專利名稱：一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以膠囊制劑為特征的醫(yī)藥配置品，尤其是ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊及其制備方法。
背景技術(shù)：
人體免疫系統(tǒng)是人體自身的防御機(jī)制，對人體起到保護(hù)作用。隨著人們生活和エ作節(jié)奏的加快，飲食不規(guī)律、食物過于精細(xì)造成特殊營養(yǎng)成分的缺乏、與化學(xué)物品接觸的增多等原因，造成人體免疫系統(tǒng)受到越來越多的化學(xué)和物理因素影響。而人體免疫系統(tǒng)造成損傷會導(dǎo)致疲勞、衰老甚至疾病的產(chǎn)生，特別是近年來心腦血管發(fā)病率在逐年増加。因此，應(yīng)用各種具有提高人們自身的免疫功能的藥物和保健品來改善和治療人體免疫功能低下所引發(fā)的病癥，例如衰老、心血管疾病具有重要意義。我們知道，沙棘籽油是多種維生素和生物活性物質(zhì)的復(fù)合體。它能滋養(yǎng)皮膚、促進(jìn)新陳代謝、抗過敏，殺菌消炎，促進(jìn)上皮細(xì)胞再生，對皮膚有修復(fù)作用，能保持皮膚的酸性環(huán)境，具有較強(qiáng)的滲透性，是美容護(hù)膚的重要原料。在增強(qiáng)免疫力方面，沙棘籽油可以明顯增強(qiáng)E花環(huán)形成率、血清抗SRBC抗體效價(jià)，對輻射損傷的小鼠體液免疫細(xì)胞和細(xì)胞免疫功能恢復(fù)均有顯著的增進(jìn)作用。經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床驗(yàn)證，沙棘籽油具有抗衰老、美白肌膚、抗炎生肌、促進(jìn)組織再生、抗腫瘤、健腦益智、保護(hù)心、腦血管、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的作用。卵磷脂是細(xì)胞膜的主要組成部分，是細(xì)胞自我修復(fù)的主要成分。補(bǔ)充卵磷脂可以提高人體的代謝能力、自愈能力和抗體組織的再生能力，延緩人體衰老。另外，卵磷脂可以乳化分解油脂，軟化血管和清除過氧化物，達(dá)到通暢血管，降低血糖和血脂的作用。維生素E是ー種脂溶性的維生素，主要用做抗氧化劑，延緩衰老。另外，也可以用作血管擴(kuò)張劑和抗凝血?jiǎng)?，改善血液循環(huán)。利用沙棘籽油、卵磷脂、維生素E制備具有心血管保護(hù)作用的保健品，目前已有報(bào)道。例如，2006年7月5日公開的CN 1262284C中國發(fā)明專利說明書就公開了具有抗氧化、心血管保護(hù)作用的“一種沙棘油保健品”，其由下列重量份配比的活性原料組成提純沙棘籽油80 99份，卵磷脂O. 5 3份，維生素E0. 5 3份。其優(yōu)選方案中，各活性原料重量份配比提純沙棘籽油96份，卵磷脂I份，維生素El份。上述公開的文件中，活性組成原料成份少，影響了抗氧化和心血管保護(hù)的效果，并且對人體免疫力的提高方面略顯不足。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)在抗衰老、保護(hù)心血管效果不理想的不足，本發(fā)明提供ー種劑量科學(xué)、應(yīng)用效果好、提高人體免疫力、具有益腎固精保健功能的抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊及其制備方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其是由軟膠囊體和封入該軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物組成，其特征在于所述的內(nèi)容物是由下列重量百分比的組分組成沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10% ;所述的軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成，所述軟膠囊體與所述內(nèi)容物的重量比為1 2 3。 作為優(yōu)化方案，所述的內(nèi)容物的組分的重量百分比分別為沙棘籽油50%、卵磷脂2%、維生素E2%、番茄紅素6%、蜂膠7%、南瓜籽油25%、膠原蛋白8%。ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，其特征在于經(jīng)過下列エ藝
a、配料按照重量百分比稱量沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10%，置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作將明膠、水、甘油按100 100 40比例稱料，投送到化膠罐中，攪拌升溫至60 75°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2 3的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度22 26°C，濕度為30 40%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為90%以上的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本發(fā)明的抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊是將具有抗氧化、血管保護(hù)作用的沙棘籽油、卵磷脂和維生素E進(jìn)行了合理搭配，増加了維生素E和卵磷脂的含量，并進(jìn)ー步選取了具有抗衰老、保護(hù)心血管作用的番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油和膠原蛋白。在本發(fā)明中，其所選用的番茄紅素在分子結(jié)構(gòu)上含有11個(gè)共軛雙鍵和2個(gè)非共軛雙鍵，在類胡蘿卜素中，它具有最強(qiáng)的抗氧化活性，其清除自由基的功效遠(yuǎn)勝于其它類胡蘿
卜素和維生素E，其淬滅單線態(tài)氧的速率常數(shù)是維生素E的100倍，其通過增強(qiáng)抗氧化酶的活性，提高機(jī)體的抗氧化能力，保持細(xì)胞正常代謝，并且可以增強(qiáng)正常細(xì)胞間隙連接通訊，促進(jìn)吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞間的相互作用，通過分泌的細(xì)胞活化因子活化細(xì)胞，最終表現(xiàn)對吞噬能力及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的促進(jìn)，增強(qiáng)免疫功能。番茄紅素具有以上優(yōu)越的生理功能，使它不僅具有抗癌、抑癌的功效，而且對預(yù)防心血管疾病、動脈硬化等各種成人病、預(yù)防衰老和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等具有重要作用；其所選的蜂膠含有七十多種黃酮類化合物、有機(jī)酸、礦物質(zhì)、微量元素、維生素和氨基酸。近代研究證明，蜂膠所含有的豐富而獨(dú)特的生物活性物質(zhì)，使其具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種功能；其所選的南瓜籽油中鋅、鎂、鈣、磷含量極高，尤其是含有豐富的不飽和脂肪酸、植物留醇、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)等多種生物活性物質(zhì),可以降低血糖、膽固醇,對糖尿病和心、腦血管疾病有預(yù)防和保健作用。另外，南瓜籽油中含有ー種男性荷爾蒙的活性生物觸媒劑成分，能夠消除前列腺的初期腫脹，對泌尿系及前列腺增生具有良好的治療和預(yù)防作用；其所選的膠原蛋白是人體組織必需的蛋白質(zhì)，可以有效的補(bǔ)充人體所需，支撐皮膚的膠原肽鍵和彈カ網(wǎng)，防止螺旋網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞及皮膚組織氧化、萎縮、塌陷，延緩衰老。本發(fā)明的關(guān)鍵在于軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物組分的選取和各組分用量的配比。其所選用的番茄紅素、蜂膠、沙棘籽油、南瓜籽油、膠原蛋白、卵磷脂和維生素E共同作用能夠達(dá)到最佳的抗衰老、保護(hù)心血管效果。與現(xiàn)有技術(shù)相比，其劑量科學(xué)，抗衰老、保護(hù)心血管效果好，有效提高了人體免疫力，并具有益腎固精的功能。本發(fā)明所提供的制備方法，其エ藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)ー步說明。實(shí)施例I
ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，經(jīng)過下列エ藝
a、配料稱量沙棘籽油50kg、卵磷脂2kg、維生素E2kg、番茄紅素6kg、蜂膠7kg、南瓜籽油25kg、膠原蛋白8kg,置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作稱量明膠16. 6kg、水16. 6kg、甘油6. 6kg投送到化膠罐中，攪拌升溫至75°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2.51的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度26°C，濕度為30%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為92%的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本實(shí)施例中，軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物的重量百分比分別為沙棘籽油50%、卵磷脂2%、維生素E2%、番茄紅素6%、蜂膠7%、南瓜籽油25%、膠原蛋白8% ;軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成。本發(fā)明所得的軟膠囊劑量科學(xué)，抗衰老、保護(hù)心血管效果好，并具有益腎固精功能；其制備方法エ藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。
實(shí)施例2
ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，經(jīng)過下列エ藝
a、配料稱量沙棘籽油59kg、卵磷脂3kg、維生素E3kg、番茄紅素4kg、蜂膠5kg、南瓜籽油20kg、膠原蛋白6kg,置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作稱量明膠13. 87kg、水13. 87kg、甘油5. 55kg投送到化膠罐中，攪拌升溫至65°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，然后過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 3的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度24°C，濕度為40%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為95%的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟 月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本實(shí)施例中，軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物的重量百分比分別為沙棘籽油59%、卵磷脂3%、維生素E3%、番茄紅素4%、蜂膠5%、南瓜籽油20%、膠原蛋白6% ;軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成。實(shí)施例3
ー種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，經(jīng)過下列エ藝
a、配料稱量沙棘籽油41kg、卵磷脂1kg、維生素Elkg、番茄紅素8kg、蜂膠9kg、南瓜籽油30kg、膠原蛋白IOkg,置于配料罐中，攪拌均勻；
b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，得內(nèi)容物物料；
C、軟膠囊體材料的制作稱量明膠20. 8kg、水20. 8kg、甘油8. 3kg投送到化膠罐中，攪拌升溫至60°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa，脫去氣體，然后過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用；
d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊；
e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度22°C，濕度為35%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸；
f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為96%的酒精洗去囊體表面的油潰；
g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊；
h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封ロ，即成成品。本實(shí)施例中，軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物的重量百分比分別為沙棘籽油41%、卵磷脂1%、維生素El%、番茄紅素8%、蜂膠9%、南瓜籽油30%、膠原蛋白10% ;軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成。本發(fā)明所得的軟膠囊劑量科學(xué)，抗衰老、保護(hù)心血管效果好，能有效提高人體免疫力，并具有益腎固精功能；其制備方法エ藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。下面采用動物試驗(yàn)來說明本發(fā)明的軟膠囊具有抗衰老，保護(hù)心血管，提高免疫力的功能。I、材料和方法
I.I、受試樣品按照本發(fā)明提供的軟膠囊制備方法，生產(chǎn)出500mg/粒軟膠囊樣品。按照人體推薦攝入量為每日2次，毎次2粒，即人體毎日推薦量為2. 0g/60kg · bw (33. 33mg/
kg · bwノ。I. 2、試驗(yàn)動物與組分實(shí)驗(yàn)動物由山東大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康SPF昆明種小鼠。將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為4個(gè)免疫大組,每大組55只。I.3、實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件實(shí)驗(yàn)環(huán)境為屏障環(huán)境。環(huán)境溫度22°C ±2°C，相対濕度50% ±10%。 I. 4、劑量選擇與受試物給與方式根據(jù)人體推薦量(33. 33mg/日/kg *bw),按相當(dāng)于人體推薦量的5倍、10倍、30倍確定小鼠的低、中、高劑量分別為0. 17g/kg · bw、0. 33g/kg · bw、lg/kg · bw,經(jīng)ロ姆日一次灌胃給予小鼠受試物,灌胃體積按10mL/kg · bw。灌胃前用玉米油溶解并稀釋受試物，對照組分別以等體積的蒸餾水和玉米油代替受試物，連續(xù)給予30d后測各項(xiàng)免疫指標(biāo)。I. 5、主要儀器與試劑
儀器動物天平、分析天平、潔凈工作臺、游標(biāo)卡尺(精密度O. 01mm)、微量注射器(25 μ L)、CO2培養(yǎng)箱、恒溫水浴、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、酶聯(lián)免疫檢測儀、光學(xué)顯微鏡、微量加樣器(20 200 μ L、100 1000 μ L)。無菌手術(shù)器械、200目篩網(wǎng)、玻璃平皿、紗布、試管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)器、平底細(xì)胞培養(yǎng)板、U型細(xì)胞培養(yǎng)板、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、玻片架。試劑綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、刀豆蛋白A (ConA)、補(bǔ)體(豚鼠血清)、Hank’s液、青鏈霉素、SA緩沖液、瓊脂糖、MTT、小牛血清、PRMI1640培養(yǎng)液、PBS緩沖液、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪ニ甲酯磷酸鹽、氧化型輔酶1、1%冰醋酸、lmol/L HCl,O. 1% NP40 (v/v)、酸性異丙醇(96mL 異丙醇加 4mL lmol/L 的 HCl )、YAC-1 細(xì)胞、O. 2mol/L 的 Tris-HCl 緩沖液、印度墨汁、lg/L Na2CO3、雞紅細(xì)胞、甲醇、丙酮Giemsa染液等。I. 6、實(shí)驗(yàn)方法。1.6. I、臟器體重比值測定
小鼠稱重后脫白處死，取其胸腺、脾臟，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污并稱重，計(jì)算胸腺體重比值與脾臟體重比值。所得數(shù)據(jù)，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。I. 6. 2、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法)
取羊血，脫去纖維，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC O. 2mL，致敏后4天，測量左足后跖部厚度，同一部位測量三次，取平均值。然后在測量部位皮下注射20%壓積SRBC 20 μ L，于注射后24h測量左后足跖部厚度，以攻擊前后足跖厚度之差值來表示DTH的程度。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組攻擊前后足跖厚度的差值高于對照組，且差異有顯著性(p〈0. 05)，可判定該受試物有提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力的作用。I. 6. 3、ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)
無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’ s液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液。用Hank’ s液洗滌2次，每次IOOOrpm離心lOmin。然后將細(xì)胞懸液浮于ImL RPMI1640的完全培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為3X IO6個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液分兩孔加入培養(yǎng)板中，每孔lmL，在其中一孔加75 μ L ConA液，另一孔作為對照，置于5% C02、37°C孵箱培養(yǎng)68h，每孔加入50 μ L MTT,繼續(xù)培養(yǎng)4h。每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解，然后將液體移入比色杯中，用紫外分光光度計(jì)，在570nm波長處測定其光密度值(0D值)。計(jì)算試驗(yàn)孔OD值和對照孔OD值之差，以此表示淋巴細(xì)胞的増殖能力。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組淋巴細(xì)胞的增殖能力高于對照組，且差異有顯著性(p〈0. 05)，可判定該受試物有提高ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的作用。I. 6. 4、抗體生成細(xì)胞測定(Jerne改良玻片法)
取羊血，脫去纖維，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC O. 2mL，將SRBC免疫5天后的小鼠處死，取脾，制成細(xì)胞懸液。將10g/L瓊脂 加熱溶解后，與等量雙倍Hank’ s液混合，分裝小試管，每管O. 5mL，再向管內(nèi)加10% (v/v,用SA液配制)壓積SRBC 50yL、脾細(xì)胞懸液25yL，迅速混勻后，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入CO2培養(yǎng)箱孵育I. 5h，然后將補(bǔ)體加入玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育I. 5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組溶血空斑數(shù)高于對照組，且差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠抗體細(xì)胞數(shù)的作用。I. 6. 5、小鼠血清溶血素的測定
取羊血，脫去纖維，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC O. 2mL,免疫5天后摘除小鼠眼球,取血于離心管內(nèi)，放置Ih,將凝固血與管壁剝離，離心(2000rpm，10min)，收集血清。用生理鹽水置約lh，將凝固血與管壁剝離，離心(2000rpm，10min)，收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度血清分別置于微量血凝試驗(yàn)板內(nèi)，每孔100 μ L，再加入O. 5% SRBC懸液100 μ L，混勻，置于濕盒內(nèi)，于37°C溫箱孵育3h，記錄血球凝集程度。計(jì)算抗體積數(shù)。血清凝集度分為5級，按以下標(biāo)準(zhǔn)判定。O級SRBC全部下沉，集中在孔底部形成致敏的圓點(diǎn)狀，四周液體清晰級=SRBC大部分沉積在孔底部形成圓點(diǎn)狀，四周有少量凝集的SRBC ；11級凝集的SRBC在孔底部形成薄層，中心可以明顯見到ー個(gè)疏松的紅點(diǎn)；111級凝集的SRBC均勻地鋪散在孔底成一薄層，中心隱約可見ー個(gè)紅點(diǎn)；IV級凝集的SRBC在孔底成ー薄層，凝塊有時(shí)成卷折狀。所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組血清溶血素抗體積數(shù)高于對照組，且差異有顯著性(p〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠血清溶血素水平的作用。I. 6. 6、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
小鼠尾浄脈注射I : 5稀釋的印度星汁,待星汁注入，立即計(jì)時(shí)，注入星汁后2min、IOmin,分別從內(nèi)眥靜脈取血20 μ L，并將其加入2mL Na2CO3溶液中。用紫外分光光度計(jì)在600nm波長處測光密度值，以Na2CO3溶液作空白対照。將小鼠處死，取其肝臟和脾臟稱重。按下式計(jì)算吞噬指數(shù)a:
K = (IgOD1 - IgOD2)/(t2 - ti), a =體重 + (肝重 + 脾重)Xk1,3
所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組的吞噬指數(shù)高于對照組，且差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠單核-巨噬細(xì)胞的碳廓清能力的作用。I. 6. 7、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)
小鼠腹腔注射20%壓積雞紅細(xì)胞懸液lmL，間隔30min，脫臼處死，取腹腔巨噬細(xì)胞洗液lmL，滴于載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，移入37°C孵箱溫育30min后，于生理鹽水中漂洗，晾干。以I : I丙酮甲醇固定，4%Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計(jì)數(shù)，每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)
吞噬率％=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100 吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)
所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，若受試物組的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯高于O. 000g/kg -bw組，且 差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的作用。I. 6. 8、小鼠NK細(xì)胞活性測定(乳酸脫氫酶LDT測定法)
試驗(yàn)前24h將YAC-I細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，用前以Hank’ s液洗三次，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4X IO5個(gè)/mL。將小鼠脫白處死，無菌取脾，制備脾細(xì)胞懸液，用Hank’s液洗三次，每次IOOOrpm離心lOmin。再用2mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸，用臺酚蘭染色計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2X IO7個(gè)/mL，使效靶比為50 I。取靶細(xì)胞和脾細(xì)胞各100 μ L，加入U(xiǎn)型培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μ L，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%ΝΡ40各100 μ L，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)平行孔，5% C02、37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h，將培養(yǎng)板以1500rpm離心5min，每孔取上清液100 μ L置于酶標(biāo)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100 μ L，反應(yīng)3min，然后每孔加入lmol/L的HCl 30 μ L終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在490nm處測定OD值。按下式計(jì)算NK細(xì)胞活性
NK細(xì)胞活性％=[(反應(yīng)孔OD-自然釋放孔0D) / (最大釋放孔OD-自然釋放孔0D)]X100
LDH基質(zhì)液的配制乳酸鋰5X 10_2mol/L 硝基氯化四氮唑6. 6 X ΙθΛιοΙ/L 吩嗪ニ甲酯硫酸鹽2. 8X 10_4mol/L 氧化型輔酶I I. 3Xl(T3mol/L 將上述試劑溶于0. 2mol/L的Tris-HCl緩沖液中
所得數(shù)據(jù)為計(jì)算資料，用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，NK細(xì)胞活性需按X=SirT1 (P)1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，式中P為NK細(xì)胞活性，用小數(shù)表示，若受試物組的NK細(xì)胞活性高于對照組，且差異有顯著性(P〈0. 05)，可判定該受試物有増加小鼠NK細(xì)胞活性能力的作用。I. 7、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件對各個(gè)實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和ー個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足“方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。I. 8、結(jié)果判定
在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能作用。其中細(xì)胞免疫功能測定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或者任ー實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定細(xì)胞免疫功能測定結(jié)果陽性。體液免疫功能測定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或者任一實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定體液免疫功能測定結(jié)果陽性。單核-巨噬細(xì)胞功能測定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或者任ー實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定單核-巨噬細(xì)胞功能測定結(jié)果陽性。NK細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)的ー個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細(xì)胞活性測定結(jié)果陽性。2、結(jié)果
2. I、軟膠囊對小鼠體重的影響見表I。表I 軟膠囊對小鼠體重的影響
權(quán)利要求
1.一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其是由軟膠囊體和封入該軟膠囊體內(nèi)的內(nèi)容物組成，其特征在于所述的內(nèi)容物是由下列重量百分比的組分組成沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10%;所述的軟膠囊體是由明膠、水、甘油按100 100 40的比例制成，所述軟膠囊體與所述內(nèi)容物的重量比為1 : 2 3。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其特征在于所述的內(nèi)容物的組分的重量百分比分別為沙棘籽油50%、卵磷脂2%、維生素E2%、番茄紅素6%、蜂膠7%、南瓜籽油25%、膠原蛋白8%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊的制備方法，其特征在于經(jīng)過下列工藝， a、配料按照重量百分比稱量沙棘籽油40% 60%、卵磷脂1% 3%、維生素El% 3%、番茄紅素4% 8%、蜂膠5% 9%、南瓜籽油20% 30%、膠原蛋白6% 10%，置于配料罐中，攪拌均勻； b、研磨、脫氣將步驟a所得的攪拌均勻的沙棘籽油、卵磷脂、維生素E1、番茄紅素、蜂膠、南瓜籽油、膠原蛋白置于膠體磨中研磨三次，過100目篩，然后置于真空鍋中，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，得內(nèi)容物物料； C、軟膠囊體材料的制作將明膠、水、甘油按100 100 40比例稱料，投送到化膠罐中，攪拌升溫至60 75°C，待明膠全部熔化，減壓抽真空，控制真空度-O. 06Mpa,脫去氣體，過80目篩，得到軟膠囊體濾液，盛于保溫桶內(nèi)，備用； d、壓丸將步驟c所得到的軟膠囊體濾液和步驟b所得到的內(nèi)容物物料按照重量比I 2 3的比例送入壓丸機(jī)中，壓制出軟膠囊； e、定型干燥將步驟d所得到的軟膠囊控制溫度22 26°C，濕度為30 40%，靜態(tài)干燥24小時(shí)后，出丸； f、洗丸將步驟e所得到的軟膠囊采用濃度為90%以上的酒精洗去囊體表面的油潰； g、選揀將步驟f所得到的洗去表面油潰的軟膠囊進(jìn)行選揀，去除非正型丸，得正型軟月父囊； h、包裝、成品將步驟g所得到的正型軟膠囊裝瓶，封口，即成成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗衰老、保護(hù)心血管軟膠囊，其是由軟膠囊體和內(nèi)容物組成，特點(diǎn)是按重量百分比稱量內(nèi)容物沙棘籽油40%～60%、卵磷脂1%～3%、維生素E1%～3%、番茄紅素4%～8%、蜂膠5%～9%、南瓜籽油20%～30%、膠原蛋白6%～10%，混勻，研磨、脫氣；按100∶100∶40比例稱量明膠、水、甘油，升溫化料，脫氣，得軟膠囊體濾液；將濾液和內(nèi)容物按重量比1∶2～3的比例送入壓丸機(jī)中壓丸，再經(jīng)定型干燥、洗丸、選揀、包裝，得成品。本發(fā)明所選取的組分協(xié)同作用，有效提高人體免疫力。其劑量科學(xué)，具有美容、抗衰老、保護(hù)心血管、益腎固精功能；其制備方法工藝合理，可操作性強(qiáng)，易實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號A61K31/355GK102727872SQ201210242609
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月13日
發(fā)明者王麗娜 申請人:榮成百合生物技術(shù)有限公司