專利名稱：一種治療艾滋病的藥物組合物及其制備方法、質(zhì)量控制方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別涉及一種用于治療治療艾滋病的藥物組合物。本發(fā)明還涉及該組合物的質(zhì)量控制方法和用途。
背景技術(shù)：
艾滋病是HIV感染引起的獲得性免疫缺陷綜合征，HIV感染進(jìn)程和發(fā)病的不同階段臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，包括在后期發(fā)生的致命性惡性腫瘤和各類機(jī)會性感染。 人感染HIV-I后一般經(jīng)7-12年進(jìn)入發(fā)病期。照現(xiàn)行的診療標(biāo)準(zhǔn)，對于無癥狀且CD+T細(xì)胞數(shù)尚未大幅度降低(例如，仍處于300個每微升以上)的HIV病毒攜帶者，不建議給予抗病毒療法，否則會使病人和社會承擔(dān)誘發(fā)嚴(yán)重抗藥性的巨大風(fēng)險。根據(jù)近十年的臨床實踐，對于進(jìn)入發(fā)病期特別是發(fā)病早、中期的艾滋病患者，在實施HAART主流療法的同時，同時加服中藥進(jìn)行輔助治療，已見到在改善乏力、腹瀉、惡寒等并發(fā)癥狀、減少西藥引起的毒副作用、提高患者治療依從性、提高患者生存質(zhì)量等方面的效果。中藥應(yīng)該能夠成為艾滋病治療的選項。本發(fā)明發(fā)明人在專利申請CN101020027A公開了一種預(yù)防和治療艾滋病的藥物組合物，使用虎杖、毛冬青、淫羊霍、甘草、女貞子，并輔以其他中草藥，制得的制劑對HIV感染 者具有很好的療效，具有延緩HIV感染者發(fā)病的作用。但是，其療效仍有待改善。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種治療艾滋病的藥物組合物。本發(fā)明的另一個目的在于提供上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的再一個目的在于提供上述藥物組合物的在治療艾滋病中的應(yīng)用。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
一種藥物組合物，其原料藥由以下質(zhì)量份的
熟附子20 30份；
淫羊藿、干姜、甘草各I0 15份；
人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份；
黃柏3 5份；
黃芩2 4份組成。優(yōu)選的，原料藥的有效成分經(jīng)水提，之后醇提得到。上述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟
1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液；
2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液；
3)在水提濃液中加入乙醇，攪拌，靜置，之后離心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)將醇提物與其他可接受的藥用輔料，制備得到藥物制劑。
更進(jìn)一歩的，其制備方法包括如下步驟
1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液；
2)將濾液離心，取上清液并濃縮至原料藥重，得水提濃液；
3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小時，之后離心，取上清液，去除こ醇，濃縮干燥，得到醇提物。上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括定性鑒定和指標(biāo)化合物的定量測定，包括如下步驟
1)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定 限度；
2)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中應(yīng)至少檢測出存在有淫羊蕾、甘草、虎杖、干姜、人參和黃岑；
3)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的總量不得超過規(guī)定限度；
4)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃芩苷的含量不低于規(guī)定限度。本發(fā)明的有益效果是
通過國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的實驗評價艾滋病藥物體內(nèi)作用的最佳艾滋病猴模型技術(shù)，證實了本發(fā)明特定的藥物組合物對猴艾滋病病毒感染恒河猴所致艾滋病模型猴具有治療作用，擁有延長生存期、提高生存質(zhì)量、改善和恢復(fù)T3、Cor水平、改善⑶4+T細(xì)胞比率、改善⑶4+/CD8+比值、抑制病毒的綜合療效指標(biāo)中的全部或部分療效指標(biāo)?；趯Π滩『锬Ｐ瓦@種適宜艾滋病動物模型的療效，可以預(yù)見本發(fā)明藥物組合物制劑具有治療人類艾滋病的用途，給予HIV感染者和艾滋病患者本發(fā)明藥物組合物制齊U，能夠緩解病癥，包括穩(wěn)定或者提升HIV病毒感染者和艾滋病病人的CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)水平，緩解臨床癥狀體征、改善生存質(zhì)量。
具體實施例方式發(fā)明人觀察研究了猴艾滋病病毒(SIV)感染的艾滋病猴模型的中醫(yī)證型分布與演變規(guī)律，總結(jié)歸納出疾病的證型分布和演變規(guī)律由感染初期階段出現(xiàn)的煩躁等“實證”演變?yōu)橹衅陔A段的攝食量減少、腹瀉、活動減少，毛發(fā)脫落，體重增長緩慢等“脾虛證”，再發(fā)展成為晩期的肌肉萎縮、蜷縮、畏寒、精神萎靡不振、機(jī)體消瘦、體重急速下降、肢體蜷縮顫抖，甚至眼瞼、臉部水腫等中醫(yī)“脾腎陽虛證”表現(xiàn)。對于艾滋病模型患猴，特別是能夠反映和評價中醫(yī)證特點的病癥復(fù)合猴艾滋病模型患猴的實驗治療結(jié)果，辨證治療優(yōu)于非辨證治療；溫補(bǔ)腎陽法的療效明顯優(yōu)于清熱解毒法的療效。溫補(bǔ)腎陽法采用的中藥應(yīng)立“溫補(bǔ)腎陽”原則為君(首要治則)，“補(bǔ)益元氣、ネト益脾陽”原則為臣(次要治則)，以是否能夠延長生存期，提高生存質(zhì)量為目的，以能否改善和恢復(fù)T3、Cor水平、改善⑶4+Τ細(xì)胞比率、改善⑶4+/⑶8+比值作為療效指標(biāo)?；谏鲜鲇^察研究的結(jié)論和分析，本發(fā)明人按照溫補(bǔ)腎陽，益氣、活血、解毒的治則思路，以熟附子、淫羊藿溫補(bǔ)腎陽作為君藥并以干姜增強(qiáng)溫陽功效，佐以人參補(bǔ)益元氣，再輔之以茯苓、甘草健脾，丹參、虎杖活血，黃柏、黃芩清熱解毒，研制得到本發(fā)明所述的藥物組合物。一種藥物組合物，其原料藥由以下質(zhì)量份的
熟附子20 30份；
淫羊藿、干姜、甘草各I0 15份；
人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份；
黃柏3 5份；
黃芩2 4份組成。優(yōu)選的，原料藥的有效成分經(jīng)水提，之后醇提得到。上述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟
1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液；
2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液；
3)在水提濃液中加入乙醇，攪拌，靜置，之后離心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)將醇提物與其他可接受的藥用輔料，制備得到藥物制劑。更進(jìn)一步的，其制備方法包括如下步驟
1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液；
2)將濾液離心，取上清液并濃縮至原料藥重，得水提濃液；
3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的乙醇，攪拌均勻，靜置6至10小時，之后離心，取上清液，去除乙醇，濃縮干燥，得到醇提物。口服制劑適合艾滋病患者的長期治療，服用方便，生產(chǎn)成本更為低廉。因此，本發(fā)明的藥物組合的劑型優(yōu)選為膠囊劑、片劑、顆粒劑、沖劑、口服液、水滴丸、蜜丸，其中，以膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液為佳。上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括定性鑒定和指標(biāo)化合物的定量測定，包括如下步驟
1)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定限度；
2)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中應(yīng)至少檢測出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人參和黃岑；
3)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的總量不得超過規(guī)定限度；
4)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃芩苷的含量不低于規(guī)定限度。本發(fā)明藥物組合物使用的藥材如下,均應(yīng)符合中國藥典對藥材的質(zhì)量要求。附子是毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。包括黑順片和白附片。淫羊藿是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb. et. Zucc.)Maxim. > 柔毛淫羊藿 Epimedium pubescensMaxim.、巫山淫羊藿 Epimedium wushanense Τ· S. Ying 或車月魚羊淫羊藿 Epimedium koreanumNakai的地上部分。干姜是姜科植物姜Zingiber officinale Rose.的干燥根莖。
甘草是豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草 Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L的干燥根及根莖。人參是五加科植物人參PanaxginsengC. A. Mey.的干燥根及根莖。包括生曬參和紅參，優(yōu)選紅參。丹參是唇形科植物丹參Salvia miotiorrhiza Bge.的干燥根及根莖?；⒄仁橇瓤浦参锘⒄萈olygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根莖。茯苓是多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw. ) Wolf.的干燥菌核。黃柏是蕓香科植物黃柏Phellodendron chinensis Schn eid.的干燥樹皮。黃岑是唇形科植物黃岑Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。下面結(jié)合實施例，進(jìn)ー步說明本發(fā)明。以下實施例中，如無特別說明，份數(shù)均指質(zhì)量份，こ醇的濃度以體積濃度計。實施例I 原料藥組成
熟附子25份、淫羊藿12. 5份、干姜12. 5份、甘草12. 5份、紅參7. 82份、茯苓7. 81份、虎杖7. 81份、丹參7. 81份、黃柏3. 75份、黃芩2. 5份。實施例2
原料藥組成
熟附子20份、淫羊藿14份、干姜15份、甘草10份、紅參10份、茯苓12份、虎杖6份、丹參10份、黃柏5份、黃岑3份。實施例3 原料藥組成
熟附子30份、淫羊藿15份、干姜10份、甘草15份、紅參6份、茯苓6份、虎杖10份、丹參12份、黃柏3份、黃芩4份。實施例4 原料藥組成
熟附子27份、淫羊藿10份、干姜12份、甘草13份、紅參12份、獲茶9份、虎杖12份、丹參6份、黃柏4份、黃岑2份。原料藥有效成分的提取
照處方比例稱取各種原料,加純水煎煮3次，每次加入20倍量的純水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液；
將濾液以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清液，將上清液濃縮至藥液體積以升計等于藥材總質(zhì)量以千克計(即與原料藥等重)；
加入兩倍藥液體積的含體積分?jǐn)?shù)為95%的藥用こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小吋，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心，取上清液，減壓下回收こ醇并減壓下濃縮成稠膏，噴霧干燥，或在80°C以下真空干燥、粉碎，即得原料藥有效成分的提取物。藥物制劑的制備
硬膠囊按上述方法，使用實施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，記為藥物組合物GZY提取物，提取物的得率為13%。將GZY提取物與輔料混合均勻，過80目篩，制粒，加入硬脂酸鎂混合均勻，裝填得到硬膠囊，規(guī)格0. 5g提取物/粒。
經(jīng)檢驗，本品測得含淫羊藿苷4. 19mg/g ;含烏頭堿為O。片劑按上述方法，使用實施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，將提取物粉碎，過100目篩，與輔料混合均勻，過80目篩，制粒，加硬脂酸鎂，經(jīng)60目篩整粒，壓片，即得。顆粒劑按上述方法，使用實施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，加入適量糖粉、苯甲酸鈉和其他輔料，加純水，加熱至沸，攪拌下于80°C保溫2h，冷卻至室溫，過濾，取濾液分裝，即得。質(zhì)量控制方法
(I)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中熟附子的指標(biāo)化合物的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定限度。具體方法如下取膠囊內(nèi)容物10.0g，加氨試 液10mL，拌勻，放置2小時，加乙醚IOOmL,分兩次提取，每次振搖O. 5小時，放置分層，取乙醚層蒸干，殘渣用無水乙醇溶解使成lmL，作為供試品溶液。取烏頭堿對照品適量，加無水乙醇制成每ImL含I. Omg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ L、對照品5 μ L，分別點于用O. I %氫氧化鈉溶液處理過的干燥硅膠G板上，以環(huán)己烷乙酸乙酯甲醇(6.4 : 3.6 : I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)的斑點應(yīng)小于對照品斑點，或不出現(xiàn)斑點。表示按照此方法，每IOg內(nèi)容物中的烏頭堿可以不被檢出；如果被檢出，其中的烏頭堿限度不得多于O. 5mg。(2)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中至少應(yīng)該檢查出如下藥材的存在淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人參、黃芩。本實施例以淫羊藿和甘草為例說明如下。其他藥材參照藥典質(zhì)量檢查標(biāo)準(zhǔn)，按照本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員能夠理解的方法進(jìn)行檢測。其中，淫羊藿的檢測方法為取膠囊內(nèi)容物5g，加水20mL，加熱使溶解，放冷，加二氯甲烷脫脂，振搖2次，每次20mL ;水層加正丁醇振搖提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，減壓蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液及對照品溶液各5μ L，分別點于同一塊硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-稀氨水(8.5 1.5 1.5)的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛高氯酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與淫羊藿苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。其中，甘草的檢測方法為取膠囊內(nèi)容物5g，加水20mL加熱使溶解，放冷，加入氨水調(diào)PH9 10，放置，濾過，濾液加稀鹽酸調(diào)pH 2 3，放置，濾過，留取固體不溶物，力口正丁醇20mL溶解，用正丁醇飽和水溶液萃取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干,加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取甘草酸單銨鹽對照品，加甲醇制成每ImL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄)試驗，吸取上述溶液各5 μ L，分別點于同一塊硅膠G薄層板上，以正丁醇-95%乙醇-氨水(5 I 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(3)按照中國藥典高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中熟附子中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿總量，不得超過規(guī)定限度。以烏頭堿為例，其測定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-O. 04mol/L醋酸銨(53 47)為流動相，檢測波長為235nm。理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備取烏頭堿對照品適量，精密稱定，加甲醇溶液制成每ImL含20 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末，研細(xì)粉，取約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，カロ濃氨液4mL，混勻，加入こ醚30mL，密塞，超聲處理15分鐘，放置過夜，攪拌，分取こ醚液，殘渣加入こ醚提取3次(毎次IOmL)，合并こ醚液，減壓蒸干，殘渣加甲醇溶液溶解，定容至10mL，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測 定，即得。(4)按照中國藥典高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中其他ー些中藥材的指標(biāo)化合物，不得少于規(guī)定限度，特別地，淫羊藿以淫羊藿苷計、甘草以甘草酸計、虎杖以虎杖苷計、黃芩以黃芩苷計，分別不得少于規(guī)定限度。以淫羊藿為例，其測定方法如下
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以こ臆-水(27 73)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于4000。對照品溶液的制備取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含
O.Img的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約O. 5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加稀こ醇45mL,超聲處理(功率250W，頻率25kHz) 30分鐘，放冷，加稀こ醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。其他藥材參照藥典質(zhì)量檢查標(biāo)準(zhǔn)，按照本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員能夠理解的方法進(jìn)行檢測。本發(fā)明藥物組合物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要要求如下
按照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄)試驗，本品含附子雙酯型生物堿以烏頭堿(C34H47NO11)、新烏頭堿(C33H45NO11)、次烏頭堿(C33H45NO10)等的總量計,不得過O. 10mg/g;含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4ciO15)計,不得少于I. 5mg/g0藥物組合物GZY提取物膠囊安全性評價
委托廣州醫(yī)藥エ業(yè)研究院藥物非臨床評價研究中心，在GLP實驗條件下進(jìn)行了一般藥理學(xué)的相關(guān)研究。結(jié)果如下
(一)急性毒性試驗研究
GZY提取物膠囊88. 9g提取物/kg. bw. Cf1 (以公斤體重折算為人用量的759倍，以體表面積折算為人用量的64倍)一天兩次灌胃給藥，可致NIH小鼠15%的動物死亡，能引起動物活動減少、稀便、閉目等，上述癥狀在第3天恢復(fù)正常，井能引致給藥前期體重減輕及雌性動物攝食量減少。而通過對第2及第3天死亡及瀕死動物系統(tǒng)解剖所見，均表現(xiàn)為胃膨大、內(nèi)含大量棕色未消化物，不排除為藥物對胃腸動能影響所致，建議追加安全性藥理試驗，以作進(jìn)ー步研究。
在本試驗條件下，GZY提取物膠囊最大耐受劑量(MTD)約為88. 9g/kg. bw. cf1。( 二 )長期毒性試驗研究
連續(xù)經(jīng)口給予藥物組合物GZY提取物膠囊180天，高劑量組即10. 2g/kg · bw(按公斤體重計為人臨床擬用量87. O倍，按體表面積計為人臨床擬用量14. 6倍)可引致①雄性動物給藥前2周的攝食量的減少及部分動物出現(xiàn)短期的稀便，雌性大鼠給藥中、后期體重增長緩慢。②血液學(xué)檢查紅細(xì)胞數(shù)的減少及不均一性、血紅蛋白量及紅細(xì)胞壓積的減少，網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞比率的增高，可能與受試物引起紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白量、紅細(xì)胞壓積減少相關(guān)，考慮為代償性的變化，但各值在正常變化范圍內(nèi)，認(rèn)為沒有毒理學(xué)意義，③血液生化學(xué)檢查鈉離子的降低及鉀離子的升高，在恢復(fù)期后未完全恢復(fù)，但該值在正常變化范圍內(nèi)，且相關(guān)的組織病理學(xué)未見異常，因此認(rèn)為上述變化沒有毒理學(xué)意義。④給藥期間，動物肝臟及腎臟增大，雌性動物在恢復(fù)期肝臟、腎臟的臟器系數(shù)仍大于陰性對照組，但在正常變化范圍內(nèi)，并結(jié)合血液學(xué)、相關(guān)血生化及組織病理學(xué)等檢測均未見異常，故將該藥物導(dǎo)致的此種反應(yīng)傾向于判斷為無毒理學(xué)意義，但建議臨床研究在大劑量給患者用藥時關(guān)注患者用藥時期及停藥后肝、腎功能的檢測，確保患者安全用藥。中劑量組即5. lg/kg · bw(按公斤體重計為人臨床擬用量43. 5倍，按體表面積計為人臨床擬用量7. 3倍)可引致①雄性動物給藥前2周的攝食量的減少。②血液學(xué)檢查紅細(xì)胞數(shù)的減少及不均一性、血紅蛋白量及紅細(xì)胞壓積的減少。③血液生化學(xué)檢查鈉離子(Na+)的降低及鉀離子(K+)的升高，但該值在正常變化范圍內(nèi)，且相關(guān)的組織病理學(xué)未見異常，因此認(rèn)為上述變化沒有毒理學(xué)意義；④給藥期間，雄性動物腎臟增大，但在正常變化范圍內(nèi)，并結(jié)合血液學(xué)、相關(guān)血生化及組織病理學(xué)等檢測均未見異常，同時在4周恢復(fù)期后此變化可恢復(fù)。低劑量組即1.7g/kg · bw (按公斤體重計為人臨床擬用量14. 4倍，按體表面積計為人臨床擬用2. 4倍)未見有毒理學(xué)意義的異常改變?；謴?fù)期未見其他有毒理學(xué)意義的改變，提不受試物對SD大鼠未見延遲性毒性反應(yīng)。綜上所述，①藥物組合物GZY提取物膠囊對SD大鼠的無毒副作用劑量為I. 7g/kg · bw (按公斤體重計為人臨床擬用量14. 4倍，按體表面積計為人臨床擬用2. 4倍)。②藥物組合物GZY提取物膠囊對SD大鼠的無毒理學(xué)意義的劑量為10. 2g/kg · bw(按公斤體重計為人臨床擬用量87. O,按體表面積計為人臨床擬用量14. 6倍)。(三)一般藥理學(xué)試驗研究
I、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對麻醉Beagle犬呼吸及循環(huán)系統(tǒng)的影響試驗”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊對循環(huán)及呼吸系統(tǒng)功能的影響。試驗結(jié)果表明，藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為O. 32、O. 96、2. 88g藥粉/kg (按體表面積等效劑量法折算，約相當(dāng)于成人臨床擬用量的I. 5,4. 4、13. 2倍)時，未見對麻醉Beagle犬呼吸及循環(huán)系統(tǒng)產(chǎn)生具有毒理學(xué)意義的影響。2、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對昆明種小鼠自主活動次數(shù)的影響試驗研究”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊對小鼠自主活動的影響。試驗結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg(按等效體表面積折算法折算，相 當(dāng)于成人臨床擬用量的1.5、4.4、13.2倍)時，對昆明種小鼠自主活動未見明顯影響。3、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對NIH小鼠機(jī)體協(xié)調(diào)能力的影響試驗研究”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊給藥后對NIH小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)能力的影響。試驗結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg (按等效體表面積折算法折算，相當(dāng)于成人臨床擬用量的1.5、4.4、13.2倍)時，對小鼠機(jī)體協(xié)調(diào)能力無明顯影響。4、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對腹腔注射閾下催眠劑量戊巴比妥鈉NIH小鼠的影響”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊與閾下催眠劑量的戊巴比妥鈉是否有協(xié)同催眠作用。試驗結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg(按等效體表面積折算法折算，相當(dāng)于成人臨床擬用量的I. 5,4. 4、13. 2倍)給藥后I小吋，與閾下催眠劑量的戊巴比妥鈉(30mg/kg)未見協(xié)同催眠作用。5、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對NIH小鼠一般行為活動的影響”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊是否對NIH小鼠一般行為活動情況的產(chǎn)生影響。試驗結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg (按等效體表面積折算法折算，相當(dāng)于成人臨床擬用量的1.5、4.4、13.2倍)時，對NIH小鼠一般行為活動情況的未見明顯影響。綜上所述，藥物組合物GZY提取物膠囊在按約相當(dāng)于成人臨床擬用量的I. 5,4. 4、13. 2倍給藥劑量給藥時，對小鼠的自主活動、機(jī)體協(xié)調(diào)能力、一般行為活動情況未見明顯影響，與閾下催眠劑量的戍巴比妥鈉未見協(xié)同作用，對麻醉Beagle犬呼吸及循環(huán)系統(tǒng)未見有毒理學(xué)意義的影響。上述實驗結(jié)果提示，藥物組合物GZY提取物膠囊在臨床應(yīng)用中當(dāng)給予臨床擬用量時出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)的不良反應(yīng)可能性較小。SIV感染的艾滋病猴模型的中醫(yī)證型分布與演變研究結(jié)果 I、實驗材料
1.1實驗動物、場地及其等相關(guān)方面
實驗動物選擇恒河猴，排除TB感染(pro試驗陰性和胸片X光片正常)、沙門氏菌、志賀氏菌和體內(nèi)外寄生蟲、血清SRV、血清STLV-I、血清SIV等項目檢測陰性，外觀健康，經(jīng)體檢無淺表淋巴結(jié)腫大的3-6歲齡,體重4-7Kg健康恒河猴35只。實驗場地生物安全2級實驗室。動物的飼養(yǎng)和管理動物單籠飼養(yǎng)在不銹鋼籠具中，攝食專用的飼料及自由飲水。室溫20-25 °C，相対濕度50-70 %。按照有關(guān)規(guī)定給予動物福利。I. 2猴艾滋病病毒感染
I. 2. I猴艾滋病病韋株SIVmac239
1.2. 2感染劑量及感染途徑接種劑量I : (1000 5000)，使用1640稀釋液進(jìn)行稀釋，靜脈注射感染，注射量lmL。2、觀察及檢測指標(biāo)
2.I SIV病毒感染相關(guān)檢測指標(biāo)
病毒載量、血常規(guī)、淋巴細(xì)胞亞群(⑶3+、⑶4+、⑶8+、⑶4+/⑶8+)。2. 2病理檢測1、無菌手術(shù)取淋巴結(jié)，固定于10%中性甲醛液，石蠟包埋，H. E染色后光鏡觀察病理形態(tài)學(xué)。2、部分組織器官免疫組化檢查。2. 3死亡動物處理試驗期間死亡動物做尸檢。 3、實驗方案
(I)實驗動物檢疫合格后移入實驗室適應(yīng)環(huán)境，期間進(jìn)行觀察，測量基本數(shù)據(jù)，確定感染前各恒河猴臨床基線特征。分組。(2)分組完成后用SIVmac239株靜脈注射進(jìn)行SIV病毒感染，于感染后14天左右抽血測病毒載量判定感染情況，確認(rèn)感染病毒。待感染后血漿病毒載量降至調(diào)定點(setpoint)，即平臺期時實施給藥治療。期間定期檢測SIV病毒載量和其他指標(biāo)。(3)各組進(jìn)入停藥后觀察期后進(jìn)行8周的臨床觀察，定期抽血檢測血液學(xué)指標(biāo)和進(jìn)行相關(guān)觀察實驗及測試。4、實驗結(jié)果
SIVmac239病毒株感染正常健康恒河猴后，病毒載量由O迅速上升，同時⑶4+比率和⑶4+/⑶8+比值出現(xiàn)下降(表I)。使用30只SIV感染猴開展了中醫(yī)證型分布與演變規(guī)律 觀察研究，在SIV感染的初期階段出現(xiàn)眼紅、煩躁，攻擊性強(qiáng)等“實證”跡象(25/30);隨后出現(xiàn)攝食量減少(為正常進(jìn)食量的50% -75% )、排便異常(主要表現(xiàn)為腹瀉)、活動減少，刺激反應(yīng)速度下降，毛發(fā)干澀、脫落，體重增長緩慢或輕度下降等中醫(yī)“脾(氣)虛”表現(xiàn)和證型轉(zhuǎn)變(15/30);隨著病情進(jìn)展，“脾虛”癥狀加重，到猴艾滋病中晚期/終末期，出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉(完谷不化)、攝食量減少(不足正常50%)、無食欲、毛發(fā)干澀脫落、肌肉萎縮明顯、體重迅速下降、喜蜷縮、嗜睡、畏寒、水腫(眼瞼部多見)等中醫(yī)“脾腎陽虛證”的表現(xiàn)(10/30)；到最后死亡前仍處于精神萎靡不振、對外界刺激反應(yīng)能力降低、肢體蜷縮顫抖、機(jī)體消瘦、眼瞼、臉部水腫等中醫(yī)“脾腎陽虛證型”。甚至衰竭死亡(6/30)。此期相當(dāng)于感染末期或衰竭期階段(表2)。表ISIV感染恒河猴模型的病毒載量與淋巴細(xì)胞亞群數(shù)據(jù)
感染后2個月
_(平臺期)
病毒載量對數(shù)(IogVL)O4.49±1.36
CD4+%30.4 牡9.2 20.80±7.03
CD4+/CD8+比值 1.73±1.23 1.08±0.51
表2SIV感染恒河猴模型的病情發(fā)展過程指標(biāo)變化
. ZZ感染中期感染末期衰竭死亡~
0^(n=30)(n=15) (n=10)(n=6)
T3 (nmol/1) 4.93±1.87 3.37±1.08 2.33±0.66 1.42±1.02 Cor (nmol/1) 1191.9±478.8 842.9±365.9 793.2±434.5 1646.2±1376.3
SIV感染恒河猴模型病情發(fā)展過程中的一些生化指標(biāo)發(fā)生了規(guī)律性變化。其中的血清總?cè)饧紫僭彼?T3)水平明顯下降，皮質(zhì)醇(Cor)水平明顯下降(死亡患猴瀕死前Cor值會出現(xiàn)反跳性升高)，⑶4+%明顯下降、⑶4+/⑶8+比值明顯下降。提示中醫(yī)藥治療艾滋病的治則，在總體上應(yīng)以溫補(bǔ)腎陽為主線，以延緩、阻止、甚至逆轉(zhuǎn)CD4+比率(或CD4計數(shù))、⑶4+/⑶8+比值的下降趨勢，改善T3、Cor的下降為治療有效的標(biāo)志，以所獲中醫(yī)對艾滋病的新認(rèn)識為依據(jù)，針對艾滋病的“腎陽虛”本質(zhì)實施中醫(yī)藥治療。在猴艾滋病病毒感染猴模型上的藥效學(xué)研究結(jié)果
實驗動物、場地、猴艾滋病病毒、感染造模、觀察檢測指標(biāo)、具體實驗方案等實驗條件與
SIV感染的艾滋病猴模型的中醫(yī)證型分布與演變研究結(jié)果相同。藥物及劑量 藥物組合物GZY ；
劑量大劑量2. Og (提取物)/kg. d ;小劑量I. Og/kg. d。給藥途徑與劑型ロ服(灌胃)；膠囊內(nèi)容物以O(shè). 5% CMC-Na在臨用前配制成20%濃度(lmL = 200mg)。實驗結(jié)果
一般情況，見表3。表3結(jié)果說明本發(fā)明藥物組合物有助于治療，在治療期間不治療的SIV病毒模型組有I只患猴死亡(死亡率為1/4)，治療組無論大、小劑量組均無患猴死亡。表3治療期間一般情況
權(quán)利要求
1.ー種藥物組合物，其原料藥由以下質(zhì)量份的 熟附子20 30份； 淫羊藿、干姜、甘草各I0 15份； 人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份； 黃柏3 5份； 黃芩2 4份組成。
2.ー種藥物組合物，其特征在于原料藥的有效成分經(jīng)水提，之后醇提得到。
3.權(quán)利要求I所述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟 1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液； 2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液； 3)在水提濃液中加入こ醇，攪拌，靜置，之后離心，取上清液，去除こ醇，得到醇提物； 4)將醇提物與其他可接受的藥用輔料，制備得到藥物制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述制備步驟包括如下操作 1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液； 2)將濾液離心，取上清液并濃縮至原料藥重，得水提濃液； 3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小時，之后離心，取上清液，去除こ醇，濃縮干燥，得到醇提物。
5.權(quán)利要求I或2所述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括定性鑒定和指標(biāo)化合物的定量測定，包括如下步驟 1)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定限度； 2)按照中國藥典薄層色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中應(yīng)至少檢測出存在有淫羊蕾、甘草、虎杖、干姜、人參和黃岑； 3)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的總量不得超過規(guī)定限度； 4)按照中國藥典一部高效液相色譜法項下規(guī)定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃芩苷的含量不低于規(guī)定限度。
6.權(quán)利要求I所述藥物組合物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療艾滋病的藥物組合物及其制備方法、質(zhì)量控制方法和用途。組合物的原料藥由熟附子、淫羊藿、干姜、甘草、人參、丹參、虎杖、茯苓、黃柏、黃芩組成。實驗數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明特定的藥物組合物制劑對猴艾滋病病毒感染恒河猴所致艾滋病模型猴的實驗治療作用，基于對艾滋病猴模型這種適宜艾滋病動物模型的療效，本發(fā)明藥物組合物制劑具有治療人類艾滋病的用途，給予HIV感染者或艾滋病患者本發(fā)明藥物組合物制劑，能夠緩解病癥，包括穩(wěn)定或者提升HIV病毒感染者和艾滋病病人的CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)水平，緩解臨床癥狀體征、改善生存質(zhì)量。
文檔編號A61K36/9068GK102641489SQ201210119628
公開日2012年8月22日 申請日期2012年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月20日
發(fā)明者符林春, 胡英杰 申請人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)