專利名稱：逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品、藥品加工領(lǐng)域中多酚類物質(zhì)脂質(zhì)體技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及以純化后的石榴皮多酚為原料，逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體。
背景技術(shù)：
石榴皮多酚為石榴科植物石榴果皮的主要活性成分，是石榴皮中所含的一類多羥基酚類化合物的總稱。其組成成分包括安石榴苷、沒食子酸、兒茶素、綠原酸、表兒茶素、咖啡酸、蘆丁等多種化合物。石榴皮多酚具有抗氧化、清除自由基活性、抗突變和抗腫瘤、防癌、抑菌消炎、抗病毒活性、防治心腦血管疾病、降血脂作用，還具有養(yǎng)肝護腎、調(diào)節(jié)免疫、抗疲勞等多種藥理功能。石榴皮多酚作為一種天然的功能性成分，其應(yīng)用領(lǐng)域十分廣闊，已在醫(yī)藥、食品、保健品、動物飼料和化妝品等領(lǐng)域擁有突出優(yōu)勢。但是，石榴皮多酚穩(wěn)定性差， 易受光、熱、氧氣、PH等因素影響，極易失去生理活性功能和營養(yǎng)價值，極大地限制了其應(yīng)用。因此，石榴皮多酚的穩(wěn)定性及生物利用率成為現(xiàn)在研究的焦點。脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層構(gòu)成的脂質(zhì)微囊，粒徑可從幾十納米到幾微米，分散性和生物相溶性均較為理想。同時，脂質(zhì)體作為藥物或保健食品載體，具有天然無毒及生物可降解性，提高了藥物的穩(wěn)定性，促進藥物吸收，延長藥物作用時間，對局部病變部位有靶向作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種操作簡便、生產(chǎn)成本低、包封率高、產(chǎn)物粒度均勻、穩(wěn)定性好的石榴皮多酚脂質(zhì)體的制備方法。解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是用氯仿溶解大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1 5 1的混合物，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，膽固醇與石榴皮多酚的質(zhì)量比為1 0.025，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1 5 1， 超聲至混合物形成均勻單相體系，蒸除氯仿，用PH值為4. 5 8. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。上述濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液是由石榴皮干粉末與pH值為 6. 5的磷酸鹽緩沖液配制成。本發(fā)明優(yōu)選大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2 4 1，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖液的體積比為2 4 1，磷酸鹽緩沖液的pH值為5. 5 7. 5。本發(fā)明最佳選擇大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為3. 08 1、氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為4 1、磷酸鹽緩沖溶液的pH值為6. 17。本發(fā)明采用脂質(zhì)體對石榴皮多酚進行包埋處理，采用逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體，并通過響應(yīng)曲面法優(yōu)化工藝條件，制備出包封率較高的脂質(zhì)體，經(jīng)對制備的脂質(zhì)體進行質(zhì)量評價，所制備的石榴皮多酚脂質(zhì)體質(zhì)量良好。


圖1是大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比兩個因素對石榴皮多酚脂質(zhì)體包封率的交互作用影響圖。圖2是石榴皮多酚脂質(zhì)體的光學(xué)顯微鏡照片。圖3是石榴皮多酚脂質(zhì)體透射顯微鏡照片。圖4是石榴皮多酚脂質(zhì)體的粒徑分布圖。圖5是石榴皮多酚脂質(zhì)體的kta電位圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步詳細說明，但本發(fā)明不限于這些實施例。實施例1將大豆卵磷脂308mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入IOmL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘，混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為6. 17 的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體，其包封率為54. 87%。本實施例濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液是由石榴皮干粉末與pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液配制而成。實施例2將大豆卵磷脂300mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入7. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 6. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體，其包封率為53.對％。本實施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實施例1相同。實施例3將大豆卵磷脂lOOmg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入2. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 4. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實施例1相同。實施例4將大豆卵磷脂500mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入12. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 8. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實施例1相同。
實施例5將大豆卵磷脂200mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入5. OmL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 5. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實施例1相同。實施例6將大豆卵磷脂400mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入10. OmL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 7. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實施例1相同。為了確定本發(fā)明的最佳工藝條件，發(fā)明人進行了大量的實驗室研究試驗，每種試驗重復(fù)三次，試驗結(jié)果為三次重復(fù)試驗的平均值，各種試驗情況如下實驗儀器XW_80A型漩渦混合器，由海門市其林貝爾儀器有限責任公司提供； 3k30超高速低溫離心機，由美國Sigma公司提供；TU-1810型紫外可見分光光度計，由北京普析通用儀器有限責任公司提供；NAN04S型激光粒度和kta電位儀，由英國Malvern公司提供；H-600型透射式電子顯微鏡，由日本日立公司提供。1、大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比對脂質(zhì)體包封率的影響向5個25mL梨形瓶中均加入膽固醇lOOmg、大豆卵磷脂、7. 5mL氯仿、2. 5mL濃度為 lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比分別為1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1，超聲至混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m 濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。研究大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比對脂質(zhì)體包封率的影響。制作標準曲線精確稱取石榴皮多酚標準品6. 25mg，加入25mL的棕色容量瓶中， 用二次蒸餾水定容，配制成質(zhì)量濃度為250 μ g/mL的石榴皮多酚標準溶液；精密移取O、 0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. 0,3. 5,4. OmL質(zhì)量濃度為250 μ g/mL的石榴皮多酚標準溶液于 25mL的棕色容量瓶中，用二次蒸餾水定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0、5、10、15、20、25、30、 35,40 μ g/mL的石榴皮多酚工作溶液，在最佳波長260nm處用紫外可見分光光度計分別測定石榴皮多酚工作溶液的吸光度值，以石榴皮多酚的質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線，并進行回歸分析，得到線性回歸方程y = 0. 0249x+0. 0095式中χ為石榴皮多酚的質(zhì)量濃度，y為吸光度值，相關(guān)系數(shù)R2 = 0. 9997。高速冷凍離心法測定脂質(zhì)體包封率取石榴皮多酚脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體溶液各 3mL于離心管中，分別加入3mL無水乙醇，置于漩渦混合器中渦旋破乳3分鐘，4°C條件下 15000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，取上清液ImL分別置于25mL容量瓶中，用無水乙醇定容，以空白脂質(zhì)體溶液作為對照，在最佳波長260nm處測定吸光度，代入線性回歸方程，得到石榴皮多酚的質(zhì)量濃度X，經(jīng)計算，得到總藥物量Ct ；另取石榴皮多酚脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體溶液各 3mL于離心管中，4°C條件下15000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，取上清液ImL定容至25mL容量瓶中，以空白脂質(zhì)體溶液作為對照，在最佳波長260nm處測定吸光度，代入線性回歸方程，得到石榴皮多酚的質(zhì)量濃度X，經(jīng)計算，得到游離石榴皮多酚的量Cf。根據(jù)下式計算脂質(zhì)體的包封率
權(quán)利要求
1.一種逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于用氯仿溶解大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1 5 1的混合物，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，膽固醇與石榴皮多酚的質(zhì)量比為1 0.025，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1 5 1，超聲至混合物形成均勻單相體系，蒸除氯仿，用pH值為4. 5 8. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，用0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體；上述濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液是由石榴皮干粉末與pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液配制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2 4 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖液的體積比為2 4 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于磷酸鹽緩沖液的pH值為5. 5 7. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于用氯仿溶解大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為3. 08 1的混合物，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，膽固醇與石榴皮多酚的質(zhì)量比為1 0.025，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為4 1，超聲至混合物形成均勻單相體系，蒸除氯仿，用pH值為 6. 17的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，用0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。
全文摘要
一種逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，采用脂質(zhì)體對石榴皮多酚進行包埋處理，通過調(diào)節(jié)大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比、磷酸鹽緩沖液的pH值制備成包封率高的石榴皮多酚脂質(zhì)體。經(jīng)質(zhì)量評價，所得石榴皮多酚脂質(zhì)體粒度均勻，具有良好的體外緩釋性和穩(wěn)定性。本發(fā)明制備方法操作簡單、生產(chǎn)成本低，可應(yīng)用于石榴皮多酚脂質(zhì)體的制備。
文檔編號A61K9/127GK102204939SQ20111012473
公開日2011年10月5日 申請日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月13日
發(fā)明者李建科, 杜丹丹 申請人:陜西師范大學(xué)