專利名稱：：實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用的制作方法實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
-本發(fā)明涉及抗乙肝、丙肝病毒的新藥，具體是實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑及其制備方法與應(yīng)用。技術(shù)背景-慢性乙型肝炎在世界上導(dǎo)致死亡的病因中列居第IO位，有約3.5億的人口感染(終生感染)。另外，世界上80%的原發(fā)性肝癌是由慢性乙型肝炎引發(fā)的，每年大約有120萬人死于與慢性乙型肝炎有關(guān)的肝病。中國是全世界感染乙型肝炎病毒人數(shù)最多的國家，大約有l(wèi).2億人(占總?cè)丝诘?.8%)，其中有3000萬為慢性感染者。目前，全國有七億人感染過乙肝病毒，1.2億是乙肝表面抗原陽性，1千多萬人是現(xiàn)狀型慢性乙肝，并且約有10%的有轉(zhuǎn)化為肝硬化或者肝癌的危險(xiǎn)。丙型肝炎病毒(HCV)為具包膜的單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒家族。HCV是已知惟一能造成慢性感染的RNA病毒(除逆轉(zhuǎn)錄病毒外)，據(jù)估計(jì)，目前全球約l.7億HCV感染者中，6o%—80%為慢性攜帶者，而持續(xù)性感染最終發(fā)展為肝硬化/肝癌的機(jī)率高達(dá)3.5%—20%。HCV可分為11個(gè)基因型(genotype),80多個(gè)基因亞型，千擾素、聚乙二醇化、病毒唑及抗纖維化藥物的使用是目前治療丙肝的主要方法，由于丙肝病毒的多型性與變異性使得抗病毒藥物效果不佳并容易產(chǎn)生耐藥性。關(guān)于丙肝疫苗與特異性抗體的研究也是進(jìn)展不大。目前，治療慢性病毒性肝炎主要有l(wèi).抗病毒藥物。以干擾素和核苷類似物拉米呋啶(賀普丁)為代表主要作用是抑制HBV的復(fù)制。但由于在用藥和停藥過程中會(huì)出現(xiàn)"反跳"的現(xiàn)象，即HBV的重新復(fù)制。而且西藥也有許多不良反應(yīng)，使其應(yīng)用受到一定的限制。因此國外正在研究新一代的核苷類似藥物如阿德福韋、恩替卡韋和聚乙二醇千擾素等，可以提高臨床療效。2.免疫調(diào)節(jié)藥。以胸腺肽為代表的制劑可以提高或調(diào)整機(jī)體的免疫功能，這是治療慢性乙型肝炎的另一個(gè)有效途徑。大多數(shù)慢性乙型肝炎患者的免疫功能都有不同程度的紊亂，因此通過調(diào)整免疫功能可以達(dá)到抑制HBV復(fù)制的效果。3.基因療法。目前尚處于研究和實(shí)驗(yàn)階段，即通過核酸、治療性疫苗等方法修飾HBV的結(jié)構(gòu)，使體內(nèi)的HBV不再復(fù)制，從而易于最終被機(jī)體所清除。從理論J^講，這是根治乙肝最為有效的方法，但由于基因制劑安全性.和有效性的問題，做到真正用于臨床還需要較長時(shí)間。4.中醫(yī)藥治療。乙型肝炎病毒由于其本身的特點(diǎn)而較容易發(fā)生變異，在慢性感染過程中，變異可自發(fā)或在治療后發(fā)生。據(jù)報(bào)道該病毒的每一個(gè)基因和每一種病毒蛋白都可發(fā)生突變，使其感染后臨床表現(xiàn)多樣化、臨床經(jīng)過復(fù)雜化，以及治療困難化。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的比較重要的變異有以下幾種一是可以造成乙肝疫苗接種失敗的變異，二是可以導(dǎo)致"小三陽"慢性乙肝的變異，三是可以對抗病毒治療產(chǎn)生耐藥的變異，后者主要發(fā)生在藥物與病毒結(jié)合的位置，當(dāng)病毒基因發(fā)生變異時(shí)，這些結(jié)合位點(diǎn)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，藥物與病毒的結(jié)合能力下降，因而導(dǎo)致病毒耐藥，因此，目前還沒有一種針對慢性乙、丙肝的理想治療藥物。蛋黃抗體是指蛋黃中存在的抗體，也稱蛋黃免疫球蛋白(Eggyolkimmunogbulinseylg)。母雞在細(xì)胞分裂產(chǎn)蛋的過程中，會(huì)將其免疫球蛋白轉(zhuǎn)移至雞蛋，母雞血漿中之IgA與IgM，會(huì)在輸卵管中與其他的蛋白質(zhì)結(jié)合而構(gòu)成雞蛋蛋白的部分。蛋黃的IgG與哺乳類的IgG在分子量、等電點(diǎn)、細(xì)胞膜上Fc受質(zhì)的鍵結(jié)構(gòu)上存在著相異點(diǎn)而被特定稱為IgY。雞卵黃免疫球蛋白G抗體是一種7S免疫球蛋白，與哺乳動(dòng)物IgG略有不同。該蛋白質(zhì)分子量約為180kDa，含兩個(gè)亞單位，即6770kDa的重鏈和2230kDa的輕鏈，存在于免疫后母雞的卵黃中。近年來，國內(nèi)外學(xué)者就卵黃抗體的研究和開發(fā)做了許多工作，證明了免疫雞的蛋對多種病原體提供特異性IgG，但未見有實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑及其制備方法與應(yīng)用的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是要提供一種療程短、療效顯著、治療費(fèi)用低的實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑及應(yīng)用。本發(fā)明的另一個(gè)目的是要提供一種實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑的制備方法。一種實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑，它以乙肝或丙肝病人的血清，注射到禽類身上，再從該禽所生的含有抗體的蛋黃中分離、純化、消毒、分裝制成的實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體口服制劑。本發(fā)明乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑的制備方法，包括如下步驟1、個(gè)性化、實(shí)時(shí)化免疫取'乙肝或丙肝病人A的血lml，免疫接種到一只禽類A，抗體產(chǎn)生后收集禽類A的蛋，取樣進(jìn)行蛋黃抗體含量檢測(ELISA)，A禽蛋貯存在4'C冰箱中；每隔7天將禽類A重復(fù)免疫接種一次，共4次；2、抗體的純化A禽蛋外殼用75%酒精消毒、去殼、分離取出蛋黃，用PEG、硫酸葡聚糖、自然膠(如藻酸納、角叉菜膠)或乙醇沉淀等方法純化抗體蛋白質(zhì)；3、制備制劑對純化的抗體蛋白質(zhì)進(jìn)行抗體檢測，并進(jìn)行抗體蛋白的保護(hù)，過濾、除菌，按100ml/瓶分裝，即制成實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑，4'C冰箱保存。所述的抗體蛋的保護(hù)是在抗體制劑中按比例加入30%海藻酸鈉或糖醇類物質(zhì)。本發(fā)明實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體(IgY)制劑在抗乙肝或丙肝病毒的應(yīng)用，口服，每天23次，每次100ml，6個(gè)月為一療程。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于公開了7"種治療乙肝或丙肝的新藥，這種藥不僅療效顯著，能克服病毒在復(fù)制過程中產(chǎn)生的變異而產(chǎn)生的耐藥性問題，而且治療費(fèi)用低，為大多數(shù)患者所能承受，療程短，無毒副作用，是乙、丙肝患者的福音。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但不是對本
發(fā)明內(nèi)容的限定。實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝病毒雞蛋抗體制劑的制備方法步驟如下1、實(shí)時(shí)化個(gè)性化免疫采用一個(gè)患者固定三只雞，取乙肝病人lml血清，免疫接種到一只雞身上，其他二只同樣操作，待檢測到產(chǎn)生蛋黃抗體后，收集雞蛋，4'C保存。雞每7天重復(fù)免疫接種一次，方法同上；2、抗體純化，收集到的蛋外殼用75%酒精消毒，去殼分離取出蛋黃，用乙醇沉淀法純化抗體蛋白質(zhì)，并進(jìn)行純度檢測；3、過濾、除菌，按100ml/瓶分裝，4'C保存；應(yīng)用實(shí)施例l:實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝病毒雞蛋抗體制劑在抗乙肝病毒上的應(yīng)用選20例4萬性乙肝患者，所有患者均為乙型肝炎e抗原(HBeAg)和HBVDNA雙陽性，均排除其他型肝炎及酒精性肝炎，自身免疫性肝炎、藥物中毒性肝損傷等其他肝病，分為治療組10例、對照組10例，治療組服個(gè)性化免疫雞蛋抗體，每日3次，每次100ml(2個(gè)雞蛋黃)，對照組吃普通蛋黃，結(jié)果見表l-表l:乙患者治療后肝功能及病毒復(fù)制指標(biāo)變化情況(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>應(yīng)用實(shí)施例2實(shí)時(shí)個(gè)性化丙肝病毒雞蛋抗體制劑在抗丙肝病毒上的應(yīng)用16例慢性丙肝患者均為2006年2月至2007年10月間在桂林第三人民醫(yī)院感染科就診的患者，其中男性10例，女性6例，年齡為(19一53歲)，平均病程3.4年。病例選擇符合2000年修訂的《病毒性肝炎防治方案》。所有患者均為丙型肝炎e抗原(HBeAg)和HCVDNA雙陽性，均排除甲、乙、丁、戊型肝炎病毒感染及酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、藥物中毒性肝損傷等其他肝病。分為治療組8例和對照組8例。治療組口服個(gè)性化免疫雞蛋抗體，每日3次，每次100ml(2個(gè)雞蛋黃)總療程為6個(gè)月；對照組口服未免疫雞蛋，方法同治療組。療效判斷指標(biāo)治療前及治療結(jié)束后分別檢測HCVDNA、HBeAg等病毒復(fù)制及肝功能指標(biāo)。結(jié)果應(yīng)用用SSPS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表2:表2:丙肝患者治療后肝功能及病毒復(fù)制指標(biāo)變化情況(義±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>應(yīng)用實(shí)施例中的療效判斷，是將治療前后患者血漿中病毒載量(定量PCR分析)，乙或丙肝病毒標(biāo)志物的檢測，分別定出無效、有效、顯效、治愈等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。權(quán)利要求1、實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑，其特征是它是以乙肝或丙肝病人的血清，注射到禽類身上，再從該禽所生的含有抗體的蛋黃中經(jīng)分離、純化、消毒、分裝制成的禽蛋抗體口服制劑。2、實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑的制備方法，包括如下步驟-(1)個(gè)性化、實(shí)時(shí)化免疫取乙肝或丙肝病人A的血lml，免疫接種到一只禽類A，抗體產(chǎn)生后收集禽類A的蛋，取樣進(jìn)行蛋黃抗體含量檢測(ELISA)，A禽蛋貯存在4'C冰箱中，每隔7天將禽類A重復(fù)免疫接種一次，共4次；(2)抗體的純化A禽蛋外殼用75免酒精消毒、去殼、分離取出蛋黃，用PEG、硫酸葡聚糖、自然膠或乙醇沉淀純化抗體蛋白質(zhì)；(3)制備制劑對純化的抗體蛋白質(zhì)進(jìn)行抗體檢測、過濾、除菌，按100ml/瓶分裝，4'C冰箱保存。3、如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述的自然膠為藻酸納或角叉菜膠。4、實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑在抗乙肝或丙肝病毒上的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種實(shí)時(shí)個(gè)性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗體制劑及其制備方法與應(yīng)用，它是以乙肝或丙肝病人的血清，注射到禽類身上，再從該禽類所生的含有抗體的蛋黃中分離、純化、消毒、分裝制成的口服制劑，應(yīng)用于抗乙肝或丙肝病毒治療，一日2～3次，每日100ml，療程6個(gè)月。本發(fā)明制劑療程短、療效高、無毒副作用、制劑制備方法簡單，是乙、丙肝患者的福音。文檔編號(hào)A61K39/42GK101224302SQ20081007346公開日2008年7月23日申請日期2008年2月4日優(yōu)先權(quán)日2008年2月4日發(fā)明者唐振祥,慶徐,戴志剛,李麗亞,楊景毅,梁榮感,沈星燦,程書權(quán),寧譚申請人:桂林市第三人民醫(yī)院