專利名稱：丹酚酸a組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途。
背景技術(shù)：
腦血管病又稱腦卒中，是由各種病因使供應(yīng)腦部血液的血管發(fā)生病變所致的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。其主要病因?yàn)槟X動(dòng)脈系統(tǒng)病損(如腦動(dòng)脈硬化)等原因?qū)е碌哪X動(dòng)脈管腔狹窄、血管痙攣、閉塞或破裂、血流減少或完全阻塞，腦部血液循環(huán)和功能障礙，腦組織受損而發(fā)生的一系列癥狀。主要包括缺血性和出血性腦血管病。其中(ICVD，又稱缺血性卒中)占80 左右。缺血性腦血管病是指局部腦組織包括神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及聯(lián)系纖維由于供血障礙發(fā)生的變性、壞死或一過(guò)性的功能喪失。血管內(nèi)血栓形成、栓塞、血管狹窄導(dǎo)致的腦動(dòng)脈阻塞是缺血性腦卒中的主要原因。缺血引起腦神經(jīng)細(xì)胞損傷和死亡的作用機(jī)制多樣、復(fù)雜，缺血性腦卒中(即腦缺血)后，由于腦部缺乏血液和氧氣的供應(yīng)，導(dǎo)致大腦能量代謝失衡，產(chǎn)生一系列病理性損傷，如氧化應(yīng)激、興奮性氨基酸毒性、鈣超載、炎癥反應(yīng)等，從而導(dǎo)致神經(jīng)元的大量死亡。它是臨床上的常見(jiàn)病、多發(fā)病，死亡率及致殘率很高，現(xiàn)已經(jīng)成為世界公認(rèn)的三大致死疾病之一。臨床上治療主要是溶栓、挽救缺血區(qū)域(半暗帶)的瀕臨死亡的神經(jīng)元和促進(jìn)損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)。防治缺血性腦血管疾病是目前人類迫切需要解決的醫(yī)學(xué)難題。目前美國(guó)FDA僅批準(zhǔn)了組織纖溶酶原活化因子(tPA)用于中風(fēng)后的溶栓治療，但其治療時(shí)間窗很窄，只有在中風(fēng)4.5小時(shí)內(nèi)使用才有效；而且還存在出血以及缺血再灌加重腦損傷的危險(xiǎn)性。而目前針對(duì)缺血性中風(fēng)治療的神經(jīng)保護(hù)藥包括鈣通道阻斷劑如尼莫地平、谷氨酸受體拮抗劑如地佐環(huán)平(dizocilPine)、抗氧化劑或自由基清除劑如依達(dá)拉奉、NO信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)劑蘆貝魯 哩(Lubeluzole)以及炎癥抑制劑恩莫單抗(enlimomab)等。但它們中有的治療作用不確切或特異性不強(qiáng)，有的毒副作用較大、耐受性小，有的還處于臨床前或臨床研究階段，很難在防治缺血性腦卒中發(fā)揮積極影響。因而，研發(fā)出快速有效、安全穩(wěn)定的防治腦缺血藥物迫在眉睫。在此領(lǐng)域中醫(yī)藥發(fā)揮了不可忽視的積極作用。丹參制劑是我國(guó)心腦血管疾病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國(guó)用量最大、銷售額最高、制劑生產(chǎn)廠最多，臨床劑型最全的中藥之一。丹參有效化學(xué)成分主要有兩大類:脂溶性丹參酮類化合物和水溶性酚酸類化合物。研究表明:丹酚酸類在抗肝臟損傷、抗動(dòng)脈粥樣硬化及細(xì)胞凋亡以及改善記憶功能障礙等方面有著顯著的活性。其中又以丹酚酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最強(qiáng)，丹酚
酸A結(jié)構(gòu)如下:
權(quán)利要求
1.丹酚酸A組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途，所述組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成；其中 所述丹酚酸A的分子式=C26H22Oltl,分子量:494.45，結(jié)構(gòu)如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于增強(qiáng)腦組織內(nèi)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織炎癥損傷的用途。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于改善腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)紊亂的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織興奮性氨基酸毒性的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括用于抑制腦組織氧自由基損傷的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A93 % 98 %，紫草酸0.1 % 2.0 %，迷迭香酸0.1 % 2.0 %，丹酚酸B0.1 % 2.0%，丹酚酸 C0.1% 3%。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A94% 97%，紫草酸0.1% L 5%，迷迭香酸0.1% L 5%，丹酚酸B0.1% 1.5%，丹酚酸 C0.1% 2.0%。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述組合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A95% 96%，紫草酸0.1% L 2%，迷迭香酸0.1% L 2%，丹酚酸B0.1% 1.2%，丹酚酸 C0.1% 1.5%。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟(I)中所述的水提取方法為:取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加3 15倍量水提取，共提取I 3次，每次提取I 4小時(shí)；提取液減壓濃縮至相對(duì)密度1.10 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在30% 80%，離心，上清液減壓回收乙醇并濃縮至無(wú)醇味，所述水提取采用煎煮提取或45 95°C水溫浸提取，同時(shí)以10 50轉(zhuǎn)/分速度攪拌，得丹參提取液。
13.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟(I)中所述的醇提取方法為:取丹參藥材，切成飲片或粉碎成直徑約2mm顆粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小時(shí)，共提取I 3次；減壓回收乙醇，得丹參提取液。
14.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其中步驟(I)中的提取液中丹酚酸B濃度為lmg/ml 30mg/ml或加水稀釋至lmg/ml 30mg/ml。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途,其中提取液中丹酹酸B濃度為5mg/ml 20mg/ml或加水稀釋至5mg/ml 20mg/ml。
16.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其中步驟(2)中的催化劑是氯化鐵、三氯化釕、氯化鋁、氯化鋅、氯化鈀中的一種或幾種，催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為0.1% 3.0%。
17.根據(jù)權(quán)利 要求16所述的用途，其中催化劑與丹酚酸B的摩爾百分比為0.5% 2.0%。
18.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟a中所述大孔樹脂柱為HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、HPD-826、ADS-5、ADS-8、ADS-21、或D101、AB-8 ；所述洗脫劑為水及不同比例的水與乙醇，并且先用水、10 40 %乙醇洗脫，再用20 60%乙醇洗脫，高效液相檢測(cè)丹酚酸A，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味。
19.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟b中的所述洗脫劑為水及不同比例的水與乙醇，并且先用水、20 60%乙醇溶液洗脫除雜，再用40 90%乙醇溶液洗脫，高效液相檢測(cè)丹酚酸A，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味。
20.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟c中所述的有機(jī)溶劑為叔丁基甲基醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲酸乙酯。
21.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟d中所述洗脫劑為石油醚、正戊烷、正庚烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸乙酯、叔丁基甲基醚組成的兩相溶劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟(4)中所述微波真空干燥的溫度:20-100°C，回差溫度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分鐘。
23.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟(4)中所述真空干燥的溫度:50°C 90°C，真空度-0.07Mpa以上，功率:1 60KW，干燥2 20小時(shí)。
24.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于步驟(4)中所述噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度:150°C 350°C，出風(fēng)口溫度:70°C 95°C，噴霧速度:1 300ml/min。
25.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于pH調(diào)節(jié)劑為磷酸、鹽酸、硫酸或醋酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求1 25任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于采用高效液相色譜法測(cè)定丹酚酸A，紫草酸，迷迭香酸，丹酚酸B，丹酚酸C含量，測(cè)定條件如下: 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 檢測(cè)波長(zhǎng)286nm ;流速1.0ml/min ;柱溫30°C ； 理論塔板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于10000 ； 對(duì)照品溶液的制備精密稱取丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C對(duì)照品適量至容量瓶中，加甲醇制成混合對(duì)照品溶液； 供試品溶液的制備 :精密稱取樣品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度，即得； 洗脫以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1 0.5%磷酸為流動(dòng)相B，按下述條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60分鐘； O 10分鐘時(shí)，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10 30分鐘時(shí)，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30 60分鐘時(shí)，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45%降至20% ； 測(cè)定法:分別精密吸取混合對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算丹酚酸Α、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹酚酸A組合物用于制備抑制腦組織神經(jīng)元損傷或死亡藥物的用途，該組合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C組成，其中所述的組合物是由下列重量配比制成丹酚酸A90％～99％，紫草酸0.1％～3％，迷迭香酸0.1％～3％，丹酚酸B0.1％～3％，丹酚酸C0.1％～5％。
文檔編號(hào)A61P29/00GK103211808SQ20131009809
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者歐陽(yáng)婷, 張功俊, 楊小玲, 蔡元魁, 李志勇, 程帆 申請(qǐng)人:蔣春紅