專利名稱：一種新型乳酸桿菌ly-73及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別是涉及乳酸桿菌的新的菌種以及該菌種的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。凡是能從葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸菌的細菌統(tǒng)稱為乳酸菌。乳酸菌在自然界中分布很廣，在植物體表、乳制品、肉制品、啤酒、葡萄酒、果汁、麥芽汁、發(fā)酵面團、污水以及人畜糞便中，均可分離得到。由于乳酸菌生長而使環(huán)境偏酸，從而抑制腐敗性菌的生長。中國傳統(tǒng)的食品制作保藏技術(shù)，如泡菜、榨菜、腌菜和釀酒等就是利用乳酸菌的這一作用。乳酸菌也有助于改善某些腸道菌群紊亂，如酸乳可醫(yī)治畜、禽的腹瀉，對人的腸炎和赤痢也有療效，有的乳酸菌也可用于生物測定。乳酸菌是一群相當(dāng)龐雜的細菌，按伯杰氏系統(tǒng)細菌學(xué)手冊中的生化及形態(tài)分類法，乳酸菌可分為18個屬，共有200多種，其中乳桿菌屬、鏈球菌屬、明串珠菌屬和乳酸乳球菌屬等屬的菌株產(chǎn)胞外多糖(ExopolySaccharides, EPS)的報道比較多。乳酸菌胞外多糖(EPS)是乳酸菌在生長代謝過程中分泌到細胞壁外的一類糖類化合物，其分子量一般在
4.0 X IO4到6.0X IO6之間。前述的多個屬的乳酸菌能分泌該多糖于細胞外，形成莢膜多糖黏附于細胞表面，或以粘質(zhì)多糖形式存在于細胞周邊培養(yǎng)基中，其形成有利于改善產(chǎn)品的黏度和質(zhì)地，有的胞外多糖還具有降血脂、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等功能。大多數(shù)產(chǎn)EPS乳酸桿菌菌株是從發(fā)酵及乳制品、發(fā)酵肉制品以及發(fā)酵蔬菜中分離獲得的。目前報道的產(chǎn)胞外多糖的主要的乳酸桿菌菌株有:德氏保加利亞桿菌、瑞士乳桿菌等。一般來說，乳酸桿菌EPS的產(chǎn)量都不高。隨著人們對乳酸菌EPS的生理活性逐漸認識和接受，開展的相關(guān)性研究也日益增多。但產(chǎn)量低、成本高、菌株穩(wěn)定性差仍是制約其大規(guī)模生產(chǎn)的主要因素，因此獲得高產(chǎn)EPS乳酸桿菌菌株則成了當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高產(chǎn)EPS的乳酸桿菌菌株及其在微生態(tài)制劑、醫(yī)藥制備、食品等各領(lǐng)域中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的是提供含有上述菌株的微生物制劑、藥物組合物、食品、保健品及食品添加劑。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案:本發(fā)明公開了一種乳酸桿菌LY-73,該菌株命名為:Lactobacillusshenzhenensis sp.nov.,已于2011年12月23日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心進行了保藏，其保藏號為CCTCC M2011481。本發(fā)明公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產(chǎn)物在微生態(tài)制劑領(lǐng)域方面的應(yīng)用。本發(fā)明公開了一種微生態(tài)制劑，所述微生態(tài)制劑含有上述的乳酸桿菌LY-73。
本發(fā)明還公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產(chǎn)物在醫(yī)藥制備領(lǐng)域方面的應(yīng)用。具體的，在制備用于治療或輔助治療免疫疾病的藥物或試劑中的應(yīng)用。具體的，在制備用于治療或輔助治療癌癥的藥物或試劑中的應(yīng)用。具體的，在制備用于治療或輔助治療腸道疾病的藥物或試劑中的應(yīng)用。具體的，在制備用于調(diào)節(jié)腸道菌群的藥物或試劑中的應(yīng)用。具體的，在制備用于輔助降血壓的藥物或試劑中的應(yīng)用。具體的，在制備用于抗氧化的藥物或試劑中的應(yīng)用。具體的，在制備用于治療或輔助治療血脂相關(guān)疾病的藥物或試劑中的應(yīng)用。本發(fā)明公開了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有有效成分的上述乳酸桿菌LY-73。本發(fā)明公開了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有有效成分的上述乳酸桿菌LY-73的代謝產(chǎn)物。所述代謝產(chǎn)物包括乳酸菌胞外多糖(乳酸菌EPS)。本發(fā)明還公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產(chǎn)物在食品領(lǐng)域方面的應(yīng)用。
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本發(fā)明公開了一種食品，所述食品含有上述的乳酸桿菌LY-73。所述食品可為飲料。所述飲料可為酸牛奶或含乳飲料。本發(fā)明公開了一種食品，所述食品含有上述的乳酸桿菌LY-73的代謝產(chǎn)物。本發(fā)明公開了一種食品添加劑，所述食品添加劑包含上述的乳酸桿菌LY-73。本發(fā)明公開了一種食品添加劑，所述食品添加劑包含上述的乳酸桿菌LY-73的代謝產(chǎn)物。所述代謝產(chǎn)物包括乳酸菌胞外多糖(乳酸菌EPS)。本發(fā)明還公開了所述乳酸桿菌LY-73和/或該菌株的代謝產(chǎn)物在保健品領(lǐng)域方面的應(yīng)用。本發(fā)明公開了一種保健品，所述保健品包含上述的乳酸桿菌LY-73。本發(fā)明公開了一種保健品，所述保健品包含上述的乳酸桿菌LY-73的代謝產(chǎn)物。所述代謝產(chǎn)物包括乳酸菌胞外多糖(乳酸菌EPS)。本發(fā)明的乳酸桿菌LY-73，是一種分離的全新的菌株，該菌株具有高產(chǎn)EPS的特性，且具有優(yōu)良的發(fā)酵性能，該新菌株可應(yīng)用于微生態(tài)制劑、醫(yī)藥制備、食品、保健品等多個領(lǐng)域。保藏信息:菌株名稱:Lactobacillusshenzhenensis sp.nov.LY-73保藏日期:2011年12月23日保藏單位:湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)保藏中心，即中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏編號:CCTCCNO: M2011481 具體實施方式
本發(fā)明的乳酸桿菌LY-73，是一種分離的全新的菌株，釆用16Sri)NA通用引物擴增此菌的16SrDNA，其測序結(jié)果和EzTaxon比對結(jié)果為:和Lactobacillus harbinensissp.(從傳統(tǒng)發(fā)酵的酸菜中發(fā)現(xiàn)的新型乳酸菌Lactobacillus harbinensis sp.nov)的相似度為97.6%。結(jié)合實驗說明該菌株為一個新種，命名為Lactobacillus shenzhenensissp.nov.ο本發(fā)明通過相關(guān)生物活性實驗表明，乳酸桿菌LY-73是一種高產(chǎn)EPS菌株，其產(chǎn)生EPS的量為299mg/L，適用于應(yīng)用于微生態(tài)制劑、食品等多個領(lǐng)域。微生態(tài)制劑(Porbioties),也叫活菌制劑(Bigone)或生菌劑,是指運用微生態(tài)學(xué)原理，利用對宿主有益無害的益生菌或益生菌的促生長物質(zhì)，經(jīng)特殊工藝制成的制劑。目前微生態(tài)制劑已被應(yīng)用于飼料、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥保健和食品等各領(lǐng)域中。本發(fā)明提供的乳酸桿菌LY-73可用于制備相關(guān)利用乳酸桿菌及其代謝產(chǎn)物EPS發(fā)揮作用的微生態(tài)制劑，具有良好的應(yīng)用前景。比如，本發(fā)明提供的乳酸桿菌LY-73可用作獸用微生態(tài)制劑，用于防治畜、禽、魚的消化道、泌尿道疾病及用于豬、牛、雞、兔等禽畜的育月巴、抗病，可替代抗生素，減少有毒物質(zhì)在體內(nèi)的殘留量。例如，可在飼料中添加適量的乳酸桿菌LY-73。也可作為生物制品類微生態(tài)制劑用于醫(yī)藥方面。乳酸菌EPS是乳酸桿菌的一種代謝產(chǎn)物，其對形成各種酸乳的質(zhì)構(gòu)和特有的營養(yǎng)保健發(fā)揮著極其重要甚至是不可替代的作用，它可以增加酸奶的粘度、穩(wěn)定性和保水性，使產(chǎn)品具有良好的口感、質(zhì)地和風(fēng)味。因此，本發(fā)明提供的乳酸桿菌LY-73在食品及其加工中也有很好的應(yīng)用，例如可將本發(fā)明中的乳酸桿菌LY-73應(yīng)用于乳制品及其制備中，可得到口感營養(yǎng)俱佳的酸奶等。相關(guān)研究進一步表明乳酸菌EPS可以改善菌株對腸道黏膜的非特異性粘附，增強菌株對腸道的定殖作用；抗腫瘤作用；調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)作用；對細胞體具有保護作用；抑制腸道腐敗菌的繁殖，防治結(jié)腸癌的作用。因此，本發(fā)明提供的乳酸桿菌LY-73可應(yīng)用于腸道疾病、癌癥、免疫系統(tǒng)等方面的藥物制備。例如可將本發(fā)明乳酸桿菌LY-73作為有效組分以醫(yī)藥有效劑量加入到藥物組合物或試劑中，也可將本發(fā)明乳酸桿菌LY-73的代謝產(chǎn)物(例如乳酸菌EPS)作為有效組分以醫(yī)藥有效劑量加入到藥物組合物或試劑中。本發(fā)明提供的乳酸桿菌LY-73還可根據(jù)其特點應(yīng)用于食品添加劑、保健品等領(lǐng)域中，例如將本發(fā)明的乳酸桿菌LY-73制成乳酸桿菌干粉，即可作為食品添加劑或保健藥中的有效成分，發(fā)揮乳酸桿菌及其乳酸菌EPS的多種作用和效果。下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。以下實施例僅僅對本發(fā)明進行進一步的說明，不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。實施例1乳酸桿菌LY-73的篩選鑒定1、采用MRS培養(yǎng)基篩選稱取5克益生菌飲料，分別加到含有45克已滅菌的MRS培養(yǎng)基里梯度稀釋，然后選擇10_5的稀釋度的飲料100微升涂平板(MRS固體培養(yǎng)基:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g,酵母提取物5.0g, Κ2ΗΡ042.0g,檸檬酸三銨2.0g,乙酸鈉5.0g,葡萄糖20.0g,吐溫801.0mL,MgSO4.7Η20 0.5g, MnSO4.4Η200.25g, PH6.2 6.4，115°C滅菌 15min，將平板倒置在 37 度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后從平 板上挑取單菌落，平板劃線分純后待16SrDNA鑒定。2、16SrDNA 分子鑒定:
以菌落為模板，16SrDNA通用引物8F1492擴增此菌的16SrDNA，連接到T載體上克隆測序。測序長度為1.52kb,測序結(jié)果和EzTaxon比對結(jié)果為:和Lactobacillusharbinensis sp.(從傳統(tǒng)發(fā)酵的酸菜中發(fā)現(xiàn)的新型乳酸菌Lactobacillus harbinensissp.nov)的相似度為97.73%。3、微生物學(xué)特性:I)形態(tài)學(xué)與生理學(xué)特性乳酸桿菌LY-73為革蘭氏陽性菌，無芽孢、過氧化氫酶陰性，兼性厭氧菌，桿狀，直徑0.6-0.8 μ m a長度3.5-4.0ym,單個或成對或成鏈、。無鞭毛、菌落灰白色、光滑、菌落直徑1.0mm，溫度生長范圍為10°C _50°C，最適生長溫度37°C，PH值生長范圍4.0-9.0。能在6%氯化鈉溶液中生長。2) API測定結(jié)果:
權(quán)利要求
1.一種乳酸桿菌 LY-73 (Lactobacillus shenzhenensis sp.nov.),其保藏號為 CCTCCM2011481。
2.權(quán)利要求1所述乳酸桿菌LY-73在微生態(tài)制劑、醫(yī)藥制備、食品、保健品領(lǐng)域方面的應(yīng)用。
3.一種微生態(tài)制劑，其特征在于:所述微生態(tài)制劑包含保藏號為CCTCCM2011481的乳酸桿菌LY-73。
4.一種藥物組合物，其特征在于:所述藥物組合物含有保藏號為CCTCCM2011481的乳酸桿菌LY-73。
5.一種食品，其特征在于:所述食品含有保藏號為CCTCC M2011481的乳酸桿菌LY-73。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的食品，其特征在于:所述食品為飲料。
7.一種食品添加劑，其特征在于:所述食品添加劑包含保藏號為CCTCCM2011481的乳酸桿菌LY-73。
8.一種保健品，其特征在于:所述保健品包含保藏號為CCTCC M2011481的乳酸桿菌LY-73。
9.一種由權(quán)利要求1所述的乳酸桿菌LY-73得到的代謝產(chǎn)物。
10.權(quán)利要求9所述乳酸桿菌LY-73的代謝產(chǎn)物在微生態(tài)制劑、醫(yī)藥制備、食品、保健品領(lǐng)域方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明的乳酸桿菌LY-73(Lactobacillus shenzhenensis sp.nov.)，是一種分離的全新的乳酸桿菌菌株，其保藏號為CCTCC M2011481。該菌株具有高產(chǎn)EPS的特性，可應(yīng)用于微生態(tài)制劑、食品、醫(yī)藥制備、保健品等多個領(lǐng)域。
文檔編號A61P37/02GK103184170SQ20111044852
公開日2013年7月3日 申請日期2011年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月28日
發(fā)明者劉峰, 趙姣, 方呈祥, 王俊, 汪建 申請人:深圳華大基因研究院, 深圳華大基因科技有限公司