專利名稱：一種增強(qiáng)免疫力的制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種增強(qiáng)免疫力的制劑及其制備方法，屬于生物保健品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
免疫力是指人體自身的防御機(jī)制，是人體識(shí)別和消滅外來(lái)侵入的任何異物(病毒、細(xì)菌等)，并處理自身衰老、損傷、死亡、變性的細(xì)胞以及識(shí)別和處理體內(nèi)突變細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的能力?，F(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，免疫力是人體識(shí)別和排除“異己”的生理反應(yīng)。人體內(nèi)執(zhí)行這一功能的是免疫系統(tǒng)。長(zhǎng)期以來(lái)，人們生活在一個(gè)既適合生存又充滿危險(xiǎn)的環(huán)境中，人類能夠存續(xù)，是因?yàn)楂@得了非凡的免疫力。所以說(shuō)免疫力是生物進(jìn)化過(guò)程的產(chǎn)物。但隨著社會(huì)的發(fā)展，人們的生活和工作節(jié)奏不斷加快，壓力也越來(lái)越大，加上生活環(huán)境的污染，導(dǎo)致身體機(jī)能下降，免疫力低下，極易招致細(xì)菌、病毒、真菌等感染。因此免疫力低下最直接的表現(xiàn)就是容易生病，因經(jīng)?；疾?，又加重了機(jī)體的消耗，表現(xiàn)為體質(zhì)虛弱、營(yíng)養(yǎng)不良、精神萎靡、疲乏無(wú)力、食欲降低、睡眠障礙等，生病、打針吃藥便成了家常便飯，且每次生病都要很長(zhǎng)時(shí)間才能恢復(fù)，而且常常反復(fù)發(fā)作。長(zhǎng)此以往會(huì)導(dǎo)致身體和智力發(fā)育不良，還易誘發(fā)重大疾病。目前，市場(chǎng)上存在眾多的增強(qiáng)免疫力的保健品，但大多數(shù)都效果不明顯或見(jiàn)效比較遲緩，甚至因人體差異而無(wú)保健效果，滿足不了眾多消費(fèi)者的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種見(jiàn)效快且效果明顯的能增強(qiáng)人體免疫力的制劑及其制備方法，以滿足廣大消費(fèi)者的需求。本發(fā)明通 過(guò)下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種增強(qiáng)免疫力的制劑，其特征在于由下列質(zhì)量份的組分組成:
鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份，
黃芪提取物I 1.5份，山茱萸提取物 0.2 0.5份，
丹參提取物0.1 0.4份，蜂蜜98 105份。所述鐵皮石斛粉是將鐵皮石斛粉碎至細(xì)度為1200目的超微粉。所述三七粉是將三七粉碎至細(xì)度為1200目的超微粉。所述黃芪提取物、山茱萸提取物、丹參提取物是市購(gòu)產(chǎn)品，或者經(jīng)過(guò)下列常規(guī)方法提取:
A、分別將所述黃芪、山茱萸、丹參各原料藥粉碎后，水煎提取2 3次，每次用水量為藥材總質(zhì)量的8 12倍，每次水煎提取保持微沸0.5 1.5小時(shí)，合并各次提取液，過(guò)濾分離出濾液和濾渣；
B、將A步驟的濾液濃縮至Ig藥材/ml，冷卻、靜置至室溫，攪拌下緩慢加入乙醇至乙醇終濃度為60wt%，靜置至沉淀完全，抽濾分離出濾液和濾渣；
C、將B步驟的濾渣用質(zhì)量濃度為60%的乙醇洗滌，直至洗滌液無(wú)色，將洗滌液并入B步驟的濾液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分別得黃芪、山茱萸、丹參的提取物一干浸膏粉。本發(fā)明的另一目的在于提供一種增強(qiáng)免疫力的制劑的制備方法，其特征在于經(jīng)過(guò)下列各步驟:
(I)按下列質(zhì)量份備料:
鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份，
黃芪提取物I 1.5份，山茱萸提取物 0.2 0.5份，
丹參提取物0.1 0.4份，蜂蜜98 105份。(2)將步驟(I)的細(xì)度為1200目的鐵皮石斛超微粉、細(xì)度為1200目的三七超微粉，與黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，即得到增強(qiáng)免疫力的制劑。將本發(fā)明提供的上述制劑通過(guò)常規(guī)成型工藝制備成具有增強(qiáng)免疫力作用的膠囊齊U、顆粒劑、片劑、散劑或丸藥等口服制劑。其中，鐵皮石斛:性味:味甘，性微寒；具有生津養(yǎng)胃、滋陰清熱、潤(rùn)肺益腎、明目強(qiáng)腰之功效。三七:性味:味甘、微 苦、性溫；歸肝經(jīng)、胃經(jīng)、心經(jīng)、肺經(jīng)、大腸經(jīng)；有止血、散血、定痛等功能。黃芪:性味:甘，性微溫；歸肝、脾、肺、腎經(jīng)；有益氣固表、斂汗固脫、托瘡生肌、利水消腫之功效。山茱萸:性味:酸、澀，微溫；歸肝、腎經(jīng)；用于補(bǔ)益肝腎，收斂固澀、固精縮尿止帶止崩、止汗，此外還有生津止渴的作用。丹參:性味:苦，微寒；歸心、肝經(jīng)；用于活血調(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養(yǎng)血安神。蜂蜜:性味:甘、性平；歸脾、胃、肺、大腸經(jīng)；用于調(diào)補(bǔ)脾胃、緩急止痛、潤(rùn)肺止咳、潤(rùn)腸通便、潤(rùn)膚生肌、解毒、主脘腹虛痛、肺燥咳嗽、腸燥便秘、目赤、口瘡、潰瘍不斂、風(fēng)疹瘙癢、水火燙傷、手足裂。本發(fā)明提供的藥物的藥理作用:鐵皮石斛具有增強(qiáng)免疫功能、促進(jìn)消化、護(hù)肝利膽、抗風(fēng)濕、降低血糖血脂、抗腫瘤、保護(hù)視力、滋養(yǎng)肌膚、抗衰老之功。三七具有良好的止血功效、顯著的造血功能；能加強(qiáng)和改善冠脈微循環(huán)，擴(kuò)張血管的作用；有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，具有抗疲勞、提高學(xué)習(xí)和記憶能力的作用；抗炎癥作用；具有免疫調(diào)節(jié)劑的作用，能使過(guò)高或過(guò)低的免疫反應(yīng)恢復(fù)到正常，但不干擾機(jī)體正常的免疫反應(yīng)；抗腫瘤作用；抗衰老、抗氧化作用；降低血脂及膽固醇作用。黃芪有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用；能消除實(shí)驗(yàn)性腎炎蛋白尿，增強(qiáng)心肌收縮力，調(diào)節(jié)血糖含量；黃芪不僅能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能夠延緩細(xì)胞衰老的進(jìn)程。山茱萸用于肝腎不足，頭暈?zāi)垦?，耳鳴，腰酸；能固經(jīng)止血，可用治婦女體虛、月經(jīng)過(guò)多等癥；有抗糖尿病、抗菌的作用，對(duì)失血性休克、心功能及血液動(dòng)力學(xué)的作用明顯。丹參具有活血散淤、消腫止血、消炎止痛、調(diào)經(jīng)止痛、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、改善心肌缺血狀況、降低血壓、安神靜心、降血糖和抗菌等功效，對(duì)月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛等病癥有一定的療效；丹參還具有抗血小板凝聚、降低血液黏度及調(diào)節(jié)內(nèi)外凝血系統(tǒng)的功能。蜂蜜對(duì)創(chuàng)面有收斂、營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)愈合作用，有潤(rùn)滑性祛痰和輕瀉作用。本發(fā)明的各成分均為國(guó)家藥材公司市售產(chǎn)品。本發(fā)明具備的優(yōu)點(diǎn)和效果:該制劑適宜于免疫力低下者，具有增強(qiáng)免疫力的功效。能促進(jìn)抗體生成細(xì)胞增殖，提高血清溶血素水平，促進(jìn)腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，對(duì)體重增長(zhǎng)、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值及脾淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化作用、單核-巨噬細(xì)胞碳廓清和NK細(xì)胞活性無(wú)明顯影響。具有見(jiàn)效快、效果明顯、安全性高、成本低且操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1
(O按下列質(zhì)量份的組分進(jìn)行備料:
細(xì)度為1200目的鐵皮石斛超微粉 12份 細(xì)度為1200目的三七超微粉 6.9份 市購(gòu)的黃芪提取物1.356份
市購(gòu)的山茱萸提取物0.3份
市購(gòu)的丹參提取物0.228份
蜂蜜101.76份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規(guī)成型工藝制備成具有增強(qiáng)免疫力作用的散劑。實(shí)施例2
(I)按下列質(zhì)量份的組分進(jìn)行備
料:
細(xì)度為1200目的鐵皮石斛超微粉10份細(xì)度為1200目的三七超·微粉4份
市購(gòu)的黃芪提取物1.5份
市購(gòu)的山茱萸提取物0.5份
市購(gòu)的丹參提取物0.4份
蜂蜜100份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規(guī)成型工藝制備成具有增強(qiáng)免疫力作用的膠囊劑。實(shí)施例3
(O按下列質(zhì)量份的組分進(jìn)行備料:
細(xì)度為1200目的鐵皮石斛超微粉15份 細(xì)度為1200目的三七超微粉 10份 市購(gòu)的黃芪提取物1.5份
市購(gòu)的山茱萸提取物0.5份
市購(gòu)的丹參提取物0.4份
蜂蜜105份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規(guī)成型工藝制備成具有增強(qiáng)免疫力作用的片劑；其中:
黃芪提取物、山茱萸提取物、丹參提取物經(jīng)過(guò)下列常規(guī)方法提取:
A、分別將所述黃芪、山茱萸、丹參各原料藥粉碎后，水煎提取2次，每次用水量為藥材總質(zhì)量的12倍，每次水煎提取保持微沸1.5小時(shí)，合并各次提取液，過(guò)濾分離出濾液和濾渣；
B、將A步驟的濾液濃縮至Ig藥材/ml，冷卻、靜置至室溫，攪拌下緩慢加入乙醇至乙醇終濃度為60wt%，靜置至沉淀完全，抽濾分離出濾液和濾渣；
C、將B步驟的濾渣用質(zhì)量濃度為60%的乙醇洗滌，直至洗滌液無(wú)色，將洗滌液并入B步驟的濾液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分別得黃芪、山茱萸、丹參的提取物——干浸膏粉。實(shí)施例4
(O按下列質(zhì)量份的組分進(jìn)行備料: 細(xì)度為1200目的鐵皮石斛超微粉13份細(xì)度為1200目的三七超微粉8份
市購(gòu)的黃芪提取物1.0份
市購(gòu)的山茱萸提取物0.4份
市購(gòu)的丹參提取物0.3份
蜂蜜101份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規(guī)成型工藝制備成具有增強(qiáng)免疫力作用的丸藥；其中:
黃芪提取物、山茱萸提取物、丹參提取物經(jīng)過(guò)下列常規(guī)方法提取:
A、分別將所述黃芪、山茱萸、丹參各原料藥粉碎后，水煎提取3次，每次用水量為藥材總質(zhì)量的8倍，每次水煎提取保持微沸0.5小時(shí)，合并各次提取液，過(guò)濾分離出濾液和濾渣；
B、將A步驟的濾液濃縮至Ig藥材/ml，冷卻、靜置至室溫，攪拌下緩慢加入乙醇至乙醇終濃度為60wt%，靜置至沉淀完全，抽濾分離出濾液和濾渣；
C、將B步驟的濾渣用質(zhì)量濃度為60%的乙醇洗滌，直至洗滌液無(wú)色，將洗滌液并入B步驟的濾液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分別得黃芪、山茱萸、丹參的提取物——干浸膏粉。為了清楚說(shuō)明本發(fā)明的效果，下面將增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介如下:
I材料和方法
1.1樣品:實(shí)施例1的增強(qiáng)免疫力的散劑，規(guī)格:120克/瓶，置陰涼干燥處保存。人口服推薦用量為每人(成人)每日2次，每次3克，成人體重按60kg計(jì)算，折合劑量為100 mg/kg BW。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組:SPF級(jí)健康昆明種雄性小鼠240只，體重為18 22克，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心繁殖，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)=SCXK (桂)2009-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):0006030。每40只小鼠為一組,共6組。免疫I組,進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)；免疫II組，進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；免疫III組，進(jìn)行臟/體比值測(cè)定，血清溶血素測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)測(cè)定；免疫IV VI組，分別進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境條件:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室為屏障系統(tǒng)，使用許可證號(hào):SYXK(桂)2011-0005。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度:22 25°C，相對(duì)濕度:55 70%。1.4劑量選擇與受試物給予方式:根據(jù)人口服推薦用量，設(shè)樣品低、中、高劑量組分別為500、1000、2000 mg/kg BW (分別相當(dāng)于人體推薦用量的5、10、20倍)，設(shè)一個(gè)陰性對(duì)照組，每組10只動(dòng)物。分別稱取樣品2.5,5.0、10.0g，各加純水至IOOmL,混勻，配成25、50、100mg/mL的溶液，按0.2mL/10g Bff的體積給予相應(yīng)劑量組動(dòng)物灌胃，陰性對(duì)照組予以等體
積的純水，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃30天。1.5主要儀器與試劑:動(dòng)物天平、電子分析天平、離心機(jī)、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、半自動(dòng)生化分析儀、酶標(biāo)儀等。無(wú)菌手術(shù)器械、微量注射器、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、24孔和96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板、96孔U型細(xì)胞培養(yǎng)板、玻璃平皿、紗布、載玻片、試管、200目篩網(wǎng)、計(jì)時(shí)器、血色素吸管等。RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、2-ME、青霉素、鏈霉素、ConA、lmol/L的HCL溶液、異丙醇、MTT、Hank，s 液(pH 7.2 7.4)、PBS 緩沖液(Ph7.2 7.4)、臺(tái)酚藍(lán)、DNFB、丙酮、硫化鋇、補(bǔ)體(豚鼠血清)、SA緩沖液、瓊脂糖、綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、印度墨汁、0.1 %的碳酸鈉、雞紅細(xì)胞、甲醇、Gimsa染液、YAC-1細(xì)胞、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶1、0.2mol/L的Tris-HCL緩沖液、1%冰醋酸、1%的NP40等。1.6實(shí)驗(yàn)方法
1.6.1臟器/體重比值測(cè)定:稱重后處死小鼠，取出胸腺和脾臟，在電子分析天平上稱重，計(jì)算臟/體比值。1.6.2ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)
無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank’ s液的平皿中，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾。用Hank’s液洗2次，每次離心IOmin (1000 r/min)。然后將細(xì)胞懸浮于ImL完全培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃 度為3 X 106個(gè)/mL。再將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔ImL,在其中一孔加75PL ConA液(相當(dāng)于7.5Pg/mL)，另一孔作為對(duì)照，置5 %C02，37°C二氧化碳孵箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5 mg/mL) 50μ /孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)孔作3個(gè)平行孔，用酶標(biāo)儀，以570nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。淋巴細(xì)胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表示。1.6.3 二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠DTH實(shí)驗(yàn)(耳腫脹法)
實(shí)驗(yàn)結(jié)束前5天用硫化鋇將小鼠腹部皮膚脫毛約3cmX 3cm范圍，用50μ DNFB溶液均勻涂抹致敏，5天后將IOPL DNFB均勻涂抹于小鼠右耳兩面進(jìn)行攻擊，24小時(shí)后頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下8_直徑的耳片、稱重，以左右耳重量之差值表示DTH的程度。1.6.4抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jerne改良玻片法)
取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心10min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2%(v/v)的細(xì)胞懸液，每鼠腹腔注射0.2mL。將免疫后5天的小鼠處死，取脾臟置盛有Hank’ s液的平皿內(nèi)，輕輕磨碎脾臟,制成細(xì)胞懸液,經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾,離心IOmin(2000 r/min)，用Hank’s液洗滌2遍，最后將細(xì)胞懸浮在8mL Hank’s液中。將表層培養(yǎng)基(Ig瓊脂糖加雙蒸水至IOOmL)加熱溶解后，放45 50°C水浴保溫，與等量Ph7.2 7.4、2倍濃度的Hank’ s液混合,分裝小試管,每管0.5mL,再向管內(nèi)加入50PL10%SRBC(v/v,用SA緩沖液配制)、25PL脾細(xì)胞懸液，迅速混勻后傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，做平行片，待瓊脂凝固后，將玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1.5h，用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1:8)加入玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)孵育1.5h，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。用空斑數(shù)/IO6脾細(xì)胞表示抗體生成細(xì)胞數(shù)。1.6.5血清溶血素的測(cè)定(血凝法)
取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心10min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2%(v/v)的細(xì)胞懸液，每鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除小鼠的眼球，取血于離心管內(nèi)，放置約lh，2000r/min離心lOmin，分離、收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別置于微量血凝板內(nèi)，每孔100 μ L，再加入IOOyL0.5% (ν/ν)的SRBC懸液，混勻，裝入濕潤(rùn)的平盤(pán)內(nèi)加蓋，于37°C溫箱孵育3h，觀察血球凝集程度。按下式計(jì)算抗體積數(shù):
抗體積數(shù)=(SJ2S2 +3Ss......nSn)
式中1、2、3……η為對(duì)倍稀釋的指數(shù)，S為凝集程度的級(jí)別。1.6.6小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
經(jīng)尾靜脈給小鼠注射用生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射0.1 mL，墨汁注入后立即計(jì)時(shí),于注入墨汁后第2、10min,分別從內(nèi)目此靜脈叢取血20yL,加入到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，搖勻。以Na2CO3溶液作空白對(duì)照，以600 nm波長(zhǎng)測(cè)光密度值(OD)。將小鼠處死，取肝、脾臟，稱重。按下式計(jì)算吞噬指數(shù)a。a=K1/3·X體重/(肝重+脾重)
式中 K=GgOD1 — IgOD2)/ (t2-t!)。1.6.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)
給小鼠腹腔注射20%(v/v，用生理鹽水配制)的壓積雞紅細(xì)胞懸液，每鼠lmL，間隔30min，頸椎脫臼處死小鼠，正中剪開(kāi)腹壁皮膚，腹腔注入2mL生理鹽水，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板IminJl出腹腔洗液lmL，平均滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，取出玻片于生理鹽水中漂洗后晾干，用甲醇:丙酮(1:1)溶液固定，4%(v/v)Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用純水漂洗、晾干。油鏡下每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)。吞噬率(％ )=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100%
吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)
1.6.8NK細(xì)胞活性測(cè)定(LDH測(cè)定法)
將小鼠頸椎脫白處死，無(wú)菌取脾，制成脾細(xì)胞懸液，用Hank’s液洗2次，每次離心IOmin(1000r/min)。棄上清，將細(xì)胞漿彈起，加入0.5mL滅菌純水20秒，裂解紅細(xì)胞后再加入
0.5mL 2 倍 Hank，s 液及 8mL Hank，s 液，1000r/min 離心 IOmin,用 ImL 含 10% 小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸，用I %冰醋酸稀釋后計(jì)數(shù)(活細(xì)胞數(shù)應(yīng)在95%以上)，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，最后用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2X107個(gè)/mL，此為效應(yīng)細(xì)胞。取傳代后24h生長(zhǎng)良好的YAC-1細(xì)胞，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4X IO5個(gè)/mL，此為靶細(xì)胞。取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100 μ L(效靶比50:1)，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μ L，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%NP40各100 μ L。上述各項(xiàng)各設(shè)3個(gè)平行孔，置5%C02、37°C二氧化碳孵箱中培養(yǎng)4h。然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100 μ L置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100 μ L，反應(yīng)8分鐘，每孔加入lmol/L的HCL30 μ L，在酶標(biāo)儀490nm處測(cè)定光密度(OD)值。按下式計(jì)算NK細(xì)胞活性:
NK細(xì)胞活性(%) = (反應(yīng)孔OD -自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD -自然釋放孔0D)X100%
1.7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析統(tǒng)計(jì)處理。1.8結(jié)果判定:在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能作用。2 結(jié)果
2.1樣品對(duì)小鼠體重的影響
表I 鐵皮石斛增強(qiáng)免疫力劑的功能實(shí)驗(yàn)小鼠體重(
權(quán)利要求
1.一種增強(qiáng)免疫力的制劑，其特征在于由下列質(zhì)量份的組分組成 鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份， 黃芪提取物I I. 5份，山茱萸提取物 O. 2 O. 5份， 丹參提取物O. I O. 4份，蜂蜜98 105份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的增強(qiáng)免疫力的制劑，其特征在于所述鐵皮石斛粉是將鐵皮石斛粉碎至細(xì)度為1200目的超微粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的增強(qiáng)免疫力的制劑，其特征在于所述三七粉是將三七粉碎至細(xì)度為1200目的超微粉。
4.一種增強(qiáng)免疫力的制劑的制備方法，其特征在于經(jīng)過(guò)下列各步驟 (1)按下列質(zhì)量份備料 鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份， 黃芪提取物I I. 5份，山茱萸提取物 O. 2 O. 5份， 丹參提取物O. I O. 4份，蜂蜜98 105份； (2)將步驟(I)的細(xì)度為1200目的鐵皮石斛超微粉、細(xì)度為1200目的三七超微粉，與黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合，再加入蜂蜜攪拌均勻，即得到增強(qiáng)免疫力的制劑。
5.
根據(jù)權(quán)利要求4所述的增強(qiáng)免疫力的制劑的制備方法，其特征在于將步驟(2)所得制劑按常規(guī)成型工藝制備成具有增強(qiáng)免疫力作用的膠囊劑、顆粒劑、片劑、散劑或丸藥制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種增強(qiáng)免疫力的制劑及其制備方法，由下列質(zhì)量份的組分組成鐵皮石斛粉10～15份、三七粉4～10份、黃芪提取物1～1.5份、山茱萸提取物0.2～0.5份、丹參提取物0.1～0.4份、蜂蜜98～105份。將鐵皮石斛粉、三七粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，即得到增強(qiáng)免疫力的制劑。該制劑適宜于免疫力低下者，能增強(qiáng)人體免疫力，具有見(jiàn)效快、效果明顯、安全性高、成本低且操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K35/64GK103251816SQ20131019779
公開(kāi)日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月25日
發(fā)明者許江 申請(qǐng)人:云南云尚生物技術(shù)有限公司