專利名稱：喜樹堿的前藥形式和類似物,及其藥物用途的制作方法
喜樹堿是天然化合物，從中國植物喜樹的葉和樹皮中首次分離(見Wall等，J.Amer.Chem.Soc.883888(1966))。喜樹堿是通過中氮茚并[1，2-b]喹啉片斷(環(huán)A、B、C和D)與具有六元環(huán)的α-羥基內(nèi)酯(環(huán)E)稠合而成的五環(huán)化合物。帶有α-羥基的20位碳是不對稱的并給此分子帶來了旋光本領。喜樹堿的天然形式在20位碳上具有絕對的“S”構型并如下式所示
喜樹堿及其類似物對若干癌癥細胞系具有抗增殖活性，這些細胞系包括結腸、肺和乳腺的人腫瘤細胞系(Suffness，M等，《生物堿化學和藥物學》，Bross A等，Vol.25，第73頁(Acedemic Press，1985))。這表明喜樹堿的抗增殖活性與其對DNA拓撲異構酶I的抑制活性有關。
此外，喜樹堿及其某些類似物不溶于水，這給它們通過非腸道途徑給藥帶來困難。已制備了喜樹堿的水溶性衍生物，它們的A和B環(huán)帶有可成鹽的取代基(參見，例如，US 4,981,968、US 5,049,668、EP 540,099)。但是，這些產(chǎn)物顯示出的抗腫瘤活性比非水溶性衍生物低。還制備了喜樹堿的其它水溶性衍生物，其中20位的羥基被帶有可成鹽基團的酸如甘氨酸酯化(參見，US 4943579和PCT WO96/02546)。本領域技術人員將這些衍生物稱為“前藥形式”，因為它們本身無生物活性，而只是在給患者使用時經(jīng)首次代謝后才能產(chǎn)生活性。在動物體內(nèi)和臨床上已表明喜樹堿的α-羥基內(nèi)酯類似物的前藥形式具有良好的抗腫瘤效果，但是伴隨有破壞性的副作用，例如出現(xiàn)嚴重的腹瀉，給患者的生命帶來危險。因此，需要開發(fā)更有效并可更好地耐受的喜樹堿水溶性類似物。
再者，已明確α-羥基內(nèi)酯對喜樹堿體內(nèi)和體外活性都是必需的(《喜樹堿新的抗癌試劑》，Putmesil，M等編，第27頁(CRC出版社，1995)；Wall M等，《癌癥研究》55753(1995)；Hertzberg等，《藥物化學雜志》32715(1982)和Crow等，《藥物化學雜志》354160(1992))。然而，本申請人發(fā)現(xiàn)具有7元環(huán)的β-羥基內(nèi)酯具有與α-羥基內(nèi)酯相當或比其更大的生物活性(未公開PCT申請FR96/00980)。本發(fā)明涉及喜樹堿類似物的新的衍生物，其中7元β-羥基內(nèi)酯代替了喜樹堿的天然α-羥基內(nèi)酯。β-羥基內(nèi)酯指在此α-羥基內(nèi)酯中的羧基碳和帶羥基的α-碳之間含有另一個碳原子的內(nèi)酯。
為了增加此喜樹堿類似物的水溶解性已被選用的有兩種辦法第一種將噁嗪接枝到分子的A環(huán)上，而第二種通過將β-羥基內(nèi)酯的羥基官能團?；瘉碓O計前藥形式。
具體地講，在此類新的喜樹堿類似物中，本發(fā)明的化合物為通過在碳10和11上加入噁嗪環(huán)進行修飾得到的類似物，或者是其中β-羥基內(nèi)酯代替喜樹堿的天然α-羥基內(nèi)酯得到的前藥形式。因此，本發(fā)明的化合物為其中接枝有噁嗪環(huán)的喜樹堿β-羥基內(nèi)酯類似物或水溶性前藥并具有本領域意料之外的強生物活性。
更具體地講，本發(fā)明的主題是式(I)和式(II)的化合物、其外消旋體、對映異構體形式或這些形式的任意混合物或其藥用鹽
R1表示低級烷基、低級鏈烯基、低級鏈炔基、低級鹵代烷基、低級烷氧基低級烷基或低級烷硫基低級烷基；
R2、R3和R4獨立地表示H、鹵素、低級鹵代烷基、低級烷基、低級鏈烯基、氰基、低級氰基烷基、硝基、低級硝基烷基、酰氨基、低級酰氨基烷基、肼基、低級肼基烷基、疊氮基、低級疊氮基烷基、(CH2)mNR6R7、(CH2)mOR6、(CH2)mSR6、(CH2)mCO2R6、(CH2)mNR6C(O)R8、(CH2)mC(O)R8、(CH2)mOC(O)R8、O(CH2)mNR6R7、OC(O)NR6R7、OC(O)(CH2)mCO2R6或(CH2)n[N＝X]、OC(O)[N＝X]、(CH2)mOC(O)[N＝X](在本發(fā)明中，[N＝X]表示含氮原子N的4至7元雜環(huán)基，N是雜環(huán)基團的一個原子，X表示構成此雜環(huán)需要的其余原子，它們選自O、S、CH2、CH、N、NR9和COR10)、未取代或被取代(即在芳基或雜環(huán)上取代一至四次)的芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基，或者R2和R3或R3和R4一起形成3或4元的鏈，其中該鏈的元素選自CH、CH2、O、S、N或NR9；R5表示H、鹵素、低級鹵代烷基、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氧基低級烷基、低級烷硫基低級烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、氰基、氰基烷基、低級烷基低級磺?；榛⒌图壛u基烷基、硝基、(CH2)mC(O)R8、(CH2)mNR6C(O)R8、(CH2)mNR6R7、(CH2)mN(CH3)(CH2)nNR6R7、(CH2)mOC(O)R8、(CH2)mOC(O)NR6R7、(CH2)mS(O)9R11、(CH2)mP(O)R12R13、(CH2)2P(S)R12R13或(CH2)n[N＝X]、OC(O)[N＝X]、(CH2)mOC(O)[N＝X]、未取代或被取代的(即在芳基或雜芳基上取代一至四次)芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R6和R7獨立地表示H、低級烷基、低級羥基烷基、低級烷基低級氨基烷基、低級氨基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基低級烷基、低級鹵代烷基或者被取代(即在芳基上取代一至四次)或未取代的芳基或低級芳基烷基，其中取代基為低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R8表示H、低級烷基、低級羥基烷基、氨基、低級烷基氨基、低級烷基低級氨基烷基、低級氨基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基、低級烷氧基低級烷基、低級鹵代烷基或者被取代(即在芳基上取代一至四次)或未取代的芳基或低級芳基烷基，其中取代基為低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R9表示H、低級烷基、低級鹵代烷基、芳基或被下列一個或多個基團取代的芳基低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R10表示H、低級烷基、低級鹵代烷基、低級烷氧基、芳基或被一個或多個基團取代的芳基(即在芳基上有一至四個取代基)，取代基選自低級烷基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基或低級烷氧基低級烷基；R11表示低級烷基、芳基、(CH2)mOR14、(CH2)mSR14、(CH2)2NR14R15或(CH2)m[N＝X]；R12和R13獨立地表示低級烷基、芳基、低級烷氧基、芳氧基或氨基；R14和R15獨立地表示H、低級烷基或芳基；R16表示H或OR21；R17表示OR6或NR6R7；R18和R19獨立地表示H、鹵素、低級烷基、低級烷氧基或羥基；R20表示H或鹵素；R21表示H、低級烷基、CHO或C(O)(CH2)mCH3；Rp表示H或易于裂解的基團，優(yōu)選相應于式-C(O)-A-NR22R23的基團，其中A表示直鏈或支鏈亞烷基，該亞烷基視具體情況而定被選自游離的、酯化的或成鹽的羥基，鹵素，游離的、酯化的或成鹽的羧基，氨基，單或二烷基氨基取代，而R22和R23獨立地表示H、低級烷基、低級羥基烷基、低級烷基低級氨基烷基、低級氨基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基低級烷基、低級鹵代烷基或者未取代或取代(即在芳基上有一至四個取代基)的芳基或低級芳基烷基，取代基選自低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；m是0至6之間的整數(shù)；n是1或2；而q表示0至2的整數(shù)；并且[N＝X]表示4至7元雜環(huán)基，X表示完成所述雜環(huán)基需要的鏈并選自O、S、CH2、CH、N、NR9和COR10；應理解當Rp是氫原子時，R3和R4一起形成3或4元的鏈。
在本文中，與烷基、烷硫基和烷氧基有關的術語“低級”指含1至6個碳原子的直鏈或支鏈飽和脂肪烴基團，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、甲硫基、乙硫基、甲氧基和乙氧基。與術語鏈烯基或鏈炔基有關的術語“低級”指含2至6個碳原子和一個或多個雙鍵或三鍵的基團，例如，乙烯基、烯丙基、異丙烯基、戊烯基、己烯基、丙烯基、乙炔基、丙炔基和丁炔基。術語環(huán)烷基是指含3至7個碳的環(huán)，例如，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。術語芳基指單、二或三環(huán)烴化合物，其中至少一個環(huán)為芳香環(huán)，每個環(huán)含最多7個碳原子，例如，苯基、萘基、蒽基、聯(lián)苯基或茚基。術語鹵素指氯、溴、碘或氟。相應于術語低級鹵代烷基、低級氰基烷基、低級硝基烷基、低級酰氨基烷基、低級肼基烷基、低級疊氮基烷基、低級芳基烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基低級烷基、低級烷硫基低級烷基和低級烷基低級磺?；榛幕鶊F分別被一個至三個鹵素、氰基、硝基、酰氨基、肼基、疊氮基、芳基、羥基、低級烷基、低級烷硫基或低級磺?；榛〈５图壨榛被珊幸粋€或兩個低級烷基，例如表示NHCH3、NHCH2CH3、N(CH3)2或N(CH3)(CH2CH3)。術語游離的、酯化的、醚化的或成鹽的羥基指OH、OCOR26、OR27基團和其醇鹽。
本發(fā)明的化合物具有兩種可能的對映異構體，即“R”和“S”構型。本發(fā)明包括這兩種對映異構體形式和它們的混合物，包括“RS”外消旋混合物。為簡便起見，當不指出結構式中的特定構型時，應理解為表示兩個對映異構體及其混合物。
對于本發(fā)明的前藥形式(其中Rp不是氫原子)，優(yōu)選通式I的產(chǎn)物。
用作起始物的取代的喜樹堿的實例參見美國專利4473692、4604463、4894956、5162532、5395939、5315007、5264579、5258516、5254690、5212317和5341745，PCT專利申請US91/08028、US94/06451、US90/05172、US92/04611、US93/10987、US91/09598、EP94/03058和EP95/00393和歐洲專利申請325247、495432、321122和540099。
含噁嗪環(huán)的此類化合物—將通式D的β羥基內(nèi)酯的化合物
其中R3是羥基，R4是H而R1、R2、R5、R18、R19和R20定義如上，用伯胺在Mannich反應條件下處理以得到式Ia的β-羥基內(nèi)酯化合物
其中R1、R2、R5、R9、R18、R19和R20定義如上。
此方法包括將起始物在伯胺如芐胺、甲醛的存在下，在酸試劑如乙酸或丙酸中，在溫度為30至80℃加熱0.5至5小時?；蛘?，將起始物的乙酸懸浮液與三-N-取代的六氫三嗪如六氫-1，3，5-三甲基三嗪、1，3，5-三乙基六氫三嗪或1，3，5-三芐基六氫三嗪一起在30至80℃加熱0.5至5小時。
—通式Ia的內(nèi)酯視具體情況而定在堿性介質中開環(huán)，以便在中和后制備式IIa的化合物
其中R1、R2、R5、R9、R17、R18、R19和R20定義如上；R16表示OR21，其中R21表示H或低級烷基；而R17表示OR6或NHR6，而R6表示H、低級烷基、環(huán)烷基、低級烷基環(huán)烷基、低級鏈烯基、低級烷基低級烷氧基或芳基或者低級烷基芳基。
—所述通式D或Ia的化合物視具體情況而定?；?，優(yōu)選用定義如上的C(O)-A-N-R22R23基團的衍生物進行酰化來制備通式Ib的β羥基內(nèi)酯化合物，即Rp不是H的通式I(本發(fā)明的前藥形式)。
—用與開環(huán)內(nèi)酯Ia相同的方法可將內(nèi)酯Ib開環(huán)以制備羥基酸IIb。
在上述方法中，如果需要可按照標準保護方法(Greene.T.，《有機合成的保護基》10-86(John Wiley & Sons 1981))保護R2、R3、R4和R5基團。如果至少R22和R23基團中的一個是H，或至少含有一個與?；椒ɑ瘜W不相容的官能團如伯或仲胺，則需要使用不受?；瘲l件影響的保護基。通常用于保護胺的保護基是叔丁氧羰基(BOC)。然后按照上述方法進行?；磻?，再將保護基裂解，例如對于BOC來說通過用三氟乙酸處理，從而制備通式(I)或(II)的化合物。保護基的使用是本領域技術人員已知的(例如，可參見Greene.T.，《有機合成的保護基》John Wiley & Sons 1981)。
式D的化合物制備如下—通式M的化合物
其中R1、R18和R19定義如上而R20表示H或鹵原子，與通式N的2-鹵代-3-喹啉-甲醇偶合，
其中R2、R3、R4和R5定義如上而X表示鹵原子，從而制備式O的化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R18、R19、R20和X定義如上；—然后將通式O的化合物環(huán)合得到定義如上的通式D的化合物。
在上述方法中，如果需要則可按照標準保護方法(Greene.T.，《有機合成的保護基》10-86(John Wiley & Sons 1981))保護R1、R2、R3和R4基團。由通式M和N的化合物開始形成化合物O的反應可按照本領域技術人員已知的方法進行，即所謂的Mitsunobu反應(參見Mitsunobu，O.等，《合成》，第1頁(1981))。通過用膦如三苯基膦和偶氮基二羧酸酯衍生物如偶氮基二甲酸二乙酯在質子惰性溶劑如四氫呋喃或N，N-二甲基甲酰胺中處理，將化合物N的羥基官能團替換為親核試劑如化合物M或其去質子衍生物?；衔颫的環(huán)合優(yōu)選在鈀催化劑(例如二乙酸鈀)的存在下，在堿性條件下(例如，視具體情況而定混合有相轉移試劑如四丁基溴化銨的堿金屬乙酸鹽)，在質子惰性溶劑如乙腈或N，N-二甲基甲酰胺中，在溫度為50至120℃下進行(R.Grigg等，《四面體》，第4003頁(1990))。
通式M的化合物可按照特征如下的方法制備
—通式如下的、其中R1和R20定義如上而R24表示鹵原子或低級烷氧基的吡啶的羰基用縮醛官能團來保護，
從而制備通式F的化合物
其中R1、R20和R24定義如上而Z和Z′基團獨立地表示低級烷基或一起形成2至4元的飽和烴—將羥甲基官能團引入通式F的化合物中從而制備通式G的化合物
其中R1、R20、R24、Z和Z′定義如上，—然后保護通式G化合物的醇官能團以制備通式H的化合物
其中R1、R20、R24、Z和Z′定義如上而R25表示醇官能團的保護基。
—將通式H的化合物的縮醛脫保護以制備通式I′的化合物
其中R1、R20、R24和R25定義如上，—用官能團化烷基化試劑處理化合物I′的化合物從而制備通式J
其中R1、R20、R24和R25定義如上，R17、R18和R19定義如通式II，—通式J化合物的保護基R25裂解以制備通式K的化合物
其中R1、R18、R19、R20和R24定義如上，而R17表示OR6或NHR6，R6表示H、低級烷基、環(huán)烷基、低級烷基環(huán)烷基、低級鏈烯基、低級烷基低級烷氧基或芳基或者低級烷基芳基，—將通式K化合物環(huán)合為通式L的化合物
其中R1、R18、R19、R20和R24定義如上，并最后—化合物L的R24基團轉變?yōu)轸驶?，得到通式M的化合物
其中R1、R18、R19和R20定義如上。
4-酰基-2-鹵代吡啶(例如按照Lammattina J.L.《雜環(huán)化學雜志》20，第553頁(1983)獲得)的羰基官能團優(yōu)選被縮醛官能團，優(yōu)選環(huán)縮醛保護，該保護按照本領域技術人員已知方法(Greene.T.，《有機合成的保護基》10-86(John Wiley & Sons 1981))進行。用鈉或鉀的醇化物在質子惰性溶劑(例如，乙腈)或制備該醇化物的醇中，在溫度為0℃至100℃，處理如上制備的中間體，得到通式F的化合物。將其3位通過用芳基或烷基鋰(例如，基鋰)在醚溶劑如四氫呋喃中，在-100至0℃進行處理來鋰化。將甲?；H電試劑如N，N-二甲基甲酰胺加入到如此得到的鋰化中間體中，水解后，將如此得到的醛用還原劑如硼氫化鈉處理從而制備通式G的化合物。按照本領域技術人員已知的標準條件進行化合物G的醇官能團的保護，從而制備通式H的化合物。醇官能團的保護基的實例包括形成醚的那些基團(即甲基、甲氧基甲基、四氫吡喃基、2-甲氧基乙氧基甲基、芐氧基甲基、叔丁基和被取代或未取代的芐基)，以及形成酯(甲酸酯、乙酸酯和異丁酸酯)的那些基團。伯羥基的保護基的其它實例參見Greene.T.，《有機合成的保護基》10-86(John Wiley & Sons 1981)。為了制備通式I′化合物而將通式H化合物脫保護的過程在維持R25基團完整性的選擇條件下進行，例如，通過在酸性條件下(如用三氟乙酸)處理。官能團的保護和脫保護的所選條件是本領域技術人員已知的(Greene.T.，《有機合成的保護基》10-86(John Wiley & Sons 1981))。用官能團化烷基化試劑處理化合物I′制備通式J的β-羥基酯的反應可使用烯醇鋰或羧酸酯的鋅衍生物在無水質子惰性溶劑如四氫呋喃中進行。通式J化合物的保護基R25在本領域技術人員已知的脫保護條件下斷裂從而制備通式K的化合物。例如，當R25是芐基時，將通式J化合物的醇溶液和加入其中的鈀催化劑置于壓力為0.5至10巴的氫氣氛中。如此得到的通式K化合物的環(huán)合反應可在酸性條件下進行(例如，通過用三氟乙酸或溶解于無水溶劑如二氯甲烷或二噁烷中的氫氯酸氣體處理)來制備為7元環(huán)的β-羥基內(nèi)酯環(huán)，例如通式L的化合物。通式L的化合物可轉變?yōu)橥ㄊ組的吡啶酮，例如，通過用熱氫氯酸處理，或通過用三甲基碘硅烷處理。
通式N的2-鹵代-3-喹啉甲醇可由通式P的N-乙酰苯胺開始制備，
其中R2、R3和R4定義如通式I和II化合物中所述。在下面的方法中，如果需要則可按照標準保護方法(Greene.T.，《有機合成的保護基》10-86(John Wiley & Sons 1981))保護R2、R3和R4基團。
于是按照下面的方法可得到式N的化合物通過用?；噭┤缫宜狒幚韺⑺鍪絇的苯胺N-乙?；?。將如此制得的N-乙?；桨吩?0至100℃，優(yōu)選75℃下，用本領域技術人員已知的所謂Vilsmeyer試劑(由磷酰氧氯在0至10℃作用于N，N-二甲基甲酰胺制得)處理從而制備相應的2-氯-3-喹啉甲醛(例如，參見Meth-Cohn等，《化學會會志》，Perkin Trans.I，第1520頁(1981)；Meth-Cohn等，《化學會會志》，Perkin Trans.I，第2509頁(1981)和Nakasimhan等，《美國化學會會志》112，第4431頁(1990))。通過在惰性溶劑如乙腈中在碘或溴鹽(例如碘化鈉或四丁基溴化銨)的存在下將產(chǎn)物加熱，2-氯-3-喹啉甲醛2位上的氯可被碘或溴取代?？赡苄枰哿康乃崛鐫恹}酸來催化此轉化過程。該2-鹵代-3-喹啉甲醛很容易還原為相應的通式N的2-鹵代-3-喹啉甲醇，該方法在本領域技術人員已知標準條件下進行，例如在醇溶劑(例如甲醇)中用硼氫化鈉在溫度為0至40℃下處理。
式N的化合物還可按照下面的方法制備定義如上的通式P的苯胺通過與腈(如氯代乙腈或丙腈)在三氯化硼和另一路易斯酸如三氯化鋁、四氯化鈦或二乙基氯化鋁的存在下，在質子惰性溶劑或質子惰性溶劑的混合物中反應，然后水解(參見Sugasawa T.等，《美國化學會會志》100，第4842頁(1978))而被?；?。然后用乙基丙二酰氯在質子惰性溶劑如乙腈中在堿如三乙胺的存在下處理如上制得的中間體，然后用堿金屬醇化物如甲醇鈉在甲醇中處理，從而制備4位取代的2-羥基-3-喹啉甲酸乙酯。通過用磷酰氧氯處理將其轉變?yōu)?-氯-3-喹啉甲酸乙酯。當喹啉的4位帶有氯甲基時，可通過用仲胺如二甲基胺、N-甲基哌嗪、嗎啉或哌啶處理進行親核取代。然后用二異丁基氫化鋁在質子惰性溶劑如二氯甲烷中將此2-氯-3-喹啉甲酸乙酯還原得到通式N的2-氯-3-喹啉甲醇。中間體化合物(N)的類似物已描述于文獻中，特別是PCT申請95/05427中。
本發(fā)明的某些化合物可按照常規(guī)方法制備為藥用鹽的形式。例如，可接受的鹽包括但不限于與無機酸如鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氫溴酸和硝酸或有機酸如乙酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、檸檬酸、乳酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、1，1’-亞甲基-二(2-羥基-3-萘甲酸)、水楊酸、草酸和硬脂酸形成的加成鹽。當它們可利用時，與堿如氫氧化鈉或氫氧化鉀形成的鹽也是本發(fā)明的一部分。藥用鹽的其它實例，請參見“藥用鹽”，《藥物學雜志》661(1977)。
本發(fā)明的化合物具有有益的藥學性質。因此本發(fā)明的化合物對拓撲異構酶I和/或II具有抑制作用并具有抗腫瘤活性。現(xiàn)有技術暗示本發(fā)明的化合物具有抗寄生蟲和/或抗病毒活性。本發(fā)明的化合物因而可被用于不同的治療應用中。
在下文的實驗部分，舉例說明了本發(fā)明化合物的藥學性質。
通過給患者使用治療有效量的式(I)或(II)化合物，該化合物可抑制患者例如哺乳動物如人體內(nèi)的拓撲異構酶，例如I和/或II型。
本發(fā)明的化合物還具有抗腫瘤活性。通過給患者使用治療有效量的式(I)或(II)化合物，它們可用于治療腫瘤，例如表達拓撲異構酶的腫瘤。腫瘤或癌癥的實例包括食道、胃、腸、直腸、口腔、咽、喉、肺、結腸、乳腺、子宮、子宮內(nèi)膜、卵巢、前列腺、睪丸、膀胱、腎、肝、胰腺、骨、結締組織、皮膚、眼、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)部位發(fā)生的癌癥，以及甲狀腺癌、白血病、何杰金氏病、除了與何杰金氏病有關的淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等。
通過抑制血鞭毛蟲(例如在錐蟲或利什曼蟲感染)或通過抑制瘧原蟲(如在瘧疾中)，它們可用于治療寄生蟲感染，還可治療病毒感染和疾病。
這些性質使式(I)或(II)的產(chǎn)物適于藥物應用。本發(fā)明的主題還有作為藥物的上述式(I)或(II)的產(chǎn)物和所述式(I)或(II)產(chǎn)物與藥用無機或有機酸形成的加成鹽，以及含至少一種限定如上的藥物作為活性成分的藥物組合物。
因此，本發(fā)明涉及含有與按照給藥方法(例如口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、透皮或皮下)選擇的藥用載體混合的、本發(fā)明化合物或其與藥用酸形成的加成鹽的藥物組合物。該藥物組合物(例如治療)可以是固體、液體、脂質體或脂質膠束。
該藥物組合物可以是固體形式，例如，散劑、丸劑、顆粒劑、片劑、脂質體、明膠膠囊或栓劑。此丸劑、片劑或明膠膠囊可用某種物質包衣，該物質能在胃中保護此組合物在足夠的時間內(nèi)不受胃酸或酶的作用，使該組合物以未被消化的形式進入小腸。該化合物還可局部使用，例如在腫瘤的發(fā)病部位。該化合物還可按照緩釋的方法給藥(例如緩釋組合物或輸液泵)。適宜的固體載體，例如，可以是磷酸鈣、硬脂酸鎂、碳酸鎂、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮和蠟。含有本發(fā)明化合物的該藥物組合物還可以是液體形式，例如，溶液、乳液、混懸液或緩釋制劑。適宜的液體載體可以是，例如，水、有機溶劑如甘油或二醇如聚乙二醇，以及它們與水以不同比例形成的混合物。
本發(fā)明的主題還包括定義如上的式(I)或(II)的產(chǎn)物在制備下述藥物方面的用途抑制拓撲異構酶并特別是I或II型拓撲異構酶的藥物，治療腫瘤的藥物，治療寄生蟲感染的藥物以及治療病毒感染的藥物。
用于治療上述疾病或紊亂的本發(fā)明化合物的劑量，根據(jù)給藥方法，患者的年齡和體重以及患者的身體狀況變化，并最后由主治醫(yī)或獸醫(yī)決定。由主治醫(yī)或獸醫(yī)確定的量在此被稱為“治療有效量”。
除非用其它方式限定，本文中所有科技術語與本發(fā)明所屬領域普通技術人員通常理解的含義相同。同樣，本文中提及的所有出版物、專利申請、所有專利和所有其它參考文獻引入作為參考。
下列實施例用來說明上述方法，而在任何情況下都不能被看作對本發(fā)明范圍的限制。
實驗部分制備例15-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮1.a. 4-乙基-3，4-二羥基-1H-吡喃并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-14(4H，12H)-酮將硼氫化鈉(14g，370mmol)分批加入到(S)-(+)-喜樹堿(14g，40mmol，可購自不同的地方如Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，WI))在甲醇(750ml)中的懸浮液中，并將所得混合物溫和地加熱至55℃從而得到透明的溶液，再將此溶液室溫攪拌16小時。然后，減壓蒸發(fā)掉溶劑，在水(250ml)中回收此殘余物，加入乙酸(21ml)中和，并在4℃放置2小時。將所得懸浮液過濾并用冷水、丙酮和乙醚連續(xù)洗滌，得到的產(chǎn)物經(jīng)減壓干燥后，形成白色固體狀目的化合物，m.p.280℃。
1.b. 8-甲酰基氧基甲基-7-丙?；械岵1，2-b]喹啉-9(11H)-酮將偏高碘酸鈉(14g，65mmol)的水(140ml)溶液滴加到4-乙基-4，5-二羥基-1H-吡喃并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-14(4H，12H)-酮(13.4g，38mmol)的冰醋酸(720ml)懸浮液中，并將所得溶液室溫攪拌1小時。然后，將此反應混合物倒入冰/水混合物(650ml)中，并再將所得懸浮液攪拌半小時，然后過濾并用水、異丙醇和乙醚連續(xù)洗滌，減壓干燥后，得到產(chǎn)物(11.5g)，其形式為淡黃色固體，m.p.＞200℃(分解)。
1.c.β-乙基-β-羥基-β-(8-羥基甲基-9-氧代(11H)-中氮茚并[1，2-b]喹啉-7-基)丙酸叔丁基酯將在無水乙醚(50ml)在氬氣氛下用磁力攪拌器攪拌的鋅(6.5g，100mmol)的懸浮液，通過滴加氯代三甲基硅烷(0.75ml，5.7mmol)活化。室溫繼續(xù)攪拌15分鐘并將此反應介質加熱回流。移除熱浴并滴加溴代乙酸叔丁酯(15ml，100mmol)，滴加速度確保持續(xù)回流。再將其置于外部熱源中并繼續(xù)加熱1小時。將由Reformatsky試劑得到的醚溶液放置冷卻至室溫，然后在氬氣氛下用導管將其轉移至8-甲?；趸谆?7-丙酰基中氮茚并[1，2-b]喹啉-9(11H)-酮(1.6g，4.7mmol)的無水四氫呋喃(40ml)懸浮液中。將此反應混合物回流下攪拌1小時，然后冷卻至室溫并通過加入飽和氯化銨(100ml)停止反應并用氯仿(3×100ml)進行萃取。用硫酸鈉干燥合并的氯仿萃取物，蒸發(fā)并在硅膠柱上(1-2％甲醇/二氯甲烷)進行色譜純化，得到0.64g產(chǎn)物(31％)，其形式為淡黃色固體，m.p.146-149℃。NMR-1H(CDCl3)0.93(t，3H)；1.37(s，9H)；1.99(m，2H)；2.97(dd，2H)；3.5(se，1H)；5.10(s，2H)；5.24(s，2H)；7.40(s，1H)；7.59(t，1H)；7.83(t，1H)；7.90(d，1H)；8.20(d，1H)；8.34(s，1H).NMR-C13(CDCl3)8.18；27.90；34.59；45.34；49.91；58.55；77.39；82.42；100.52；127.67；127.97；128.10；128.64；129.44；129.79；130.42；130.99；142.86；148.69；152.75；155.16；162.38；172.24.IR(KBr)764；1016；1157；1580；1651；1726.
1.d. 5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-lH-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮將β-乙基-β-羥基-β-(8-羥基甲基-9-氧代(11H)-中氮茚并[1，2-b]喹啉-7-基)丙酸叔丁基酯(1.45g，3.32mmol)溶解于無水二氯甲烷(25ml)中并用氯化氫的飽和二氯甲烷溶液(100ml)處理。將所得混合物在-20℃維持16小時。濾出沉淀，用甲醇洗滌并減壓干燥，得到662mg(55％)標題化合物，其形式為黃色固體，m.p.＞300℃。NMR-1H(DMSO)0.90(t，3H)；1.20(q，2H)；3.27(dd，2H)；5.29(s，2H)；5.49(dd，2H)；7.42(s，1H)；7.73(t，1H)；7.90(t，1H)；8.16(t，2H)；8.71(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.45；36.48；42.54；50.68；61.44；73.34；99.78；122.71；127.83；128.15；128.75；129.08；130.07；130.61；131.81；144.66；148.04；152.80；155.91；159.26；172.08.IR(KBr)761；1127；1204；1285；1580；1653；1757.
制備例25-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮的拆分將β-乙基-β-羥基-β-(8-羥基甲基中氮茚并[1，2-b]喹啉-9-(11H)-酮-7-基)丙酸(19.5g，51mmol)和L-(-)-α-甲基芐基胺(12.12g，100mmol)在純乙醇(1l)中的混合物加熱至沸騰，加熱的同時過濾并將其放置68小時。濾出沉淀并用乙醇和乙醚洗滌得到9.8g白色固體。通過在手性固定相上高壓液相色譜(在Chiral-AGP柱(Chromtech，Stockholm，Sweden)上進行“手性HPLC”100×4mm，洗脫液為2％乙腈的10mM磷酸緩沖液pH6.9，在4.5和7.5分鐘出現(xiàn)洗脫峰)分析到兩個峰，其積分面積分別占兩個峰總面積的24％和76％。將此固體在93％乙醇(350ml)中回流，然后放置48小時。濾出此沉淀，然后用乙醇和乙醚洗滌得到4.8g白色固體，用手性HPLC分析產(chǎn)生兩個峰，分別占兩個峰總面積的9％和91％。用50％乙醇(48ml)回流并再放置48小時。濾出沉淀并用乙醇和乙醚洗滌得到2.7g白色固體，用手性HPLC分析產(chǎn)生兩個峰，分別占兩個峰總面積的3％和97％。將此固體在50％乙醇(22ml)中回流，然后放置48小時。濾出此沉淀并再用乙醇和乙醚洗滌得到1.6g白色固體，用手性HPLC分析產(chǎn)生兩個峰，分別占兩個峰總面積的1％和99％。將富集非對映異構體的所得鹽溶在蒸餾水(20ml)中，并用乙酸(0.35ml，6.4mmol)處理15分鐘。濾出所得沉淀，用水、丙酮和乙醚洗滌，然后在80℃真空干燥得到1.1g白色固體。將其溶在純乙醇(55ml)中并加入濃鹽酸(11.5N，11ml)得到黃色溶液，將其在室溫攪拌68小時。濾出所得沉淀并用水、乙醇和乙醚洗滌，然后在80℃真空干燥得到770mg富集對映異構體的5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮。通過手性HPLC(Chiral-AGP柱，用含2至5％乙腈的10mM磷酸緩沖液pH6.9進行梯度洗脫，在15分鐘和20分鐘出現(xiàn)洗脫峰)分析表明對映體過量98％。用D-(+)-α-甲基芐基胺替代L-(-)-α-甲基芐基胺再進行上述方法。這樣便得到5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮的另一個對映體。
制備例35，12-二乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮除步驟1.a.用7-乙基喜樹堿(Sawada等，《藥物化學通報》392574(1991))代替喜樹堿外，按照類似于制備例1的方法制備此化合物。得到的標題化合物是鮮黃色固體，m.p.＞270℃。NMR-1H(DMSO)0.92(t，3H)；1.39(t，3H)；1.93(q，2H)；3.08(d，2H)；3.25(q，2H)；3.51(d，2H)；5.32(s，2H)；5.52(dd，2H)；7.42(s，1H)；7.76(t，1H)；7.89(t，1H)；8.18(d，1H)；8.32(d，1H).NMR-C13(DMSO)8.46；14.15；22.42；36.50；42.54；49.95；61.45；73.35；99.68；122.61；124.27；126.76；127.70；128.27；129.92；130.18；145.17；145.82；148.57；152.15；155.89；159.26；172.08.
制備例45-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮4.a. 2-乙基-2-(2-甲氧基-4-吡啶基)-1，3-二氧雜環(huán)戊烷用Dean Stark儀器從得自Lamattina，J.L.《雜環(huán)化學雜志》20，第553頁(1983)的2-氯-4-丙?；拎?10g，59mmol)、乙二醇(20ml)和對甲苯磺酸(250mg)在甲苯(150ml)中的混合物中以共沸的方式蒸出水(過夜)。然后減壓除去溶劑，用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)中和此酸并用乙醚萃取此產(chǎn)物。用鹽水洗滌合并的醚萃取物，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，得到13.3g(96％)被羰基保護的粗品，將其與3當量的甲醇鈉在乙腈中加熱回流至反應徹底(通過薄層色譜二氧化硅，叔丁基甲基醚/己烷(TBMO/HX)50/50檢測)。然后過濾此乙腈溶液并蒸發(fā)。在乙醚中溶解此殘余物，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，得到棕色油狀物，將其蒸餾(70-75℃，0.04毫巴)；得到10.7g(總收率81％)產(chǎn)物(F)，為透明的油狀物。
4.b. 2-乙基-2-(3-羥甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-1，3-二氧雜環(huán)戊烷在-78℃氬氣氛下，用導管將叔丁基鋰(1.7M戊烷溶液，100ml，170mmol)滴加到溴代(13ml，85mmol)的無水四氫呋喃(300ml)溶液中。將所得白色沉淀在-78℃攪拌1小時，然后加入2-乙基-2-(2-甲氧基-4-吡啶基)-1，3-二氧雜環(huán)戊烷(10g，44.8mmol)，再將此反應混合物在-78℃攪拌15分鐘，在0℃攪拌1小時并在室溫攪拌1小時。再將其冷卻至-78℃，加入無水N，N-二甲基甲酰胺(100mmol)，將此反應混合物加溫至室溫并攪拌16小時，之后通過薄層色譜分析(二氧化硅，TBMO/HX50/50)說明起始物徹底反應。用飽和氯化銨停止反應并用乙醚(200ml，50ml，50ml)萃取此反應混合物。用硫酸鈉干燥合并的萃取物并蒸發(fā)，得到黃色油狀物，通過柱色譜(二氧化硅，TBMO/HX0/100至5/95洗脫此衍生物，然后用20/80至50/50洗脫此產(chǎn)物)純化得到中間體醛(7g)。將此醛溶解于甲醇(100ml)并用硼氫化鈉(5g，132mmol)處理，并將所得混合物攪拌至通過薄層色譜控制分析說明此中間體醛徹底反應(約1小時)。然后蒸發(fā)掉溶劑，并在乙醚中溶解此殘余物，用水和鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)掉溶劑。將此殘余物進行柱色譜(二氧化硅，TBMO/HX10/90至50/50)純化得到7g(總收率62％)產(chǎn)物(G)，為黃色油狀物。
4.c. 2-(3-芐氧基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-2-乙基-1，3-二氧戊環(huán)將2-乙基-2-(3-羥甲基-2-甲氧基-4-吡啶)-1，3-二氧雜環(huán)戊烷(7g，30mmol)和芐基氯(5ml，45mol)的無水四氫呋喃(50ml)溶液，滴加到氫化鈉(80％在礦物油中，1.85g，6lmmol)的無水四氫呋喃(100ml)懸浮液中，并將此反應混合物在回流狀態(tài)下保持16小時。然后將此反應混合物冷卻至室溫，用水(50ml)停止反應并減壓濃縮此反應混合物。將此殘余物溶解于乙醚(150ml)中并用水和鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。通過柱色譜(二氧化硅，TBMO/HX5/95至20/80)進行純化得到9g(87％)被芐基保護的產(chǎn)物(H)，為透明油狀物。
4.d. 1-(3-芐氧基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-丙烷-1-酮將2-(3-芐氧基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-2-乙基-1，3-二氧雜環(huán)戊烷(9g，27mmol)用三氟乙酸(10ml)和水(5ml)在120℃溫度的熱浴中處理3小時。將此反應混合物減壓濃縮，通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液中和殘余的痕量的酸。用乙醚進行萃取，然后通過柱色譜(二氧化硅，TBMO/HX10/90)純化得到5.5g(70％)產(chǎn)物(I)。
4.e.β-乙基-β-羥基-β-(3-芐氧基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-丙酸叔丁酯將溴代乙酸叔丁酯(13ml，80mmol)滴加到回流狀態(tài)下的鋅(5.3g，80mmol，用6N HCl活化10秒，然后依次用水洗滌至pH為中性，用丙酮和乙醚洗滌)的無水四氫呋喃(60ml)懸浮液中。滴加完畢后，將此反應介質再維持回流10分鐘。然后，加入1-(3-芐氧基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-丙烷-1-酮(5.8g，20mmol)的無水四氫呋喃(20ml)溶液并將此反應混合物再回流攪拌1小時。在0℃用飽和氯化銨水溶液(100ml)停止反應，并用乙醚萃取此反應混合物。用硫酸鈉干燥合并的萃取物并蒸發(fā)，得到黃色油狀物，將其通過柱色譜(二氧化硅，TBMO/HX5/95至10/90)純化得到叔丁基酯(J)(7g，95％)，為透明油狀物。
4.f.β-乙基-β-羥基-β-(3-羥基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-丙酸叔丁酯將β-乙基-β-羥基-β-(3-芐氧基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-丙酸叔丁酯(1g，2.5mmol)在常壓和室溫下用5％鈀/碳作催化劑(50mg)用純乙醇作溶劑(10ml)進行氫解。反應一旦終止(6小時)，就濾出催化劑并蒸發(fā)掉溶劑，得到0.7g(90％)產(chǎn)物(K)，其純度足以用于隨后的反應。
4.g. 5-乙基-1，5-二氫-5-羥基-9-甲氧基-氧雜環(huán)庚三烯并[3，4-c]吡啶-3(4H)-酮將β-乙基-β-羥基-β-(3-羥基甲基-2-甲氧基-4-吡啶基)-丙酸叔丁酯(8.8g，28mmol)用三氟乙酸(30ml)室溫處理3小時。蒸發(fā)掉揮發(fā)成分并將此殘余物通過柱色譜(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇100/0至98/2)進行純化，得到透明油狀物，用甲苯處理后，得到5.9g(89％)產(chǎn)物(L)，為白色結晶，m.p.97-98℃。
4.h. 5-乙基-1，5-二氫-5-羥基-氧雜環(huán)庚三烯并[3，4-c]吡啶-3，9(4H，8H)-二酮將5-乙基-1，5-二氫-5-羥基-9-甲氧基-氧雜環(huán)庚三烯并[3，4-c]吡啶-3(4H)-酮(0.5g，2.1mmol)在1N鹽酸(20ml)中加熱回流9小時。將此反應混合物減壓濃縮并通過加入并蒸發(fā)甲苯將此殘余物干燥，然后在五氧化二磷存在下減壓將其放置過夜。將所得油狀物溶解于無水乙腈(5ml)中，并在氬氣氛下攪拌24小時。濾出沉淀并干燥，得到0.23g(49％)白色固體(M)，m.p.118-119℃。
4.i. 2-氯-6，7-二氟-3-喹啉-甲醇使用Meth-Cohn及其同事在J.Chem.Soc.Perkin Trans.I.第1520頁(1981)；Meth-Cohn在J.Chem.Soc.Perkin Trans.I.第2509頁(1981)描述的方法。將3，4-二氟-N-乙酰基苯胺(38g，22mmol)加入到通過向無水二甲基甲酰胺(34ml，44mmol)中滴加磷酰氯氧(103ml，1.1mmol)制備的Vilsmeyer試劑中，用水/冰浴冷卻并在氬氣氛下攪拌0.5小時。將所得混合物在70℃加熱16小時。冷卻至室溫后，將此反應混合物加入到冰和水(400ml)的混合物中，并繼續(xù)攪拌2小時，然后過濾并用水、乙醇和乙醚連續(xù)洗滌制備9g 2-氯-6，7-二氟喹啉-3-甲醛，為黃色固體，m.p.222-224℃。用硼氫化鈉(2g，52mmol)在甲醇(400ml)中在室溫處理此中間體0.5小時，然后通過加入乙酸(2ml)破壞過量的試劑。減壓除去此溶劑，將此殘余物加入到乙酸乙酯溶液中并用稀碳酸氫鈉、水和飽和氯化鈉水溶液依次洗滌。用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮有機相。用1，2-二氯乙烷將所得固體重結晶得到8g 2-氯-6，7-二氟-3-喹啉-甲醇，為米黃色固體。
4.j. 5-乙基-8-(2-氯-6，7-二氟-3-喹啉甲基)-1，5-二氫-5-羥基-氧雜環(huán)庚三烯并[3，4-c]吡啶-3，9(4H，8H)-二酮將偶氮基二甲酸二乙酯(570μl，3.6mmol)在5分鐘內(nèi)滴加到5-乙基-1，5-二氫-5-羥基-氧雜環(huán)庚三烯并[3，4-c]吡啶-3，9(4H，8H)-二酮(400mg，1.79mmol)、步驟4.i.得到的化合物(770mg，2.23mmol)和三苯基膦(934mg，3.58mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(45ml)溶液中，并將所得混合物在室溫在氬氣氛下攪拌16小時。然后減壓濃縮此反應混合物并將此殘余物溶解于乙醚(100ml)中。用鹽水(4×50ml)洗滌所得溶液，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。將此殘余物通過柱色譜(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇99/1至98/2)進行色譜純化，得到650mg(66％)產(chǎn)物(O)，為白色固體，m.p.165-167℃。
4.k. 5-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮將5-乙基-8-(2-氯-6，7-二氟-3-喹啉甲基)-1，5-二氫-5-羥基-氧雜環(huán)庚三烯并[3，4-c]吡啶-3，9(4H，8H)-二酮(600mg，1.1mmol)、四丁基溴化銨(352mg，1.1mmol)、醋酸鈉(359mg，4.4mmol)和醋酸鈀II(98mg，0.43mmol)溶解于無水乙腈(40ml)中并在90℃在氬氣氛下加熱16小時。冷卻至室溫后，從紅色溶液中分離出白色沉淀。濾出此沉淀并減壓干燥。將此粗品懸浮于水中，過濾并用五氧化二磷減壓干燥，得到250mg標題化合物，為米色固體，m.p.＞250℃。NMR-1H(DMSO)0.91(t，3H)；1.87(m，2H)；3.08(d，1H)；3.51(d，1H)；4.45(s，4H)；5.19(s，2H)；5.47(dd，2H)；6.02(se，1H)；7.33(s，1H)；7.54(s，1H)；7.55(s，1H)；8.43(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.43；36.47；42.54；50.52；61.43；64.43(2C)；73.31；99.07；112.27；113.14；122.00；124.24；128.18；129.74；144.59；145.01；145.33；147.63；150.88；155.88；159.23；172.07.
制備例55-乙基-4，5-二氫-5，10-二羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮用氫氣在常壓和室溫下以10％鈀/碳作催化劑(60mg)和三氟乙酸作溶劑(15ml)處理10-芐氧基-5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3’，4’6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮(370mg，0.79mmol)。一旦反應停止(16小時)，就向此反應混合物中加入二氯甲烷(50ml)和甲醇(50ml)，濾出催化劑并減壓蒸發(fā)揮發(fā)組分，這樣得到含痕量三氟乙酸的標題粗產(chǎn)物。通過與1，4-二噁烷共蒸餾除去痕量的三氟乙酸。得到桔黃色固體產(chǎn)物，m.p.150℃(分解)，其純度足以用于隨后的合成。NMR-1H(DMSO)0.89(t，3H)；1.85(q，2H)；3.02(d，1H)；3.45(d，1H)；5.19(s，2H)；5.37(d，1H)；5.50(d，1H)；5.98(se，1H)；7.26(s 1H)；7.31(s，1H)；7.40(d，1H)；8.00(d，1H)；8.42(s，1H)；10.32(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.47；36.50；42.61；50.57；61.46；73.35；98.84；109.02；121.83；123.18；129.50；129.85；130.12；130.80；143.39；145.10；149.69；155.97；156.82；159.30；172.11.
制備例65-乙基-9-氟-4，5-二氫-5-羥基-10-甲氧基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3-氟-4-甲氧基苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.89(t，3H)；1.85(q，2H)；3.08(d，1H)；3.49(d，1H)；4.00(s，3H)；5.25(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.00(s，1H)；7.32(s，1H)；7.72(d，1H)；7.91(d，1H)；8.58(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.43；36.48；42.51；50.68；56.60；61.42；73.29；99.25；108.68；113.52；122.23；126.33；129.99；130.30；143.79；144.70；148.42；151.18；153.19；155.81；159.20；172.06.IR(KBr)1259；1503；1602；1737.
制備例79-氯-5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-10-甲基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3-氯-4-甲氧基苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；2.55(s，3H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；5.25(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.05(s，1H)；7.39(s，1H)；8.10(s，1H)；8.20(s，1H)；8.60(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.43；20.20；36.47；42.49；50.67；61.41；73.28；99.87；122.82；126.98；127.99；129.60；130.53；131.08；135.64；136.56；144.39；147.11；153.10；155.85；159.18；172.03.IR(KBr)1208；1479；1606；1656；1724.
制備例88-乙基-2，3，8，9-四氫-8-羥基-10H，12H-[1，4]二喔星并(dioxino)[2，3-g]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3，4-亞乙基二氧基苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.47(d，1H)；5.25(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.05(s，1H)；7.39(s，1H)；8.15(q，1H)；8.25(q，1H)；8.68(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.41；36.45；42.48；50.68；61.40；73.25；99.92；114.44；115.42；115.58；122.96；125.52；130.56；131.46；144.21；145.25；142.36；153.41；155.85；159.15；172.00.IR(KBr)1266；1512；1581；1618；1751.
制備例97-乙基-7，8-二氫-7-羥基-9H，11H-[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯并[4，5-g]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-9，12(14H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3，4-亞甲基二氧基苯胺開始反應得到此化合物，為霜狀固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；5.20(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.00(s，1H)；6.30(s，2H)；7.30(s，1H)；7.49(d，2H)；8.45(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.43；36.49；42.56；50.58；61.42；73.31；98.87；102.75；103.33；104.92；121.76；125.74；128.59；130.33；145.08；146.69；148.78；150.19；151.49；155.90；159.24；172.08.IR(KBr)1248；1459；1606；1731.
制備例109-氯-5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-10-甲氧基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3-氯-4-甲氧基苯胺開始反應得到此化合物，為白色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；4.01(s，3H)；5.22(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.02(s，1H)；7.31(s，1H)；7.68(s，1H)；8.20(s，1H)；8.55(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.22；36.27；42.30；50.48；56.69；61.23；73.08；99.16；107.44；122.16；127.12；128.12；129.25；130.02；130.53；143.29；144.37；151.12；153.29；155.71；158.98；171.84.IR(KBr)1056；1256；1483；1592；1657；1747.
制備例115-乙基-4，5-二氫-5-羥基-10-甲氧基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由4-甲氧基苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；3.95(s，3H)；5.28(s，2H)；5.40(d，1H)；5.51(d，1H)；6.00(s，1H)；7.38(s，1H)；7.51(d，2H)；8.07(d，1H)；8.55(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.45；36.48；42.51；50.64；55.92；61.42；73.33；99.01；106.49；122.02；123.19；129.59；130.20；130.43；144.17；144.94；150.40；155.92；158.31；159.26；172.07.IR(KBr)1251；1604；1655；1735.
制備例129，11-二氯-5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3，5-二氯苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；5.30(s，2H)；5.41(d，1H)；5.55(d，1H)；6.08(s，1H)；7.41(s，1H)；8.05(s，1H)；8.21(s，1H)；8.91(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.39；36.45；42.51；51.03；61.39；73.25；100.62；123.55；124.63；127.60；128.08；128.56；132.06；132.19；134.53；143.77；148.80；154.88；155.82；159.13；171.98.IR(KBr)1064；1275；1586；1651；1743.
制備例135-乙基-9-氟-4，5-二氫-5-羥基-10-甲基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由3-氟-4-甲基苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.89(t，3H)；1.85(q，2H)；2.49(s，3H)；3.08(d，1H)；3.49(d，1H)；5.21(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.05(s，1H)；7.39(s，1H)；7.87(d，1H)；8.05(d，1H)；8.61(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.40；15.14；36.45；42.52；50.60；61.41；73.28；99.71；112.00；122.66；125.38；127.66；129.59；130.28；144.49；147.88；152.88；155.85；159.18；162.25；172.02.IR(KBr)1054；1580；1651；1760.
制備例145-乙基-10-氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由4-氟苯胺開始反應得到此化合物，為白色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；5.29(s，2H)；5.39(d，1H)；5.55(d，1H)；6.30(s，1H)；7.39(s，1H)；7.80(q，1H)；7.99(q，1H)；8.23(q，1H)；8.68(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.40；36.46；42.48；50.66；61.41；73.31；99.68；111.83；122.75；128.93；130.93；131.22；131.93；144.46；145.27；152.60；155.89；159.21；172.04.IR(KBr)1209；1589；1659；1739.
制備例1510-氯-5-乙基-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由4-氯苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.47(d，1H)；5.25(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.05(s，1H)；7.39(s，1H)；7.89(d，1H)；8.19(d，1H)；8.29(s，1H)；8.67(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.40；36.46；42.47；50.70；61.42；73.31；100.00；122.96；127.31；127.42；128.87；131.11；132.12；144.34；146.53；153.38；155.88；159.20；172.04.IR(KBr)1069；1483；1606；1741.
制備例169-氯-5-乙基-10-氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4i、4j和4k的方法，由4-氯-3-氟苯胺開始反應得到此化合物，為黃色固體，m.p.＞250℃.NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.07(d，1H)；3.45(d，1H)；5.25(s，2H)；5.39(d，1H)；5.51(d，1H)；6.05(s，1H)；7.40(s，1H)；8.20(d，1H)；8.40(d，1H)；8.68(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.38；36.47；42.58；50.71；61.40；73.26；99.99；113.59；123.09；124.28；127.74；130.64；131.31；144.13；145.08；153.57；154.13；155.84；156.61；159.14；172.00.IR(KBr)1488；1583；1655；1743.
制備例175，12-二乙基-9-氟-4，5-二氫-5-羥基-10-甲氧基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮17.a. 5-氟-4-甲氧基-2-丙酰基苯胺按照Sugasawa T，Toyoda T，Adachi M，Sasakura K，《美國化學會會志》，100(1978)，第4842-4852頁得到此產(chǎn)物。在氮氣氛下，在0℃，向3-氟-4-甲氧基苯胺(20g，142mmol)的無水二氯甲烷(200ml)溶液中，滴加三氯化硼(1M在庚烷中，156ml，156mmol)。將這樣獲得的粉紅色懸浮液攪拌5分鐘，然后滴加丙腈(33ml，420mmol)，再以小批量加入三氯化鋁(20.8g，156mmol)。將此反應介質加熱回流3小時，冷卻至0℃，小心地加入2N鹽酸(100ml)進行水解，然后加熱回流45分鐘。冷卻至0℃后，濾出所得沉淀，用二氯甲烷洗滌，然后在水(300ml)中回收。將此水相pH調節(jié)至堿性，用二氯甲烷萃取，再用乙酸乙酯萃取。用硫酸鎂干燥有機相，然后蒸發(fā)得到粗品，將此粗品通過柱色譜(二氧化硅，乙酸乙酯/庚烷1/99至20/80)進行純化。得到15.3g黃色固體。NMR-1H(CDCl3)1.20(t，3H)；2.92(q，2H)；3.83(s，3H)；6.2(s，2H)；6.40(d，2H)；7.32(d，2H).IR(KBr)857；1148；1240；1561；1583；1662.
17.b. 4-乙基-7-氟-2-羥基-6-甲氧基-3-喹啉甲酸乙酯在氬氣氛下和0℃，將乙基丙二?；?12.9ml，100mmol)的無水乙腈(30ml)溶液滴加到5-氟-4-甲氧基-2-丙?；桨?15.3g，77.5mmol)和三乙胺(13.9ml，100mmol)的無水乙腈(110ml)溶液中。讓此反應介質的溫度回到室溫，在氬氣氛下，通過導管滴加乙醇鈉溶液(由1.8g，78mmol鈉在80ml乙醇中制得)，然后室溫將此反應介質攪拌12小時。將此反應混合物倒入冰冷的水(100ml)中并攪拌2小時，然后濾出沉淀并用水、乙醇和乙醚洗滌。得到19.4g白色固體。NMR-1H(DMSO)1.25(m，6H)；2.78(q，2H)；3.92(s，3H)；4.30(q，2H)；7.15(d，2H)；7.40(d，2H)；11.93(s，1H).IR(KBr)786；1083；1410；1521；1644；1725.
17.c. 2-氯-4-乙基-7-氟-6-甲氧基-3-喹啉甲酸乙酯將4-乙基-7-氟-2-羥基-6-甲氧基-3-喹啉甲酸乙酯(19.4g，0.066mol)的磷酰氯(243ml)懸浮液加熱回流6小時。蒸餾掉磷酰氯。將此反應混合物倒入冰冷的水中，然后在二氯甲烷中將其溶解。用水洗滌有機相，然后用飽和氯化鈉溶液洗滌。用硫酸鎂干燥有機相并將溶劑蒸發(fā)。將此殘余物懸浮于乙醚中并濾出未反應的起始物(4g)。將此濾液蒸發(fā)并將此殘余物通過柱色譜(二氧化硅，乙酸乙酯/庚烷5/95至20/80)純化。得到10.9g白色固體。NMR-1H(DMSO)1.30(t，3H)；1.39(t，3H)；3.08(q，2H)；4.09(s，3H)；4.49(q，2H)；7.64(d，2H)；7.86(d，2H).IR(KBr)865；1016；1082；1190；1224；1253；1272；1508；1571；1732.
17.d. 2-氯-4-乙基-7-氟-6-甲氧基-3-喹啉甲醇室溫，在惰性氣氛下，將二異丁基氫化鋁(1M在二氯甲烷中，65ml，65mmol)滴加到2-氯-4-乙基-7-氟-6-甲氧基-3-喹啉甲酸乙酯(10.8g，35mmol)的無水二氯甲烷(200ml)溶液中，然后在40℃加熱4小時。冷卻至0℃后，小心地加入酒石酸鉀鈉鹽的20％水溶液(105ml)和二氯甲烷(200ml)，并將此反應混合物攪拌1小時，隨后傾析并用水洗滌3次。用硫酸鎂干燥有機相并將此溶劑蒸發(fā)。將此殘余物通過柱色譜(二氧化硅，乙酸乙酯/庚烷5/95至50/50)提純。得到6g白色固體。NMR-1H(DMSO)1.28(t，3H)；3.25(q，2H)；4.04(s，3H)；4.77(d，2H)；5.27(t，1H)；7.55(d，2H)；7.73(d，2H).IR(KBr)840；864；1023；1232；1267；1317；1444；1511；1569.
17.e. 5，12-二乙基-9-氟-4，5-二氫-5-羥基-10-甲氧基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照制備例4步驟4.j.所述將2-氯-4-乙基-7-氟-6-甲氧基-3-喹啉甲醇與化合物(M)偶合。所得偶合產(chǎn)物按照步驟4.k.所述方法環(huán)合。得到黃色固體，m.p.＞275℃。NMR-1H(CF3COOD)1.07(m，3H)；1.62(m，3H)；2.27(m，2H)；3.44(d，1H)；3.54(m，2H)；3.91(d，1H)；4.25(s，3H)；5.60(d，1H)；5.74(s，2H)；5.98(d，1H)；7.85(m，1H)；8.16(m，1H)；8.31(s，1H).NMR-C13(CF3COOD)9.03；14.20；26.68；38.77；43.98；53.79；58.27；64.73；77.93；106.85；109.24；110.15；128.99；129.20；131.61；137.32；141.23；144.13；154.79；158.32；160.25；160.8 1；179.30.IR(KBr)1013；1068；1265；1466；1514；1601；1655；1748.
制備例185-乙基-4，5-二氫-5-羥基-12-甲基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮應用制備例17.b.、17.c.和17.d.所述的方法用2-乙酰基苯胺制備2-氯-4-甲基-3-喹啉甲醇。按照制備例4步驟4.j.的方法將后者與化合物(M)偶合。所得偶合產(chǎn)物按照步驟4.k.所述方法環(huán)合。得到黃色固體，m.p.＞260℃。NMR 1H(DMSO)0.87(t，3H)；1.87(q，2H)；2.78(s，3H)；2.80(d，1H)；3.55(d，1H)；5.27(s，2H)；5.42(d，1H)；5.52(d，1H)；6.04(s，1H)；7.39(s，1H)；7.75(t，1H)；7.88(t，1H)；8.13(d，1H)；8.25(d，1H).NMR-C13(DMSO)8.23；36.26；42.36；62.00；73.11；78.65；79.13；79.25；99.52；122.36；124.30；127.67；129.54；129.55；129.56；140.11；145.06；148.07；152.00；155.79；159.09；171.89.IR(KBr)1649；1751；3404.
制備例1910-芐氧基-5-乙基-9-氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮應用制備例4.i.所述的方法用3-氟-4-甲氧基-乙?；桨分苽?-氯-7-氟-6-甲氧基-喹啉-3-甲醛，將后者在室溫用處于二氯甲烷中的過量三溴化硼處理24小時。將所得2-氯-7-氟-6-羥基-喹啉-3-甲醛在二甲基甲酰胺中在芐基溴和碳酸鉀存在下進行O-芐基化從而制備6-芐氧基-2-氯-7-氟-喹啉-3-甲醛，用甲醇中的硼氫化鈉將其還原制備相應的喹啉甲醇。按照制備例4步驟4.j.所述將后者與化合物(M)偶合。所得偶合產(chǎn)物按照步驟4.k.所述方法環(huán)合。得到黃色固體，m.p.＞275℃。NMR-1H(DMSO)0.86(t，3H)；1.85(q，2H)；3.05(d，1H)；5.25(s，2H)；5.37(s，2H)；5.45(dd，2H)；6.05(s，1H)；7.4-7.6(m，5H)；7.88(d，1H)；7.95(d，1H)；8.56(s，1H).
制備例205-乙基-9-氟-4，5-二氫-5，10-二羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮將制備例19的化合物(0.79mmol)溶解于三氟乙酸(15ml)中，用氫氣以10％鈀/碳(60mg)作催化劑處理。得到黃色固體，m.p.＞275℃。NMR-1H(DMSO)0.86(t，3H)；1.85(q，2H)；3.05(d，1H)；5.25(s，2H)；5.37(s，2H)；5.45(dd，2H)；6.05(s，1H)；7.8(d，1H)；7.90(d，1H)；8.56(s，1H).
上述制備例作為通過如下實施例說明本發(fā)明的基礎。
實施例15-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-(2-氨基-1-氧代乙氧基)-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮a. 5-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-(2-(叔丁氧羰基氨基)-1-氧代乙氧基)-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮鹽酸鹽將5-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮(200mg，0.526mmol，得自制備例4)、N-Boc-甘氨酸(185mg，1.051mmol)和催化量4-二甲基氨基吡啶(20mg)在無水吡啶(10ml)中的混合物，在0℃和氬氣氛下，用二環(huán)己基碳二亞胺(239mg，1.16mmol)處理，然后室溫攪拌48小時。真空除去揮發(fā)物并將此殘余物進行色譜(二氧化硅，1％甲醇的氯仿溶液)純化，得到所需中間體(40mg，14％)，為黃色固體。NMR-1H(CDCl3)1.20(t，3H)；1.38(s，9H)；1.40-1.70(m，2H)；3.10(d，1H)；4.00(d，2H)；4.30(d，1H)；5.00(t，1H)；5.20(s，2H)；5.30-5.90(dd，2H)；7.20(s，1H)；7.50-8.10(m，2H)；8.30(s，1H).
b. 5-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-(2-氨基-1-氧代乙氧基)-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮鹽酸鹽將上述獲得的中間體(40mg，0.072mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液保持在0℃并滴加用氯化氫飽和的二噁烷(8ml)。將所形成的黃色懸浮液攪拌2小時，然后真空除去揮發(fā)物。在水(5ml)中溶解此殘余物，用二氯甲烷(3×30ml)洗滌。將此水相冷凍并凍干從而制備預期的鹽，為吸濕性黃色固體(20mg，50％)。NMR-1H(CDCl3)1.00(t，3H)；2.15(m，1H)；2.30(m，1H)；3.60(d，1H)；
3.90(d，1H)；4.15(s，2H)；5.10(s，2H)；5.40(d，1H)；5.70(d，2H)；7.40(s，1H)；7.80(m，2H)；8.50(s，1H).
實施例25-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-(2-氨基-1-氧代丙氧基)-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮按照實施例1的方法，用5-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮，并用N-Boc-b-丙氨酸代替N-Boc-甘氨酸，然后通過在二氯甲烷中用三氟乙酸處理斷裂中間體上的Boc保護基。真空蒸發(fā)掉揮發(fā)物并將此殘余物在二氯甲烷中溶解。用稀碳酸氫鹽洗滌所得溶液，干燥并蒸發(fā)。得到黃色固體。
使用實施例1和2的方法，對于其它化合物可得到類似的結果。這樣可以“前藥”形式獲得所有喜樹堿類似物。
實施例31，8-二乙基-8，9-二氫-8-羥基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮將5-乙基-4，5-二氫-5，10-二羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮(84mg，按照制備例5制備)在乙酸(2.5ml)中的懸浮液用1，3，5-三乙基六氫三嗪(0.5ml)處理。將此反應混合物在70℃攪拌30分鐘，然后真空蒸發(fā)。用乙醇溶解此殘余物，過濾并用乙醚洗滌。得到固體，m.p.＞275℃。
NMR-1H(DMSO)0.87(t，3H)；1.50(t，3H)；1.85(q，2H)；2.77(q，2H)；3.05(d，1H)；3.47(d，1H)；4.37(s，2H)；5.00(s，2H)；5.22(s，2H)；5.45(dd，2H)；6.00(s，1H)；7.34(s，1H)；7.36(d，1H)；7.93(d，1H)；8.53(s，1H).
NMR-C13(DMSO)8.46；13.48；36.46；42.49；45.49；46.44；50.75；61.43；73.33；82.06；99.02；112.90；122.00；122.98；125.42；127.04；129.04；130.20；144.09；144.97；149.87；152.92；155.98；172.07.
IR(KBr)1045；1215；1502；1604；1657，1722.
實施例48-乙基-8，9-二氫-8-羥基-1-甲基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮將5-乙基-4，5-二氫-5，10-二羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮(200mg，按照制備例5制備)在乙酸(5ml)中的懸浮液用六氫-1，3，5-三甲基三嗪(110mg)處理。將此反應混合物在70℃攪拌30分鐘，然后真空蒸發(fā)。用乙醇回收此殘余物，過濾并用乙醚洗滌。得到固體，m.p.＞275℃。NMR-1H(DMSO)0.87(t，3H)；1.85(q，2H)；3.04(d，1H)；3.48(d，1H)；4.33(s，2H)；4.93(s，2H)；5.28(s，2H)；5.45(dd，2H)；6.01(s，1H)；7.35(s，1H)；7.38(d，1H)；7.94(d，1H)；8.49(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.46；36.43；37.85；42.55；48.68；50.79；61.43；73.35；83.82；99.04；112.49；122.04；123.00；125.46；127.14；129.07；130.27；144.99；149.95；152.46；155.99；172.09IR(KBr)1047；1058；1219；1246；1295，1439；1504；1604，1655，1735.
實施例58-乙基-8，9-二氫-8-羥基-1-芐基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮將5-乙基-4，5-二氫-5，10-二羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮(200mg，按照制備例5制備)在乙酸(5ml)中的懸浮液用1，3，5-三芐基六氫三嗪(285mg)處理。將此反應混合物在70℃攪拌30分鐘，然后真空蒸發(fā)。用乙醇回收此殘余物，過濾并用乙醚洗滌。得到固體，m.p.＞275℃。NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.05(d，1H)；3.47(d，1H)；3.96(s，2H)；4.33(s，2H)；5.04(s，2H)；5.17(s，2H)；5.44(dd，2H)；6.01(s，1H)；7.38(m，6H)；7.42(d，1H)；7.97(d，1H)；8.42(s，1H).NMR-C13(DMSO)8.42；19.96；36.45；42.51；46.36；50.78；55.38；61.39；73.31；99.00；112.55；122.01；123.08；125.38；127.09；127.47；128.70；129.14；130.35；128.40；139.19；144.18；149.99152.84；155.92；159.24；172.05.IR(KBr)1056；1205；1225；1248；1504；1535；1599；1655；1726.
實施例6
8-乙基-8，9-二氫-4-氟-8-羥基-1-芐基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮將5-乙基-9-氟-4，5-二氫-5，10-二羥基-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]-中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮(200mg，按照制備例20制備)在乙酸(5ml)中的懸浮液用1，3，5-三芐基六氫三嗪(285mg)處理。將此反應混合物在70℃攪拌30分鐘，然后真空蒸發(fā)。用乙醇回收此殘余物，過濾并用乙醚洗滌。得到固體，m.p.＞250℃。NMR-1H(DMSO)0.85(t，3H)；1.85(q，2H)；3.05(d，1H)；3.48(d，1H)；3.95(s，2H)；4.45(s，2H)；5.20(s，4H)；5.45(dd，2H)；6.05(s，1H)；7.40(s，7H)；7.90(d，1H)；8.45(s，1H).IR(KBr)1248；1451；15001；1598；1657；1727.
本發(fā)明產(chǎn)物的藥物學研究拓撲異構酶1誘導的DNA的松弛活性實驗所有反應在20μl反應緩沖液中進行，該緩沖液由50mMTris-HCl(pH7.5)、50mM氯化鉀、0.5mM二硫蘇糖醇、10mM氯化鎂、0.1mM乙二胺四乙酸(EDTA)、30μg/ml胎牛血清白蛋白和300ng超螺旋pUC19(Pharmacia Biotech，Orsay，F(xiàn)rance)組成，其中不加或加入固定濃度的被測化合物。所有被測化合物開始都溶解于二甲基亞砜(DMSO)中或適用于水溶性化合物的水中，用蒸餾水進行其它稀釋。DMSO的最終濃度不超過1％(v/v)。在37℃通過加入純化的小牛胸腺的DNA拓撲異構酶1(Life Technologies/Gibco-BRL，Paisley，UnitedKingdom)引發(fā)反應，15分鐘后使反應完全。通過加入3μl含1％十二烷基硫酸鈉、20mM EDTA和500μg/ml K蛋白激酶(BoehringerMannheim，Meylan，F(xiàn)rance)的混合物停止反應。在37℃再孵育30分鐘后，向樣品中加入2μl加樣緩沖液，該緩沖液含10mM磷酸氫二鈉、0.3％溴酚藍和16％Ficoll，將此樣品在1.2％的瓊脂凝膠上在緩沖液中以1V/cm進行電泳20小時，其中該緩沖液含有36mMTris-HCl(pH7.8)、30mM磷酸氫二鈉、1mM EDTA和2μg/ml氯喹。用2μg/ml溴化乙錠將此凝膠染色，在UV光下在312nm用電荷偶合儀(ccd)照相機拍照，并用bioProfil成象分析儀(Viber Lourmat，Lyon，F(xiàn)rance)檢測熒光強度，以確定釋放的DNA的百分率。
在每個實驗中，將超螺旋質粒DNA單獨或與拓撲異構酶1一起培養(yǎng)。在15分鐘內(nèi)完成該反應。對于每個被測化合物或對照物(將只含載體的稱為對照物)，此超螺旋質粒DNA在不存在酶時在被測化合物或對照物的實驗用最大濃度下孵育，或者存在酶時在被測化合物以1μM至200μM濃度存在下或在對照物存在下孵育。如表I所示，實施例3至6以濃度依賴方式抑制拓撲異構酶1引起的放松活性。
表權利要求
1.一種喜樹堿的類似物，其中喜樹堿的羥基內(nèi)酯是β-羥基內(nèi)酯或由此內(nèi)酯開環(huán)得到的相應的β-羥基酸，其特征在于所述類似物含有接在A環(huán)的10和11位上可被取代的噁嗪環(huán)。
2.一種喜樹堿的類似物，其特征在于喜樹堿的羥基內(nèi)酯被由易于斷裂的基團保護的B-羥基內(nèi)酯或由此內(nèi)酯開環(huán)得到的相應的β-羥基酸代替。
3.一種化合物，其特征在于所述化合物是式(I)或式(II)、其外消旋體或對映異構體形式或這些形式的任意混合物或其藥用鹽
R1表示低級烷基、低級鏈烯基、低級鏈炔基、低級鹵代烷基、低級烷氧基低級烷基或低級烷硫基低級烷基；R2、R3和R4獨立地表示H、鹵素、低級鹵代烷基、低級烷基、低級鏈烯基、氰基、低級氰基烷基、硝基、低級硝基烷基、酰氨基、低級酰氨基烷基、肼基、低級肼基烷基、疊氮基、低級疊氮基烷基、(CH2)mNR6R7、(CH2)mOR6、(CH2)mSR6、(CH2)mCO2R6、(CH2)mNR6C(O)R8、(CH2)mC(O)R8、(CH2)mOC(O)R8、O(CH2)mNR6R7、OC(O)NR6R7、OC(O)(CH2)mCO2R6或(CH2)n[N＝X]、OC(O)[N＝X]、(CH2)mOC(O)[N＝X](在本發(fā)明中，[N＝X]表示含氮原子N的4至7元雜環(huán)基，N是雜環(huán)基團的一個原子，X表示構成此雜環(huán)需要的其余原子，它們選自O、S、CH2、CH、N、NR9和COR10)、未取代或被取代(即在芳基或雜環(huán)上取代一至四次)的芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基，或者R3和R4一起形成3或4元的鏈，其中該鏈的元素選自CH、CH2、O、S、N或NR9；R5表示H、鹵素、低級鹵代烷基、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氧基低級烷基、低級烷硫基低級烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、氰基、氰基烷基、低級烷基低級磺酰基烷基、低級羥基烷基、硝基、(CH2)mC(O)R8、(CH2)mNR6C(O)R8、(CH2)mNR6R7、(CH2)mN(CH3)(CH2)nNR6R7、(CH2)mOC(O)R8、(CH2)mOC(O)NR6R7、(CH2)mS(O)qR11、(CH2)mP(O)R12R13、(CH2)2P(S)R12R13或(CH2)n[N＝X]、OC(O)[N＝X]、(CH2)mOC(O)[N＝X]、未取代或被取代的(即在芳基或雜芳基上取代一至四次)芳基或低級芳基烷基，其中取代基是低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R6和R7獨立地表示H、低級烷基、低級羥基烷基、低級烷基低級氨基烷基、低級氨基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基低級烷基、低級鹵代烷基或者被取代(即在芳基上取代一至四次)或未取代的芳基或低級芳基烷基，其中取代基為低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R8表示H、低級烷基、低級羥基烷基、氨基、低級烷基氨基、低級烷基低級氨基烷基、低級氨基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基、低級烷氧基低級烷基、低級鹵代烷基或者被取代(即在芳基上取代一至四次)或未取代的芳基或低級芳基烷基，其中取代基為低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R9表示H、低級烷基、低級鹵代烷基、芳基或被下列一個或多個基團取代的芳基低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基；R10表示H、低級烷基、低級鹵代烷基、低級烷氧基、芳基或被一個或多個基團取代的芳基(即在芳基上有一至四個取代基)，取代基選自低級烷基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基或低級烷氧基低級烷基；R11表示低級烷基、芳基、(CH2)mOR14、(CH2)mSR14、(CH2)2NR14R15或(CH2)m[N＝X]；R12和R13獨立地表示低級烷基、芳基、低級烷氧基、芳氧基或氨基；R14和R15獨立地表示H、低級烷基或芳基；R16表示H或OR21；R17表示OR6或NR6R7；R18和R19獨立地表示H、鹵素、低級烷基、低級烷氧基或羥基；R20表示H或鹵素；R21表示H、低級烷基、CHO或C(O)(CH2)mCH3；Rp表示H或易于裂解的基團，優(yōu)選相應于式-C(O)-A-NR22R23的基團，其中A表示直鏈或支鏈亞烷基，該亞烷基可被選自游離的、酯化的或成鹽的羥基，鹵素，游離的、酯化的或成鹽的羧基，氨基，單或二烷基氨基取代，而R22和R23獨立地表示H、低級烷基、低級羥基烷基、低級烷基低級氨基烷基、低級氨基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基低級烷基、低級鏈烯基、低級烷氧基低級烷基、低級鹵代烷基或者未取代或取代(即在芳基上有一至四個取代基)的芳基或低級芳基烷基，取代基選自低級烷基、鹵素、硝基、氨基、低級烷基氨基、低級鹵代烷基、低級羥基烷基、低級烷氧基或低級烷氧基低級烷基或者R22與R23一起形成可含有選自O、N、S的另一雜原子的可被取代的5、6或7員環(huán)；m是0至6之間的整數(shù)；n是1或2；而q表示0至2的整數(shù)；并且[N＝X]表示4至7元雜環(huán)基，X表示構成所述雜環(huán)基需要的鏈并選自O、S、CH2、CH、N、NR9和COR10；條件是當Rp是氫原子時，R3和R4一起形成3或4元的鏈。
4.權利要求3的化合物或其藥用鹽，其特征在于R1表示乙基。
5.權利要求3所述的化合物或其藥用鹽，其特征在于R5表示H、低級烷基或(CH2)mNR6R7或未被取代或被低級烷基取代的(CH2)n[N＝X]。
6.權利要求3所述的化合物或其藥用鹽，其特征在于R3和R4形成可被取代的噁嗪環(huán)。
7.權利要求3所述的化合物或其藥用鹽，其特征在于Rp是易于裂解的基團。
8.權利要求7所述的化合物或其藥用鹽，其特征在于Rp表示C(O)-(A1)-N-R22-R23基團，其中A1表示CH2m或支鏈低級亞烷基，而m是表示0至6之間的整數(shù)。
9.權利要求6的化合物或其藥用鹽，其特征在于所述化合物選自-1，8-二乙基-8，9-二氫-8-羥基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮-8-乙基-8，9-二氫-8-羥基-1-甲基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮-8-乙基-8，9-二氫-8-羥基-1-芐基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮-8-乙基-8，9-二氫-4-氟-8-羥基-1-芐基-2H，10H，12H-[1，3]噁嗪并[5，6-f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10，13(15H)-二酮。
10.權利要求7的化合物或其藥用鹽，其特征在于所述化合物選自-5-乙基-9，1O-二氟-4，5-二氫-5-(2-氨基-1-氧代乙氧基)-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮；-5-乙基-9，10-二氟-4，5-二氫-5-(2-氨基-1-氧代丙氧基)-1H-氧雜環(huán)庚三烯并[3′，4′6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3，15(4H，13H)-二酮。
11.上述任一權利要求所述化合物或其藥用鹽作為藥物的用途。
12.藥物組合物，其中含有至少一種權利要求1至10中任一項所述化合物作為活性成分。
13.權利要求1至10任一項所述化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
14.權利要求1、6和9中任一項所述相應于其中R3和R4形成噁嗪環(huán)的式I產(chǎn)物的式Ia的化合物的制備方法，其特征在于—將通式D的β羥基內(nèi)酯化合物
其中R3是羥基，R4是H而R1、R2、R18、R19和R20定義如上，用伯胺在Mannich反應條件下處理以得到式通Ia的β-羥基內(nèi)酯化合物
其中R1、R2、R5、R9、R18、R19和R20定義如上。
15.權利要求2至10中任一項所述的相應于其中Rp不是氫原子的式I產(chǎn)物的式Ib化合物的制備方法，其特征在于—通式D的化合物
或
優(yōu)選用權利要求3所述的C(O)-A-N-R22R23基團的衍生物?；灾苽銻p不是H的通式I的β-羥基內(nèi)酯化合物。
16.權利要求1至10中任一項所述的式II化合物的制備方法，其特征在于—在堿性介質中將通式I的內(nèi)酯開環(huán)從而在中和后制備式II的化合物
其中R1、R2、R5、R9、R17、R18、R19和R20定義如上；R16表示OR21，其中R21表示H或低級烷基；而R17表示OR6或NHR6，而R6表示H、低級烷基、環(huán)烷基、低級烷基環(huán)烷基、低級鏈烯基、低級烷基低級烷氧基或芳基或者低級烷基芳基。
全文摘要
本發(fā)明涉及喜樹堿的新衍生物,特別是下式的產(chǎn)物:8－乙基－8,9－二氫－8－羥基－1－芐基－2H,10H,12H－[1,3]噁嗪并[5,6－f]氧雜環(huán)庚三烯并[3′,4′:6,7]中氮茚并[1,2－b]喹啉－10,13(15H)－二酮;5－乙基－9,10－二氟－4,5－二氫－5－(2－氨基－1－氧代乙氧基)－1H－氧雜環(huán)庚三烯并[3′,4′:6,7]中氮茚并[1,2－b]喹啉－3,15(4H,13H)－二酮;5－乙基－9,10－二氟－4,5－二氫－5－(2－氨基－1－氧代丙氧基)－1H－氧雜環(huán)庚三烯并[3′,4′:6,7]中氮茚并[1,2－b]喹啉－3,15(4H,13H)－二酮。本發(fā)明還涉及它們的制備方法,它們作為藥物的應用,含有它們的藥物組合物以及它們在制備抗腫瘤、抗病毒和抗寄生蟲藥物中的用途。
文檔編號A61P35/00GK1241192SQ9718081
公開日2000年1月12日 申請日期1997年12月5日 優(yōu)先權日1996年12月20日
發(fā)明者D·比格, O·拉威尼, J·哈尼特, A·羅拉德, A－M·里比拉托勒, C·朗科 申請人:科學研究與運用咨詢公司