專利名稱：一種ps-脂質體合成工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種脂質體合成工藝，特別涉及一種PS-脂質體合成工藝，屬于生物醫(yī)藥領域。
背景技術：
21世紀腦研究將是生命科學研究的主流，隨著我國人民生活水平的提高和人口的老齡化，對于急性腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)變性病等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病新型藥物的開發(fā)將變?yōu)楦悠惹小?
脂質體(liposome，或稱類脂小球，液晶微囊)以磷脂、膽固醇等類脂質為膜材，具有類細胞膜結構，故作為藥物的載體，能被單核吞噬細胞系統(tǒng)吞噬，增加藥物對淋巴組織的指向性和靶組織的滯留性。近年的生物學研究表明磷脂酰絲氨酸(簡稱PS)作為膜表面的標記物在周圍組織的巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞吞噬凋亡細胞的過程中發(fā)揮著極為重要的定向誘導作用，巨噬細胞在進行吞噬作用后能夠產(chǎn)生轉化生長因子-β (Transforminggrowth factor-β TGF-β )等抗炎性介質，限制炎癥反應的發(fā)生。因此,本領域技術人員急需研發(fā)一種PS-脂質體合成工藝。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)在技術中的上述不足，本發(fā)明的目的是提供一種PS-脂質體合成工藝，該合成工藝簡單易控制、工藝要求低，且生產(chǎn)過程中無副產(chǎn)物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的
一種PS-脂質體合成工藝，包括以下步驟
(1)、將脂質體、人體非必需氨基酸和三氯甲烷按體積百分比混合均勻；
(2)、將(I)中的混合物干餾；
(3)、將(2)的混合物真空干燥，然后加入CMF-PBS，使之成懸濁樣液體；
(4)、將(3)中的懸濁液用超聲波粉碎至成透明樣液體，然后離心，取上清液；
(5)、將(4)中的上清液用SaltoriusFilter (0. 22Mm)過濾滅菌，制得PS-脂質體溶液。所述的人體非必需氨基酸為磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。所述的步驟(I)中的體積百分比為
脂質體40%-55%
磷脂酰絲氨酸30%-48%
憐脂酸膽喊10%_12%
三氯甲烷5%-9%。作為優(yōu)選的，一種PS-脂質體合成工藝，所述的步驟(I)中的體積百分比為 脂質體45%
磷脂酰絲氨酸38%
磷脂酰膽堿10%三氯甲烷7%。所述的步驟(4)中的離心溫度為4°C。本發(fā)明的PS-脂質體合成工藝，工藝簡單易控制、工藝要求低，且生產(chǎn)過程中無副產(chǎn)物，安全環(huán)保。
具體實施方式
實施例I
將45ml脂質體、38ml磷脂酰絲氨酸、IOml磷脂酰膽堿與7ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22μηι)過濾滅菌,制得PS-脂質體溶液。
實施例2
將55ml脂質體、30ml磷脂酰絲氨酸、IOml磷脂酰膽堿與5ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22Mm)過濾滅菌,制得PS-脂質體溶液。實施例3
將40ml脂質體、39ml磷脂酰絲氨酸、12ml磷脂酰膽堿與9ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22μηι)過濾滅菌,制得PS-脂質體溶液。實施例4
將52ml脂質體、31ml磷脂酰絲氨酸、Ilml磷脂酰膽堿與6ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22μηι)過濾滅菌,制得PS-脂質體溶液。性能測試
將上述實施例1-4制得的PS-脂質體進行粒徑、包封率和表面張力的檢測。將PS-脂質體溶液用10mmol/L乙酸銨、50mmol/L Tris溶液(PH=7. 5)調配至O. 3-0. 6g/L，滴在有支持膜的銅網(wǎng)上，濾紙吸干，再滴加鑰酸銨，濾紙吸干，自然干燥30min，電鏡觀察PS-脂質體的結構和粒徑大小，在電鏡照片上隨機取10個不同的視野，分別測量PS-脂質體的直徑，將此直徑乘以校正系統(tǒng)O. 707即為PS-脂質體粒徑。量取PS-脂質體溶液O. 5ml，用PBS稀釋至5. Oml，4 °C下，以37000r/min離心30min。棄上清液以去除包裹的PS，沉積于底部的即為脂質體小囊，將脂質體小囊以PBS稀釋至I. 0ml。分別取200uL脂質體小囊液和IOOuL PS-脂質體溶液，加入100g/L Triton100溶解，用Folin酚試劑法測定其中蛋白質的含量。脂質體小囊液中蛋白質的含量與脂質體溶液中蛋白質的含量的比值即為PS-脂質體的包封率。取PS-脂質體用表面張力儀測定5min。測試結果見下表。表
權利要求
1.一種PS-脂質體合成工藝，其特征在于包括以下步驟 (1)、將脂質體、人體非必需氨基酸和三氯甲烷按體積百分比混合均勻； (2)、將(I)中的混合物干餾； (3)、將(2)的混合物真空干燥，然后加入CMF-PBS，使之成懸濁樣液體； (4)、將(3)中的懸濁液用超聲波粉碎至成透明樣液體，然后離心，取上清液；(5)、將(4)中的上清液用SaltoriusFilter (0. 22Mm)過濾滅菌，制得PS-脂質體溶液。
2.如權利要求I所述的PS-脂質體合成工藝，其特征在于所述的人體非必需氨基酸為磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。
3.如權利要求2所述的PS-脂質體合成工藝，其特征在于所述的步驟(I)中的體積百分比為 脂質體40%-55% 磷脂酰絲氨酸30%-48% 憐脂酸膽喊10%_12% 三氯甲烷5%-9%。
4.如權利要求2所述的PS-脂質體合成工藝，其特征在于所述的步驟(I)中的體積百分比為 脂質體45% 磷脂酰絲氨酸38% 磷脂酰膽堿10% 三氯甲烷7%。
5.如權利要求I所述的PS-脂質體合成工藝，其特征在于所述的步驟(4)中的離心溫度為4°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種脂質體合成工藝，特別涉及一種PS-脂質體合成工藝，屬于生物醫(yī)藥領域，包括以下步驟(1)、將脂質體、人體非必需氨基酸和三氯甲烷按體積百分比混合均勻；(2)、將(1)中的混合物干餾；(3)、將(2)的混合物真空干燥，然后加入CMF-PBS，使之成懸濁樣液體；(4)、將(3)中的懸濁液用超聲波粉碎至成透明樣液體，然后離心，取上清液；(5)、將(4)中的上清液用SaltoriusFilter(0.22μm)過濾滅菌，制得PS-脂質體溶液。人體非必需氨基酸為磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。本發(fā)明的PS-脂質體合成工藝，工藝簡單易控制、工藝要求低，且生產(chǎn)過程中無副產(chǎn)物，安全環(huán)保。
文檔編號A61K9/127GK102793669SQ20121031350
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權日2012年8月30日
發(fā)明者張新華, 張若煜 申請人:紹興文理學院