專利名稱：柴胡和黃芩苷的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由柴胡及黃芩苷制成的用于抗菌、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物，及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)由于目前對(duì)如青霉素、阿莫西林等許多傳統(tǒng)抗生素抗藥性的蔓延已引起了醫(yī)藥界的高度關(guān)注和重視，多種耐藥性菌株大量出現(xiàn)及新病毒的出現(xiàn)，使難治性感染越來越多。與此同時(shí)，由于傳統(tǒng)中草藥等天然藥物的配伍或有效成分的組合物往往具有互補(bǔ)、協(xié)同增效作用，亦不產(chǎn)生耐藥性，因而對(duì)天然藥物的發(fā)掘和研究日益受到重視。
柴胡是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥和常用中藥，《中國(guó)藥典》規(guī)定傘形科多年生草本植物柴胡(北柴胡)BupleurumChinese DC.和狹葉柴胡(南柴胡)Bupleurum scorzonerifolium Willd.為中藥正品的原植物，其性味苦涼，有疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉氣之功效，用于治療寒熱往來，胸滿脅痛，口苦耳聾，頭痛目眩等。近代藥理研究表明，柴胡具有多種生理生物活性，主要有抗炎，解熱，抗病毒，抗細(xì)菌內(nèi)毒素，降血脂，保肝，提高免疫力，抗腫瘤等。柴胡的主要有效成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油。
黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，性苦、寒，歸肺、膽、脾、大腸、小腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效，用于濕溫、暑溫胸悶嘔惡，肺熱咳嗽，高熱煩渴等癥。黃芩苷為黃芩中提取的有效活性成分，為β-D-葡萄糖酸-5，6-二羥基-4-氧-2-苯基-4H-苯并吡喃-7，已收載入國(guó)家藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第10冊(cè)239頁(yè)(國(guó)家藥典委員會(huì)編)，其中規(guī)定含黃芩苷(C21H18O11)不得少于90.0％(注射用)；不得少于83.0％(口服用)。黃芩苷為抗菌藥，具有抑菌抗炎、清熱解毒、螯合金屬離子、鎮(zhèn)靜、降壓、神經(jīng)保護(hù)作用等藥理作用，主要用于感染、肺炎、肝炎、高血壓等疾病。目前黃芩苷原料國(guó)內(nèi)已有5家上市。黃芩苷的結(jié)構(gòu)式如下圖所示。
黃芩苷結(jié)構(gòu)式大量的藥理和臨床研究表明，柴胡和黃芩苷在抗菌、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛等方面有良好的療效。目前用于治療細(xì)菌、病毒等致病微生物引起的感染和/或具有解熱鎮(zhèn)痛作用的藥物雖有不少，但它們大多作用單一，或只有抗菌作用，或只有抗病毒作用，使其應(yīng)用受到局限。目前急需一種同時(shí)具有抗菌、抗病毒作用的藥物，且劑量小、顯效快，毒副作用小。目前利用柴胡與黃芩苷的相互作用，配伍組方，用于抗菌、抗病毒等方面的藥物，尚未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用于抗菌、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物及其制備方法和用途，其特征在于它是由柴胡和黃芩苷制成的，其重量份數(shù)為柴胡500～8000份、黃芩苷60～1000份；優(yōu)選為柴胡1000～4000份、黃芩苷125～500份；最優(yōu)為柴胡2000份、黃芩苷250份。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支；如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
上面所述的柴胡系經(jīng)過提取加工得到柴胡揮發(fā)油，再與黃芩苷混合加工制成藥學(xué)上可接受的制劑。柴胡揮發(fā)油的提取方法為水蒸氣蒸餾法或超臨界萃取法，也可通過其它方法制備。
本發(fā)明藥物還可以由一定比例的柴胡揮發(fā)油和黃芩苷制成，其重量配比為1∶15～500；優(yōu)選配比為1∶30～250；最優(yōu)配比為1∶180。
本發(fā)明提供了柴胡揮發(fā)油的提取工藝，柴胡水蒸氣蒸餾法的揮發(fā)油得率為0.05-0.1％，超臨界萃取法的揮發(fā)油得率為0.2～0.6％?，F(xiàn)列舉部分工藝如下，但不僅限于下述工藝工藝一水蒸氣蒸餾取柴胡藥材粉末，用20％NaCl、pH值為1(50％硫酸調(diào)節(jié))的酸水5倍量，浸泡5～10小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取6小時(shí)，收集揮發(fā)油，即得。得率0.04％～0.06％；工藝二水蒸氣蒸餾取柴胡藥材粉末，用少量水潤(rùn)濕，進(jìn)行蒸餾，收集初餾液7倍量，進(jìn)行二次水蒸氣蒸餾，收集精餾液5倍量，合并精餾液，用乙醚振搖提取，無水硫酸鈉干燥12h左右，揮干乙醚，即得。得率0.06％～0.09％；工藝三水蒸氣蒸餾取柴胡藥材粉末，用5倍量、20％NaCl、pH＝1(硫酸調(diào))的酸水浸泡5～10h。進(jìn)行蒸餾，收集初餾液7倍量之后，進(jìn)行二次蒸餾，收集精餾液5倍量，合并精餾液，用乙醚萃取，無水硫酸鈉干燥12h左右，揮干乙醚，即得。得率0.05％～0.07％；工藝四超臨界萃取取柴胡藥材粉末，投入萃取釜中。萃取條件萃取壓力為20MPa，溫度30℃，解析釜I壓力為12MPa，溫度65℃，解析釜II壓力為6MPa，溫度40℃，萃取時(shí)間3h，稱油重，計(jì)算平均得油率。得率0.2％～0.6％。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于制備治療抗菌、抗病毒、抗炎以及解熱鎮(zhèn)痛等方面疾病的藥物。
本發(fā)明藥物組合物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、解熱、保肝、降血脂、抗驚厥、免疫調(diào)節(jié)等作用。主要用于感冒，上呼吸道感染，急、慢性肝炎，支氣管肺炎，病毒性肺炎，發(fā)熱等疾病。
該組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等；還可以將其制成滴眼劑。本組合物的優(yōu)選的形式是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等；在制成口服制劑時(shí)，由于柴胡揮發(fā)油溶解性小，可以將其制成β-環(huán)糊精包合物以增加其溶解度。
本發(fā)明經(jīng)過藥理學(xué)研究和藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，由柴胡與黃芩苷為主要成分制成的藥物，可以降低體外抑菌的最小抑菌濃度；對(duì)被細(xì)菌感染的小鼠有明顯的保護(hù)作用；能明顯抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增高，有很好的抗炎作用；對(duì)病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用；還可以對(duì)菌苗引起的家兔體溫升高有明顯的抑制作用。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，柴胡與黃芩苷合并用藥呈協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)。
本發(fā)明組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)提供了一種用于抗菌、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物及其制備方法和用途，滿足了臨床急需；(2)對(duì)本發(fā)明組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比；(3)對(duì)柴胡和黃芩苷的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥理學(xué)研究，證明兩藥協(xié)同增效，療效顯著，明顯優(yōu)于單用柴胡或黃芩苷；(4)進(jìn)行的穩(wěn)定性試驗(yàn)證明本發(fā)明藥物組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全。
(5)黃芩苷結(jié)構(gòu)明確，以黃芩苷直接投料，制備工藝簡(jiǎn)單，避免了提取時(shí)造成的藥物損失和由于原藥材質(zhì)量差異造成的不同產(chǎn)品質(zhì)量差異較大的缺點(diǎn)，使藥品純度更高，雜質(zhì)少，安全性更高，且不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定；
(6)柴胡和黃芩苷療效確切，且減小了相對(duì)用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，柴胡和黃芩苷的組合物以下簡(jiǎn)稱柴黃組合物。其中的柴胡的制備根據(jù)實(shí)施例1中的工藝二的制備方法制備。
實(shí)驗(yàn)例1 柴黃組合物合并用藥藥效研究供試品陰性對(duì)照組0.9％氯化鈉注射液，自制；陽性對(duì)照組左氧氟沙星注射液，自制；柴胡組柴胡注射液，自制；黃芩苷組黃芩苷注射液，自制；柴黃組合物注射液(柴胡和黃芩苷不同劑量配比)組9組(柴+黃＝1000mg+125mg；柴+黃＝1000mg+250mg；柴+黃＝1000mg+500mg；柴+黃＝2000mg+125mg；柴+黃＝2000mg+250mg；柴+黃＝2000mg+500mg；柴+黃＝4000mg+125mg；柴+黃＝4000mg+250mg；柴+黃＝4000mg+500mg)，自制。
供試菌種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌。
供試液的制備取陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、柴胡組、黃芩苷組、柴黃組合物注射液(柴胡和黃芩苷不同劑量配比)組(柴+黃＝1000mg+125mg；柴+黃＝1000mg+250mg；柴+黃＝1000mg+500mg；柴+黃＝2000mg+125mg；柴+黃＝2000mg+250mg；柴+黃＝2000mg+500mg；柴+黃＝4000mg+125mg；柴+黃＝4000mg+250mg；柴+黃＝4000mg+500mg)，分別配制成濃度為8mg/ml的供試液，系列稀釋為4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml的供試液。
菌懸液的制備將上述供試菌種用適宜的斜面活化后，以無菌水制成含菌數(shù)約為108個(gè)/ml菌懸液。
最低抑菌濃度(MIC)的測(cè)定配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，按每管準(zhǔn)確量取8ml，分裝試管，細(xì)菌每個(gè)菌種分裝21支，于121.3℃溫?zé)釡缇?0分鐘，然后準(zhǔn)確量取8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml系列濃度的藥物1ml，注入已滅菌的液體培養(yǎng)基中，每一個(gè)濃度重復(fù)3次，每一系列接種一種菌，每支試管準(zhǔn)確注入0.1ml菌懸液，細(xì)菌置培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)1～2d，觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象。另一系列不接種任何菌種作為空白對(duì)照。
最低抑菌濃度，細(xì)菌用OD值表示。在550nm波長(zhǎng)下用721型分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)菌培養(yǎng)液的OD值，培養(yǎng)液OD值與培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌繁殖速度成正相關(guān)；培養(yǎng)后的培養(yǎng)物與空白對(duì)照在721分光光度計(jì)上進(jìn)行比色測(cè)定，以二者吸收完全相同，培養(yǎng)基中沒有菌生長(zhǎng)的最低濃度作為柴黃注射液的最低抑菌濃度。結(jié)果見表1。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果柴黃組合物對(duì)各供試菌種的最低抑菌濃度分別與陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、柴胡組、黃芩苷組的最低抑菌濃度相比較，前者對(duì)每一供試菌種的最低抑菌濃度均明顯小于后面四者的。柴黃組合物各個(gè)劑量配比組都對(duì)供試的細(xì)菌均有明顯的抑菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC值小于0.125mg/ml，對(duì)大腸桿菌的為0.125mg/ml，對(duì)肺炎雙球菌的小于0.125mg/ml，對(duì)流感嗜血桿菌的為0.5mg/ml。其中以柴+黃＝2000mg+250mg的劑量配比抑菌作用最強(qiáng)。提示柴胡與黃芩苷配伍有協(xié)同增效作用。
表1 柴黃組合物注射液對(duì)供試菌的最低抑菌濃度(MIC)
注表中最低抑菌濃度為平均值。
實(shí)驗(yàn)例2 柴黃組合物小鼠體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)供試品對(duì)照組氯化鈉注射液，自制；柴胡組柴胡注射液，自制；黃芩苷組黃芩苷注射液，自制；柴黃組合物注射液(柴胡和黃芩苷不同劑量配比)組3組(柴+黃＝2000mg+125mg；柴+黃＝2000mg+250mg；柴+黃＝2000mg+500mg)，自制。
受試動(dòng)物健康小鼠360只，體重18～22g，雌雄兼用，隨機(jī)分為對(duì)照組、柴胡組、黃芩苷組、柴黃組合物注射液組(柴+黃＝2000mg+125mg；柴+黃＝2000mg+250mg；柴+黃＝2000mg+500mg)，共18組，每組20只。
菌液用5％胃膜素稀釋金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌混懸液，含菌量均為1010個(gè)/ml。
實(shí)驗(yàn)方法每只小鼠腹腔注射菌液0.5ml感染，注射菌液后1、6小時(shí)分別腹腔注射氯化鈉注射液、柴胡注射液、黃芩苷注射液、柴黃組合物注射液(柴+黃＝2000mg+125mg；柴+黃＝2000mg+250mg；柴+黃＝2000mg+500mg)，給藥劑量均為15mg/kg。感染后觀察24小時(shí)動(dòng)物生存數(shù)，判斷藥品保護(hù)作用。結(jié)果見表2。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌感染小鼠各治療組中，柴黃組合物注射液組(柴胡和黃芩苷不同劑量配比)的作用明顯強(qiáng)于柴胡組、黃芩苷組和對(duì)照組。其中以柴+黃＝2000mg+250mg的劑量配比的作用最強(qiáng)。
表2 柴黃組合物對(duì)感染小鼠的保護(hù)作用
*小鼠處于瀕死狀態(tài)而被處死。
實(shí)驗(yàn)例3 柴黃組合物對(duì)小鼠抗炎實(shí)驗(yàn)供試品對(duì)照組氯化鈉注射液，自制；柴胡組柴胡注射液，自制；黃芩苷組黃芩苷注射液，自制；柴黃組合物注射液組柴+黃＝2000mg+250mg，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制。
受試動(dòng)物昆明種小鼠60只，雄性，體重18～22g，隨機(jī)分為6組。
實(shí)驗(yàn)方法取昆明種小鼠60只，雄性，隨機(jī)分為6組，每組10只，各組小鼠分別灌胃給與對(duì)照藥及受試藥。實(shí)驗(yàn)分為6組，分別給與柴黃組合物注射液50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg，黃芩苷150mg/kg和柴胡150mg/kg，另設(shè)一組陰性對(duì)照給予同體積生理鹽水。藥后一小時(shí)后，尾靜脈注射0.5％伊文思蘭液0.2ml/20g，10分鐘后腹腔注射1.0％醋酸0.2ml/20g，10分鐘后腹腔注射5ml生理鹽水注射液，處死小鼠，輕揉腹部50次，剪開皮膚，用吸管吸取腹腔液，在波長(zhǎng)590nm下測(cè)光密度。結(jié)果見表3。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯的抗炎作用(*P＜0.05和**P＜0.01)，均能明顯抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增高。其中柴黃組合物的作用強(qiáng)于單用柴胡或黃芩苷(#P＜0.05)。證明柴胡和黃芩苷配伍有很好的抗炎作用，且與組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為150mg/kg時(shí)作用最好。
表3 柴黃組合物抗炎作用結(jié)果
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.05，與柴胡組或黃芩苷組相比實(shí)驗(yàn)例4 柴黃組合物的解熱實(shí)驗(yàn)供試品對(duì)照組氯化鈉注射液，自制柴胡組柴胡注射液，自制；黃芩苷組黃芩苷注射液，自制；柴黃組合物注射液組柴+黃＝2000mg+250mg，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制。
受試動(dòng)物健康大耳白家兔，雌雄兼用，體重2.4～2.8kg。于實(shí)驗(yàn)前兩天，每天測(cè)家兔正常肛門溫度4次，選肛門溫每天波動(dòng)不超過0.2℃的家兔48只，隨機(jī)分為6組。
致熱源傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗，市購(gòu)。
實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)當(dāng)日早晨先測(cè)動(dòng)物的基礎(chǔ)體溫，以0.5ml/kg的傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗給家兔耳靜脈注射致熱，半小時(shí)后分別測(cè)肛溫，并靜脈注射相應(yīng)的藥物。給藥后每1小時(shí)測(cè)肛溫一次，共4次，以不同時(shí)間所測(cè)肛溫與基礎(chǔ)肛溫之差值，為體溫變化的指標(biāo)。結(jié)果見表4。
表4 柴黃組合物對(duì)菌苗致熱家兔的解熱作用(x±s；n＝8)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.05，與柴胡組或黃芩苷組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯的解熱作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中柴黃組合物對(duì)菌苗引起的家兔體溫升高有明顯的抑制作用，且較單獨(dú)使用柴胡或黃芩苷持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，用藥4小時(shí)后仍有解熱效果。且與組合物的給藥劑量有關(guān)，高劑量時(shí)作用最好。
實(shí)驗(yàn)例5 柴黃組合物注射劑體內(nèi)抗病毒實(shí)驗(yàn)供試品感染對(duì)照組流感病毒液(FM1)，自制；柴胡組柴胡注射液，自制；黃芩苷組黃芩苷注射液，自制；柴黃組合物注射液組柴+黃＝2000mg+250mg，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制。
受試動(dòng)物昆明種小鼠70只，雌雄各半，體重18～22g，隨機(jī)分為7組。
實(shí)驗(yàn)方法取昆明種小鼠70只，雌雄各半，隨機(jī)分為7組，分別為感染對(duì)照組、正常對(duì)照組、柴胡組、黃芩苷組、柴黃組合物注射液組(柴+黃＝2000mg+250mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，每組10只。除正常組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以1/5個(gè)LD50流感病毒液(FM1)滴鼻感染。從感染前一天開始腹腔注射給藥，每天2次，連續(xù)5天，其中感染組與正常對(duì)照組給予同體積生理鹽水。第6天稱取小鼠體重后解剖，摘取全肺稱重，逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)抑制率。公式肺指數(shù)＝肺重(g)/體重(g)×100，肺指數(shù)抑制率％＝(病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值-實(shí)驗(yàn)組肺指數(shù)均值)/病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值×100％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。(注肺指數(shù)大，表示肺重量大，肺病變程度嚴(yán)重。)表5 柴黃組合物對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥的影響(x±s；n＝10)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與感染對(duì)照組相比#P＜0.05，與柴胡組或黃芩苷組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果感染后小鼠肺指數(shù)值明顯增大。各給藥組都具有明顯的抗病毒感染作用(*P＜0.05，**P＜0.01)，其中柴黃組合物的作用強(qiáng)于單用柴胡或黃芩苷(#P＜0.05)。證明柴胡和黃芩苷配伍對(duì)病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用，肺指數(shù)值明顯降低，肺組織病變程度明顯減輕，且與組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為150mg/kg時(shí)作用最好。
實(shí)驗(yàn)例6 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品柴黃組合物注射液(自制，2ml相當(dāng)于生藥材2g的柴胡提取物和黃芩苷250mg)。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各40只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性試驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行一日內(nèi)最大給藥量試驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.15ml/10g，腹腔注射0.15ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測(cè)量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，柴黃組合物注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.3ml/10g，相當(dāng)于50kg體重人日最大用量10ml的150倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例7 柴黃組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品柴黃組合物注射液(自制，柴胡2000mg，黃芩苷250mg)考察項(xiàng)目性狀、PH值、澄明度長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
綜上所述，本發(fā)明提供的柴胡與黃芩苷組合物具有協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于柴胡或黃芩苷單獨(dú)給藥的藥效。對(duì)柴黃組合物注射液(自制，柴胡2000mg，黃芩苷250mg)進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的柴胡與黃芩苷組合物制成的注射劑的各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，可以用于放大生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)驗(yàn)例2～11中的柴胡揮發(fā)油的的制備方法可以參見實(shí)施例1中的工藝一、二、三。
實(shí)施例1 柴胡揮發(fā)油的制備工藝一水蒸氣蒸餾取柴胡藥材粉末，用20％NaCl、pH值為1(50％硫酸調(diào)節(jié))的酸水5倍量，浸泡5～10小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取6小時(shí)，收集揮發(fā)油，即得。得率0.04％～0.06％。
工藝二水蒸氣蒸餾取柴胡藥材粉末，用少量水潤(rùn)濕，進(jìn)行蒸餾，收集初餾液7倍量，進(jìn)行二次水蒸氣蒸餾，收集精餾液5倍量，合并精餾液，用乙醚振搖提取，無水硫酸鈉干燥12h左右，揮干乙醚，即得。得率0.06％～0.09％。
工藝三水蒸氣蒸餾取柴胡藥材粉末，用5倍量、20％NaCl、pH＝1(硫酸調(diào))的酸水浸泡5～10h，進(jìn)行蒸餾，收集初餾液7倍量之后，進(jìn)行二次蒸餾，收集精餾液5倍量，合并精餾液，用乙醚萃取，無水硫酸鈉干燥12h左右，揮干乙醚，即得。得率0.05％～0.07％。
工藝四超臨界萃取取柴胡藥材粉末，投入萃取釜中。萃取條件萃取壓力為20MPa，溫度30℃，解析釜I壓力為12MPa，溫度65℃，解析釜II壓力為6MPa，溫度40℃，萃取時(shí)間3h，稱油重，計(jì)算平均得油率。得率0.2％～0.6％。
柴胡揮發(fā)油鑒別實(shí)驗(yàn)(1)取本品各2ml，分置甲、乙兩試管中，乙管置水浴中蒸干后，殘?jiān)铀?ml使溶解。兩管各加0.05％二硝基苯肼的2mol/L鹽酸溶液2滴，混勻，再分別加入10％氫氧化鉀溶液4～5滴，甲管所顯葡萄酒紅色應(yīng)比乙管深。
(2)取本品各2ml，分置甲、乙兩支試管中，乙管置水浴中蒸干后，殘?jiān)铀?ml使溶解。兩管各加品紅亞硫酸試液2滴，混勻，稍放置后，甲管所顯玫瑰紅色應(yīng)比乙管深。
實(shí)施例2 柴黃組合物水針劑的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50g注射用水加至2000ml共制備 1000支處方2柴胡揮發(fā)油 1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50g注射用水加至2000ml共制備 1000支處方3柴胡揮發(fā)油 1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50g注射用水加至2000ml共制備 1000支2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的柴胡揮發(fā)油，加熱攪拌溶解完全，黃芩苷加少量注射用水，并加適量10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9～10，加熱使溶解。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并加稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至5～7。
6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例3 柴黃組合物氯化鈉輸液的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方2柴胡揮發(fā)油1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方3柴胡揮發(fā)油1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g聚山梨酯8050g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶2、具體步驟1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的柴胡揮發(fā)油，加熱攪拌溶解完全。黃芩苷加少量注射用水，并加適量10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9～10，加熱使溶解。將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并加稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至5～7。
6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4 柴黃組合物葡萄糖輸液的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方2柴胡揮發(fā)油1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方3柴胡揮發(fā)油1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶2、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，先加入聚山梨酯80溶解完全，再加入處方量的柴胡揮發(fā)油，加熱攪拌溶解完全。黃芩苷加少量注射用水，并加適量10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9～10，加熱使溶解。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測(cè)定并加稀鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至5～7。
6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5 柴黃組合物片劑的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250gβ-環(huán)糊精 6g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方2柴胡揮發(fā)油 1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250gβ-環(huán)糊精 8.4g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方3柴胡揮發(fā)油 1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250gβ-環(huán)糊精 7.2g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片2、具體步驟1)按照處方量稱取原料和輔料。
2)將黃芩苷粉碎過100目篩備用，取柴胡揮發(fā)油，加入用水已調(diào)成糊狀的β-環(huán)糊精中，研磨1小時(shí)，低溫干燥(≤60℃)，即得包合物，粉碎，過100目篩，備用。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將柴胡揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物、黃芩苷、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6 柴黃組合物膠囊劑的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250gβ-環(huán)糊精 6g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方2柴胡揮發(fā)油 1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250gβ-環(huán)糊精 8.4g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方3柴胡揮發(fā)油 1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250gβ-環(huán)糊精7.2g淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒2、具體步驟1)按照處方量稱取原料和輔料。
2)將黃芩苷粉碎過100目篩備用，取柴胡揮發(fā)油，加入用水已調(diào)成糊狀的β-環(huán)糊精中，研磨1小時(shí)，低溫干燥(≤60℃)，即得包合物，粉碎，過100目篩，備用。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將柴胡揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物、黃芩苷、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 柴黃組合物軟膠囊劑的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g大豆油 500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備 1000粒處方2柴胡揮發(fā)油1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g大豆油500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備1000粒處方3柴胡揮發(fā)油1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250g大豆油500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備1000粒2、具體步驟將柴胡揮發(fā)油和黃芩苷分別粉碎過100目篩，將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入柴胡揮發(fā)油和黃芩苷研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例8 柴黃組合物顆粒劑的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250gβ-環(huán)糊精 6g糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備1000包處方2柴胡揮發(fā)油1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250gβ-環(huán)糊精 8.4g糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備1000包處方3柴胡揮發(fā)油1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷250gβ-環(huán)糊精 7.2g糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備1000包2、具體步驟
1)按照處方量稱取原料和輔料。
2)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將黃芩苷粉碎過100目篩備用，取柴胡揮發(fā)油，加入用水已調(diào)成糊狀的β-環(huán)糊精中，研磨1小時(shí)，低溫干燥(≤60℃)，即得包合物，粉碎，過100目篩，備用。
3)將柴胡揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物、黃芩苷與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例9 柴黃組合物滴丸劑的制備1、處方處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚乙二醇6000 600g處方2柴胡揮發(fā)油 1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚乙二醇6000 600g處方3柴胡揮發(fā)油 1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚乙二醇6000 600g2、具體步驟將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入柴胡揮發(fā)油和黃芩苷，攪拌溶解，60目篩過濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例10 柴黃組合物口服液制備1、處方
處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50gβ-環(huán)糊精 6g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支處方2柴胡揮發(fā)油 1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50gβ-環(huán)糊精 8.4g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支處方3柴胡揮發(fā)油 1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50gβ-環(huán)糊精 7.2g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支2、具體步驟1)取柴胡揮發(fā)油，加入用水已調(diào)成糊狀的β-環(huán)糊精中，研磨1小時(shí)，低溫干燥(≤60℃)，即得包合物，粉碎，過100目篩，備用。
1)先將聚山梨酯80用配液量40％的水溶解完全，再將柴胡揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物加入加熱攪拌溶解完全。黃芩苷加少量水加熱后加適量氫氧化鈉溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加水至全量。
4)過0.8μm的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例11 柴黃組合物滴眼劑制備1、處方
處方1柴胡揮發(fā)油 1g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50g氫氧化鈉適量氯化鈉 70g尼泊金乙酯 3.0g水 加至10000ml處方2柴胡揮發(fā)油 1.4g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50g氫氧化鈉適量氯化鈉 70g尼泊金乙酯 3.0g水 加至10000ml處方3柴胡揮發(fā)油 1.2g(相當(dāng)于柴胡原藥材2000g)黃芩苷 250g聚山梨酯80 50g氫氧化鈉適量氯化鈉 70g尼泊金乙酯 3.0g水 加至10000ml2、具體步驟1)先將聚山梨酯80用配液量40％的水溶解完全，再將柴胡揮發(fā)油加入加熱攪拌溶解完全。黃芩苷加少量水加熱后加適量氫氧化鈉溶解完全。
2)氯化鈉和尼泊金乙酯用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加水至全量。測(cè)定并調(diào)節(jié)pH值。
4)過0.8μm的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該組合物由柴胡利黃芩苷制成，其重量份數(shù)為柴胡500～8000份、黃芩苷60～1000份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于柴胡及黃芩苷的重量份數(shù)為柴胡1000～4000份、黃芩苷125～500份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于柴胡及黃芩苷的重量份數(shù)為柴胡2000份、黃芩苷250份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的柴胡經(jīng)過提取加工得到柴胡揮發(fā)油，再與黃芩苷混合加工制成藥學(xué)上可接受的制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于其中的柴胡揮發(fā)油的提取方法為水蒸氣蒸餾法或超臨界萃取法。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還可以由柴胡揮發(fā)油和黃芩苷制成，其重量比為1∶15～500。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還可以由柴胡揮發(fā)油和黃芩苷制成，其重量比為1∶30～250。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料結(jié)合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為注射劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為口服劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于抗菌、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物及其制備方法和用途，該組合物由柴胡和黃芩苷制成，其重量比為柴胡500～8000份、黃芩苷60～1000份。該組合物還可以由柴胡揮發(fā)油和黃芩苷制成，其重量比為1∶15～500，可制成各種藥學(xué)上可接受的劑型；該組合物具有協(xié)同增效作用，穩(wěn)定性好，比單用同劑量的柴胡或黃芩苷的效果大大提高。
文檔編號(hào)A61K36/233GK1947742SQ200510104218
公開日2007年4月18日 申請(qǐng)日期2005年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月10日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華