專(zhuān)利名稱(chēng)：鹽酸萬(wàn)乃洛韋及其藥物組合物治療乙型肝炎的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種鹽酸萬(wàn)乃洛韋及其藥物組合物治療乙型肝炎的用途。
乙型肝炎是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的傳染性疾病，尤其是發(fā)病率高的慢性乙型肝炎。目前，全世界攜帶乙肝表面抗原(HBsAg)的人數(shù)已達(dá)近3億，發(fā)病患者約8000萬(wàn)人。長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直在致力于開(kāi)發(fā)有效對(duì)抗乙肝病毒的藥物，目前已發(fā)現(xiàn)的臨床治療乙型肝炎的藥物主要有生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，包括免疫調(diào)節(jié)劑，如干擾素、細(xì)胞因子、乙肝疫苗、高效價(jià)免疫球蛋白等；抗病毒藥物如阿昔洛韋、阿糖腺苷、磷甲酸、疊氮胸苷、蘇拉明等；天然藥物如蕓芝多糖、豬嶺多糖、香茹多糖等，以及傳統(tǒng)中草藥單方、驗(yàn)方及其成藥。而上述藥物往往因療效不確切，治愈率低，遠(yuǎn)期療效不佳、毒副作用大、給藥不方便，治療費(fèi)用高等不足而影響其臨床應(yīng)用。
上述藥物中，阿昔洛韋(Acyclovir，ACV)是一種抗核酸生物合成類(lèi)抗病毒劑，與傳統(tǒng)抗病毒藥物相比，它具有高效、低毒、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)，是目前防治瘡疹病毒感染的首選藥。另外，國(guó)內(nèi)外研究表明，阿昔洛韋對(duì)乙肝病毒復(fù)制指標(biāo)有抑制作用，臨床治療慢性乙型肝炎亦有一定療效。目前，阿昔洛韋作用于乙型肝炎病毒的機(jī)理尚不清楚，臨床應(yīng)用中還存在以下主要問(wèn)題1.給藥不方便由于阿昔洛韋口服后在體內(nèi)的吸收呈容量限制性，當(dāng)口服劑量增大到一定量時(shí)，吸收率并不相應(yīng)增加，而呈飽和吸收狀態(tài)，生物利用度僅15～30％?？诜⑽袈屙f難以達(dá)到抗乙肝病毒之血藥濃度，因而只能采用15mg/kg/天靜脈注射給藥的方式，不利于醫(yī)院外患者的治療。
2.治療費(fèi)用高，由于必須住院治療使治療費(fèi)增高，多數(shù)患者無(wú)法承受，尤其是我國(guó)經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)或偏遠(yuǎn)地區(qū)的患者。
3.副反應(yīng)嚴(yán)重由于需要長(zhǎng)達(dá)60～90天的靜脈注射，因注射劑的PH值高達(dá)9.0，導(dǎo)致許多患者因長(zhǎng)期注射造成注射部位發(fā)生靜脈炎和局部刺激被迫停止給藥，難以堅(jiān)持完成全部療程，使治療失敗，而加大劑量注射則有可能發(fā)生腎功能損傷和神經(jīng)毒性。
4.治愈率低，目前臨床陰轉(zhuǎn)率不高且有反跳，故至今阿昔洛韋仍未獲準(zhǔn)正式用于治療乙型肝炎。
本發(fā)明的目的在于努力克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，尋找一種具有療效好、副作用低、給藥方便的抗乙型肝炎病毒的藥物。
本發(fā)明人經(jīng)多次實(shí)踐，研究發(fā)現(xiàn)鹽酸萬(wàn)乃洛韋與阿昔洛韋具有類(lèi)似抗病毒譜，口服生物利用度高達(dá)67％，是阿昔洛韋的3～4倍，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)口服鹽酸萬(wàn)乃洛韋治療乙型肝炎具有優(yōu)良的效果，且副作用低，隨著劑量的增加，效果更好，且無(wú)反跳現(xiàn)象。本發(fā)明正是基于上述發(fā)現(xiàn)得以完成。
鹽酸萬(wàn)乃洛韋(valacicloir Hydrochloricle)是已知具有下式結(jié)構(gòu)的化合物。
鹽酸萬(wàn)乃洛韋是由寶威公司在八十年代研究報(bào)道的一種新型抗病毒劑，1995年1月31日鹽酸萬(wàn)乃洛韋口服劑型首次在英國(guó)和愛(ài)爾蘭獲準(zhǔn)上市。1995年6月該藥在美國(guó)獲FDA批準(zhǔn)，并已陸續(xù)在法國(guó)、瑞典、丹麥等國(guó)獲批準(zhǔn)。目前在歐美等國(guó)已替代阿昔洛韋作為主要的抗病毒藥用于預(yù)防和治療帶狀皰疹、初發(fā)性及復(fù)發(fā)性生殖器皰疹(Ep308，065；Amino acid ester prodrugs of acyclovir；Antiviral chemistry&chemotherapy(1992)3(3)，157-164)等。同時(shí)各國(guó)還在繼續(xù)開(kāi)展鹽酸萬(wàn)乃洛韋其它適應(yīng)癥的研究。但至今未見(jiàn)任何人報(bào)導(dǎo)有關(guān)它在治療乙型肝炎方面的用途。
因此，本發(fā)明第一方面涉及的是鹽酸萬(wàn)乃洛韋治療乙型肝炎的用途，其中包括將有效量的鹽酸萬(wàn)乃洛韋給藥于乙型肝炎患者。
本發(fā)明第二方面涉及的是鹽酸萬(wàn)乃洛韋藥物組合物治療乙型肝炎的用途，所述藥物組合物包括鹽酸萬(wàn)乃洛韋，含或不含其它可用于乙型肝炎的藥物及輔料(包括輔劑)。
本發(fā)明的鹽酸萬(wàn)乃洛韋及其藥物組合物可以各種適宜的給藥途徑給藥，優(yōu)選口服給藥。給藥的劑量范圍根據(jù)患者的年齡、性別、體重、所患乙型肝炎的嚴(yán)重程度及給藥途徑而變化，一般給藥的劑量范圍為12～120mg鹽酸萬(wàn)乃洛韋/公斤.天。
鹽酸萬(wàn)乃洛韋是L-纈氨酸阿昔洛韋酯，口服后在體內(nèi)水解出阿昔韋和L-纈氨酸，雖然與阿昔洛韋有類(lèi)似的抗病毒譜，但鹽酸萬(wàn)乃洛韋因結(jié)構(gòu)上含有L-纈氨酸基團(tuán)，與阿昔洛韋相比具有水溶性好、口服生物利用度高、劑型多、療效好、副作用少，便于醫(yī)院外患者治療，尤其便于經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)和邊遠(yuǎn)地區(qū)患者的治療等優(yōu)點(diǎn)?？诜竽塬@得與靜脈注射阿昔洛韋相等的血藥濃度，并且保持了阿昔洛韋的優(yōu)點(diǎn)，克服了它的不足之處，極大地方便了臨床應(yīng)用。作為一種國(guó)家級(jí)新藥必將造福于廣大乙型肝炎患者，并獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益。
下面為實(shí)施例材料和方法一、受試藥物鹽酸萬(wàn)乃洛韋，由四川抗菌素工業(yè)研究所制藥廠合成，為白色粉末制成相應(yīng)規(guī)格的膠囊，含量為5mg/粒。
二、動(dòng)物模型采用重慶麻鴨蛋孵化的1日齡雛鴨，經(jīng)腹腔接種0.1m1DHBV DNA陽(yáng)性病毒血清。接種1周后，分別頸外靜脈抽血，用地高辛標(biāo)記的DHBV DNA探針經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)選出感染陽(yáng)性鴨作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
地高辛標(biāo)記DNA藥盒購(gòu)自德國(guó)Boehringer Mannheim公司。
三、實(shí)驗(yàn)分組及用藥將DHBV DNA陽(yáng)性鴨63只隨機(jī)分為5組1.病毒對(duì)照組用生理鹽水，于每日清晨腹腔注射，劑量為1ml/kg/日。
2.陽(yáng)性藥物對(duì)照組用阿昔洛韋(湖北醫(yī)藥工業(yè)研究所科益制藥廠出品，批號(hào)04100302)每日腹腔注射1次，劑量為100mg/kg/日。
3.萬(wàn)乃洛韋小劑量組劑量為50mg/kg/日。
4.萬(wàn)乃洛韋中劑量組劑量為100mg/kg/日。
5.萬(wàn)乃洛韋大劑量組劑量為200mg/kg/日。
萬(wàn)乃洛韋于每日清晨空腹灌服。各組用藥時(shí)間為1月。
四、實(shí)驗(yàn)方法及觀察指標(biāo)1.血清DHBV DNA改變情況于用藥前、用藥2周、用藥1月、停藥1周分別頸外靜脈抽血，分離血清于-20℃保存待檢。采用斑點(diǎn)雜交法，用地高辛探針將用藥前后的血清統(tǒng)一對(duì)比檢測(cè)，以與探針同源性的質(zhì)粒DNA倍比稀釋后點(diǎn)樣于硝酸纖維薄膜上雜交顯示的斑點(diǎn)顏色深淺比較來(lái)半定量。
2.于停藥后1周將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物斷頸處死，取小塊肝組織固定于10％甲醛溶液，作常規(guī)HE染色病理檢查。
3.各組于用藥1月、停藥1周分別抽血檢測(cè)鴨血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT及AST)的變化情況。
結(jié) 果一、用藥前、中、后血清DHBV DNA改變情況除病毒對(duì)照組外，陽(yáng)性藥物對(duì)照組、萬(wàn)乃洛韋小、中、大劑量組用藥2周、用藥1月分別與同組用藥前比較，均有DHBV DNA顯著或極顯著降低；其中，中小劑量組用藥后比用藥前血清DHBV DNA顯著降低(P＜0.05)，大劑量組則是極顯著降低(P＜0.01)，說(shuō)明大劑量萬(wàn)乃洛韋抗病毒效果更佳(見(jiàn)表1)。此外，各用藥組有病毒DNA陰轉(zhuǎn)效果(見(jiàn)表2)，萬(wàn)乃洛韋小劑量組2只鴨DHBV DNA低滴度者陰轉(zhuǎn)而無(wú)回升，中劑量組2只DNA較高滴度陰轉(zhuǎn)后又回升，高劑量組3只DNA滴度者陰轉(zhuǎn)后而無(wú)回升(見(jiàn)附表1-5)。
表1 用藥前后血清DHBV DNA滴度改變情況(X±S)log DHBV DNA(pg/μl)±S組別 例數(shù)用藥前 用藥2周 用藥1月 停藥1周病毒對(duì)照組 142.86±0.95 2.50±1.23 2.57±1.162.43±1.16陽(yáng)性藥對(duì)照組132.g5±1.14 1.46±0.66** 0.92±0.64** 2.39±1.33萬(wàn)乃洛韋小劑量組 122.83±1.34 1.83±1.12* 2.00±1.28* 1.75±0.97**萬(wàn)乃洛韋中劑量組 102.70±0.68 1.70±1.06* 1.90±1.45* 2.00±0.82*萬(wàn)乃洛韋大劑量組 143.14±0.86 1.21±0.89** 1.36±1.01** 1.29±1.00**注“*”P(pán)＜0.05；“**”P(pán)＜0.01。
各組每只鴨用藥前后血清DHBV DNA滴度改變情況見(jiàn)附表1～5，其中“++++”10，000pg/μl；“+++”1000pg/μl；“++”100pg/μl；“+”10pg/μl； “-”＜lppg/μl。上表所列為各組DNA滴度的對(duì)數(shù)平均數(shù)及方差，統(tǒng)計(jì)學(xué)采用配對(duì)t檢驗(yàn)。
表2用藥2周、1月及停藥1周血清DHBV DNA陰轉(zhuǎn)率(％)組 別 用藥2周用藥1月停藥1周病毒對(duì)照組 0 (0/14)0(0/14)0 (2/14)陽(yáng)性藥對(duì)照組 7.69(1/13) 23.08 (3/13)7.69 (1/13)萬(wàn)乃洛韋小劑量組 16.67 (2/12) 16.67 (2/12)16.67 (2/12)萬(wàn)乃洛韋中劑量組 10.00 (1/10) 20.00 (2/10) 0 (0/10)萬(wàn)乃洛韋大劑量組 21.43 (3/14) 21.43 (3/14)21.43 (3/14)
二、肝臟HE染色病理檢查各組均有不同程度肝細(xì)胞空泡變性，混濁腫脹，部份可見(jiàn)匯管區(qū)及小葉間隔炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，少數(shù)有肝細(xì)胞嗜酸變，點(diǎn)狀壞死，所有這些改變?nèi)f乃洛韋各劑量組均較病毒對(duì)照組輕，見(jiàn)附表6～10。
三、用藥1月、停藥1周血清轉(zhuǎn)氨酶改變情況用藥1月，萬(wàn)乃洛韋大劑量組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)有5只輕度升高，但停藥1周后均回復(fù)正常，且與正常值無(wú)顯著性差異(我們檢測(cè)了10只正常未感染DHBV血清的麻鴨血清中的ALT及AST，其結(jié)果分別為10.71±4.86酶活力單位，5.00±4.12酶活力單位)。各組間同一時(shí)相內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶ALT及AST比較也無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)表3。
表3用藥1月、停藥1周血清轉(zhuǎn)氨酶改變情況(酶活力單位X±S)組別ALT AST用藥1月 停藥1周用藥1月 停藥1周病毒對(duì)照組 26.15±8.47 23.54±11.15 5.00±2.866.83±5.67陽(yáng)性藥對(duì)照組24.55±6.36 23.10±14.77 4.27±4.78 13.10±15.33萬(wàn)乃洛韋大劑量組 30.50±10.81 13.33±2.651.50±1.418.22±6.44萬(wàn)乃洛韋中劑量組 21.27±8.10 11.10±5.302.73±3.826.30±3.27萬(wàn)乃洛韋小劑量組 18.86±2.85 12.00±3.213.43±5.135.88±3.56
總結(jié)DHBV與HBV同屬嗜肝DNA病毒科(Hepadnavirus)，DHBV感染鴨作為研究人類(lèi)乙型肝炎發(fā)病機(jī)理、病毒復(fù)制過(guò)程及篩選有效治療藥物的鴨乙肝動(dòng)物模型的應(yīng)用日益增多。1～3日齡雛鴨感染DHBV可維持長(zhǎng)期病毒血癥而無(wú)明顯自然轉(zhuǎn)陰現(xiàn)象。因此，我們應(yīng)用鴨乙肝動(dòng)物模型進(jìn)行萬(wàn)乃洛韋抗病毒作用的考核，為臨床治療肝炎病人提供參考資料。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用藥2周、1月后萬(wàn)乃洛韋與對(duì)照藥阿昔洛韋都能使血清DHBV DNA顯著或極顯著降低，但阿昔洛韋在停藥1周后有DNA回升現(xiàn)象，而萬(wàn)乃洛韋各劑量？組停藥1周后DNA回升現(xiàn)象不明顯，說(shuō)明萬(wàn)乃洛韋的遠(yuǎn)期抑制效果較對(duì)照藥佳。此外，萬(wàn)乃洛韋的抗病毒效果似與劑量大小有一定關(guān)系，大劑量用藥組較中、小劑量組抗病毒效果更好。
肝臟病理檢查及血清轉(zhuǎn)氨酶檢查發(fā)現(xiàn)，萬(wàn)乃洛韋各劑量組病理?yè)p害較對(duì)照組輕，ALT、AST的改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，可以說(shuō)明該藥對(duì)肝組織無(wú)明顯的毒性損害。
附表1 病毒對(duì)照組用藥前后血清DHBV DNA滴度變化情況動(dòng)物編號(hào) 用藥前 用藥2周 用藥1月 停藥1周1 ++++++++ ++ +++2 +++ ++++ ++++ ++++3 +++ ++++ ++4 +++++ ++ +5 ++++++++++ ++6 ++++++++ ++++ ++7 ++ ++++ +++ ++++8 +++ +++ +++ +++9 +++ +++ +++ +++10+++ ++++ +++11++ +++ ++++ ++++12+ + ++13++ + ++14++ + ++
附表2 陽(yáng)性藥對(duì)照組用藥前后血清DHBV DNA滴度變化情況動(dòng)物編號(hào) 用藥前 用藥2周 用藥1月 停藥1周17++++- ++++19++++ ++++ +++20+++ +++ +++21++++ +++ ++++23+++ + +++25+++ + - +26++++ +++ ++++27+ +++ +++28+ + + +29++++++ ++30++++ + + +31+++ + + ++32++++ - - -
附表3 萬(wàn)乃洛韋小劑量組用藥前后血清DHBV DNA滴度變化情況動(dòng)物編號(hào) 用藥前 用藥2周 用藥1月 停藥1周33+++++++ +++ ++35+++ +++ +++ +++37++ +++ + +39++++++++++ ++40+++++++++ +++41+++++++ +42+++++++ +++ ++44+++++ ++++45++ + ++++46+ ++++++48+ - - -200+ - - -
附表4 萬(wàn)乃洛韋中劑量組用藥前后血清DHBV DNA滴度變化情況動(dòng)物編號(hào) 用藥前 用藥2周 用藥1月 停藥1周50++++ +++ ++51+++ ++ +++++++52+++ +++ ++ ++54++++ +++++++56+++ +++ + ++58++++ +59+++- +60++-- +61+++ +++ ++63+++ +++ +++ +++
附表5 萬(wàn)乃洛韋大劑量組用藥前后血清DHBV DNA滴度變化情況動(dòng)物編號(hào) 用藥前 用藥2周 用藥1月 停藥1周65++ ++ ++66++++ +- -67+++++ ++ +68++++++ +69++++- -71++ ++ ++ ++72++++ ++ +73++++ ++ + +++75++ -+ +76++++ +++ +77++ +++ +++ ++78+++++ +++ +++79++++ -+ +80++++ -- -
附表6 病毒對(duì)照組肝臟HE染色病理結(jié)果動(dòng)物編號(hào) 肝細(xì)胞濁腫 空泡變 嗜酸變 炎細(xì)胞浸潤(rùn) 壞死1++++-- -2++++++ -3++++++ 點(diǎn)、小灶壞死(肝內(nèi)淤膽4+++++++ 小灶壞死5+++ ++-- -6+ + ++ 點(diǎn)狀壞死7+++ +- -8++++++ 大片壞死9++++-+ -10 ++++++ -11 + + ++ 點(diǎn)狀壞死12 + - -- -13 + - -- -14 + + +- -
附表7 陽(yáng)性藥對(duì)照組肝臟HE染色病理結(jié)果動(dòng)物編號(hào) 肝細(xì)胞濁腫 空泡變 嗜酸變 炎細(xì)胞浸潤(rùn) 壞死17+ ----19+ ----20+ +---21+ +---23+ ----25++ +-+ 點(diǎn)狀壞死26+ ----27+ +++ 點(diǎn)、小灶壞死28+ --+-29++ +++-30+ ----31+ +---32+ ----
附表8 萬(wàn)乃洛韋小劑量組肝臟HE染色病理結(jié)果動(dòng)物編號(hào) 肝細(xì)胞濁腫 空泡變 嗜酸變 炎細(xì)胞浸潤(rùn) 壞死33+ - -+-35+++ -+-37+ + ± + 點(diǎn)狀壞死39++- ---40+++ -+-41+ - -+-42+ - ---44+ - ++ --45+ - ---46+ - -+-48+++ -+-200 + - ---
附表9 萬(wàn)乃洛韋中劑量組肝臟HE染色病理結(jié)果動(dòng)物編號(hào) 肝細(xì)胞濁腫 空泡變 嗜酸變 炎細(xì)胞浸潤(rùn) 壞死50 + - ---51 + - -+-52 + - ---54 ++- -+點(diǎn)狀壞死56 + - -+-58 + - -+-59 - - -+-60 + - -+61 + - -+-63 + - ---
附表10 萬(wàn)乃洛韋大劑量組肝臟HE染色病理結(jié)果動(dòng)物編號(hào) 肝細(xì)胞濁腫 空泡變 嗜酸變 炎細(xì)胞浸潤(rùn) 壞死65+ - -- -66+ - -+ -67+ - -- -68+ - -+ -69+ - ++ 點(diǎn)狀壞死71+ - -+ -72+ - -+ -73+ - -+ -75+ - -+ -76++ - -+ -77+ - -+ -78+ - -+ 點(diǎn)狀壞死79++ - -+ -80++ - -- -注1.肝細(xì)胞濁腫及空泡變性、嗜酸變“+”1～10個(gè)/HP“++”10～20個(gè)/HP“+++”20～30個(gè)/HP“++++”＞30個(gè)/HP2.炎性細(xì)胞浸潤(rùn)“+”1～5個(gè)/LP“++”5～10個(gè)/LP“+++”10～20個(gè)/LP“++++”＞20個(gè)/LP3.壞死分為點(diǎn)狀、小灶、片及大片壞死，此批標(biāo)本細(xì)胞變性及炎細(xì)胞反應(yīng)以小血管周?chē)黠@。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)式為下式的鹽酸萬(wàn)乃洛韋治療乙型肝炎的用途，
其中包括將治療有效量的鹽酸萬(wàn)乃洛韋給藥于乙型肝炎患者。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中有效量是指按12～120mg鹽酸萬(wàn)乃洛韋/日.公斤的用量給藥于乙型肝炎患者。
3.一種含鹽酸萬(wàn)乃洛韋的藥物組合物治療乙型肝炎的用途，所述藥物組合物包括鹽酸萬(wàn)乃洛韋，含或不含其它可用于乙型肝炎的藥物及輔料。
全文摘要
本發(fā)明為鹽酸萬(wàn)乃洛韋及其藥物組合物治療乙型肝炎的用途，屬于臨床治療乙型肝炎藥物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。其特征是將12-120mg鹽酸萬(wàn)乃洛韋/日·公斤有效劑量口服給藥于乙型肝炎患者的治療，其鹽酸萬(wàn)乃洛韋的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為上式。
文檔編號(hào)A61K31/505GK1166318SQ9710058
公開(kāi)日1997年12月3日 申請(qǐng)日期1997年2月5日 優(yōu)先權(quán)日1997年2月5日
發(fā)明者張凱, 方道宇, 陳壓西, 郭樹(shù)華 申請(qǐng)人:國(guó)家醫(yī)藥管理局四川抗菌素工業(yè)研究所制藥廠