專(zhuān)利名稱：一種具有保肝作用的靜脈注射用粉針及其制備與質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有保肝作用，治療多種肝臟損傷疾病的注射用粉針及其制備方法和質(zhì)量控制方法。特別是涉及一種治療多種肝臟損傷的水飛薊賓葡甲氨鹽粉針。
背景技術(shù)：
肝臟是人體重要的代謝器官，結(jié)構(gòu)和功能復(fù)雜，易受多種病原體、毒物及免疫病理累及。病毒、化學(xué)物質(zhì)、藥物、酒精及自體免疫等都可能造成肝損傷的發(fā)生。尤其是病毒性肝炎，分布于世界各地，由于難以根治和危害面廣，而與癌癥、艾滋病并稱“世紀(jì)三大頑癥”；我國(guó)是病毒性肝炎高發(fā)區(qū)，僅乙型肝炎病毒攜帶者就達(dá)1.3億。隨著制藥業(yè)的迅速發(fā)展，藥物性肝炎日益成為一個(gè)世界性的大問(wèn)題，長(zhǎng)期用藥或重癥時(shí)大量用藥，可引起肝細(xì)胞損害，可導(dǎo)致急性肝衰竭、急性肝炎、慢性肝炎、生化異常、膽汁淤積性肝炎、脂肪肝、脂質(zhì)過(guò)氧化、肉芽腫、血管損傷等，即“藥物性肝炎”發(fā)生；研究表明女性和年齡40歲以上的人群更容易患藥物性肝損傷。近年來(lái)，我國(guó)酒精性肝病(Alcoholic，liver disease，ALD)的發(fā)病率亦呈逐年增加的趨勢(shì)，在一些地區(qū)已成為第二大肝??；我國(guó)現(xiàn)有酒民3億多，酒精性肝病的發(fā)病率約為20％左右。各種原因所致的肝損傷如果得不到及時(shí)、有效的治療和保護(hù)，就會(huì)進(jìn)一步惡化為肝纖維化、肝硬化。
臨床上采用對(duì)癥進(jìn)行抗肝損傷治療，保肝降酶是抗肝損傷的基本治療法則。臨床研究報(bào)道中藥保肝降酶沒(méi)有明顯副作用，從而具有抗肝損傷治療優(yōu)勢(shì)。因此，具有保肝降酶活性的中藥成為目前的研究熱點(diǎn)。
近年來(lái)，水飛薊被公認(rèn)為治療肝炎的5大有效植物藥物之一，水飛薊素是由菊科植物水飛薊Silybum Marianum L.果實(shí)中提取得到的水難溶性黃酮類(lèi)化合物(總黃酮)。1968年H.Wagner等從中提取得黃酮類(lèi)化合物，命名為水飛薊素(Silymarin)。藥理實(shí)驗(yàn)證明，Silymarin對(duì)多種肝臟毒物引起的肝臟損傷有明顯的保護(hù)作用。其靶器官為肝臟，進(jìn)入體內(nèi)后主要與血漿蛋白結(jié)合，以結(jié)合型水飛薊素的形式存在于血漿、膽汁及尿液中。對(duì)抗肝損傷藥物具有穩(wěn)定細(xì)胞膜，改善肝功能的作用，對(duì)急慢性肝炎、肝硬變和代謝中毒性肝損傷具有較好的療效。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)這一天然藥物不僅具有保肝利膽作用，而且還有明顯的抗脂質(zhì)過(guò)氧化，抗輻射，清除自由基和抗胃潰瘍等作用。其毒性小，無(wú)致畸和誘變作用，在降血脂、防治動(dòng)脈粥樣硬化，預(yù)防腦缺血，抗血小板聚集等方面顯示出可喜的效果。由于水飛薊素難溶于水及一般有機(jī)溶劑，口服吸收差，其生物利用度較低，從而影響了其臨床療效。國(guó)內(nèi)外研究工作者正在積極開(kāi)發(fā)研制其復(fù)合物，或是通過(guò)其它途徑改善其生物利用度，或是研究其注射劑，以提高療效，擴(kuò)大應(yīng)用范圍。水飛薊素目前劑型有口服制劑水飛薊素片、益肝靈片、水飛薊賓卵磷脂復(fù)合物硬膠囊。商品名有利肝隆，利加隆，益肝靈等。注射劑僅有水飛薊賓葡-N·甲胺鹽水針。在我國(guó)，生產(chǎn)水飛薊素制劑有幾十年的歷史，常見(jiàn)的劑型主要為片劑、膠囊，現(xiàn)在尚有德國(guó)馬博士制藥廠生產(chǎn)的水飛薊素制劑在我國(guó)銷(xiāo)售。這些制劑主要為水飛薊素提取物或游離水飛薊賓，在其釋放度和生物利用度試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)結(jié)果均不理想。有的制劑根本不能有效崩解，影響釋放。有文獻(xiàn)記載水飛薊素水溶性衍生物如水飛薊賓.葡甲脂鹽、水飛薊賓·鄰苯二甲酸單酸納鹽的注射劑；水飛薊素在非水溶媒、復(fù)合溶媒中的溶解性能，結(jié)果表明聚乙二醇-乙醇-水(5∶2∶3)混合溶媒中可溶解16mg/ml，可作為注射劑的溶媒；但制成的注射液加水稀釋至含水量占75％以上時(shí)即出現(xiàn)渾濁，因此只可作肌肉注射，不宜靜脈注射。中國(guó)專(zhuān)利02125823公開(kāi)了含環(huán)糊精或其衍生物的水飛薊素注射液，它雖然藥物吸收快、生物利用度高，但由于水飛薊賓葡甲胺鹽在水中的溶解度及穩(wěn)定性較差，臨床應(yīng)用時(shí)受到很大限制，目前尚沒(méi)有水飛薊的注射液面市。
目前國(guó)內(nèi)肝損傷病群多，治療用藥市場(chǎng)大，特別是在注射液用藥上，藥物奇缺，主要是甘草酸類(lèi)的注射液在大量臨床應(yīng)用，但其療效有限。
針對(duì)以上存在的問(wèn)題，為了提供一種安全、有效、穩(wěn)定的治療肝損傷的靜脈注射用粉針制劑以滿足臨床用藥需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高效、安全、穩(wěn)定的水飛薊賓葡甲胺制劑，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該中藥制劑的制備檢測(cè)方法。
本發(fā)明制劑的技術(shù)特征有本發(fā)明制劑主要活性成分及含量為水飛薊賓葡甲氨鹽20-500mg/g。
本發(fā)明制劑主要活性成分及含量為水飛薊賓葡甲氨鹽80-300mg/g。
本發(fā)明制劑主要活性成分及含量為水飛薊賓葡甲氨鹽100-200mg/g。
以上所述水飛薊賓葡甲氨鹽可用水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉鹽、水飛薊賓·磷酸鹽、水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽代替。
為了提高藥物的穩(wěn)定性和安全性本發(fā)明制劑中還需加入添加劑甘露醇、氯化鈉或葡萄糖等添加劑。其中必須加的添加劑是甘露醇。
為了增加粉針的穩(wěn)定性、加速藥物的吸收、減少藥液對(duì)肌體的不良反應(yīng)，本發(fā)明粉針必須有適當(dāng)?shù)腜H值。水飛薊賓葡甲氨鹽是復(fù)鹽，PH值過(guò)大或過(guò)小都會(huì)使反應(yīng)相分解方向進(jìn)行，生成水飛薊賓，由于水飛薊賓溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇，微溶于氯仿，而不溶于水，在水溶液中結(jié)晶析出，使藥物中有效成分含量降低，影響藥物的療效。在試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明制劑在PH值在4-9的條件下可穩(wěn)定存在一定時(shí)間，在PH值在7-8的條件下可穩(wěn)定存在。
本發(fā)明制劑凍干粉的質(zhì)量控制方法如下(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品50-500mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至1-10ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓0.5-5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品50-500mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至50-100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓0.5-5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
本發(fā)明制劑(薊賓葡甲胺粉針)制備方法為取飛薊賓葡甲胺，加10-40倍量的注射用水?dāng)嚢?，溶解，離心，得上清液；取甘露醇或葡萄糖、氯化鈉加水使溶解，用適量的注射用水稀釋至一定體積，混勻，過(guò)濾，濾液經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
本發(fā)明藥物安全、穩(wěn)定對(duì)治療肝損傷具有很好的療效。為表明本發(fā)明藥物對(duì)肝損傷的治療作用，我們做了大量的實(shí)驗(yàn)研究，下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
本發(fā)明制劑藥效學(xué)一、在肝纖維化模型中的抗氧化作用目的觀察本發(fā)明制劑對(duì)大鼠因在肝纖維化模型中的抗氧化作用。
受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
2、對(duì)照藥品水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823
試驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠 山東醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
試驗(yàn)方法與結(jié)果雄性普通級(jí)Wistar大鼠60只，體重201±10g，隨機(jī)均分為6組，每組10只對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組(水飛薊素注射液)、本發(fā)明大劑量組、本發(fā)明中劑量組和本發(fā)明小劑量組。肝纖維化模型的建立大鼠第一次后腿皮下注射40％四氯化碳花生油溶液0.5ml/100g，以后改為0.3ml/100g，每周兩次，共6周。前兩周給動(dòng)物飼以高脂飲食(79.5％米粉+20％豬油+0.5％膽固醇)，后4周飼以單純玉米面(混以0.5％膽固醇)。動(dòng)物于造模結(jié)束1周前腹腔注射給藥，給藥1周，本發(fā)明小劑量組、本發(fā)明中劑量組和本發(fā)明大劑量組腹腔注射本發(fā)明制劑分別相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍，每日1次，每次2ml；陽(yáng)性藥對(duì)照組按臨床劑量5倍給予水飛薊素注射液；對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水，末次給藥后，頸動(dòng)脈取血，得血清，處理后按試劑盒方法測(cè)MDA、SOD、NO。指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表1表1 不同組方在肝纖維化模型中抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究(X±S)(n＝10)組別MDA(nmol/ml) SOD(IU/g) NO(umol/l)對(duì)照組 4.52±0.59***33.06±2.74***32.33±1.64***模型組 10.49±1.23 23.24±1.85 83.22±4.71陽(yáng)性組 6.55±0.82**27.32±1.09**55.97±4.80**本發(fā)明制劑小劑量組 7.64±1.14*27.30±1.50*58.44±5.59*本發(fā)明制劑中劑量組 6.95±1.81*30.11±1.26**52.92±6.13*本發(fā)明制劑大劑量組 5.47±1.65*33.25±1.47*47.09±5.58*試驗(yàn)結(jié)果表明正常組與模型組比較，***P＜0.001，表明肝纖維化模型造模成功；本發(fā)明制劑大、中、小劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均有明顯的抗氧化作用，與模型組相比，呈顯著性差異(*P＜0.05，**P＜0.01)，本發(fā)明制劑組的抗氧化檢測(cè)指標(biāo)值均優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組，表明本發(fā)明制劑具有較強(qiáng)的抗氧化作用。
二、本發(fā)明抗肝纖維化研究肝纖維化模型的建立每只大鼠首次后腿皮下注射純四氯化碳0.05ml/kg，以后注射40％四氯化碳橄欖油0.03ml/kg(V/V)，每周2次，共9周。
受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
2、對(duì)照藥品水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823
試驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠 山東醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
試驗(yàn)方法與結(jié)果雄性普通級(jí)Wistar大鼠60只，體重198±10g，隨機(jī)均分為6組，每組10只。①空白對(duì)照組，大鼠接受橄欖油后腿皮下注射，首次0.05ml/kg，以后0.03ml/kg，每周2次，同時(shí)予0.5％羧甲基纖維素鈉溶液經(jīng)口灌胃，5ml/kg，1/d。②肝纖維化模型組，在造模的同時(shí)予0.5％羧甲基纖維素鈉灌胃5ml/kg，1/d。③陽(yáng)性組(水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823實(shí)施例1生產(chǎn))，在造模的同時(shí)予水飛薊素注射液腹腔注射，1/d。④本發(fā)明小劑量組。⑤本發(fā)明中劑量組。⑥本發(fā)明大劑量組。④、⑤、⑥在造模的同時(shí)，腹腔注射予以本發(fā)明制劑分別相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍，每日1次。各組于第9周末處死大鼠。用3％戊巴比妥鈉腹腔注射0.02ml/kg，麻醉后，經(jīng)股動(dòng)脈放血，分離血清，-20℃保存。留取肝組織標(biāo)本。結(jié)果如表2。
表2 抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究(X±S)(n＝10)組別 ALT(IU/L)HA(ρB/μg·L-1) LN(ρB/μg·L-1)Hyp(mg/g)正常組39.63±5.13***100.13±17.1***33.86±4.28***2.39±0.46***模型組348.63±52.75198.78±34.54 85.56±12.34 3.95±0.98陽(yáng)性對(duì)照組265.4±67.57*178.25±36.64 73.24±13.32*3.89±0.94小劑量組 212.8±63.94*169.16±18.87*78.58±14.18*3.43±1.07*中劑量組 211.56±69.62*168.97±20.17*77.89±10.27*3.40±0.69*大劑量組 196.39±69.84**161.38±20.41*65.52±9.10**3.31±0.99*與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；根據(jù)表2正常組與模型組比較，***P＜0.001，表明肝纖維化模型造模成功；從各檢測(cè)指標(biāo)的結(jié)果來(lái)看，陽(yáng)性對(duì)照組和本發(fā)明各劑量組都具有不同程度的抗纖維化作用，與模型組相比，呈顯著性差異(*P＜0.05，**P＜0.01)，但本發(fā)明制劑各組的抗纖維化作用要強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照組。
三、對(duì)醋氨酚所致小鼠肝毒性的保護(hù)作用受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
2、對(duì)照藥品水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823
試驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠 山東醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
試驗(yàn)方法與結(jié)果90只小鼠，雌雄兼用，隨機(jī)分成6組，每組15只。陽(yáng)性對(duì)照組給予水飛薊素注射液；正常組和模型組給予等量注射用水；本發(fā)明小、中、大劑量組給予本發(fā)明制劑分別相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍。上述各組每天給藥1次，連續(xù)3天。于第3天給藥后，除正常組，各組腹腔注射2％醋氨酚500mg/kg，觀察其48h死亡率，結(jié)果如表3表3 對(duì)醋氨酚致小鼠肝毒性的保護(hù)作用組別n死亡數(shù)(只) 死亡率(％)
正常組 150 0模型組 1514 93.3陽(yáng)性組 157 46.7小劑量組158 53.3中劑量組154 26.7大劑量組152 13.3由表3看出，陽(yáng)性對(duì)照組和本發(fā)明各劑量組都具有不同程度的抗肝毒性作用，與模型組相比，呈顯著性差異(*P＜0.05，**P＜0.01)，但本發(fā)明制劑各組的抗肝毒性作用要強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照組。
四、對(duì)醋氨酚所致小鼠肝臟還原型谷胱甘肽耗竭的保護(hù)作用受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
2、對(duì)照藥品水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823
試驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠 山東醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
試驗(yàn)方法與結(jié)果90只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成6組，每組15只。本發(fā)明小劑量組、中劑量組、大劑量組分別給予相應(yīng)濃度的本發(fā)明制劑(同對(duì)醋氨酚所致小鼠肝毒性的保護(hù)作用)，正常組和模型組給予等量注射用水，陽(yáng)性組給予水飛薊素注射液，每天給藥1次，連續(xù)3天。于第3天給藥后，本發(fā)明小劑量組、中劑量組、大劑量組、陽(yáng)性組和模型組腹腔注射0.8％醋氨酚200mg/kg，正常組給予等量注射用水。45min后，解剖肝臟，測(cè)定其還原型谷胱甘肽(GSH)含量，結(jié)果如表4表4 對(duì)醋氨酚所致小鼠肝臟還原型谷胱甘肽耗竭的保護(hù)作用組別肝GSH含量正常組 58.12±11.29***模型組 24.05±14.18陽(yáng)性組 46.96±11.07*小劑量組36.42±12.06中劑量組50.10±10.09**大劑量組52.31±11.08**與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明制劑組對(duì)醋氨酚所致小鼠肝臟還原型谷胱甘肽耗竭有明顯的保護(hù)作用，與模型組相比，具有顯著性差異(*P＜0.05，**P＜0.01)，且保肝組抗肝GSH耗竭作用要高于陽(yáng)性組。
五、對(duì)四氯化碳致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
2、對(duì)照藥品水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823
試驗(yàn)方法與結(jié)果取SD雄性大鼠60只，體重180～220g，隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、陽(yáng)性藥物組(劑量相當(dāng)于臨床劑量的5倍)、本發(fā)明制劑低、中、高3個(gè)劑量組(劑量分別相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍)。各組動(dòng)物每天iv給藥1次，連續(xù)5天。末次給藥12小時(shí)后，除正常組外，各組動(dòng)物ip CCl4溶液1.0ml/kg，注射CCl412小時(shí)后，各動(dòng)物眼眶取血，以3000r/min離心10min常規(guī)制備血清，應(yīng)用谷丙轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定試劑盒及谷草轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定試劑盒，在754-型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)505nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算ALT含量、AST含量，并采用組間t檢驗(yàn)法與模型組進(jìn)行顯著性測(cè)定比較。結(jié)果如表5。
表5 保肝凍干粉針對(duì)四氯化碳致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用組別ALT(卡門(mén)氏單位/ml血清) AST(卡門(mén)氏單位/ml血清)正常組 29.10±5.1725.64±10.09模型組 154.40±67.03 127.23±34.71陽(yáng)性組 82.90±60.69*91.05±36.81*低劑量 81.80±45.85*89.27±42.52*中劑量 74.20±48.31*87.41±37.21**高劑量 70.30±48.89**82.14±35.66**實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，iv本發(fā)明粉針可明顯降低CCl4致急性肝損傷大鼠的血清ALT、AST含量，證明其對(duì)CCl4所致的大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用。
六、對(duì)氨基半乳糖致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
2、對(duì)照藥品水飛薊素注射液，魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利02125823
試驗(yàn)方法與結(jié)果取SD雄性大鼠60只，體重180～220g，隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、陽(yáng)性藥物組(劑量相當(dāng)于臨床劑量的5倍)、本發(fā)明粉針低、中、高3個(gè)劑量組(劑量分別相當(dāng)于臨床劑量的5、10、20倍)。各組動(dòng)物每天iv給藥1次，連續(xù)5天。末次給藥12小時(shí)后，除正常組外，各組動(dòng)物ip GaLN溶液600mg/kg，注射GaLN 36小時(shí)后，各動(dòng)物眼眶取血，以3000r/min離心10min常規(guī)制備血清，應(yīng)用谷丙轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定試劑盒及谷草轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定試劑盒，在754-型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)505nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算ALT含量、AST含量；應(yīng)用堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒，在754-型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)520nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算AKP含量，并采用組間t檢驗(yàn)法與模型組進(jìn)行顯著性測(cè)定比較。結(jié)果如表6表6 本發(fā)明制劑(粉針)對(duì)氨基半乳糖致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用ALT AST AKP組別(卡門(mén)氏單位/ml血清) (卡門(mén)氏單位/ml血清) (金氏單位/100ml血清)正常組29.10±5.1725.64±10.09 15.01±2.91模型組293.40±70.58 301.18±89.10 19.45±2.56陽(yáng)性組219.20±51.42*212.91±60.50*16.65±3.31*低劑量215.00±77.34*207.95±73.22*17.58±4.40中劑量202.00±70.31**200.32±35.65**15.96±3.41*高劑量171.00±66.43**187.59±82.91**15.58±2.25**實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，iv本發(fā)明粉針可明顯降低GaLN致急性肝損傷大鼠的血清ALT、AST、AKP含量，證明其對(duì)GaLN所致的大鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用。
七、本發(fā)明制劑(粉針)的一般藥理作用受試藥物1、藥物名稱本發(fā)明制劑魯南制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。
試驗(yàn)方法與結(jié)果試驗(yàn)選用健康犬24只，體重8～12kg，，♀♂兼用。隨機(jī)分為對(duì)照組(靜脈推注注射用生理鹽水)，本發(fā)明制劑高、中、低3個(gè)劑量組(分別靜脈推注本發(fā)明40mg/kg、20m g/kg、10m g/kg)，給藥容積為2ml/kg，靜脈推注給藥速度為10ml/分鐘。動(dòng)物稱重后在3％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉下，仰臥位固定，分離并暴露右下肢股動(dòng)脈，插管連接血壓換能器，記錄血壓。分離左下肢股靜脈以備給藥。接呼吸換能器，記錄呼吸；肢體II導(dǎo)聯(lián)測(cè)定心電圖。上述準(zhǔn)備工作結(jié)束，動(dòng)物穩(wěn)定半小時(shí)后測(cè)定并記錄血壓、呼吸和心電圖，作為給藥前正常指標(biāo)(血壓、呼吸和心電圖有異常者剔去不用)。然后從股靜脈推注給藥，分別于給藥后1、5、10、15、30、45、60、90和120分鐘同步測(cè)定記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖P、R、T、P-R和Q-T、血壓和呼吸，并與對(duì)照組比較，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果表明本發(fā)明制劑40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg經(jīng)靜脈推注給藥后2小時(shí)內(nèi)，對(duì)犬呼吸頻率無(wú)明顯影響；對(duì)犬心血管系統(tǒng)除高劑量40mg/kg組可使犬血壓在給藥后1min內(nèi)出現(xiàn)明顯下降外，其他指標(biāo)如血壓、心率、心律、P、R、T、P-R和Q-T等，均未見(jiàn)明顯改變，與對(duì)照組相比，無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示，犬靜脈推注本發(fā)明制劑40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg，除高劑量組犬的血壓出現(xiàn)短暫波動(dòng)，可能具有一過(guò)性的擴(kuò)張血管作用外，對(duì)犬呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)其他指標(biāo)均無(wú)明顯影響。
八、保肝凍干粉針的急性毒性試驗(yàn)小鼠1次靜脈注射本發(fā)明粉針(30mg/ml)0.5ml/20g(750mg/kg/d)及小鼠1次腹腔注射本發(fā)明粉針(30mg/ml)0.8ml/20g(1200mg/kg/d)，給藥后7天內(nèi)均未見(jiàn)動(dòng)物死亡或出現(xiàn)異常，無(wú)法測(cè)出本發(fā)明粉針尾靜脈注射及腹腔注射給藥的LD50。結(jié)果提示本發(fā)明粉針小鼠尾靜脈注射最大給藥量為750mg/kg；本發(fā)明粉針腹腔注射的最大給藥量為1200mg/kg。
本發(fā)明粉針小鼠靜脈注射最大給藥量和小鼠腹腔注射最大給藥量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于成人臨床用量，表明本品用藥。
九、本發(fā)明粉針的大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)取7周齡左右SD大鼠，在本實(shí)驗(yàn)室條件下飼養(yǎng)1周后，選出80只大鼠供實(shí)驗(yàn)用。三個(gè)給藥組和對(duì)照組每組各20只，雌雄各半。雌雄分開(kāi)，每籠5只，掛牌飼養(yǎng)。每天1次，上午8～10時(shí)左右，腹腔注射給藥。各組給藥容積均為10ml/kg。分別給藥(1)低劑量組0.75％本發(fā)明粉針溶液(75mg/kg/d)。(2)中劑量組1.5％本發(fā)明粉針溶液(150mg/kg/d)。(3)高劑量組3％本發(fā)明粉針溶液(300mg/kg/d)。(4)對(duì)照組用本發(fā)明粉針溶媒。每周根據(jù)動(dòng)物體重情況調(diào)整給藥量。連續(xù)給藥13周。連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥觀察3周(恢復(fù)期)。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組動(dòng)物的外觀體征、行為活動(dòng)和糞便性狀等均未見(jiàn)異常。連續(xù)給藥13周后，給藥組與對(duì)照組動(dòng)物的體重均明顯增加，給藥組動(dòng)物體重增長(zhǎng)與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理基本無(wú)明顯差異。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中給藥組動(dòng)物攝食量與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理基本無(wú)明顯差異。
血液學(xué)檢查在連續(xù)用藥13周給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組動(dòng)物的凝血時(shí)間、血紅蛋白、血小板、紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)和分類(lèi)均在正常范圍內(nèi)，給藥組與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異；在連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥觀察3周(恢復(fù)期)后，各組動(dòng)物的凝血時(shí)間、血紅蛋白、血小板、紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)和分類(lèi)均在正常范圍內(nèi)，給藥組與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異。
血液生化檢查在連續(xù)給藥13周給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組動(dòng)物的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(T-BIL)、血糖(GLU)、肌酐(Crea)、總膽固醇(T-CHO)值均基本在正常范圍內(nèi)，給藥組與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，基本無(wú)明顯差異；連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥觀察3周(恢復(fù)期)后，各組動(dòng)物的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(T-BIL)、血糖(GLU)、肌酐(Crea)、總膽固醇(T-CHO)值均基本在正常范圍內(nèi)，給藥組與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，基本無(wú)明顯差異。
病理檢查在連續(xù)給藥13周給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組均取10只大鼠，雌雄各半；在連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥觀察3周(恢復(fù)期)后，各組再取10只大鼠，雌雄各半，剖殺取心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、甲狀腺、前列腺、睪丸(帶附睪)、卵巢、子宮等臟器和腺體，肉眼觀察未見(jiàn)異常。各臟器稱重，計(jì)算主要臟器重量系數(shù)。各組動(dòng)物主要臟器重量系數(shù)均在正常范圍內(nèi)，給藥組與對(duì)照組相比，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)明顯差異。
重要臟器切片鏡檢在連續(xù)給藥13周給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，高劑量組和對(duì)照組均取10只大鼠，雌雄各半；在連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)束停藥觀察3周(恢復(fù)期)后，高劑量組和對(duì)照組再取10只大鼠，雌雄各半，取心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、甲狀腺、垂體、胸腺、前列腺、睪丸(連附睪)、卵巢、子宮、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、胰腺、膀胱、淋巴結(jié)、脊髓、胸骨(骨和骨髓)、視神經(jīng)等24個(gè)臟器和腺體，10％福爾馬林固定，石臘包埋，常規(guī)切片，HE染色，作組織學(xué)鏡檢。結(jié)果基本無(wú)組織學(xué)影響。
十、本發(fā)明粉針熱原檢查試驗(yàn)選取健康家兔按中國(guó)藥典附錄XIIIA法檢驗(yàn)，用MC-3B電腦數(shù)字式體溫計(jì)測(cè)量各兔肛門(mén)體溫，結(jié)果如表7表7熱原檢查的試驗(yàn)結(jié)果


由表7可見(jiàn)，家兔注射經(jīng)超濾的凍干粉，體溫升高不明顯；而注射未經(jīng)超濾的凍干粉，體溫略有升高；結(jié)果表明，溶液經(jīng)過(guò)超濾可以除去熱原，保證制劑的安全性。
上述藥效學(xué)資料顯示根據(jù)本發(fā)明所述的中藥注射制劑，用于保護(hù)肝臟、治療各型病毒性肝炎、酒精性肝損害、其它中毒代謝性肝損害、肝纖維化、肝硬化等肝臟疾病，而不被本發(fā)明的具體文字所限定。下述實(shí)施例為進(jìn)一步公開(kāi)本發(fā)明，需要說(shuō)明的是這些實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選方式，并不限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1水飛薊賓葡甲氨 2g甘露醇 98g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)量控制方法(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品50mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至1ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品50mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓0.5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件 色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例2水飛薊賓葡甲氨 50g甘露醇 50g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓葡甲氨投入10倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)控方法為(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品500mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至10ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品500mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例3水飛薊賓葡甲氨30g甘露醇70g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入30倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)控方法為(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品100mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至5ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品100mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓1mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例4
水飛薊賓葡甲氨 8g甘露醇 50g葡萄糖 42g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓葡甲氨投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)控方法為(2)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品200mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至5ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品250mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓3mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例5水飛薊賓葡甲氨 10g甘露醇 60g氯化鈉 30g稱取處方量的甘露醇、氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)控方法為(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品150mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至5ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓1.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品50-500mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓2.5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件 色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例6水飛薊賓葡甲氨20g甘露醇80g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)控方法為(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品250mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至5ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓1.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品75mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓4.5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例7水飛薊賓葡甲氨20g甘露醇8g氯化鈉72g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，加入氯化鈉溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
質(zhì)控方法為
(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品80mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至10ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品500mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
實(shí)施例8水飛薊賓葡甲氨10g甘露醇30g葡萄糖60g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，加入葡萄糖溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例9水飛薊賓葡甲氨8g氯化鈉30g葡萄糖62g稱取處方量的氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與氯化鈉溶液合并，混勻，加入葡萄糖溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例10水飛薊賓葡甲氨30g氯化鈉8g甘露醇62g稱取處方量的氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與氯化鈉溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例11水飛薊賓葡甲氨50g葡萄糖8g甘露醇42g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓葡甲氨投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例12水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉 2g葡萄糖30g甘露醇68g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·二偏琥珀酸酯鈉投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例13水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉 50g葡萄糖8g甘露醇42g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例14水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉 30g葡萄糖8g甘露醇62g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·二偏琥珀酸酯鈉投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例15水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉 8g
葡萄糖30g甘露醇62g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·二偏琥珀酸酯鈉投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例16水飛薊賓·磷酸鹽 10g甘露醇30g葡萄糖60g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·磷酸鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，加入葡萄糖溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例17水飛薊賓·磷酸鹽 8g氯化鈉30g葡萄糖62g稱取處方量的氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·磷酸鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與氯化鈉溶液合并，混勻，加入葡萄糖溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例18水飛薊賓·磷酸鹽 30g氯化鈉8g甘露醇62g稱取處方量的氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓·磷酸鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與氯化鈉溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例19水飛薊賓·磷酸鹽 50g葡萄糖8g甘露醇42g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·磷酸鹽投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例20水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽10g甘露醇30g葡萄糖60g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，加入葡萄糖溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例21水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽8g氯化鈉30g葡萄糖62g稱取處方量的氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與氯化鈉溶液合并，混勻，加入葡萄糖溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例22水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽30g氯化鈉8g甘露醇62g稱取處方量的氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與氯化鈉溶液合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例23水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽50g葡萄糖8g甘露醇42g稱取處方量的葡萄糖，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽投入40倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與葡萄糖合并，混勻，加入甘露醇溶液，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例24水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)2g甘露醇 98g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽投入20倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例25水飛薊賓·磷酸鹽50g甘露醇 50g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙猓瑢⑼读狭克w薊賓·磷酸鹽投入10倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
實(shí)施例26水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉30g甘露醇 70g稱取處方量的甘露醇，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?，將投料量水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉投入30倍量的注射用水中，攪拌，溶解，離心，得上清液，與甘露醇溶液合并，混勻，初濾，濾液再經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
權(quán)利要求
1.一種具有保肝作用的靜脈注射用粉針，其特征在于其主要活性成分及含量為水飛薊賓葡甲氨鹽20-500mg/g。
2.如權(quán)利要求1所述的粉針，其特征在于所述活性成分含量為水飛薊賓葡甲氨鹽80-300mg/g。
3.如權(quán)利要求2所述的粉針，其特征在于所述活性成分及含量為水飛薊賓葡甲氨鹽100-200mg/g。
4.如權(quán)利要求1-3所述的粉針，其特征在于所述的水飛薊賓葡甲氨鹽可用水飛薊賓·二偏琥珀酸酯鈉鹽、水飛薊賓·磷酸鹽、水飛薊賓磷脂酰膽堿復(fù)鹽代替。
5.如權(quán)利要求1-4所述的粉針，其特征在于該制劑中加了添加劑甘露醇、氯化鈉或葡萄糖。
6.如權(quán)利要求1-4所述的粉針，其特征在于所述添加劑為甘露醇。
7.如權(quán)利要求1-6所述的粉針，其特征在于該藥物制劑PH值在4.0～9.0之間。
8.如權(quán)利要求1-6所述的粉針，其特征在于該藥物制劑PH值在7～8之間。
9.如權(quán)利要求1-8所述的粉針，其特征在于該藥物制劑的質(zhì)控方法為(1)水飛薊賓葡甲胺的鑒別取本品50-500mg，用甲醇超聲溶解，溶液濃縮至1-10ml，離心，取上清液作為供試品溶液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含水飛薊賓0.5-5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(9∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254nm)下觀察，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)水飛薊賓葡甲胺的HPLC含量測(cè)定取本品50-500mg，用甲醇超聲使溶解，完全轉(zhuǎn)移至50-100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，為供試品液；取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml含水飛薊賓0.5-5mg的溶液，作對(duì)照品溶液；色譜條件 色譜柱反相C18柱；流動(dòng)相甲醇∶乙腈∶0.05％三氟乙酸水為17.5∶17.5∶65(V/V)；測(cè)定波長(zhǎng)288nm；流速1.0ml/min。
10.如權(quán)利要求1-9所述的粉針，其特征在于它的制備方法為取水飛薊賓葡甲胺，加10-40倍量的注射用水?dāng)嚢?，溶解，離心，得上清液；取甘露醇或葡萄糖、氯化鈉加水使溶解，用適量的注射用水稀釋至一定體積，混勻，過(guò)濾，濾液經(jīng)分子量為5000～10000的超濾柱，超濾，超濾液灌裝，冷凍干燥，壓蓋，質(zhì)檢、包裝，即得粉針。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種具有保肝作用的靜脈注射用粉針，其中主要有效成分水飛薊賓葡甲氨鹽的含量為20－500mg/g，本發(fā)明臨床上用于治療多種肝臟損傷疾病效果顯著，本發(fā)明解決了飛薊賓葡甲胺鹽在水中的溶解度及穩(wěn)定性較差的問(wèn)題，使水飛薊的臨床應(yīng)用又有了新選擇。
文檔編號(hào)A61K31/357GK1709238SQ20051008065
公開(kāi)日2005年12月21日 申請(qǐng)日期2005年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月6日
發(fā)明者趙志全 申請(qǐng)人:魯南制藥集團(tuán)股份有限公司