專(zhuān)利名稱(chēng)：一種新型定位口服藥用組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，是的一種胸腺肽α1的新劑型——腸溶微球制劑即定位于小腸釋放的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
胸腺素α1(thymosin，簡(jiǎn)稱(chēng)Tα1)是一種具有免疫功能的多肽，臨床上多用于治療病毒性肝炎，其氨基酸序列為-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-[Glodstein AL，Low TL，McAdoo M，McClure J，et al.Thymosin alpha1isolation and sequence analysis of an immunological active thymic peptide.Proc Natl Acad SciUSA，1977，74(2)725～729]。目前Tα1只有一種劑型——注射用粉針劑，給藥途徑單一，為皮下注射，且因穩(wěn)定性方面的原因，對(duì)貯存條件及使用過(guò)程中要求較高。
由于Tα1的適應(yīng)癥是肝炎、惡性腫瘤、免疫缺陷疾病等，用藥周期較長(zhǎng)，這不僅給患者長(zhǎng)期使用帶來(lái)不便而且也給患者帶來(lái)不必要的痛苦。因此Tα1的口服制劑是十分需要的。
目前尚未見(jiàn)Tα1口服制劑的專(zhuān)利或?qū)＠暾?qǐng)。
中國(guó)專(zhuān)利(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?2136181.9，授權(quán)公告號(hào)CN1176718C)披露了Tα1微球制劑及其制備方法，其采用乳化劑Tween80或Span80和3～5mg Tα1乳化于10ml含5～20％PLGA的二氯甲烷溶液中，溫度為15±2℃，即成Tα1乳劑；在攪拌條件下將制備好的乳劑緩慢滴入含0.5～10％的PVA的水溶液中，攪拌10min，速度為300～1000rpm，再向此體系中傾入500ml蒸餾水，繼續(xù)攪拌，使有機(jī)溶劑揮干形成含藥微球。該專(zhuān)利提出的實(shí)施例使用小白豬，建立了深I(lǐng)I°燙傷模型，使用Tα1微球的創(chuàng)面愈合較未使用者更快。

發(fā)明內(nèi)容
蛋白質(zhì)與多肽類(lèi)藥物口服給藥需解決兩個(gè)問(wèn)題，一是穩(wěn)定性問(wèn)題，因?yàn)樗幬镌诳诜笫紫冗M(jìn)入胃中，蛋白質(zhì)與多肽類(lèi)藥物很難承受胃液的強(qiáng)酸性環(huán)境，且胃液中還含有胃蛋白酶以及消化道中存在的其他酶對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生降解破壞作用；本發(fā)明人將Tα1制成腸溶微球，在胃中不溶，進(jìn)入腸道微球中的Tα1溶出，即可避免胃酸與胃蛋白酶對(duì)Tα1的破壞作用；另外，在處方中加入透明質(zhì)酸酶，水解透明質(zhì)酸，減少透明質(zhì)酸阻止外來(lái)物在組織中的擴(kuò)散性能，使粘膜的密度降低；因多肽藥物的分子量較大，存在著胃腸道細(xì)胞的屏障作用，加入吸收促進(jìn)劑可解決這一問(wèn)題。
一、試劑、材料與儀器D25-2型電動(dòng)攪拌器，杭州儀表電機(jī)廠(chǎng)；7901型電磁臺(tái)式攪拌器 上海光華儀器儀表廠(chǎng)丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)藥用級(jí)，連云港制碘廠(chǎng)鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯藥用級(jí)，日本信越(Shin-Etsu Chemical Co.，Ltd)Tα1標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自意大利ISFS.P.A.公司，明膠、福氏完全佐劑購(gòu)自Sigma公司，生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG為Catalog公司產(chǎn)品透明質(zhì)酸酶Sigma公司明膠青海明膠股份有限公司聚氧乙烯月桂醇醚分析純，Ubichem公司月桂氮唑酮分析純，湖北南星化工總廠(chǎng)膽酸鈉藥用級(jí)，四川正東制藥有限責(zé)任公司卵磷脂藥用級(jí)，黑龍江鑫威格藥業(yè)有限公司豆磷脂藥用級(jí)，上海金伴藥業(yè)有限公司聚維酮系列藥用級(jí)，BASF公司亞油酸藥用級(jí)，哈藥集團(tuán)制藥總廠(chǎng)苯甲醇藥用級(jí)，徐州平光制藥有限責(zé)任公司乙醇分析純，北京化學(xué)試劑公司二、微球的制備與檢測(cè)方法1.微球的基本制備方法精密稱(chēng)取Tα1適量溶于0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液中，精密稱(chēng)取丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)及其他成分適量溶于乙醇中，將兩種溶液混勻，再于高速攪拌下分散于液體石蠟中，緩慢加入明膠溶液，攪拌至微球固化，離心收集沉淀，用石油醚除去表面的液體石蠟，減壓干燥12h即得。對(duì)制備出的微球，采用光學(xué)顯微鏡觀(guān)察微球的外觀(guān)形態(tài)。
2.微球抗酸能力的測(cè)定稱(chēng)取兩份Tα1腸溶微球各0.1g，一份測(cè)定其含藥量，另一份在37℃ 200ml人工胃液中攪拌2h，離心，取沉淀物測(cè)定其中的Tα1保留量，并在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察微球的形態(tài)變化，重復(fù)3次。具體測(cè)定方法略。
3.微球腸溶能力考察稱(chēng)取兩份Tα1腸溶微球各0.1g，放射一份測(cè)定其含藥量，另一份在37℃ 200ml人工腸液中攪拌1h，測(cè)定溶液中的Tα1量，計(jì)算Tα1的釋放度，重復(fù)3次。具體測(cè)定方法略。
4.ELISA法檢測(cè)Tα1血漿水平及給藥方法采用ELISA法測(cè)定志愿者血漿Tα1水平。首先測(cè)定給藥前6名健康志愿者血漿Tα1水平。給予Tα1原料藥粉5mg，測(cè)定Tα1水平。1周后，再分別給予6名健康志愿者實(shí)施例10制備的Tα1微球5mg，測(cè)定血漿中的Tα1水平。
具體測(cè)定方法簡(jiǎn)述如下以Tα1與BSA的偶聯(lián)復(fù)合體免疫新西蘭大白兔制備兔抗Tα1多克隆抗體。以Tα1(200ng/ml)100μl包被酶標(biāo)板，4℃孵育過(guò)夜，洗板后以3％明膠4℃封閉過(guò)夜，去除封閉液，洗板后每孔加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)血漿標(biāo)本50μl和稀釋的抗血清50μl充分混勻，37℃孵育120min，洗板后加入生物素標(biāo)記的羊抗兔抗體稀釋液100μl，37℃孵育60min，洗板后加入親和素標(biāo)記的辣根過(guò)氧化酶稀釋液100μl，37℃孵育60min，洗板后加入OPD顯色，在酶標(biāo)示儀上測(cè)490nm的吸光度。所有測(cè)定以均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)。未給藥的空白血漿測(cè)定在第1天的上午10:00進(jìn)行；于第2天上午8:00給予原料藥，第9天上午8:00給予腸溶微球，測(cè)定口服給予原料藥及微球后1、2、5及8小時(shí)的血漿Tα1水平。
三、實(shí)施例實(shí)施例1Tα1100mg磷酸鹽緩沖液10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào) 5.0g乙醇適量明膠溶液50ml照以上基本制備方法制備腸溶微球，對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例2Tα1100mg磷酸鹽緩沖液 10ml鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯 5.0g乙醇 適量明膠溶液 50ml照以上基本制備方法制備腸溶微球，對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例3Tα1100mg磷酸鹽緩沖液 10ml醋酸纖維素酞酸酯 5.0g乙醇 適量明膠溶液 50ml照以上基本制備方法制備腸溶微球，對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例4Tα1100mg磷酸鹽緩沖液 10ml蟲(chóng)膠 5g乙醇 適量明膠溶液 50ml照以上基本制備方法制備腸溶微球，對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例5Tα1100mg透明質(zhì)酸酶 5mg磷酸鹽緩沖液10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào) 5.0g乙醇適量明膠溶液50ml照以上基本制備方法制備腸溶微球，其中透明質(zhì)酸酶與Tα1一同溶解于磷酸鹽緩沖液；對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例6Tα1100mg透明質(zhì)酸酶5mg磷酸鹽緩沖液 10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)5.0g聚氧乙烯月桂醇醚 2mg乙醇 適量明膠溶液 50ml制備方法同實(shí)施例5，其中聚氧乙烯月桂醇醚與其他成分一同溶解于乙醇中；對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例7Tα1100mg透明質(zhì)酸酶 5mg
磷酸鹽緩沖液 10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)5.0g聚氧乙烯月桂醇醚 2mg月桂氮唑酮2mg乙醇 適量明膠溶液 50ml制備方法同實(shí)施例6，其中月桂氮唑酮與其他成分一同溶解于乙醇中；對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例8Tα1100mg透明質(zhì)酸酶5mg磷酸鹽緩沖液 10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)5.0g聚氧乙烯月桂醇醚 2mg膽酸鈉2mg乙醇 適量明膠溶液 50ml制備方法同實(shí)施例6，其中膽酸鈉與其他成分一同溶解于乙醇中；對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例9Tα1100mg透明質(zhì)酸酶5mg磷酸鹽緩沖液 10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)5.0g聚氧乙烯月桂醇醚 2mg卵磷脂2mg乙醇 適量明膠溶液 50ml制備方法同實(shí)施例6，其中卵磷脂與其他成分一同溶解于乙醇中；對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
實(shí)施例10Tα1100mg透明質(zhì)酸酶5mg磷酸鹽緩沖液 10ml丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)5.0g聚氧乙烯月桂醇醚 2mg月桂氮唑酮2mg苯甲醇2mg乙醇 適量明膠溶液 50ml
制備方法同實(shí)施例6，其中苯甲醇與其他成分一同溶解于乙醇中；對(duì)制備的微球進(jìn)行形態(tài)觀(guān)察及抗酸能力與腸溶能力的測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
四、檢測(cè)結(jié)果1.微球的耐酸情況及人工腸液中釋放情況表1 Tα1腸溶微球性質(zhì)考察結(jié)果

結(jié)果可見(jiàn)微球耐酸力較好，在人工腸液中釋放1h即幾乎全部釋放。
2.ELISA法檢測(cè)Tα1血漿水平表2 6名健康志愿者服藥后不同時(shí)間的血漿Tα1水平(均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，μg/ml)

由表中結(jié)果可見(jiàn)，腸溶微球在給藥后1h及2h的血漿水平比直接給予原料藥的要低，表明給藥2h以?xún)?nèi)藥物在胃中基本上未釋放，血漿藥物水平與未服藥的水平相當(dāng)，表明微球的體內(nèi)耐酸性能良好；給藥后5h與8h腸溶微球制劑進(jìn)入腸道并釋放藥物，藥物的血漿水平比給予原料藥者高，有顯著性(P＜0.01)。同時(shí)，以梯形法計(jì)算腸溶微球的AUC值顯著高于原料藥的AUC值(因取樣時(shí)間點(diǎn)較少，未列出AUC數(shù)據(jù))。
權(quán)利要求
1一種新型定位與小腸或結(jié)腸釋放制劑——口服胸腺肽α1腸溶制劑，其包括胸腺肽α1，吸收促進(jìn)劑，明膠和腸溶材料等。
2.權(quán)利要求1的口服胸腺肽α1腸溶制劑，其中吸收促進(jìn)劑選自聚氧乙烯月桂醇醚、月桂氮唑酮、膽酸鈉、甘氨膽酸鈉、?；悄懰徕c、脫氧膽酸鈉、癸酸、癸酸鈉、油醇、油酸、β-環(huán)糊精、EDTA-Na2、羥丙基-β-環(huán)糊精、卡波姆、氧乙醇、十二烷基硫酸鈉、芐澤、吐溫、司盤(pán)、桉葉油醇、薄荷腦、冰片、甘草次酸、丙二醇、甘油、乙醇、甘露醇、枸櫞酸、磷酸鹽緩沖液、水楊酸鈉、卵磷脂、豆磷脂、聚維酮、苯甲醇、亞油酸、苯甲酸芐酯、油酸乙酯及尿素，吸收促進(jìn)劑可選用以上中的一種或數(shù)種。
3.權(quán)利要求1的口服胸腺肽α1腸溶制劑，其中吸收促進(jìn)劑最優(yōu)為聚氧乙烯月桂醇醚、月桂氮唑酮合并使用。
4.權(quán)利要求1的口服胸腺肽α1腸溶制劑，其中腸溶材料丙烯酸樹(shù)脂、鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯、醋酸纖維素酞酸酯或蟲(chóng)膠。
5.權(quán)利要求3所述的腸溶材料更優(yōu)選為丙烯酸樹(shù)脂，型號(hào)更優(yōu)選為丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)。
6.權(quán)利要求1～5任何要求的口服胸腺肽α1制劑，其中胸腺肽α1的量為每個(gè)劑量單位含1～20mg。
7.權(quán)利要求6的口服胸腺肽α1制劑，其中胸腺肽α1是以微球的形式存在，可以加適當(dāng)?shù)馁x形劑壓成片劑或裝入膠囊。
8.權(quán)利要求6的口服胸腺肽α1腸溶制劑的制備方法如下胸腺肽α1溶于0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液中，丙烯酸樹(shù)脂II號(hào)及其他成分溶于乙醇中，將兩種溶液混勻，再于高速攪拌下分散于液體石蠟中，緩慢加入明膠溶液，攪拌至微球固化，離心收集沉淀，除去表面的液體石蠟，減壓干燥12h即得。
9.權(quán)利要求1所述的口服胸腺肽α1腸溶制劑，在治療病毒性肝炎、惡性腫瘤、免疫缺陷疾病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明介紹了一種胸腺素α1的定位釋放于腸道的微球制劑及其制備方法。采用丙烯酸樹(shù)脂等腸溶材料，加入聚氧乙烯月桂醇醚及月桂氮唑酮等吸收促進(jìn)劑，制備成微球。在人工胃液溶出2h后，顯微鏡下觀(guān)察外形光滑、圓整。在人工腸液1h可釋放95％以上。用ELISA法測(cè)定胸腺素α1腸溶微球在健康志愿者口服情況，與原料藥直接口服相比，微球制劑的胸腺素α1血漿水平可顯著提高。
文檔編號(hào)A61K9/48GK1853718SQ200510064708
公開(kāi)日2006年11月1日 申請(qǐng)日期2005年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月18日
發(fā)明者王家權(quán), 徐小虎, 于曉軍, 董紅梅, 王晉, 呂俊耀 申請(qǐng)人:汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院