專利名稱：一種包載親水性藥物的微球制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物的微球制劑及其制備領(lǐng)域，具體涉及一種包載親水性藥物的微球制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
微球(microsphere)是藥物溶解或者分散在高分子材料基質(zhì)中形成的微小球狀實(shí)體，屬于基質(zhì)型骨架微粒，一般直徑在微米級甚至納米級。藥物制成微球后，可實(shí)現(xiàn)藥物濃集于靶區(qū)、緩釋或控釋藥物、降低藥物的毒副作用。在微球給藥系統(tǒng)中，載體材料的性質(zhì)是決定藥物釋放的主要因素。聚酯類高分子材料是迄今為止國內(nèi)外研究最多、應(yīng)用最廣的可生物降解的合成高分子材料，它們基本上都是乳酸或其內(nèi)酯的聚合物，如聚乳酸(PLA)和聚乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA)。聚酯類高分子的降解機(jī)制為在體內(nèi)水解脫酯，使高分子主鏈斷裂，分子量逐漸變小，最終生成乳酸單體，并在乳酸脫氫酶作用下氧化為丙酮酸，作為能量代謝物質(zhì)參與體內(nèi)三羧酸循環(huán)，終產(chǎn)物為水和二氧化碳，經(jīng)肺、腎、皮膚排泄到體外。因此，目前聚酯類高分子材料被公認(rèn)為良好的可生物降解的控釋骨架，并已獲美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)，廣泛應(yīng)用于藥物緩釋載體和其他人體植入裝置中。但聚酯類高分子材料中的PLA和PLGA表面是疏水基團(tuán)，不利于藥物以擴(kuò)散方式釋藥和包載親水性藥物，目前PLA和PLGA多用于制備脂溶性藥物微球制劑，如紫杉醇、喜樹堿、地塞米松、利培酮等，用于制備親水性藥物的報道較少；而且PLA和PLGA的降解產(chǎn)物都是酸性物質(zhì)，局部大量酸性物質(zhì)的堆積，影響了其生物降解性以及緩控釋系統(tǒng)的釋藥行為。復(fù)乳法是研究時間最早、應(yīng)用范圍最廣的一種制備微球的方法，現(xiàn)有文獻(xiàn)(如公開號為 CN101940782A 的中國專利申請；Fengying Sun, Cheng Sui，Lesheng Teng, et al.Studies on the preparation, characterization and pharmacological evaluation of tolterodine PLGA microspheres. Int J Pharm，2010，397 :44-49.)多采用水包油包水 (W1/0/W2)法制備親水性藥物微球，其制備方法常為將藥物水溶液與PLGA的二氯甲烷溶液混合，超聲乳化形成油包水(W1/0)初乳，再將初乳倒入含有乳化劑的水溶液中高壓均質(zhì)或高速攪拌乳化制成復(fù)乳，攪拌過夜揮去有機(jī)溶劑，使微球析出，洗滌，凍干得到微球。但在制備過程中親水性藥物容易擴(kuò)散到外水相中而導(dǎo)致包封率不高、載藥量低，并存在明顯的突釋效應(yīng)，從而增加藥物的毒副作用、造成藥物的浪費(fèi)且無法維持藥物的長期釋放，存在著技術(shù)問題。朱曉靜(氟尿嘧啶明膠-PLGA微球復(fù)合凝膠劑的制備及評價.浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文，2007,5), Jinhui Wu (Microspheres Made by w/o/o Emulsion Method With Reduced Initial Burst for Long-Term Delivery of Endostar, a Novel Recombinant Human Endostatin.J Pharm Sciences,2009,98 (6) :2051-2058)等 K, N.Badri Viswanathan(Preparation of non-porous microspheres with high entrapment efficiency of proteins by a(water-in-oil)-in-oil emulsion technique. J. ControlRelease 58(1999) 9-20)等人，采用W/01/02 (油包油包水)法制備親水性藥物微球，其制備方法常為將PLGA用二氯甲烷和乙腈的混合溶劑溶解，與親水性藥物水溶液混合，超聲或高壓均質(zhì)制成W1/0(油包水)初乳，再將初乳倒入含乳化劑的液體石蠟中制成復(fù)乳，最后將復(fù)乳倒入大量液體石蠟中提取二氯甲烷并慢慢揮去乙腈，使微球析出，洗滌，凍干得到微球。雖然用該方法制備微球的親水性藥物的包封率有所提高，突釋有所減少，但由于其材料 PLGA表面是疏水基團(tuán)，不利于藥物以擴(kuò)散方式釋藥和包載親水性藥物，且采用二氯甲烷和乙腈的混合溶劑溶解PLGA形成的有機(jī)溶液與藥物水溶液形成初乳比較困難，需要超聲或高壓均質(zhì)等特殊工藝方能完成，制備工藝復(fù)雜，制備難度較高，存在著技術(shù)缺陷。吳燦(超順磁性硫酸鏈霉素PLA-PEG微球的實(shí)驗研究.重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文，2010)以聚乳酸聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)為材料，采用水包油包水(W1/0/W2)法制備親水性藥物微球，其制備方法常為硫酸鏈霉素溶液與超順磁性殼聚糖!^e3O4納米?；靹?， 加入一定量聚乙烯醇(PVA)溶液，超聲分散，得內(nèi)水相；將PLA-PEG溶入二氯甲烷中成油相； 混合內(nèi)水相與油相超聲乳化后得初乳，將初乳傾入含一定PVA的外水相中，高速均質(zhì)形成復(fù)乳后倒入去離子水中，再經(jīng)攪拌過夜揮發(fā)二氯甲烷，得到的微球經(jīng)反復(fù)洗滌、凍干即得超順磁性硫酸鏈霉素PLA-PEG微球。在超順磁性硫酸鏈霉素PLA-PEG微球的制備過程中親水性藥物容易擴(kuò)散到外水相中而導(dǎo)致包封率不高，并存在明顯的突釋效應(yīng)，從而增加藥物的毒副作用、造成藥物的浪費(fèi)且無法維持藥物的長期釋放，仍存在著技術(shù)缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種包載親水性藥物的微球制劑，通過引入具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物(PLA-mPEG)作為微球基質(zhì)成分，可大大改善疏水性材料 PLA或PLGA的親水性，大大提高親水性藥物的包封率。本發(fā)明還提供了一種包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，以乙酸乙酯和乙腈的混合溶劑作為溶解聚合物材料的溶劑，將油包油包水(W/01/02)復(fù)乳法、相分離法和溶劑揮發(fā)法的優(yōu)勢相結(jié)合制備親水性藥物微球，無需超聲、高壓均質(zhì)等特殊乳化工藝，制備工藝簡單可控，得到的微球具有表面圓整、粒徑均勻可控、包封率高、釋藥行為可控的特點(diǎn)。一種包載親水性藥物的微球制劑，由以下重量百分比的組分組成
親水性藥物0. 1 % 40 % ；聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物 0.1% 99%;聚乳酸或聚乳酸羥基乙酸共聚物0.1% 99%。為了得到更好的發(fā)明效果，以下作為本發(fā)明的優(yōu)選本發(fā)明中的親水性藥物的選擇沒有特殊的限制，親水性藥物作為本發(fā)明包載親水性藥物的微球制劑藥效成分，選擇不同的親水性藥物使得制得的包載親水性藥物的微球制劑具有不同的藥效。在本發(fā)明的包載親水性藥物的微球制劑還可以包括適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，藥用輔料的選擇可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)選擇，如可選用甘露醇、甘油、氯化鈉、蔗糖、明膠等藥用輔料中的一種或多種。所述的親水性藥物可選用親水性小分子藥物、親水性大分子藥物中的一種或兩種。
所述的親水性小分子藥物可選用鹽酸多柔比星、鹽酸米托蒽醌、硫酸長春新堿、 5-氟尿嘧啶、博來霉素、鹽酸阿糖胞苷、綠原酸等中的一種或者兩種以上。所述的親水性大分子藥物可選用醋酸曲普瑞林、醋酸亮丙瑞林、醋酸布舍瑞林、胸腺肽、醋酸奧曲肽、重組人胰島素、重組人生長激素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、免疫球蛋白、肌紅蛋白、超氧化物岐化酶、L-天門冬酰胺酶、阿糖苷酶、重組鏈激酶、葡激酶、紅細(xì)胞生成素、重組人血管內(nèi)皮抑制素、干擾素(alb，α 2b, α 2a, Y )、白細(xì)胞介素_11、白細(xì)胞介素-2、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子、重組人表皮生長因子、重組人腦利鈉肽等中的一種或者兩種以上。所述的聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物(PLA-mPEG)具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)，作為微球基質(zhì)成分。所述的PLA-mPEG的制備方法為D，L_丙交酯與聚乙二醇單甲醚在辛酸亞錫的催化作用下熔融共聚。所述的聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物的數(shù)均分子量優(yōu)選為 0.5萬 16萬，聚乳酸與聚乙二醇單甲醚的質(zhì)量比優(yōu)選為40 60 95 5，其中，聚乙二醇單甲醚的數(shù)均分子量優(yōu)選為2000 8000。所述的聚乳酸(PLA)的數(shù)均分子量優(yōu)選為0. 5萬 10萬。所述的聚乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA)的數(shù)均分子量優(yōu)選為0. 5萬 6萬，其中， 乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比優(yōu)選為50 50 90 10。所述的包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，包括以下步驟(1)將親水性藥物溶解于水或者磷酸鹽緩沖溶液中，得到親水性藥物溶液；(2)將聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物與聚乳酸、聚乳酸羥基乙酸共聚物兩者中的一種溶解于有機(jī)溶劑中，得到有機(jī)溶液，；(3)將步驟⑵得到的有機(jī)溶液與步驟⑴得到的親水性藥物溶液混合，渦旋形成油包水型初乳，其中，有機(jī)溶液與親水性藥物溶液體積比為1 20 1 ；(4)將步驟(3)中的油包水型初乳與含乳化劑I的液體石蠟混合，渦旋形成油包油包水型復(fù)乳，其中，油包水型初乳與含乳化劑I的液體石蠟體積比為1 3 10;(5)邊攪拌邊將步驟中的油包油包水型復(fù)乳加入到含乳化劑II的液體石蠟中，繼續(xù)攪拌4小時 M小時，離心收集微球，經(jīng)石油醚洗滌、干燥后制得包載親水性藥物的微球制劑，其中，油包油包水型復(fù)乳與含乳化劑II的液體石蠟的體積比為1 5 10。親水性藥物、聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物和聚乳酸或聚乳酸羥基乙酸共聚物的原料的加入量保證制得的包載親水性藥物的微球制劑中對應(yīng)組分的含量在限定范圍(即處方設(shè)計的包載親水性藥物的微球制劑中對應(yīng)組分的含量范圍)。步驟(2)中，所述的有機(jī)溶劑選用乙酸乙酯和乙腈的混合溶劑。聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物中聚乳酸鏈段溶于乙酸乙酯，聚乙二醇單甲醚鏈段不溶于乙酸乙酯，這一特殊結(jié)構(gòu)致使其在乙酸乙酯中能夠自組裝形成反相膠束，因此，在步驟⑶中無需超聲、 高壓均質(zhì)等特殊工藝即可形成初乳，顯著改進(jìn)了微球制劑的制備工藝。步驟(4)中，所述的乳化劑I選用卵磷脂，所述的含乳化劑I的液體石蠟中乳化劑 I的重量百分比含量優(yōu)選為0. 10%。步驟(5)中，所述的乳化劑II選用卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、司盤80中的一種或兩種以上，所述的含乳化劑II的液體石蠟中乳化劑II的重量百分比含量為0. 5%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明包載親水性藥物的微球制劑中聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物含有親水鏈段(聚乙二醇單甲醚鏈段)和疏水鏈段(聚乳酸鏈段)，改善了疏水性聚酯材料的親水性，易于調(diào)節(jié)材料親水/疏水平衡，兼有高分子載體材料和油包水(W/0)型乳化劑的雙重性質(zhì)。其中，聚乙二醇單甲醚鏈段(mPEG)分子中存在的大量乙氧基，能夠分別與水分子形成氫鍵，分子末端剩余的羥基通過適當(dāng)方式活化后可與各類蛋白分子相偶聯(lián)，具有優(yōu)越的物理化學(xué)以及生物性質(zhì)。聚乙二醇單甲醚鏈段(mPEG)在體內(nèi)不降解，可直接被排出體外， 從而減少了 PLA和PLGA的局部產(chǎn)酸量，從而盡量避免藥物的突釋。聚乙二醇單甲醚鏈段 (mPEG)親水層也可為藥物的擴(kuò)散提供一個穩(wěn)定的擴(kuò)散層，從而能更好的以擴(kuò)散機(jī)理釋藥。本發(fā)明包載親水性藥物的微球制劑具有油包油包水(W/01/02)型結(jié)構(gòu)，有利于藥物以擴(kuò)散方式釋藥，釋藥行為可控，可明顯減少突釋效應(yīng)，能維持長時間穩(wěn)定地釋藥，具有表面圓整、粒徑均勻可控、包封率高的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，采用油包油包水(W/01/02)復(fù)乳-相分離法制備親水性藥物微球制劑。在初乳制備過程中，由于聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物的乳化作用，親水性藥物的水溶液能均勻分散于高分子載體材料的有機(jī)溶液中，形成具有納米乳性質(zhì)的穩(wěn)定的油包水(W/01)型初乳。更為關(guān)鍵的是，由于聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物的存在，藥物及高分子載體材料在乙酸乙酯-乙腈這一溶劑體系中無需超聲、高壓均質(zhì)等特殊工藝即可形成初乳，顯著改進(jìn)了微球制劑的制備工藝。采用油包油包水(W/01/C^)復(fù)乳法，可以避免由于內(nèi)水相中的親水性藥物大量擴(kuò)散出來而出現(xiàn)的微球大量突釋的情況。在將w/01/02型復(fù)乳加入到含乳化劑II的液體石蠟的過程中，溶解高分子載體材料的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯和乙腈的混合溶劑，其中，乙酸乙酯擴(kuò)散至液體石蠟中(相分離法)，由于乙腈的存在，使微球不至于立刻大量沉淀下來，從而克服了相分離法制備微球存在的載藥量低、粒徑大的缺點(diǎn)。隨后乙腈緩慢揮發(fā)，微球固化析出(溶劑揮發(fā)法)。該制備方法具有包封率高、操作簡單、可控性好，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。


圖1為實(shí)施例1中聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物的氫核磁譜圖；圖2為實(shí)施例13制備的胸腺肽微球制劑的微球顯微鏡照片。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1分別稱取D，L-丙交酯4. 5g和聚乙二醇5000單甲醚0.5g溶于IOOml無水甲苯中，加入25mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為90 10，數(shù)均分子量為5萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 20mg、PLGA(數(shù)均分子量為6萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 50 50)80mg溶于0.8ml乙酸乙酯與0.2ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，醋酸亮丙瑞林15mg溶于0. 2ml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后形成油包水型初乳， 加入6ml含有重量百分比2%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入50ml含有重量百分比2%卵磷脂和重量百分比2%司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌6小時，2000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得醋酸亮丙瑞林微球制劑。微球粒徑 68. 4 μ m，包封率62%，載藥量8. 1 %，24h累積釋放百分率10%。實(shí)施例2分別稱取D，L-丙交酯3. 5g和聚乙二醇5000單甲醚1. 5g溶于IOOml無水甲苯中，加入20mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為70 30，數(shù)均分子量為1.7萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 40mg、PLGA (數(shù)均分子量為5萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 75 25)，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為75 25) 60mg溶于1.5ml乙酸乙酯與0.3ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，鹽酸多柔比星20mg溶于0.5ml 0. IM磷酸鹽緩沖溶液(pH 6.0)中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入8ml含有重量百分比3%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入80ml含有重量百分比1.5%卵磷脂和重量百分比司盤80 的液體石蠟中，持續(xù)攪拌8小時，3000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得鹽酸多柔比星微球制劑。微球粒徑51. 6 μ m，包封率58%，載藥量9. 7%，24h累積釋放百分率15%。實(shí)施例3分別稱取D，L-丙交酯3. Og和聚乙二醇5000單甲醚2. Og溶于IOOml無水甲苯中，加入20mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為60 40，數(shù)均分子量為1.3萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 50mg、PLGA (數(shù)均分子量為2萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 80 20) 50mg溶于2ml乙酸乙酯與0.5ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，鹽酸米托蒽醌 IOmg溶于0. 5ml 0. IM磷酸鹽緩沖溶液(pH6. 0)中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60 秒后，加入13ml含有重量百分比5%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入IOOml 含有重量百分比0. 5%卵磷脂和重量百分比司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌10小時， 3000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得鹽酸米托蒽醌微球制劑。 微球粒徑45. 1 μ m,包封率53 %，載藥量4. 8 %，24h累積釋放百分率16 %。實(shí)施例4分別稱取D，L-丙交酯4. Og和聚乙二醇5000單甲醚1. Og溶于IOOml無水甲苯中，加入30mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為80 20，數(shù)均分子量為2. 5萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 80mg、PLGA(數(shù)均分子量為1萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為70 30)20mg溶于1. 2ml乙酸乙酯與0. Iml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，重組人血管內(nèi)皮抑制素Img溶于0. 8ml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入IOml 含有重量百分比4%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入120ml含有重量百分比
卵磷脂和重量百分比2%司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌5小時，2000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得重組人血管內(nèi)皮抑制素微球制劑。微球粒徑 82. 5 μ m,包封率92 %，載藥量0.9%，24h累積釋放百分率5 %。
實(shí)施例5分別稱取D，L-丙交酯3. 75g和聚乙二醇5000單甲醚1. 25g溶于IOOml無水甲苯中，加入25mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為75 25，數(shù)均分子量為2萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 10mg、PLGA (數(shù)均分子量為1萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 75 25)90mg溶于1. 5ml乙酸乙酯與0. 4ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，干擾素α 2b 0. 5mg溶于0. Iml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入9ml含有重量百分比6%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入90ml含有重量百分比0. 8%單硬脂酸甘油酯和重量百分比司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌8小時，3000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，冷凍干燥M小時即制得干擾素α 2b微球制劑。微球粒徑47.2 μ m，包封率 82 %，載藥量0.4%，24h累積釋放百分率11%。實(shí)施例6分別稱取D，L-丙交酯4. 75g和聚乙二醇5000單甲醚0. 25g溶于IOOml無水甲苯中，加入30mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇單甲醚5000的質(zhì)量比為95 5，數(shù)均分子量為10萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 45mg、PLGA (數(shù)均分子量為0. 5萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為90 10) 55mg溶于3ml乙酸乙酯與0.2ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，超氧化物歧化酶Img溶于0. 2ml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入20ml含有重量百分比3%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入200ml含有重量百分比2%卵磷脂和重量百分比2%司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌6小時，2000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，冷凍干燥M小時即制得超氧化物歧化酶微球制劑。微球粒徑67. 9 μ m,包封率78%，載藥量0. 8 %，24h累積釋放百分率8 %。實(shí)施例7分別稱取D，L-丙交酯2. 5g和聚乙二醇5000單甲醚2. 5g溶于IOOml無水甲苯中，加入20mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為50 50，數(shù)均分子量為1萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 30mg、PLGA (數(shù)均分子量為6萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 85 15)70mg溶于2. 5ml乙酸乙酯與0. 2ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子2mg溶于0. 2ml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入18ml含有重量百分比0. 5%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入200ml含有重量百分比 3%卵磷脂和重量百分比2%單硬脂酸甘油酯的液體石蠟中，持續(xù)攪拌6小時，2000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，冷凍干燥M小時即制得重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子微球制劑。微球粒徑71. 6 μ m，包封率64%，載藥量1. 3%，24h累積釋放百分率5%。實(shí)施例8分別稱取D，L-丙交酯2. 25g和聚乙二醇5000單甲醚2. 75g溶于IOOml無水甲苯中，加入15mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為45 55，數(shù)均分子量為0.9萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 35mg、PLGA (數(shù)均分子量為6萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 85 15)65mg溶于2. 5ml乙酸乙酯與0. 3ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，牛血清白蛋白 5mg溶于0. 4ml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入25ml含有重量百分比2%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入^Oml含有重量百分比2%單硬脂酸甘油酯和重量百分比3%司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌8小時，2000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥對小時即制得牛血清白蛋白微球制劑。微球粒徑49. 5 μ m，包封率 89 %，載藥量4. 2 %，24h累積釋放百分率6 %。實(shí)施例9分別稱取D，L-丙交酯4. 25g和聚乙二醇5000單甲醚0. 75g溶于IOOml無水甲苯中，加入25mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇5000單甲醚的質(zhì)量比為85 15，數(shù)均分子量為3. 3萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 90mg、PLA (數(shù)均分子量為8萬)IOmg溶于3ml乙酸乙酯與^il 乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，重組人胰島素25mg溶于Iml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入30ml含有重量百分比2%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入250ml含有重量百分比卵磷脂和重量百分比2%司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌M小時，4000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，冷凍干燥M小時即制得重組人胰島素微球制劑。微球粒徑14. 4 μ m，包封率67%，載藥量13. 4%，24h累積釋放百分率18%。實(shí)施例10分別稱取D，L-丙交酯4. 75g和聚乙二醇8000單甲醚0. 25g溶于IOOml無水甲苯中，加入30mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇8000單甲醚的質(zhì)量比為95 5，數(shù)均分子量為16萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 50mg、PLGA (數(shù)均分子量為0. 5萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為90 10)50mg溶于3ml乙酸乙酯與3ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，人血清白蛋白 IOmg溶于1. 2ml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入30ml含有重量百分比0. 8%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比3%卵磷脂和重量百分比2%司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌M小時，4000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得人血清白蛋白微球制劑。微球粒徑21. 7 μ m，包封率81%， 載藥量7.4%，24h累積釋放百分率31 %。實(shí)施例11分別稱取D，L-丙交酯3. 25g和聚乙二醇8000單甲醚1. 75g溶于IOOml無水甲苯中，加入20mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇8000單甲醚的質(zhì)量比為65 35，數(shù)均分子量為2. 3萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 10mg、PLGA(數(shù)均分子量為5萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 75 25)90mg溶于2ml乙酸乙酯與3ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，重組人生長激素Img溶于Iml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入35ml含有重量百分比卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比卵磷脂和重量百分比2%單硬脂酸甘油酯的液體石蠟中，持續(xù)攪拌M小時，4000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得重組人生長激素微球制劑。微球粒徑18. 3 μ m，載藥量 0.8%,包封率79 %，24h累積釋放百分率28 %。實(shí)施例12分別稱取D，L-丙交酯2. 25g和聚乙二醇8000單甲醚2. 75g溶于IOOml無水甲苯中，加入15mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇8000單甲醚的質(zhì)量比為45 55，數(shù)均分子量為1. 5萬的PLA_mPEG。稱取上述PLA-mPEG 20mg、PLGA (數(shù)均分子量為6萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 50 50)80mg溶于Iml乙酸乙酯與^iil乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，5-氟尿嘧啶35mg 溶于Iml水中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后，加入21ml含有重量百分比8% 卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入125ml含有重量百分比0. 4%卵磷脂和重量百分比司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌M小時，4000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得5-氟尿嘧啶微球制劑。微球粒徑17. 5 μ m,包封率65%，載藥量 16.9%, 24h累積釋放百分率25 %。實(shí)施例13分別稱取D，L-丙交酯3. Og和聚乙二醇2000單甲醚2. Og溶于IOOml無水甲苯中，加入25mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇2000單甲醚的質(zhì)量比為60 40，數(shù)均分子量為0.5萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 75mg、PLGA (數(shù)均分子量為6萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為 90 10)25mg溶于3ml乙酸乙酯與Iml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，胸腺肽65mg溶于
0.8ml水中制得親水性藥物溶液，向有機(jī)溶液中加親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60秒后， 加入20ml含有重量百分比10%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入200ml含有重量百分比0. 2%卵磷脂和重量百分比司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌12小時，4000rpm 離心收集微球，石油醚洗滌，冷凍干燥M小時即制得胸腺肽微球制劑。微球粒徑31. 2 μ m, 包封率68 %，載藥量34 %，24h累積釋放百分率23 %。實(shí)施例14分別稱取D，L-丙交酯3. 5g和聚乙二醇2000單甲醚2. 5g溶于IOOml無水甲苯中，加入25mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥M小時即得聚乳酸與聚乙二醇2000單甲醚的質(zhì)量比為70 30，數(shù)均分子量為0.7萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 85mg、PLA(數(shù)均分子量為5萬)15mg溶于3ml乙酸乙酯與
1.2ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，重組鏈激酶36mg溶于Iml水中制得親水性藥物溶液， 兩相渦旋混合60秒后，加入25ml含有重量百分比8%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒， 迅速倒入^Oml含有重量百分比0. 4%單硬脂酸甘油酯和重量百分比1 %司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌12小時，4000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，冷凍干燥M小時即制得重組鏈激酶微球制劑。微球粒徑32. 1 μ m,包封率62%，載藥量16. 4%，24h累積釋放百分率 21%。實(shí)施例15分別稱取D，L-丙交酯4. 5g和聚乙二醇2000單甲醚0.5g溶于IOOml無水甲苯中，加入30mg辛酸亞錫為催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，130°C油浴中回流反應(yīng)24h后，減壓蒸餾除去部分甲苯，濃縮液倒入無水乙醚中沉淀，過濾收集產(chǎn)物，真空干燥即得聚乳酸與聚乙二醇 2000單甲醚的質(zhì)量比為90 10，數(shù)均分子量為2萬的PLA-mPEG。稱取上述PLA-mPEG 95mg、PLGA(數(shù)均分子量為3萬，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為80 20)5mg溶于2ml乙酸乙酯與1. 2ml乙腈的混合溶劑制得有機(jī)溶液，鹽酸阿糖胞苷 35mg溶于0.6ml 0.05M磷酸鹽緩沖溶液(pH6. 0)中制得親水性藥物溶液，兩相渦旋混合60 秒后，加入20ml含有重量百分比9%卵磷脂的液體石蠟，再次渦旋60秒，迅速倒入200ml 含有重量百分比0. 3%卵磷脂和重量百分比司盤80的液體石蠟中，持續(xù)攪拌12小時， 4000rpm離心收集微球，石油醚洗滌，室溫真空干燥M小時即制得鹽酸阿糖胞苷微球制劑。 微球粒徑34. 8 μ m，包封率64%，載藥量16. 6%，24h累積釋放百分率。
權(quán)利要求
1.一種包載親水性藥物的微球制劑，由以下重量百分比的組分組成親水性藥物0.1% 40%;聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物0.1% 99%;聚乳酸或聚乳酸羥基乙酸共聚物 0. 99%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包載親水性藥物的微球制劑，其特征在于，所述的親水性藥物為親水性小分子藥物、親水性大分子藥物中的一種或兩種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的包載親水性藥物的微球制劑，其特征在于，所述的親水性小分子藥物為鹽酸多柔比星、鹽酸米托蒽醌、硫酸長春新堿、5-氟尿嘧啶、博來霉素、鹽酸阿糖胞苷、綠原酸中的一種或者兩種以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的包載親水性藥物的微球制劑，其特征在于，所述的親水性大分子藥物為醋酸曲普瑞林、醋酸亮丙瑞林、醋酸布舍瑞林、胸腺肽、醋酸奧曲肽、重組人胰島素、重組人生長激素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、免疫球蛋白、肌紅蛋白、超氧化物岐化酶、L-天門冬酰胺酶、阿糖苷酶、重組鏈激酶、葡激酶、紅細(xì)胞生成素、重組人血管內(nèi)皮抑制素、干擾素、白細(xì)胞介素-11、白細(xì)胞介素_2、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子、重組人表皮生長因子、重組人腦利鈉肽中的一種或者兩種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包載親水性藥物的微球制劑，其特征在于，所述的聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物的數(shù)均分子量為0.5萬 16萬，其中，聚乳酸與聚乙二醇單甲醚的質(zhì)量比為40 60 95 5，聚乙二醇單甲醚的數(shù)均分子量為2000 8000。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包載親水性藥物的微球制劑，其特征在于，所述的聚乳酸的數(shù)均分子量為0. 5萬 10萬；所述的聚乳酸羥基乙酸共聚物的數(shù)均分子量為0. 5萬 6萬，其中，乳酸與羥基乙酸的質(zhì)量比為50 50 90 10。
7.根據(jù)權(quán)利要求1 6任一項所述的包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，包括以下步驟(1)將親水性藥物溶解于水或者磷酸鹽緩沖溶液中，得到親水性藥物溶液；(2)將聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物與聚乳酸、聚乳酸羥基乙酸共聚物兩者中的一種溶解于有機(jī)溶劑中，得到有機(jī)溶液；(3)將步驟( 得到的有機(jī)溶液與步驟(1)得到的親水性藥物溶液混合，渦旋形成油包水型初乳，其中，有機(jī)溶液與親水性藥物溶液體積比為1 20 1 ；(4)將步驟C3)中的油包水型初乳與含乳化劑I的液體石蠟混合，渦旋形成油包油包水型復(fù)乳，其中，油包水型初乳與含乳化劑I的液體石蠟體積比為1 3 10;(5)邊攪拌邊將步驟中的油包油包水型復(fù)乳加入到含乳化劑II的液體石蠟中，繼續(xù)攪拌4小時 M小時，離心收集微球，經(jīng)石油醚洗滌、干燥后制得包載親水性藥物的微球制劑，其中，油包油包水型復(fù)乳與含乳化劑II的液體石蠟的體積比為1 5 10。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟 ⑵中，所述的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯和乙腈的混合溶劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟 (4)中，所述的乳化劑I為卵磷脂，所述的含乳化劑I的液體石蠟中乳化劑I的重量百分比含量為0. 10%。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，其特征在于，步驟 (5)中，所述的乳化劑II為卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、司盤80中的一種或兩種以上，所述的含乳化劑II的液體石蠟中乳化劑II的重量百分比含量為0. 5%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種包載親水性藥物的微球制劑，由重量百分比0.1％～40％的親水性藥物、0.1～99％聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物和0.1～99％聚乳酸或聚乳酸羥基乙酸共聚物組成，微球制劑表面圓整、粒徑均勻可控、包封率高、釋藥行為可控。本發(fā)明還公開了一種包載親水性藥物的微球制劑的制備方法，工藝簡單，可控性好，包括向含聚乳酸-聚乙二醇單甲醚嵌段共聚物的有機(jī)溶液加親水性藥物水溶液渦旋形成油包水型初乳；初乳加入到含乳化劑I的液體石蠟中，渦旋形成油包油包水型復(fù)乳；復(fù)乳加入到含乳化劑II的液體石蠟中，繼續(xù)攪拌4～24小時，離心收集微球，洗滌、干燥后即得包載親水性藥物的微球制劑。
文檔編號A61K9/16GK102266294SQ20111020978
公開日2011年12月7日 申請日期2011年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月25日
發(fā)明者于洋, 朱金芳, 邱利焱 申請人:浙江大學(xué)