專利名稱：賴氨酸作為增效劑在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是賴氨酸作為增效劑在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來臨床上深部真菌感染率大幅上升，已成為免疫功能低下患者死亡的主要原因之一。目前可供臨床選擇的治療深部真菌感染藥物較少且毒副作用大，再加上日益嚴(yán)重的真菌耐藥現(xiàn)象使其防治成為臨床上的棘手難題。多烯類(如兩性霉素B、制霉菌素)及棘白菌素類(如卡泊芬凈)等抗真菌藥物是臨床上常用的能有效治療深部及淺部真菌感染的抗真菌藥。但由于眾所周知的原因，臨床上的耐藥菌株越來越普遍，致使不得不加大用藥劑量，某些抗真菌藥物甚至加大用藥劑量也無效。加大用藥劑量必然會增加毒副作用。兩性霉素B抗真菌作用強(qiáng)，抗真菌譜廣，對幾乎所有真菌都有較好活性，被稱為抗真菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是其嚴(yán)重的毒副作用如不可逆的腎臟毒性嚴(yán)重限制了兩性霉素B的臨床應(yīng)用。臨床分離的卡泊芬凈耐藥真菌也日益增多，致使不得不加大用藥劑量，但加大用藥劑量的同時毒副作用不可避免。賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。但至今未見賴氨酸用于多烯類或棘白菌素類抗真菌藥物增效劑的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是對賴氨酸提供一種作為抗真菌藥物增效劑的新用途。所說的抗真菌藥物是多烯類或棘白菌素類等抗真菌藥物，賴氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的用量為在抗真菌藥物有效濃度中加入0. 03 0. 5mM，優(yōu)選用量為0. 06 0. 25mM。例如在應(yīng)用時，每毫升液體制劑(或每毫克固體制劑)中含賴氨酸0. 06 0. 25微摩爾，含兩性霉素B、制霉菌素或卡泊芬凈0. 03 4微克。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)抗真菌藥物與賴氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽合用時，賴氨酸能降低抗真菌藥物的用藥劑量。因此，在制備抗真菌藥物時，可加入賴氨酸作為抗真菌藥物的增效劑。本發(fā)明為賴氨酸開辟了一種新用途，賴氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽作為抗真菌藥物的增效劑，可降低多烯類或棘白菌素類抗真菌藥物的用藥劑量，從而減輕了藥物的毒副作用，特別是兩性霉素B、制霉菌素及卡泊芬凈等，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于實(shí)施例。實(shí)施例1 :兩性霉素B單用及與賴氨酸合用對不同臨床真菌分離株的抗菌效果對比實(shí)驗(yàn)材料和方法
1.試藥賴氨酸美國sigma試劑公司。兩性霉素B :中國藥品生物制品檢定所(下冋)。二甲亞砜中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司。賴氨酸的濃度為40mM,兩性霉素B的濃度為2mg/ml,受試藥物于_20°C保存。實(shí)驗(yàn)前，將藥物貯存液取出置35°C溫箱融化，充分混勻，分別進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)。2.菌株:白念珠菌、克柔氏念珠菌和羊毛狀小孢子菌臨床株，由上海長海醫(yī)院真菌室提供，均經(jīng)形態(tài)學(xué)和生化學(xué)鑒定。所有實(shí)驗(yàn)用菌株均按常規(guī)于沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)劃板活化，于35°C培養(yǎng)3天后，`于4°C保存?zhèn)溆谩?.培養(yǎng)液沙堡葡萄糖瓊脂(SDA)培養(yǎng)基蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，調(diào)整pH至7.0，定容至1000ml，高壓滅菌后
4°C保存。YEPD培養(yǎng)液酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，加A 2mg/ml氯霉素水溶液50ml，定容至1000ml，高壓滅菌后4°C保存。4.儀器隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)；THZ-82A臺式恒溫振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);511型酶標(biāo)分析儀(上海第三分析儀器廠)；5.菌液制備(I)念珠菌菌液從4°C保存的SDA培養(yǎng)基上挑取念珠菌少量，接種至Iml YEPD培養(yǎng)液，于30°C以200rpm振蕩培養(yǎng)活化，使真菌處于指數(shù)生長期后期。取該菌液至Iml YEPD培養(yǎng)液中，用上述方法再次活化16小時后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以YEH)培養(yǎng)液調(diào)整菌液濃度至3X103 5X103 個/ml。6.藥敏實(shí)驗(yàn)取玻璃管分排編號，每排I號管加YEH)培養(yǎng)液100 ill作空白對照；3 11號管加入新鮮配制的菌液100 u I ；2號管分別加入菌液196 u I和兩性霉素B溶液2 ill。在2號管加入相應(yīng)濃度的賴氨酸2 ii 1，3 11號管加入賴氨酸I U I。對2 11號管進(jìn)行倍比稀釋，使2 11號管的最終兩性霉素B濃度分別為4、2、1、0. 5,0. 25,0. 125和0. 0625 u g/ml; I號管為不含藥物的YEPD培養(yǎng)液，作為陰性對照，12號管為不含藥物的菌液，作為陽性對照，于30°C培養(yǎng)。7. MIC8。值判定各管分別于30°C培養(yǎng)24小時后，取培養(yǎng)液用酶標(biāo)分析儀于620nm測各孔OD值。與陽性對照管比，以O(shè)D值下降80%以上的最低濃度管中的藥物濃度為MIC8tl (真菌生長80%被抑制時的藥物濃度)。當(dāng)藥物的MIC8tl值超過測定濃度范圍時，按以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)=MIC8tl值高于最高濃度2mM時，計(jì)為“>2mM”。上述實(shí)驗(yàn)均平行操作2到3次，當(dāng)MIC8tl值能準(zhǔn)確重復(fù)時才被接受；當(dāng)MIC8tl值相差一個濃度以上時，則需要重新實(shí)驗(yàn)，直到符合要求為止。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，表2。表I兩性霉素B單用及與賴氨酸合用合用對5株臨床白念珠菌的MIC8tl值
權(quán)利要求
1.賴氨酸作為增效劑在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用，所說抗真菌藥物為兩性霉素B、制霉菌素或卡泊芬凈，賴氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽在抗真菌藥物有效濃度中的用量為O.03 O. 5mM。
2.按權(quán)利要求1所述的賴氨酸作為增效劑在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于賴氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽在抗真菌藥物有效濃度中的用量為O. 06 O. 25mM。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是賴氨酸作為增效劑在制備多烯類或棘白菌素類抗真菌藥物中的應(yīng)用，所說抗真菌藥物為兩性霉素B、制霉菌素或卡泊芬凈，賴氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽在抗真菌藥物有效濃度中的用量為0.03～0.5mM。實(shí)驗(yàn)表明，賴氨酸與兩性霉素B、制霉菌素、卡泊芬凈等抗真菌藥物合用，能在減少用藥量的情況下同樣確保其對淺表部或深部真菌感染的治療效果，因此可用作抗真菌藥物的增效劑。賴氨酸作為抗真菌藥物的增效劑，可降低多烯類或棘白菌素類等抗真菌藥物的用藥劑量，從而減輕了藥物的毒副作用，有效治療真菌感染，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號A61K31/198GK103040852SQ20121053763
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者曹穎瑛, 趙柳婭, 高越, 朱臻宇, 姚響文, 楊宇, 柴逸峰, 姜遠(yuǎn)英 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)