質(zhì)。
2、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果加入活性炭，有利于降低有關(guān)物質(zhì)，但活性炭量增加到一定 程度,林可霉素的有關(guān)物質(zhì)反而升高?；钚蕴烤哂忻撋⑽胶椭鸀V作用，因此 加入活性炭可使有關(guān)物質(zhì)降低，但隨活性炭量增加，活性炭吸附飽和，出現(xiàn)脫吸 附現(xiàn)象,反而〗吏有關(guān)物質(zhì)增加。加入總體積O. 1 %~0. 2 % (V/V)的活性炭可使 有關(guān)物質(zhì)降4氐0. 3% ~ 0. 7%,活性炭量控制在總體積的O. 1%為最好(此時，有關(guān)物質(zhì)的含量最低，活性炭的用量也較少，可有效節(jié)省生產(chǎn)成本)。
試驗(yàn)例6 滅菌時間和溫度對林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液中有關(guān)物質(zhì)含量
的影響
1、 試驗(yàn)方法將配制灌裝好的注射液，放入手提式滅菌器內(nèi)，開啟加熱電 源，分別于110。C、 U5。C、 121。C下進(jìn)行滅菌，滅菌時間分別為10min、 15min、 20min、 25min、 30 min,其中升溫和降溫均控制在10min內(nèi)?？疾鞙缇鷾囟葘?有關(guān)物質(zhì)的影響。
2、 試驗(yàn)結(jié)果滅菌時間和溫度對林可-慶大霉素復(fù)方注射液中有關(guān)物質(zhì)的 影響，結(jié)果見表2。滅菌時間和溫度對硫酸慶大霉素的有關(guān)物質(zhì)影響很小，在不 同溫度和時間下，其有關(guān)物質(zhì)符合中國獸藥典的規(guī)定。但是林可霉素的有關(guān)物 質(zhì)隨著溫度的升高，降解加快。
在滅菌溫度為ll(TC時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控制在25分鐘 內(nèi)有關(guān)物質(zhì)合格。在滅菌溫度為115'C時，林可霉素降解速度較慢，滅菌時間控 制在25分鐘內(nèi)有關(guān)物質(zhì)合格。在滅菌溫度為121。C時，林可霉素降解速度較快， 滅菌時間控制在15分鐘內(nèi)有關(guān)物質(zhì)合;^各。
綜合考慮有關(guān)物質(zhì)的含量和生產(chǎn)成本、效率等因素，最終確定滅菌溫度為 115°C,滅菌時間為20分鐘為最佳的滅菌條件。
表2 不同的滅菌溫度和時間復(fù)方藥物的有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果
序號 滅菌溫度rc)滅菌時間F。 林可霉素有關(guān)物質(zhì)峰
_(min)_面積(％)_
1 ^ 巧 OE T"^
2 110 15 0.375 3.68
3 110 20 0.5 3.92
4 110 25 0.625 4.04
5 110 30 1.975 4.34
6 115 10 0.79 3.467 115 15 1.185 3.67
8 115 20 1.58 3.97
9 115 25 2.975 4.54
10 115 30 3.875 4.62
11 121 10 2.51 4.42
12 121 15 3.765 4.57
13 121 20 5.02 4.78 _121 25_6. 275_
實(shí)施例1林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備
取0. 02°/。EDTA,加入30。C注射用水中，攪拌，溶解；分別取慶大霉素、林 可霉素共同加入適量注射用水(3(TC)中攪拌。取0. 2%無水亞硫酸氫鈉加入藥液 中，攪拌。用鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至5. 0，用注射用水定溶。加入0. 1°/。針用活 性炭(25°C)攪拌20分鐘。分別用經(jīng)0.45um和0. 22咖微孔濾膜過濾至澄明。 充氮?dú)夤喾?，流通蒸汽滅?15。C, 20分鐘。
實(shí)施例2林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備
取0. 03%EDTA,加入35。C注射用水中，攪拌，溶解；分別取慶大霉素、林 可霉素共同加入適量注射用水(35。C)中攪拌。取0. 2°/。無水亞硫酸氫鈉加入藥液 中，攪拌。用鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至4. 0,用注射用水定溶。加入O. 2°/。針用活 性炭(25°C )攪拌20分鐘。分別用經(jīng)0. 45um和0. 22um微孔濾膜過濾至澄明。 充氮?dú)夤喾?，流通蒸汽滅?15。C, 30分鐘。
實(shí)施例3林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備
取0. 04°/ EDTA,加入25。C注射用水中，攪拌，溶解；分別取慶大霉素、林 可霉素共同加入適量注射用水(25。C)中攪拌。取0. 15°/ 無水亞硫酸氫鈉加入藥液中，攪拌。用鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH至6. 0,用注射用水定溶。加入O. 1%針用活 性炭(25°C )攪拌20分鐘。分別用經(jīng)0. 45um和0. 22um微孔濾膜過濾至澄明。 充氮?dú)夤喾?，流通蒸汽滅?15。C, 20分鐘。
權(quán)利要求
1、一種林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備方法，包括(1)將乙二胺四乙酸加入到溫?zé)岬淖⑸溆盟腥芙?，備用?2)將慶大霉素和林可霉素加入到溫?zé)岬淖⑸溆盟?，攪拌均勻，加入乙二胺四乙酸水溶液和無水亞硫酸氫鈉，攪拌均勻，得到藥液；(3)將藥液pH值調(diào)至3.0～6.0；(4)加入針用活性炭攪拌，過濾，流通蒸汽滅菌；其特征在于步驟(3)中將藥液pH值調(diào)至4.0-6.0。
2、 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中將藥液 pH值調(diào)調(diào)至4. 0-5. 0。
3、 按照權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中將藥液 pH值調(diào)調(diào)至5. 0。
4、 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1 )和步驟(2 ) 中所述的溫?zé)嶙⑸溆盟臏囟葹?5-35°C;優(yōu)選為30°C。
5、 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述乙 二胺四乙酸在藥液中的終濃度為0. G2-0. 04% (W/V),優(yōu)選為0, 02wt%。
6、 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述無 水亞石克酸氪鈉在藥液中的終濃度為0. 2°/。 (W/V)。
7、 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(4)中，向藥 液中加入占總體積O. 1 %~0. 2 % (V/V)的活性炭，優(yōu)選為0.1%。
8、 按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(4)所述滅菌 溫度為110。C,滅菌時間控制在20分鐘。
9、 由權(quán)利要求1-8任何一項所述制備方法制備得到的林可霉素-慶大霉 素復(fù)方注射液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種林可霉素-慶大霉素復(fù)方注射液的制備方法，包括(1)制備EDTA水溶液；(2)將慶大霉素和林可霉素加入到溫?zé)嶙⑸溆盟袛嚢杈鶆?，加入EDTA和無水亞硫酸氫鈉，得到藥液；(3)將藥液pH值調(diào)至3.0～6.0；(4)加入活性炭攪拌，過濾，流通蒸汽滅菌；其中，步驟(3)中將藥液pH值調(diào)至4.0-6.0。本發(fā)明對林可霉素-慶大霉素注射液制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化和篩選，分別考察了pH值，配制溫度，亞硫酸氫鈉和EDTA的濃度、活性炭的加入量以及滅菌溫度和時間對林可霉素-慶大霉素注射液的穩(wěn)定性和安全性的影響，最終確定了最適宜的制備工藝，所制備的林可-慶大復(fù)方注射液具有優(yōu)異的穩(wěn)定性和良好的安全性。
文檔編號A61K9/08GK101518543SQ20091012915
公開日2009年9月2日 申請日期2009年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月27日
發(fā)明者永 劉, 洋 劉, 琳 崔, 陽 崔, 剛 徐, 李明雁, 李艷華, 敏 王, 棟 邊 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué);中華人民共和國黑龍江出入境檢驗(yàn)檢疫局