專利名稱：肽藥物的長效脂質(zhì)體制劑及其制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于胃腸外的肽藥物的長效脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明的制劑用于皮下(S.C.)或肌肉(i.m.)注射，作用時間為14日以上。此外，本發(fā)明還涉及此種制劑的制備方法。
脂質(zhì)體是一些空球形態(tài)的超顯微粒子。它們具有雙層膜，該雙層膜由兩親分子，多為磷脂構(gòu)成，并包圍著水性的內(nèi)腔。它們由類似人體的物質(zhì)組成，能起到完全不同的物質(zhì)的載體作用，并有針對性地適合于一些特殊要求。而且親水的藥物大多數(shù)被包圍在含水的內(nèi)部，而親脂的物質(zhì)大多數(shù)被結(jié)合在膜中。
脂質(zhì)體被推薦為許多藥物的載體系統(tǒng)，例如作為細胞抑制藥，抗感染藥和免疫調(diào)節(jié)劑的載體系統(tǒng)(參見例如Yatvin，M.B.和Lelkes，P.I.，Med.phys.9，(1982))。脂質(zhì)體的藥物主要用于胃腸外，而且常常爭取達到靜脈給藥。其目的是利用貯存效果，降低副作用或提高有效性。脂質(zhì)體在靜脈內(nèi)注射以后，象所有的膠體體系一樣被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的細胞吸收，以最大限度為2天的半衰期消去，而最好是積聚在肝臟和脾臟內(nèi)(參見Senior，J.H.，CRC，Critical Revievs in Therapeutic Drug Carrier Systems 3，123(1987))。與靜脈內(nèi)注射相比，皮下或肌肉注射后能保持較長時間的有效濃度。脂質(zhì)體制劑的作用時間取決于泡囊中的物質(zhì)釋放，取決于它們從注射處的轉(zhuǎn)移，以及取決于小泡的崩解。物質(zhì)的釋放和崩解主要取決于脂質(zhì)體膜的成分，而轉(zhuǎn)移量依賴于粒子大小，也就是說，隨粒度的降低而增加(參見Arrowsmith等Int.J.Pharm.20，347-362(1984))。另一種因素是制劑中的脂質(zhì)濃度(參見Jackson，A.J.，Res.Comm.Chem.Pathol.Pharmacol.27，293(1980))。
在上述刊物中所敘述的關(guān)于肌肉或皮下注射有脂質(zhì)體的藥物載體的研究，絲毫未表明超過14天以上還有藥物釋放或在注射處有制劑留下。而對各種泡囊成分的脂質(zhì)體制劑和各種藥物的藥代動物學(xué)研究也表明，有效物質(zhì)的釋放或者在14天內(nèi)結(jié)束，或者在這段時間內(nèi)脂質(zhì)體已崩解。
供皮下或肌肉注射的肽脂質(zhì)體制劑已有說明。長時間釋放胰島素的脂質(zhì)體配方例如在GB-B-2，050，287中作了敘述。公開號為WO 87/04592的國際專利申請中說明了不能透過膜的分子(實施例中的降(血)鈣素)的一種脂質(zhì)體釋放系統(tǒng)，該系統(tǒng)是由小的含有效成分的SUV(單層脂質(zhì)體，粒度約為30-100nm)和大的MLV(多層泡囊，粒度約為200-10000納米(nm))的混合物組成。Eukunaga等(見Endocrinology 115，757(1984))敘述了形成了降鈣素的脂質(zhì)體包囊后延長了該蛋白質(zhì)降低血鈣的效果。按照這些刊物中的實施例其有效性證明絕對不會超過14天。
對肽，例如對LHRH類似物敘述了以生物可分解的聚合物為基礎(chǔ)的長效配方，例如，關(guān)于微膠囊參見EP-B0052510和EP-BO 145240，關(guān)于其它受控釋放系統(tǒng)參見EP-BO058 481)。EP-AO 299 402敘述了具有拮抗活性的LHRH類似物的長效配方。
上述4個專利文件中沒有提到脂質(zhì)體配方，而GB-B2050287卻說明了含LHRH的脂質(zhì)體的組成，但該組成不同于本發(fā)明的組成，它含有釋放調(diào)節(jié)劑和皮下注射后的消去半衰期約為4天。
Scharfer等(見Pharmazie 42，674(1987)和Pharmazie 42，689(1987)敘述了作為LHRH的載體系統(tǒng)的脂質(zhì)體。他們用卵黃卵磷脂和磷酯酸的混合物制成了MLV，并研究了對家兔或豬的肌肉注射后的藥代動力學(xué)。藥物從注射處消去的半衰期，最大限度為20天。在此半衰期后，LHRH血濃度是不會再測量出的。
用下面表征的特殊脂質(zhì)體配方，出乎意外地說明，35天后在注射處還可證實有部分LHRH可測出，并會導(dǎo)致有明顯的血藥濃度和藥理學(xué)效果。
因此，本發(fā)明涉及具有延長肽釋放的肽脂質(zhì)體制劑，其特征在于這類肽的分子量約在500和10000之間，脂質(zhì)體膜的磷脂成分具有相轉(zhuǎn)變溫度至少為20℃，主要含有飽和的脂肪酸;皮下或肌肉注射后有效性持續(xù)14天以上。
本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑，由于其特殊組成可保證有效性在14天以上。這表示，此制劑由于其特殊的組成不但在給用處停留14天以上不分解，而且超過這段時間制劑所包含的肽藥仍可釋放出足夠的所需的有效劑量。
有效性最好至少持續(xù)20天，尤其是30天和更長時間更好。
為了把從注射部位的轉(zhuǎn)移速度降低到最低限度，泡囊(脂質(zhì)體)的平均體積當(dāng)量粒度優(yōu)選在600nm和10000nm之間，尤其要超過800nm。脂質(zhì)體膜的磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度較好為30℃以上，最好至少37℃。它主要含有鏈長至少14個碳原子的飽和脂肪酸。
合適的磷脂有例如二肉豆蔻酰-PC(DMPC)，二硬脂酰-PC(DSPC)，二棕櫚酰-PC(PC＝磷脂酰膽堿)或者已水解的或部分水解的天然卵磷脂。為了膜的穩(wěn)定化，例如使用一些甾族化合物的親脂添加劑如膽固醇是合適的。
被包在脂質(zhì)體中的肽類(也包括其生理可以接受的鹽)有天然的，合成的或半合成的，并在生物體內(nèi)有特殊作用。因此，在上面和下面的論述中，按本發(fā)明的含義，所謂肽既指上面所表征的游離的化合物，又指在生理上可接受的肽鹽。它們的分子量約為500至10000。合適的肽例如有LHRH類似物，緩激肽拮抗劑，胰島素，加壓素，催產(chǎn)素，降鈣素，肝素，水蛭素和它們的合成的或半合成的類似物。最好包入一些LHRH結(jié)構(gòu)類似物，例如Buserelin HOE 013(Ac-D-Nal-P-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(α-L-Rha-)Leu-Arg-Pro-Azagly-NHz，參見EP-AO263，521，相當(dāng)于美國專利申請?zhí)?96477)但也適用的有例如水蛭素如HBW023(按照EP-A-0324712，R-DNA-水蛭素，相當(dāng)于美國專利申請?zhí)?95422)，HOE427(＝Ebiratide，〔4-二氧化甲硫氨酸，8-D-賴氨酸，9-苯胺〕-α-MSH-(4-9)-(8-氨基-辛基)酰胺-三乙酸酯，參見EP-A-0 179 332，相當(dāng)于美國專利號4，623，715和4，696，913)和HOE 140(＝H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH 6CH3COOH(參見EP-A-0370453，相當(dāng)于美國專利申請?zhí)?74162)。
皆知，適合作藥物的一些肽在用于生物體后，只是很短時間有效(參見Banga等，Int.J.Pharm.45，15-50(1988)。由于酶或化學(xué)反應(yīng)可使它們失去活性或者很快消失。通過將這些肽包藏在本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑中，可以防止這些有效物質(zhì)在生物體內(nèi)迅速代謝失活，并保證在較長時間內(nèi)不斷地連續(xù)釋放出未變化的藥物。
這些脂質(zhì)體或是單層型或是多層型的。肽不但可以在含水的內(nèi)腔中作為溶液存在，而且可存在于脂質(zhì)體膜中。尤其可通過膜來控制活性物質(zhì)的釋放，也就是說，膜的特性和可能在膜中的有效成分含量會影響有效成份的釋放時間。通過將肽包藏到大的，例如多層的脂質(zhì)體中，由于有效物質(zhì)和載體系統(tǒng)結(jié)合，例如把作用持續(xù)時間提高到例如20天和更長時間。在本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑中，即使30天后在注射部位還可發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體。甚至超過這個時間還可證明有效。
通過加入帶負電或帶正電的電荷載體例如二棕櫚酰-磷脂酰-甘油或膜成中的硬脂酰胺，抗氧化劑或具有穩(wěn)定特性的或影響釋放特性的其它輔助劑還可控制有效物質(zhì)的釋放。
原則上可以按照例如由文獻(參見Lichtenberg，D.，Methods of Biochemical Anlysis 33，337(1988))中知道的各種方法制備脂質(zhì)體。特別合適的是可提供較大量脂質(zhì)體的生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑的制備方法有如下特征a)α)將磷脂成分，必要時和親脂的添加劑一起溶解在合適的有機溶劑中，去除此溶劑，得到的脂質(zhì)基體在添加肽的水溶液后溶解形成脂質(zhì)體，此溶解作用在磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度以上進行，或β)將磷脂成分，必要時和親脂的添加劑，以及肽一起溶解在合適的有機溶劑中，去除此溶劑，用水性介質(zhì)溶解得到的脂質(zhì)基體，此溶解作用在磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度以上進行，或γ)將磷脂成分，必要時和親脂的添加劑一起溶解在揮發(fā)性的有機溶劑中，加入一含水性的，不能和有機相混合的肽溶液，通過在磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度以上的均化作用使此得到的兩相系統(tǒng)轉(zhuǎn)化成一種穩(wěn)定的乳狀液，去除有機溶劑，則生成脂質(zhì)體。
必要時在均化和平衡作用之后將按α至γ的方法得到的脂質(zhì)體調(diào)節(jié)到所要的肽含量，進行灌裝和必要時進行冷凍干燥，或b)按照方法α，β或γ制備不含肽的凍干品和制備裝在一個合適容器中的肽的水性溶液，并且在應(yīng)用前將凍干品和肽溶液合并。
按照本發(fā)明方法獲得的凍干品可按普通的方法例如將水添加到注射物中變成適于肌肉或皮下注射的合適劑型。
在本發(fā)明方法中使用的水性介質(zhì)由水或者由水和一種有機溶劑例如甲醇或乙醇組成。此外，它還可以含有添加劑如食鹽或緩沖劑例如磷酸鹽緩沖液。肽的水性溶液也可具有這樣的添加劑。
以下適當(dāng)?shù)貙嵤┻@些方法。
方法a)
α)將磷脂，必要時和親脂添加劑(例如膽甾醇)一起溶解在一種有機溶劑中，例如乙醇、甲醇、三氯甲烷、氯仿、叔丁醇中。
去除溶劑，確無殘留溶劑，得到其表面盡可能大的脂質(zhì)基體。對此特別合適的是用旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器抽真空和凍干法或這兩種方法結(jié)合使用。
在添加水性的、需要時經(jīng)過緩沖的肽藥物溶液后，脂質(zhì)基體被溶解生成脂質(zhì)體。此過程必須在配制的溫度下進行，該溫度高于磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度，當(dāng)然要低于肽的臨界分解溫度。通過容器的攪拌和使用加速方法(例如玻璃珠或撇沫器)可促進此過程。接著還可使脂質(zhì)體的分散體經(jīng)受例如用Ultraturrax、高壓均化器和類似于方法的均化步驟。產(chǎn)生的脂質(zhì)體在提高的溫度下進行平衡，一直達到穩(wěn)定狀態(tài)和理想的膨脹為止。通過例如用孔徑為1-20μm的膜濾器和玻璃濾器過濾該分散體，分離出粗粒部分的方法來改善分散體的均勻性。
假如藥物未定量形成包囊，在多數(shù)情況下有必要分離出未形成包囊的部分。交叉過濾在分離結(jié)合型的和游離的藥物時都顯示出一些特別的優(yōu)點。這種交叉過濾在適當(dāng)選擇薄膜的情況下也可分離脂質(zhì)體的微細部分(粒度約為400nm)。此外，也可使用離心分離法，色層分離法(凝膠色層分離法，離子交換或吸收色層分離法)或者用吸附法或消化法分離游離的肽。
制成的脂質(zhì)體分散體可用合適方法檢驗藥物濃度，并稀釋到需要的含量，將其裝入安瓿或注射瓶中，在合適的條件下保存。
制備藥物制劑的所有處理步驟均應(yīng)在無菌的條件下進行。
β)制備方法類似于α)，但將肽和親脂成分一起溶解在有機溶劑中。這種方法特別適合于具有親脂特性的肽，適合作溶劑的有乙醇甲醇和叔丁醇。
γ)將磷脂和親脂的添加劑(例如膽甾醇)溶解在易揮發(fā)的有機溶劑，例如乙醚、二異丙醚或它們和二氯甲烷或氯仿的混合物中。在此溶液中加入水性的、與有機相不混合肽溶液。用合適的均化方法(Ultraturrax、超聲波、高壓均化器)在高于磷脂成分的相轉(zhuǎn)化化溫度和低于肽的臨界分解溫度下使此兩相系統(tǒng)轉(zhuǎn)化成一種穩(wěn)定的乳狀液。然后在需要的溫度和真空條件下去掉有機溶劑。經(jīng)過亞穩(wěn)定的多為凝膠狀的中間狀態(tài)形成脂質(zhì)體，進一步去除溶劑盡可能地除去脂質(zhì)體中的雜質(zhì)。
如α)中所述的方法將脂質(zhì)體繼續(xù)加工，精制和裝入瓶中。
按照α-γ的方法制備和在水性溶液中含有低溫保護劑添加物的或在制備后在其中添加了低溫保護劑的脂質(zhì)體可以冷凍干燥。要把添加劑和凍干法的選擇調(diào)整到脂質(zhì)體在應(yīng)用前容易重新組合并使含有的肽藥物大部分以結(jié)合形式存在。合適的低溫保護劑例如有甘露醇、木糖醇、山梨醇、海藻醇、葡聚醇、聚乙烯吡咯烷酮、清蛋白、羥乙基淀粉和改性明膠。
方法b)無有效物質(zhì)的脂質(zhì)體可按照方法a)α，β或γ進行制備并按如上所述凍干。將無菌的、水性的肽溶液加到凍干品中制成脂質(zhì)體分散體，然后就可使用此脂質(zhì)體分散體。
必要時，通過合適的均化方法將按照方法a)α，β或γ得到的不含有效物質(zhì)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)化成小泡囊分散體。一種特別合適的方法是例如用微流化器進行高壓均化，此外還可用超聲波或Ultraturrax進行處理。
可將這里產(chǎn)生的小顆粒脂質(zhì)體在按上面所述進行凍干之前進行除菌過濾。使用前把這些脂質(zhì)體與肽溶液合并。如此獲得的分散體主要是大泡囊。
本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑表明可長時間連續(xù)釋放出有效物質(zhì)。此外，它的特點是貯存穩(wěn)定性高，因此正如實施例9中所述，貯存12個月以后，和脂質(zhì)體結(jié)合的肽仍在99%以上，而且粒度不變。
實施例1將200毫克LHRH拮抗劑(HOE 013)，1348毫克氫化卵磷脂(相轉(zhuǎn)變溫度約為53℃)和652毫克膽甾醇在50℃下溶解在50毫升甲醇中。用0.2μm的薄膜過濾器將溶液進行無菌可濾，并在無菌條件下加工成脂質(zhì)體。為此，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在55℃下蒸去溶劑直到生成薄層脂質(zhì)基體(薄膜)。在通氮情況下脂質(zhì)薄膜加入20毫升無菌的食鹽溶液，于55℃下兩小時內(nèi)脂質(zhì)薄膜從容器壁上溶解，并于50℃振蕩過夜。用5μm的薄膜過濾器過濾所獲得的脂質(zhì)體分散體并用食鹽溶液補足到100毫升。將獲得的分散體轉(zhuǎn)移到聚碳酸酯離心玻璃器皿中，在20.000×g的條件下于5℃離心分離5分鐘。取出帶有溶解的未形成包囊的LHRH拮抗劑的物料。加入新鮮的食鹽溶液后，脂質(zhì)體再被分散，重復(fù)離心分離五次;接著將脂質(zhì)體添滿到20毫升。用高壓液相色譜法(HPLC)測定有效物質(zhì)含量后，用食鹽溶液稀釋此脂質(zhì)體分散體到最終濃度為1.6毫克HOEO13/毫升，并裝入無菌的注射瓶中。與體積有關(guān)的粒度平均為2300納米，形成包囊的效率為20%。
實施例2
體重約200克的雌性大鼠皮下注射來自實施例1的2×1ml脂質(zhì)體(相當(dāng)于一次給藥3200μg HOE 013)。用同樣的一組實驗動物作對照，對照組試驗動物只注射溶劑(食鹽溶液，安慰藥)，而另一組動物每天注射LHRH拮抗劑溶液(60μg，在5%的甘露醇溶液中)。每星期用動情期涂片法檢查這些動物的動情抑制作用。在第35天測定尿中的HOE 013的溶度，計算出24小時的排泄量。
實驗結(jié)果(見表1)表明，注射脂質(zhì)體組的動物和其它兩個對照組不同，35天后還明顯地受到抑制。若注射脂質(zhì)體制劑，在第35天的排泄率(4.5μg)證明是明顯的拮抗藥物排泄物。此排泄率與與血漿濃度密切相關(guān)。
實施例3將40毫克LHRH-拮抗劑HOE 013，262毫克二棕櫚酰-磷脂酰-膽堿(DPPC)(相轉(zhuǎn)變溫度約41℃)和138毫克膽甾醇溶解在15毫升甲醇中。用類似實施例1的方法制備脂質(zhì)體，但用于溶解薄膜和填滿脂質(zhì)體包囊的水相體積為4毫升。
實施例4將40毫克LHRH-拮抗劑HOE 013、158.7毫克二肉豆蔻酰-磷脂酰-膽堿(DMPC)(相轉(zhuǎn)變溫度約23℃)和41.3毫克膽甾醇按實施例3所述的方法加工成脂質(zhì)體。
實施例5將由實施例1，3和4中得到的脂質(zhì)體進行其在試管中的釋放試驗。為此，把1毫升分散體封閉在滲析軟管內(nèi)，放在一個容器中，加入10毫升緩沖液(Tris HCl 0.1M，pH7.4用NaCl等滲化)并于37℃在振蕩下保溫。每天更換緩沖液并分析HOE 013的含量。實驗結(jié)果(見表2)表明，釋放量明顯地依賴于脂質(zhì)體膜的組成。
實施例6用200毫克Buserelinacetat代替HOE 013按實施例1所述的方法加工成脂質(zhì)體。與體積有關(guān)的粒度平均為1800nm，形成包囊效率為10.6%。
實施例7將250克水解大豆卵磷脂在40℃下溶解在33.3毫升二異丙醚和16.7毫升二氯甲烷中。加入4毫升由500毫克水蛭素(HBW 023)溶于pH值為7.4的10毫摩爾(mM)磷酸鹽緩沖液中而成的溶液。混合物在超聲浴中均化1分鐘。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中于55℃下蒸去有機溶劑。生成的脂質(zhì)體平衡1小時，然后用5μm薄膜過濾器過濾。通過在8000×g條件下的三次離心分離去除未形成包囊的部分之后，把脂質(zhì)體包囊裝入容器至10毫升。形成包囊的效率為11.5%。
實施例8將135毫克水解卵黃卵磷脂在40℃下溶解在8毫升二異丙醚和4毫升二氯甲烷中，加入4毫升由20毫克Ebiratid(HOE 427)溶于pH值為3.5mM醋酸鹽緩沖液中而成的溶液。讓此混合物在超聲浴中均化1分鐘。在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器中于55℃下蒸去有機溶劑。讓生成的脂質(zhì)體平衡1小時，然后用5μm薄膜過濾器過濾。通過在16000×g速率下三次離心分離去除未形成包囊的部分之后，把脂質(zhì)包囊裝入容器至10毫升。形成包囊的效率為15%。
實施例9將由實施例1中得到的脂質(zhì)體在4℃下存放12個月，然后檢驗其貯存穩(wěn)定性。通過每分鐘16000轉(zhuǎn)(UPM)的離心分離，分離出存放后由脂質(zhì)體釋放入分散體溶劑(水)中的肽，利用高壓液相色譜法(HPLC)加以測定。貯存12個月后，由包囊中釋放出0.75%的有效物質(zhì)，99.25%HOE 013仍結(jié)合在脂質(zhì)體中。用光子相關(guān)光譜法測定的與體積有關(guān)的平均粒度為2300nm，與初始數(shù)值相比未發(fā)生變化。
實施例10將2000毫克由二棕櫚酰-磷脂酰膽堿(DPPC)、水解卵黃卵磷脂或卵黃卵磷脂和膽甾醇(CH)混合成的等摩爾混合物溶解在甲醇中。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，于55℃在真空下蒸去溶劑。用20.0毫升由200毫克HOE 013溶于5.4%的甘露醇水溶液中而成的溶液在55℃下將脂質(zhì)基體溶解，并在50℃下平衡過夜。用5μm過濾器將生成的脂質(zhì)體分散體進行過濾，然后冷卻到約20℃通過每分鐘1000轉(zhuǎn)的離心分離，經(jīng)過10分鐘即可分離出未形成包囊的部分。加入0.9%的食鹽溶液和再分散后重復(fù)離心分離兩次。
把精制過的脂質(zhì)體部分稀釋到需要的HOE 013濃度并裝入無菌的注射瓶中。形成包囊的效率對于由DPPC/脂甾醇(50∶50摩爾%)制成的脂質(zhì)體制劑為61.6%;
對于由水解卵黃卵磷脂(HPC)/膽甾醇(50∶50摩爾%制成的脂質(zhì)體制劑為78.9%;
對于由卵黃卵磷脂(PC)/膽甾醇(50∶50摩爾%)制成的脂質(zhì)體制劑為74.3%。
實施例11給平均體重為190-200克的雌性大鼠皮下注射由實施例10制成的脂質(zhì)體。劑量為每只動物7.2毫克HOE 013。在規(guī)定的時間用陰道細胞法計算出對月經(jīng)周期的抑制作用并和對照試驗組比較。對動情期抑制的平均時間間隔注射PC/CH-脂質(zhì)體(第2組)為14天;
注射HPC/CH-脂質(zhì)體(第3組)為34天;
注射DPPC/CH-脂質(zhì)體(第4組)為48天。
實施例12將3.37克水解卵磷脂和1.63克膽甾醇溶解在100毫升甲醇中。于60℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)蒸發(fā)30分鐘成為脂質(zhì)薄膜。加入玻璃珠后，添加100毫升加熱到60℃的甘露醇溶液(5.4%)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)于60℃旋轉(zhuǎn)燒瓶60分鐘使此脂質(zhì)薄膜溶解。
將此脂質(zhì)體分散體在一個小噴嘴(Verstallen公司產(chǎn)品)中于縫隙寬度10和60℃的溫度下處理15分鐘。生成的少量脂質(zhì)體通過0.2μm薄膜過濾器進行過濾，在注射瓶中冷卻后，接著進行凍干。
而將凍干品和每毫升水中有1毫克HOE 013的溶液一起加到注射液中并在60℃下振蕩以再生。
按照實施例1的方法通過重復(fù)離心，分離出未形成包囊的部分，有效物質(zhì)與脂質(zhì)體結(jié)合的部分為28.9%。
權(quán)利要求
1.能延長釋放肽的時間的肽脂質(zhì)體制劑的制備方法，其特征在于a)α)將磷脂成分，必要時和親脂的添加劑一起溶解在合適的有機溶劑中，去除此溶劑，得到的脂質(zhì)基體在添加肽的水性溶液后溶解形成脂質(zhì)體，此溶解作用在磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度以上進行，或β)將磷脂成分，必要時和親脂的添加劑，以及肽一起溶解在合適的有機溶劑中，去除此溶劑，用水性介質(zhì)溶解得到的脂質(zhì)基體，該溶解作用在磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度以上進行，或γ)將磷脂成分，必要時和親脂的添加劑一起溶解在揮發(fā)性的有機溶劑中，加入水性的、和有機相不能混合的肽溶液，在磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度以上經(jīng)均化作用，使得到的兩相系統(tǒng)轉(zhuǎn)化成一種穩(wěn)定的乳狀液，去除有機溶劑，則生成脂質(zhì)體，按照方法α到γ得到的脂質(zhì)體分散劑，必要時均相化和平衡化后，調(diào)整所需的肽含量、填充、和必要時冷凍干燥，或b)按照方法α，β或γ制備不含肽的脂質(zhì)體凍干品，并將水性的肽溶液裝于合適的容器中，在應(yīng)用前將凍干品和肽溶液合并。所加入的肽，其分子量約在500和10000之間。脂質(zhì)體薄膜的磷脂成分，其相轉(zhuǎn)變溫度至少為20℃并主要含有飽和脂肪酸。這種制劑的有效性在皮下注射或肌肉注射后可持續(xù)14天以上。
2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于要遵照以下一個或多個條件a)肽是一種LHRH類似物，一種緩激肽拮抗藥劑，HOE427或一種水蛭素衍生物;b)磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度在30℃以上;c)磷脂成分中的主要飽和脂肪酸的鏈長至少有14個碳原子;d)脂質(zhì)體薄膜含有一種類甾醇添加物;e)脂質(zhì)體的與體積有關(guān)的平均粒度至少為600至10000納米;f)得到的制劑的有效性至少可持續(xù)20天。
3.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于要遵照以下的一個或多個條件a)肽是一種LHRH類似物，HOE140，HOE427或HBW023;b)磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度至少為37℃;c)磷脂成分中的主要飽和酸的鏈長至少有14個碳原子;d)脂質(zhì)體薄膜含有一種類甾醇添加物;e)脂質(zhì)體的與體積有關(guān)的平均粒度至少為600至10000納米;f)得到的制劑的有效性至少可持續(xù)30天。
4.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于要遵照以下的一個或多個條件a)肽是Buserelinacetat或HOE 013;b)磷脂成分的相轉(zhuǎn)變溫度至少為37℃;c)磷脂成分是二棕櫚酰-磷脂酰膽堿(DPPC)或天然的水解卵磷脂;d)薄膜含有膽甾醇添加物;e)脂質(zhì)體的與體積有關(guān)的平均粒度至少為600至10000納米;f)得到的制劑的有效性至少可持續(xù)30天。
5.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在薄膜材料中附加電荷載體。
6.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于添加抗氧化劑和其它具有穩(wěn)定作用或影響釋放性能的助劑。
7.按權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體制劑作為皮下注射或肌肉注射的用途。
全文摘要
本說明書說明了能延長肽的釋放時間的肽脂質(zhì)體制劑。這種肽的分子量在500和10000之間。脂質(zhì)體薄膜的磷脂成分表明其相轉(zhuǎn)變溫度至少為20℃，并且主要含有飽和脂肪酸。皮下注射或肌肉注射后有效性持續(xù)14天以上。此外，還說明了這種脂質(zhì)體制劑的制備方法。
文檔編號A61K38/00GK1055483SQ91101790
公開日1991年10月23日 申請日期1991年4月11日 優(yōu)先權(quán)日1990年4月12日
發(fā)明者鮑爾-戈哈德·卡巴特, 杰根·科特·桑多 申請人:赫徹斯特股份公司