專利名稱：一種病毒凍干制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種病毒凍干制劑的制備方法，特別是涉及一種新城疫病毒凍干制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
新城疫病毒屬于動物副粘科病毒，目前生產(chǎn)新城疫病毒凍干制劑的方法是將新城疫病毒La Sota株、clone30株、HBi株、F株或N79株等標(biāo)準(zhǔn)病毒液，接種于10日齡的雞胚尿囊腔內(nèi)，37°C孵化繁殖。定時收取合格的雞胚尿囊液，與適量冷凍干燥添加劑混合均勻，定量分裝于無菌西林瓶內(nèi)，經(jīng)預(yù)凍真空加熱干燥制成凍干制劑。用上述方法生產(chǎn)凍干制劑的過程中存在以下幾個問題1、凍干制劑保質(zhì)期較短；
2、凍干制劑的生物活性不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種保質(zhì)期較長的新城疫病毒凍干制劑。一種病毒凍干制劑的制備方法，包括新城疫病毒原液及冷凍干燥添加劑，所述冷凍干燥添加劑基本上由人血白蛋白和羥乙基淀粉組成。為了更好地維持和保護原液生物的活性，所述冷凍干燥添加劑中還含有抗壞血酸鈉、精氨酸。所述冷凍干燥添加劑各組分的重量體積比為
人血白蛋白 O. 5 ~ 2.0%
精氨酸O. 5 ~ 2. 0%
抗壞血酸鈉 9. 0~ 11. 0%
羥乙基淀粉 5. 0~20. 0%所述的新城疫病毒原液與所述冷凍干燥添加劑的比例是新城疫病毒原液冷凍干燥添加劑=I : I 5 : I。一種生產(chǎn)病毒凍干制劑的方法，包括以下步驟(I)將新城疫病毒原液過O. 45 μ m濾芯，經(jīng)過濃縮、純化后加入冷凍干燥添加劑混勻無菌過濾，分裝于西林瓶中，半加塞，其中，所述冷凍干燥添加劑基本上由人血白蛋白和羥乙基淀粉組成；(2)將西林瓶放入冷凍干燥器內(nèi)，分別在4. 8 5. 2 °C、0. 2
O.8°C、-5. 8 -6. 2°C各平衡I小時；(3)快速凍結(jié)，將制品溫度降至-48 -52°c維持2. 5 3. 5小時；(4)真空干燥；(5)加熱干燥，在制品溫度達到25. 5 37. 5°C條件下持續(xù)2. 5 3. 5小時；
(6)全部加塞，壓封鋁蓋。所述病毒原液是將新城疫病毒接種于10日齡雞胚尿囊腔內(nèi)，36°C孵化繁殖，收取雞胚尿囊液。所述冷凍 干燥添加劑中還有抗壞血酸鈉、精氨酸。所述冷凍干燥添加劑各組分的重量體積比為
人血白蛋白 O. 5 ~ 2.0%
精氨酸O. 5 2. 0%
抗壞血酸鈉 9. O ~ 11.0%
羥乙基淀粉 5. 0~20. 0%所述病毒原液與所述冷凍干燥添加劑的比例是新城疫病毒原液冷凍干燥添加劑=I : I 5 : I。本發(fā)明由于采用了上述技術(shù)方案，因此具有以下優(yōu)點I.在凍干制劑的減壓一升溫一干燥過程中，適宜的升溫程序?qū)S持生物制品的生物活性、制劑的外觀形態(tài)是重要的。將升溫干燥的終點控制在30°C并持續(xù)3小時，使制品中的殘余水分以定量非共價鍵形式存在，以維持原液的形態(tài)、活性的穩(wěn)定，減少成品凍干制劑在保存過程中的效價急速回落，并延長保存時間。2、本發(fā)明的冷凍干燥添加劑與新城疫病毒原液具有極佳的生物相容性。羥乙基淀粉是一種水溶性變性淀粉，屬于多糖，既能夠很好的保護病毒活性，又是一種很好的凍干賦形劑；精氨酸是一種很好的蛋白保護物質(zhì)；抗壞血酸鈉是抗細(xì)胞膜氧化的維生素；特別是當(dāng)加入人血白蛋白時，它們共同構(gòu)成了適合于新城疫病毒原液的仿生體系，有利于原液的休眠與復(fù)蘇，本發(fā)明的凍干制劑在4°C條件下至少可以保存14個月。3、微生物在液體凍結(jié)過程中，即液體降溫一結(jié)冰一形成玻璃化晶態(tài)的過程中會發(fā)生從宏觀到微觀的適應(yīng)性變形，以保持其生物活性。在凍干制劑生產(chǎn)的凍結(jié)過程中采用5°C、0°C、_6°C各平衡I小時，有利于原液對溫度的適應(yīng)性變形，對維持凍干制劑的生物效價是必要的。下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。
具體實施例方式實施例I、生產(chǎn)本發(fā)明凍干制劑本發(fā)明新城疫病毒凍干制劑的生產(chǎn)包括以下步驟I、生產(chǎn)用種毒為clone30株；2、孵化取受精蛋，按照《中華人民共和國生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(以下簡稱《標(biāo)準(zhǔn)》)中的方法37°C孵育10日。用生理鹽水稀釋種毒，使病毒效價為91og2，每雞胚尿囊腔接種該種毒O. 1ml，置36 °C孵育72小時；3、收獲原液棄去24小時前死亡的雞胚，剩余的雞胚置4°C冷藏過夜。在無菌條件下吸取尿囊液，混勻過濾，密閉保存；4、將收獲的原液用O. 45 μ m濾芯過濾，用超濾器濃縮，用層析柱純化；
5、配制添加劑(I)取抗壞血酸鈉108. 7克、羥乙基淀粉198. 2克、精氨酸19. 6克，溶于600毫升蒸餾水中，加入20%人血白蛋白20ml，過濾，115°C消毒40分鐘；(2)將第(I)溶液，用10%無菌磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)溶液的pH值至6. 8±0· 1，補加蒸餾水至1000毫升，混勻；6、配制凍干制劑液將效價調(diào)整為91og2的原液與添加劑溶液以I : I的比例混勻，注入西林瓶中，半加塞；7、凍結(jié)將分裝好的凍干制劑液放入冷凍干燥工作箱內(nèi)，預(yù)置降溫程序，分別在5°C、0°C、-6°C各平衡I小時，啟動快速凍結(jié)程序，將物料溫度降至_50°C，維持3小時；8、真空干燥啟動真空工作程序，待冷凍干燥器內(nèi)相對壓力降至5Pa，預(yù)設(shè)升溫程序，以每次升溫15°C維持30分鐘，持續(xù)減壓升溫至30°C并維持3小時；9、全部加塞，壓封鋁蓋。成品凍干制劑按《標(biāo)準(zhǔn)》所列方法檢定，合格。實施例2、本發(fā)明凍干制劑在2 8 °C保存條件下的保質(zhì)期在2 8°C條件下分別測定了 3個批次用本發(fā)明方法制備的凍干制劑在不同時期的半數(shù)感染率(EID5tl)，結(jié)果如表I所示表I :凍干制劑在2 8°C保存條件下的EID50

權(quán)利要求
1.一種病毒凍干制劑的制備方法，包括新城疫病毒原液及冷凍干燥添加劑，其特征在于所述冷凍干燥添加劑基本上由人血白蛋白和羥乙基淀粉組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的病毒凍干制劑，其特征在于所述冷凍干燥添加劑中還含抗壞血酸鈉、精氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的病毒凍干制劑，其特征在于所述冷凍干燥添加劑各組分的重量體積比為人血白蛋白 O. 5 ~ 2.0%精氨酸O. 5 ~ 2. 0% 抗壞血酸鈉 9. O - 11. 0%羥乙基淀粉 5. 0~20. 0%
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的病毒凍干制劑，其特征在于所述新城疫病毒原液與所述冷凍干燥添加劑的比例是新城疫病毒原液冷凍干燥添加劑=I I 5 I。
5.一種生產(chǎn)病毒凍干制劑的方法，包括以下步驟 (1)將新城疫病毒原液過O.45 μ m濾芯，經(jīng)過濃縮、純化后加入冷凍干燥添加劑混勻，無菌過濾，分裝于西林瓶中，半加塞，其中所述冷凍干燥添加劑基本上由人血白蛋白、羥乙基淀粉組成； (2)待西林瓶放入冷凍干燥器內(nèi)，分別在4.8 5. 2°C、0. 2 O. 8°C、_5. 8 -6. 2°C各平衡I小時； (3)快速凍結(jié)，將制品溫度降至-48 -52°C維持2.5 3. 5小時； (4)真空干燥； (5)加熱干燥，在制品溫度達到25.5 37. 5°C條件下持續(xù)2. 5 3. 5小時； (6)全部加塞，壓封鋁蓋。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)病毒凍干制劑的方法，其特征在于所述新城疫病毒原液是將新城疫病毒接種于10日齡雞胚尿囊腔內(nèi)，36°C孵化繁殖，收取雞胚尿囊液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)病毒凍干制劑的方法，其特征在于所述冷凍干燥添加劑中還有抗壞血酸鈉、精氨酸；所述冷凍干燥添加劑各組分的重量體積比為人血白蛋白 O. 5 ~ 2.0%精氨酸O. 5 2. 0%抗壞血酸鈉 9.0-11.0%羥乙基淀粉 5. 0~20. 0% 所述新城疫病毒原液與所述冷凍干燥添加劑的比例是新城疫病毒原液冷凍燥添加劑=I : I 5 : I。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種病毒凍干制劑的制備方法。涉及領(lǐng)域為病毒凍干制劑及其制備方法。本發(fā)明的目的是提供一種病毒凍干制劑。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種病毒凍干制劑，包括新城疫病毒原液及冷凍干燥添加劑，所述冷凍干燥添加劑基本上由人血白蛋白和羥乙基淀粉組成。生產(chǎn)上述病毒凍干制劑的方法，包括以下步驟(1)將病毒原液及冷凍干燥添加劑混勻，無菌過濾，分裝于西林瓶中；(2)將西林瓶放入冷凍干燥器內(nèi)，分別在5℃、0℃、-6℃各平衡1小時；(3)快速凍結(jié)，將制品溫度降至-50℃維持3小時；(4)真空干燥；(5)加熱干燥，在制品溫度達到30℃條件下持續(xù)3小時；(6)加塞，封口。
文檔編號A61P31/14GK102908368SQ20111021937
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月2日
發(fā)明者沈麗麗 申請人:天津濟命生生物科技有限公司