專(zhuān)利名稱(chēng)：咪唑啉取代的苯氧乙酰寡肽類(lèi)衍生物，它們的合成及在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及咪唑啉取代的苯氧乙酰修飾的寡肽類(lèi)衍生物，其合成以及它們作為藥物方面的用途。
背景技術(shù)：
腦缺血導(dǎo)致猝死已成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的常見(jiàn)現(xiàn)象。研究表明，腦缺血時(shí)腦內(nèi)釋放大量谷氨酸，激動(dòng)N-甲基-D-天冬氨酸受體，導(dǎo)致eNOS和nNOS大量表達(dá)及活性增高，使缺血病灶區(qū)NO的濃度在20分鐘內(nèi)達(dá)到微摩爾水平，6至12小時(shí)內(nèi)iNOS也大量表達(dá)，產(chǎn)生大量NO，致使神經(jīng)元死亡。請(qǐng)參見(jiàn)Dawson YL，Dawson TM，London ED，Bredt DS，Nitric oxid mediates glutamate neurotoxicity inprimary cortical cultures，Pro.Natl.Acad Sci，USA，1991，88，6368。目前，臨床對(duì)腦缺血性損傷尚無(wú)系統(tǒng)治療方法。抑制神經(jīng)元毒性物質(zhì)生成、清除毒性物質(zhì)和阻斷其遞轉(zhuǎn)，以及改善缺血后神經(jīng)元病理生化的改變，是藥物治療腦缺血損傷的主要目標(biāo)?？刹捎玫拇胧┲饕ǜ纳颇X能量代謝、防止鈣超負(fù)荷和EAA受體的持續(xù)激活、清除氧自由基和抑制NO生長(zhǎng)等。
不少臨床實(shí)踐證明，腦動(dòng)脈阻塞或嚴(yán)重狹窄導(dǎo)致腦血流阻斷后，腦組織的中心部分在數(shù)分鐘內(nèi)便可形成不可逆損傷。雖然腦組織的周邊部分通過(guò)側(cè)支循環(huán)仍可維持低需要量的血流，不過(guò)，如果這種不穩(wěn)定的血液循環(huán)在3至4小時(shí)內(nèi)若不改善，則可發(fā)生腦組織代謝衰竭。因此，及時(shí)重建血液循環(huán)為缺血腦組織供氧及養(yǎng)分至關(guān)重要(朱國(guó)行，腦梗塞的溶栓治療，國(guó)外醫(yī)學(xué)-神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè)，1995，22，51-57)。
腦組織缺血再灌注時(shí)還會(huì)發(fā)生進(jìn)一步的腦損傷。腦組織缺血再灌注損傷是遲發(fā)性腦缺血損傷的重要原因，與氧自由基及NO自由基等神經(jīng)細(xì)胞代謝毒性物質(zhì)的產(chǎn)生相關(guān)。及時(shí)清除神經(jīng)細(xì)胞毒性物質(zhì)是治療急性腦梗死的重要方面(FisherM，Prophylactic neuroprotection for cerebral ischemia，Stroke，1994，25，25，1074)。
于是，及時(shí)改善缺血腦組織中的血流以防止再梗塞，以及避免邊緣區(qū)腦組織受毒性代謝產(chǎn)物的進(jìn)一步改善，成為治療缺血性腦卒中的兩個(gè)基本原則。
發(fā)明人綜合以上背景后認(rèn)識(shí)到，如果能夠把自由基清除尤其是NO清除與溶栓結(jié)合，即在溶栓的同時(shí)清除自由基，可以更完善地體現(xiàn)缺血性腦卒中的治療原則。有鑒于此，發(fā)明人將分別具有上述兩者功能的藥物進(jìn)行結(jié)合，試圖發(fā)明可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)兩種功能的新藥物。
在本發(fā)明的發(fā)明人提出的中國(guó)專(zhuān)利95106340.5(該專(zhuān)利授予北京醫(yī)科大學(xué))中，公開(kāi)了通式(I)的多肽化合物具有擴(kuò)張血管和溶血栓的作用。
而取代的咪唑啉類(lèi)化合物據(jù)信具有清除自由基的功效，發(fā)明人認(rèn)真研究和分析了取代的咪唑啉的結(jié)構(gòu)與NO清除作用之間的關(guān)系后發(fā)現(xiàn)，咪唑啉取代苯氧乙酸不僅具有優(yōu)秀的NO清除作用，而且能夠耐受多肽合成中的各種反應(yīng)條件，由此發(fā)明人將該兩類(lèi)化合物有機(jī)結(jié)合，設(shè)計(jì)出一類(lèi)新的化合物，從而提出本發(fā)明。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的之一是提供一種通式(I)的化合物，4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰-X-Arg-Pro-Ala-Lys-Y(I)其中，X為天然氨基酸片斷，Y為羥基，羥基上的氫被金屬離子或銨離子取代后的基團(tuán)，氨基，取代的氨基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)烷氧基，被取代基取代的低級(jí)芳基低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烯氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)炔氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)炔氧基，所述取代基選自鹵素，氰基，硝基，羧基，羥基，醛基，低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基。
本發(fā)明的另一目的是提供含通式(I)化合物的藥物組合物，包括治療有效量的通式(I)化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的再一目的是提供通式(I)化合物在制備治療腦卒藥物，特別是制備清除氧、羥基和氧化氮自由基和溶血栓藥物方面的用途。
發(fā)明詳述在本發(fā)明的通式(1)化合物中，4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰-X-Arg-Pro-Ala-Lys-Y(I)X為天然氨基酸片斷，Y為羥基，羥基上的氫被金屬離子或銨離子取代后的基團(tuán)，氨基，取代的氨基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)烷氧基，被取代基取代的低級(jí)芳基低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烯氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)炔氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)炔氧基，所述取代基選自鹵素，氰基，硝基，羧基，羥基，醛基，低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基。
本發(fā)明中的“天然氨基酸”是指自然界中存在的20種氨基酸。氨基酸片段指氨基酸中的氨基端的氫和羧基端的羥基被取代的部分，本發(fā)明中天然氨基酸的縮寫(xiě)都是指相應(yīng)的氨基酸片段。在本發(fā)明中，天然氨基酸優(yōu)選為Gly，Gln，Ala。
術(shù)語(yǔ)“烷基”“烯基”和“炔基”通常指含1-20個(gè)碳的直鏈或支鏈基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)”則是指具有含1-8個(gè)碳原子。
“芳基”指具有6-40碳原子并具有芳環(huán)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，如苯環(huán)和萘環(huán)。術(shù)語(yǔ)“取代基”是指鹵素，氰基，硝基，羧基，羥基，醛基，低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基?！叭〈姆蓟笔侵阜辑h(huán)上的氫被取代基所取代。本發(fā)明中，芳環(huán)上的取代基優(yōu)選為1-3個(gè)。
在本發(fā)明中，Y優(yōu)選為羥基，低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)炔氧基，氨基，被取代基取代的氨基，所述取代基選自低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基。
本發(fā)明中所述的治療有效量通常為通式(I)化合物重量占組合物的0.1-99.9％，優(yōu)選為1-90％。在本發(fā)明的組合物中，通式(I)化合物可以為單一化合物，也可為兩種以上存在于組合物中。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)患者的情況以及所患病癥具體確定。所述“載體”為制藥領(lǐng)域常用的那些，如固體載體如玉米粉，碳酸鈣，液體載體如乙醇，水，和氣體載體，此決定于組合物的給藥劑型。
本發(fā)明中，咪唑啉取代的苯氧乙酸按照下列所示的路線(xiàn)。
在Br2和NaOH存在下將2-硝基丙烷轉(zhuǎn)化為2，3-二甲基-2，3-二硝基丁烷。后者在Zn/NH4Cl體系中還原，生成2，3-雙(羥氨基)丁烷。2，3-二甲基-2，3-雙(羥氨基)丁烷與對(duì)羥基苯甲醛縮合，生成4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二羥基咪唑啉-2-基)苯酚(4)。在PbO2存在下，4轉(zhuǎn)化為4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧咪唑啉-2-基)苯酚(5)。在NaC2H5存在下，BrCH2COOC2H5與5發(fā)生氧烷基化反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)皂化之后得到4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧咪唑啉-2-基)苯氧乙酸(7)?；衔?對(duì)多肽合成反應(yīng)中應(yīng)用的皂化、脫Boc、以及脫側(cè)鏈保護(hù)基的條件(例如HCl，NaOH，HF或三氟甲磺酸)足夠穩(wěn)定。
本發(fā)明涉及按照文獻(xiàn)方法(Ming Zhao Shiqi Peng Studies on hybrid offragments from fibrinogen，J.Prakt Chem，1999，341，668-676)制備保護(hù)多肽中間體X-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl(8-10，其中X分別為Gly，Gln和Ala)，涉及把4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧基咪唑啉-2-基)苯酚乙酸與多肽中間體8-10分別偶聯(lián)，得到的產(chǎn)物11-13經(jīng)HF脫保護(hù)，得到期待的N-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧咪唑啉-2-基)苯氧乙?；揎椀墓央?4-16。
以上路線(xiàn)示出了N-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧咪唑啉-2-基)苯氧乙酰寡肽的合成，其中X為Gly，Gln，Ala。
為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，下面給出相應(yīng)的實(shí)例。應(yīng)當(dāng)指出，這些實(shí)例僅僅是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明的例證，沒(méi)有任何限制發(fā)明的含義。
制備例12，3-二甲基-2，3-二硝基丁烷的制備3.45 g(0.039mol)2-硝基丙烷加到6.5ml 6mol/l NaOH水溶液中，冰浴攪拌5分鐘后處理滴加1ml(0.019mol)Br2，歷時(shí)1小時(shí)。往混合物中加12ml乙醇，90水浴中回流3小時(shí)，反應(yīng)混合物中出現(xiàn)片狀沉淀。將熱反應(yīng)混合物倒入40ml冰浴中，待冰溶化后減壓抽濾收集片狀結(jié)晶。干燥后得2.80g(81％)標(biāo)題化合物，mp 110-112℃。
制備例22，3-二甲基-2，3-雙羥氨基丁烷的制備75g(1mmol)2，3-二甲基-2，3-二硝基丙烷和1.00gNH4Cl懸浮于20ml50％乙醇水溶液中。懸浮液于冰浴攪拌，往里加4.00g鋅粉，歷時(shí)3小時(shí)。然后反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)混合物減壓抽濾，濾餅用50％乙醇水溶液反復(fù)洗滌。合并洗滌液和濾液，用濃鹽酸調(diào)pH 2，減壓濃縮至泥漿狀。得到的泥漿狀物與適量K2CO3混和均勻至PH 10，然后置于索氏提取器中用CHCl3提取6小時(shí)。提取液減壓濃縮，殘留液用石油醚析晶，得到0.48g(48％)標(biāo)題化合物，為白色片狀結(jié)晶，mp157-159℃制備例33-二羥基-2-(4-羥基苯基)-4，4，5，5-四甲基咪制備122mg(1mmol)對(duì)羥基苯甲醛，148mg(1mmol)2，3-二甲基-2，3-雙羥基丁烷及3ml甲醇室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失，反應(yīng)混合物減壓抽濾，得到125mg(47％)標(biāo)題化合物，為白色結(jié)晶，mp198-200℃制備例43-二氧-2-(4-羥基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉的制備往176mg(0.5mmol)1，3-二羥基-2-(4-羥基苯基)-4，4，5，5-四甲基咪唑烷與5ml甲醇的溶液中加入200mg PbO2。反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾液減壓濃縮，殘留物用硅膠柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯，20∶1)。收集到的含產(chǎn)物的餾份減壓濃縮，得到50mg(29％)標(biāo)題化合物，為蘭色固體。Mp 142℃，EI/MS(m/e)＝249[M+]，217[M-32]+。
制備例53-二氧-2-(4-乙氧羰基甲氧基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉的制備250mg(1mmol)1，3-二氧-2-(4-羥基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉、0.32ml溴代乙酸乙酯、100mg乙醇鈉，以及5ml無(wú)水四氫呋喃的溶液于60攪拌5小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物用硅膠柱層析分離，CHCl3洗脫。含所需組分的餾份減壓濃縮至干，得到300mg(90％)目標(biāo)化合物，mp107-109℃，EI/MS(m/e)＝336[M]+。
制備例64-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酸的制備33mg(0.1mmol)1，3-二氧-2-(4-乙氧羰基甲氧基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉溶于3ml甲醇。往得到的溶液中加入7滴2mol/NaOH水溶液，然后室溫?cái)嚢?0分鐘，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物與2ml飽和食鹽水混和，用2mol/l鹽酸調(diào)PH 5。得到的弱酸性溶液用CHCl3(3ml×3)萃取。
制備例7Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl的制備38mg(0.2mmol)Boc-Ala-OH溶于4ml無(wú)水四氫呋喃中，冰浴下往溶液中加30mg(0.22mmol)HOBT和48mg(0.22mmol)DCC，冰浴下攪拌30分鐘。將按文獻(xiàn)(Ming Zhao Shiqi Peng Studies on hybrid of fragments from fibrinogen，J.Prakt Chem，1999，341，668-676)制備的170mg(0.20mmol)HCl Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl溶于5ml無(wú)水四氫呋喃，冰浴下滴加N-甲基嗎啉調(diào)PH 9。將兩種溶液冰浴下混和，0℃攪拌2小時(shí)，室溫?cái)嚢?2小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液洗、飽和NaCl水溶液洗、以及5％KHSO4水溶液洗。分出乙酸乙酯層，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得到169mg(83％)標(biāo)題化合物，mp 86-89℃，[α]20D＝-13(c＝0.2，CHCl3)，F(xiàn)AB/MS(m/e)＝1042[M+Na]+。
制備例8Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl的制備操作同制備例7，用35mg(0.2mmol)Boc-Gly-OH代替Boc-Ala-OH，得到179mg(89％)標(biāo)題化合物，mp 79-81℃，[α]20D＝+13(c＝0.2，CHCl3)，F(xiàn)AB/MS(m/e)＝1028[M+Na]+。
制備例9Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl的制備操作同制備例7，用49mg(0.2mmol)Boc-Gln-OH代替Boc-Ala-OH，得到187mg(87％)標(biāo)題化合物，mp，84-86，[α]20D＝-9(c＝0.3，CHCl3)，F(xiàn)AB/MS(m/e)＝1099[M+Na]+。
實(shí)施例14-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl的制備196mg(0.2mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl溶于6ml 4mol/l無(wú)水氯化氫/乙酸乙酯溶液，得到的溶液室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，再減壓濃縮。如此反復(fù)處理3次，直至除凈游離氯化氫。殘留物用無(wú)水乙醚研磨，得到183mg(100％)HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl，為白色粉末。
61mg(0.2mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸溶于3ml無(wú)水四氫呋喃。冰浴下往得到的溶液中加入30mg(0.22mmol)HOBT，48mg(0.22mmol)DCC，0℃下往該溶液加入183mg(0.2mmol)HCl Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl與5ml四氫呋喃配成的溶液并用N-甲基嗎啉調(diào)PH9的溶液?；旌秃?，反應(yīng)混合物0℃反應(yīng)2小時(shí)，室溫反應(yīng)12小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失。反應(yīng)混合物過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，殘留物用乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液洗，飽和NaCl水溶液洗，5％KHSO4水溶液洗。分離乙酸乙酯層并用無(wú)水Na2SO4干燥。過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得到215mg(92％)標(biāo)題化合物，mp，92-94℃，[α]20D＝+24(c＝1，CH3OH)FAB/MS(m/e)＝1210[M+H]+。
4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備136mg(0.1mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl，1ml苯甲醚及2ml無(wú)水HF，再于6℃反應(yīng)1小時(shí)，減壓除去HF，殘留物用無(wú)水乙醚固化，得到白色固體。在無(wú)水乙醚中放置變?yōu)樗{(lán)色。藍(lán)色固體用sephadex G10脫鹽，蒸餾水洗脫，收集到含藍(lán)色帶的餾份冷凍干燥，得到70mg(84％)標(biāo)題化合物，為藍(lán)色凍干劑mp，170℃(分解)，[α]20D＝+35(c＝1，H2O)，ESI/MS(m/e)＝831[M]+。
實(shí)施例24-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gly-Arg-Pro-Ala-LysOH的制備4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl的制備操作同實(shí)施例1，用186mg Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl代替Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl。得到210mg(90％)目標(biāo)化合物，mp，90-92℃，[α]20D＝+13(c＝2，CHCl3)，F(xiàn)AB/MS(m/e)＝1196[M+H]+。4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gly-Arg-Pro-Ala-LysOH的制備操作同實(shí)施例1，用130mg 4，5，4-(1，3-二氧-4，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl代替4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)Obzl，得到60mg(75％)標(biāo)題化合物，mp，174℃(分解)，[α]20D＝+21(c＝1，H2O)，ESI/MS(m/e)＝817[M]+。
實(shí)施例34-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl的制備操作同實(shí)施例1，用220mg Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl代替Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl。得到220mg(90％)目標(biāo)化合物，mp，96-98℃，[α]20D＝+29(c＝2，CHCl3)，F(xiàn)AB/MS(m/e)＝1267[M+H]+。4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制備操作同實(shí)施例1，用136mg 4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)OBzl代替4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Czl)Obzl，得到70mg(80％)標(biāo)題化合物，mp，178(分解)，[α]20D＝-27(c＝1，H2O)，ESI/MS(m/e)＝889[M+2H]+。
實(shí)施例4含本發(fā)明化合物的藥物組合物實(shí)施例1化合物 0.1克乙醇100ml實(shí)施例5含本發(fā)明化合物的藥物組合物實(shí)施例2化合物 1克生理鹽水 200ml試驗(yàn)例1本發(fā)明的化合物的NO清除劑活性測(cè)定體重250-300g雄性Wistar大鼠(術(shù)前禁食12小時(shí)，自由飲水)頸椎脫位致死，開(kāi)胸后迅速摘取胸主動(dòng)脈。剝離附著的結(jié)締組織后將血管剪成3-5mm長(zhǎng)的動(dòng)脈環(huán)。將動(dòng)脈環(huán)置于15ml灌注浴槽內(nèi)，浴槽中裝有15mlKrebsHenseleit(KH)液，37℃恒溫，通95％O2與5％CO2混和氣體。將固定主動(dòng)脈環(huán)的掛鉤連接到張力換能器上。在二道記錄儀上描化主動(dòng)脈的舒張曲線(xiàn)，紙速為1mm/min。調(diào)整張力為1.0g，平衡30分鐘后往浴槽中加去甲腎上腺素，使終濃度為10-9mol/l，預(yù)激主動(dòng)脈條。洗凈去甲腎上腺素，平衡30分鐘，再往浴槽中加去甲腎上腺素使終端濃度為10-9mol/l待主動(dòng)脈條張力穩(wěn)定于平臺(tái)水平后加15ml乙醇(作空白對(duì)照)或不同濃度(10-4mol/l，10-5mol/l，10-6mol/l)本發(fā)明的化合物，二道儀平穩(wěn)后加入1.5ul乙酰膽堿(終濃度為10-6mol/l)。本發(fā)明的化合物清除NO的活性以抑制乙酰膽堿舒張主動(dòng)脈條的百分率表示，結(jié)果列入表1。本發(fā)明的化合物都顯示明確的NO清除活性，說(shuō)明4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸引入溶栓寡肽的N端之后，NO清除活性得到保持。
表1本發(fā)明的化合物對(duì)乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管條舒張的抑制作用
N＝6，終濃度為100umol/l試驗(yàn)例2本發(fā)明化合物的溶栓活性測(cè)定雄性Wistar大鼠(250-300g)，腹腔注射戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，分離右頸總動(dòng)脈和左頸外靜脈。先從右頸總動(dòng)脈取0.5ml血制備血栓，用固定螺栓作血栓支架。15分鐘后取出固定在螺栓上的血栓稱(chēng)重并放入由聚乙烯管構(gòu)建的旁路插管中。用注射器從管的尖端將管注滿(mǎn)肝素的生理鹽水溶液。然后將管的一端插入左頸外靜脈中并用注射器再補(bǔ)推肝素的生理鹽水溶液。管的另一端插入右頸主動(dòng)脈，保持血栓原理左頸外靜脈的近心端，用頭皮針將生理鹽水(空白對(duì)照)，尿激酶的生理鹽水溶液(陽(yáng)性對(duì)照)，以及本發(fā)明的化合物的生理鹽水溶液從聚乙烯管的中段插入遠(yuǎn)離血栓固定螺栓的近靜脈，將內(nèi)容物緩慢注入血液中，歷時(shí)6分鐘。注完后計(jì)時(shí)，1小時(shí)后取出血栓固定螺栓稱(chēng)重。兩次的重量即為血栓溶解量，結(jié)果列入表3。表2數(shù)據(jù)說(shuō)明4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙?；?肽溶栓寡肽的N端之后，只有QRPAK保留了溶栓活性，而且三個(gè)劑量之間顯示的劑量-效應(yīng)依賴(lài)關(guān)系。
表2本發(fā)明化合物的溶栓作用
N＝10，與NS比，**P＜0.01，***P＜0.001，△與UK比，P＜0.0權(quán)利要求
1.通式(I)化合物，4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰-X-Arg-Pro-Ala-Lys-Y(I)其中X為天然氨基酸片斷，Y為羥基，羥基上的氫被金屬離子或銨離子取代后的基團(tuán)，氨基，取代的氨基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)烷氧基，被取代基取代的低級(jí)芳基低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烯氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)炔氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)炔氧基，所述取代基包括鹵素，氰基，硝基，羧基，羥基，醛基，低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X選自Gly，Gln，Ala。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中Y為羥基，低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)炔氧基，氨基，被取代基取代的氨基，所述取代基選自低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中Y為羥基，氨基。
5.一種藥物組合物，包括治療有效量的通式(I)的化合物，4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰-X-Arg-Pro-Ala-Lys-Y(I)其中，X為天然氨基酸片斷，Y為羥基，羥基上的氫被金屬離子或銨離子取代后的基團(tuán)，氨基，取代的氨基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)烷氧基，被取代基取代的低級(jí)芳基低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烯氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)炔氧基，被取代基取代的芳基低級(jí)炔氧基，所述取代基包括鹵素，氰基，硝基，羧基，羥基，醛基，低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基，和藥物學(xué)上可接受的載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中X選自Gly，Gln，Ala。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的化合物，其中Y為羥基，低級(jí)烷氧基，芳基低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，芳基低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，芳基低級(jí)炔氧基，氨基，被取代基取代的氨基，所述取代基選自低級(jí)烷基，低級(jí)烯基，低級(jí)炔基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烯氧基，低級(jí)炔氧基，低級(jí)烷基羰基，低級(jí)烯基羰基，低級(jí)炔基羰基，低級(jí)烷氧基羰基，低級(jí)烯氧基羰基，低級(jí)炔氧基羰基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中Y為羥基，氨基。
9.權(quán)利要求1-4化合物在制備清除氧、羥基和氧化氮自由基和溶血栓藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種通式(I)的化合物，其中，X為天然氨基酸片斷，Y為羥基，氨基等，它們作為活性成分的藥物組合物，以及在制備藥物組合物方面的用途。
文檔編號(hào)A61K38/08GK1490329SQ0213499
公開(kāi)日2004年4月21日 申請(qǐng)日期2002年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月18日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 王超, 劉峻嶺, 楊堅(jiān) 申請(qǐng)人:一泰醫(yī)藥研究(深圳)有限公司