專利名稱：苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦瓜多糖的藥效新用途，特別是一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
苦瓜(Momordica charantia，MC),別名涼瓜、錦蒸枝、癲瓜,為葫蘆科苦瓜屬植物?？喙蠟橹拿耖g中草藥?？喙系乃幱糜涊d最早始于明代《滇南本草》，以后又有許多記載?！侗静菥V目》曰“去邪熱，解勞乏，清心明目，益氣壯陽”。國(guó)內(nèi)外對(duì)苦瓜的藥用價(jià)值研究已經(jīng)取得了重要進(jìn)展，目前苦瓜的活性成分的研究仍然在進(jìn)行之中。
文獻(xiàn)I :H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, K Miyahara, T Kawasaki. Chem Pharm Bull [J], 1980，28(9): 2753-2762.研究表明，苦瓜中含有的多種活性成分具有降低血糖、抗突變、抗HIV、抗腫瘤以及提高人體免疫力的功效。
文獻(xiàn)2 :J Pitipanapong, S Chitprasert, M Goto. Separation and Purification Technology [J]. 2007, 52(3): 416-422.研究發(fā)現(xiàn)，苦瓜多糖對(duì)某些病原菌有顯著的抑制效果，如金黃色葡萄球菌，但對(duì)志賀氏菌、真菌等效果不明顯。
文獻(xiàn)3 :程霜，崔慶新，王勇.水溶性苦瓜多糖的提取與測(cè)定[J].鄭州糧食學(xué)院學(xué)報(bào)，食品科學(xué)，2000，21⑵53-56.研究證明，苦瓜多糖對(duì)超氧陰離子自由基以及羥基自由基有顯著的抑制作用。
但是，至今尚無任何數(shù)據(jù)支持苦瓜多糖可有效地用于老年癡呆的預(yù)防或治療作用，而老年癡呆是世界范圍內(nèi)發(fā)病率很高的疾病，加強(qiáng)神經(jīng)元保護(hù)是治療老年癡呆的重要策略，但是迄今臨床效果并不太理想。因此，尋求理想的老年癡呆預(yù)防及治療藥物一直是心腦血管醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用。近期研究發(fā)現(xiàn)許多中藥多糖具有自由基清除功能。多糖的抗氧化功能主要通過兩種途徑，第一，增強(qiáng)機(jī)體超氧化物歧化酶S0D、過氧化氫酶CAT、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px等內(nèi)源性抗氧化酶類的活性，第二，直接清除和降低脂質(zhì)過氧化物 LP0、丙二醛MDA的作用。本發(fā)明通過對(duì)老年癡呆模型前加藥，證明苦瓜多糖對(duì)老年癡呆具有很好的預(yù)防作用模型前對(duì)SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(60mg/kg)，SOD、CAT酶活性分別增加 20. 2%,87%, MDA的含量降低為24. 4%，模型前對(duì)SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(100mg/kg)，SOD、 CAT酶活性分別增加24. 0%、104%，MDA的含量降低為27. 9% ;模型后加藥證明苦瓜多糖具有很好的治療作用模型后對(duì)SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(60mg/kg)，SOD、CAT酶活性分別增加 23. 7%、109%, MDA的含量降低率26. 8%，模型后對(duì)SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(100mg/kg)，SOD、 CAT酶活性分別增加22. 8%,91%, MDA的含量降低為18. 6%，通過模型后加藥的實(shí)驗(yàn)研究，表明了苦瓜多糖臨床治療老年癡呆的可行性。因此，苦瓜多糖不但有可能用作預(yù)防藥物使用，也有可能作為治療藥物，以提高老年癡呆的治愈率和生存率。
本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的苦瓜多糖在預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物的劑量為 60-100mg/kgo
所述的苦瓜多糖在治療原發(fā)性老年癡呆藥物的劑量為60_100mg/kg。
所述的藥物為水溶性的，根據(jù)體重按劑量稀釋(60_100mg/kg)，稀釋比例為1:100 (mg/ml)。
本發(fā)明的原理是苦瓜多糖能夠消除老年癡呆應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生的過多自由基。正常情況下，動(dòng)物機(jī)體內(nèi)自由基生成量較小。但在但動(dòng)物在受到應(yīng)激、微生物入侵、患病、衰老或特殊生理情況下，機(jī)體內(nèi)自由基會(huì)大量產(chǎn)生。研究老年癡呆狀態(tài)下，大腦海馬內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)，過氧化氫酶(CAT)等酶的活性顯著下降，而脂質(zhì)過氧化物L(fēng)P0、丙二醛MDA等會(huì)顯著上升。因此，老年癡呆狀態(tài)下，動(dòng)物本身不能有效地清除體內(nèi)自由基的堆積，會(huì)造成細(xì)胞膜、線粒體、溶酶體等生物膜損傷，最終導(dǎo)致細(xì)胞腫脹變性、壞死，構(gòu)成神經(jīng)元的損傷。
多糖的抗氧化功能主要通過兩種途徑，第一，增強(qiáng)機(jī)體超氧化物歧化酶S0D、過氧化氫酶CAT、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px等內(nèi)源性抗氧化酶類的活性，第二，直接清除和降低脂質(zhì)過氧化物L(fēng)P0、丙二醛MDA的作用。實(shí)驗(yàn)證明了苦瓜多糖可以增加老年癡呆狀態(tài)下 SOD和CAT的活性，降低MDA的作用，見下表I :苦瓜多糖在老年癡呆模型(A ^ )中對(duì)海馬組織中SOD、CAT活性及MDA含量的影響SOD■比率％CAT■比率％MDA增加比率％對(duì)腿112.80.23O.SfiA_f|E133.70.390.97pr&eo137,30.59QM-244pre-100160,824 JJ0.631040.73-275po60137.323.70.64im0.74-265po-100159.422JS0.60910.81-ISjS*7X0. 05本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是提供了苦瓜多糖在治療老年癡呆中的新用途；無論老年癡呆模型前還是老年癡呆模型后加藥，都對(duì)SOD、CAT酶活性有明顯的增加作用，對(duì)MDA有明顯的降低作用。通過對(duì)老年癡呆模型前加藥，說明苦瓜多糖對(duì)老年癡呆具有很好的預(yù)防作用(60mg/ kg :S0D、CAT 酶活性分別增加 20. 2%,87%, MDA 的含量降低為 24. 4% ；100mg/kg :S0D、CAT 酶活性分別增加24. 0%、104%，MDA的含量降低為27. 9%。)；通過對(duì)腦梗死模型后加藥，說明苦瓜多糖具有很好的治療作用(60mg/kg :S0D、CAT酶活性分別增加23. 7%、109%，MDA的含量降低率26. 8% ；100mg/kg :S0D、CAT酶活性分別增加22. 8%,91%, MDA的含量降低為18. 6%)。 根據(jù)苦瓜多糖治療老年癡呆顯著的臨床前的藥效，表明了苦瓜多糖臨床治療老年癡呆的可行性，不但有可能用作預(yù)防藥物使用，也有可能作為治療藥物，以提高老年癡呆的治愈率和生存率。


下面結(jié)合附圖、附表及具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。4
圖I是本發(fā)明的苦瓜多糖對(duì)老年癡呆模型(AP)原代神經(jīng)元的保護(hù)作用的實(shí)體圖；圖2是本發(fā)明的苦瓜多糖對(duì)老年癡呆模型(AP )原代神經(jīng)元的保護(hù)作用的統(tǒng)計(jì)圖。
圖I中，AP代表SD大鼠神經(jīng)元老年癡呆模型組；AP +3代表老年癡呆模型模型前神經(jīng)元給藥3 ug/ml組；A0 +10代表老年癡呆模型模型前神經(jīng)元給藥10ug/ml組；A0 +30 代表老年癡呆模型模型前神經(jīng)元給藥30ug/ml組；AP +100代表老年癡呆模型模型前神經(jīng)元給藥100ug/ml組；A0 +300代表老年癡呆模型模型前神經(jīng)元給藥300ug/ml組。
圖2中各組和圖I中各組相對(duì)應(yīng)。
具體實(shí)施方式
以孕17-18天Sprague-Dawley (SD)大鼠海馬神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)材料,觀察苦瓜多糖對(duì)大鼠神經(jīng)元的影響。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(Sham)、老年癡呆模型AP對(duì)照組(AP溶于水濃度為 IOuM,作用 24 小時(shí))、加藥組(AP + 3ug/ml, A^+ 10ug/ml, A^+ 30ug/ml, A^ + 100ug/ml, + 300ug/ml)。不同濃度的苦瓜多糖作用于A0刺激I. 5h后的海馬神經(jīng)元, 使用DAPI熒光染色，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見圖I)。各個(gè)實(shí)驗(yàn)組陽性細(xì)胞的凋亡率分別是27%、 64%、46%、38%、36%、30%、29%(見圖2)。本發(fā)明的研究表明，苦瓜多糖對(duì)A P引起的老年癡呆神經(jīng)元的損傷有保護(hù)作用，這種保護(hù)具有濃度依賴性。
(I)染色觀察在OlympusVanox顯微鏡上，以400nm入射光激發(fā)，455nm接受觀察。 染色較亮，呈藍(lán)綠色，染色質(zhì)濃縮，甚至破碎的細(xì)胞為凋亡樣陽性細(xì)胞。
(2)陽性細(xì)胞的計(jì)算方法隨機(jī)選取的10個(gè)400倍視野下的陽性細(xì)胞總數(shù)占假刺激對(duì)照組的百分率。
結(jié)合圖2,通過Sigmastate統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)及Sigmaplot作圖軟件處理，Control代表正常對(duì)照組、AP代表AP給藥對(duì)照組、AP+ 3ug/ml代表AP給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖3ug/ml組、AP + 10ug/ml代表AP給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖10ug/ml組、A3 + 30ug/ml代表AP給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖30ug/ml組、AP+ 100ug/ml代表A3給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖100ug/ml組、A P + 300ug/ml代表A ^給藥模型前30分鐘加苦瓜多糖300ug/ml組，各組陽性細(xì)胞的凋亡率分別是27%、64%、46%、38%、36%、30%、29%。 T<0. 05相對(duì)正常組，bZXO. 05相對(duì)AP給藥組。(見圖2)。
結(jié)合表1，SD大鼠老年癡呆模型(AP ):大鼠以水合氯醛30mg/kg腹腔注射麻醉，在大鼠腦立體定位儀上將大鼠固定，通過不銹鋼微量注射器將寡聚化A ￠ 25-35 20ug10u I (lu 1/min, 注射完留針5分鐘)注射到大鼠側(cè)腦室(前囟點(diǎn)后0. 8毫米，旁I. 5毫米，深3. 7毫米)。 Aman在A P注射前20分鐘按50mg/kg腹腔注射。Ro在A P注射前20分鐘在對(duì)側(cè)腦室注射IOOnmol :5u I (lu 1/min,注射完留針5分鐘)。NVP在A 0注射前20分鐘在對(duì)側(cè)腦室注射4nmol:10ia (lu 1/min,注射完留針5分鐘)。CNQX在A3注射前20分鐘在對(duì)側(cè)腦室注射501111101:5111(1111/1^11，注射完留針5分鐘)。58在八0注射后的第三天側(cè)腦室注射100nmOl:5iil (liU/min，注射完留針5分鐘)。模型后取海馬、勻漿、測(cè)蛋白，按照試劑盒說明書步驟測(cè)定SOD和CAT酶活性及丙二醛MDA的含量。計(jì)算公式I、組織勻漿中SOD活力計(jì)算
權(quán)利要求
1.一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的苦瓜多糖在預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物的劑量為60-100mg/kg。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用， 其特征是所述的苦瓜多糖在治療原發(fā)性老年癡呆藥物的劑量為60-100mg/kg。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的藥物為水溶性的，根據(jù)體重按劑量稀釋(60-100mg/kg)，稀釋比例為 I:100 (mg/ml)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種苦瓜多糖的藥效新用途，特別是一種苦瓜多糖在治療或預(yù)防原發(fā)性老年癡呆藥物中的應(yīng)用。體外研究表明，苦瓜多糖可以對(duì)Aβ引起的神經(jīng)元的損傷具有保護(hù)作用，其抑制率可以達(dá)到71%(Aβ+300ug/ml)。在此實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將苦瓜多糖用于預(yù)防或治療由Aβ誘導(dǎo)的原發(fā)性老年癡呆SD大鼠，無論老年癡呆模型前還是模型后給藥，苦瓜多糖都具有增加SOD、CAT活性降低MDA的含量的作用。模型前給藥60、100mg/kgSOD活性增加分別為20.2%、24.0%，CAT活性增加分別為87%、104%，MDA的含量降低分別為24.4%、27.9%，因此具有很好的預(yù)防效果；模型后給藥60、100mg/kgSOD活性分別為增加23.7%、22.8%，CAT活性增加分別為109%、91%，MDA的含量降低分別為26.8%、18.6%，因此具有很好的治療效果。
文檔編號(hào)A61P25/28GK102526090SQ20121004377
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月26日
發(fā)明者孫福謀, 鞏娟娟, 王旻, 齊素華 申請(qǐng)人:徐州醫(yī)學(xué)院