專利名稱：治療眼干綜合癥的包含n-乙酰-半胱氨酸的眼科組合物的制作方法
描述本發(fā)明是關(guān)于一種治療眼干綜合癥的包含N-乙酰-半胱氨酸的眼科組合物。更特定的是，本發(fā)明是涉及包含作為活性成分的N-乙酰-半胱氨酸的組合物，它適合以眼藥水局部給藥，因為它們和淚液是等滲的，這是由于對所述組合物滲量無副作用的N-乙酰-半胱氨酸中和劑的存在。
正如所知的，眼前的淚薄膜是覆蓋結(jié)膜和暴露的眼球表面的組織液體結(jié)構(gòu)。在正常的條件下，淚薄膜表現(xiàn)為三層結(jié)構(gòu)的復(fù)合體，包括·內(nèi)部的黏液層，由存在于結(jié)膜上皮的特殊的細胞(杯狀細胞)所產(chǎn)生的糖蛋白混合物(粘蛋白)組成，這一層黏附在角膜-結(jié)膜上皮而形成親水層。
·豐富的中間水層，覆蓋前述的親水層，富含氧并主要由水、電解質(zhì)、蛋白質(zhì)、酶和粘蛋白組成，它們具有營養(yǎng)、防御、運載和視覺功能。
·外部脂質(zhì)層，主要起的作用是調(diào)節(jié)來自淚薄膜的水的蒸發(fā)率。
前述的三層結(jié)構(gòu)組成了一種復(fù)雜的生理結(jié)構(gòu)，它的主要功能是保護眼睛表面，維持角膜表面的水化、潤滑和清洗作用并協(xié)同產(chǎn)生正常的視力。這個生理系統(tǒng)完全的平衡和連續(xù)的更新對于它完成自己的功能來說是必不可少的條件。對于這個發(fā)生，首先必須有恒定的但不是過多的水從淚液蒸發(fā)，這樣就使得滲量維持在300mOsm/kg的生理值附近，淚膜必須通過眨眼不斷的重新分布在角膜表面。
眼睛許多病理的或反常的狀態(tài)通過淚膜的不連續(xù)或改變而顯現(xiàn)出來，由于例如眨眼率的不足，隱型眼鏡過長時間的使用，應(yīng)用特定的系統(tǒng)藥物或老年高血壓。在本文中，名詞“眼干綜合癥”的意思是一系列眼部的病理表現(xiàn)，特征是所述淚膜的減少和/或成分的改變，然而更合適的是由于這種原因產(chǎn)生的角膜表面特征性的改變和術(shù)語干性角膜結(jié)膜炎是一樣的。不言而喻的，眼干是臨床上一種很難用頻率定義的病癥，因為它不是一直被認識到，由于它經(jīng)常是溫和的以及非特異性的癥狀學(xué)和客觀事實(Lemp M.A.，眼干治療的最新發(fā)展(Recent developments in dry eyemanagement)，Ophthalmology 10，1299-304(1987)；Lemp M.A.，眼干綜合征治療和臨場試驗(Dry eye syndromestreatment and clinical trials).Adv.Exp.Med.Biol.，350 553-9(1994)；Lemp M.A.，眼干的流行病學(xué)和分類(Epidemiology andclassification of dry eye)，Adv.Exp.Med.Biol.，438 791-803(1998))。患有眼干綜合癥的病人表現(xiàn)出的紊亂如結(jié)膜變紅，醒來時眼瞼睜開困難，一種燒灼、刺痛和多沙的感覺，一種異質(zhì)體感覺和畏光?？赡艿牟l(fā)癥有從表面非上皮化(disepithelisation)的角膜病，到感染性角膜炎甚至嚴重的角膜感染性變質(zhì)性病理改變。
從診斷的觀點來看，除了評價它自己的癥狀外，眼干綜合癥可以通過統(tǒng)一的步驟鑒別和檢測，最常用的是測定淚液的產(chǎn)生(Schirmer試驗)，眨眼后淚膜消失的時間(BUT)以及應(yīng)用孟加拉玫紅或熒光素進行眼表面染色的測定。而且，眼淚的滲量值可以作為在檢查時病理狀態(tài)的客觀參數(shù)，已經(jīng)證明在病理條件下這個值平均上升30-40mOsm/kg。
有許多可能的病因。有時候不太可能，甚至利用實驗室調(diào)查和精密復(fù)雜的裝置來認識到這個綜合癥的病因；在這種情況下，有人稱之為“特發(fā)形式”，它完全作為癥狀可治療的。由于淚膜的改變可有不同的病理解釋和治療方法，這依賴于已經(jīng)發(fā)現(xiàn)改變了的淚液成分的類型，一種基本的步驟包括評定異常情況是發(fā)生在脂質(zhì)表層、水層或內(nèi)部的黏蛋白層(Miglior M.，Troiano P.，淚膜病理學(xué)治療的歸類和基本原理(Lacrimal film pathologiesclassification and rationale of thetherapy)，選自Symposium on the lacrimal System，Toronto，June 25，1994，Hurwitz J.等編輯，Kugler & Ghedini Publ.，(1995))，然后從治療的觀點得出更合適的結(jié)論。
本身不經(jīng)常發(fā)生的外部脂質(zhì)成分的改變，通常是由于瞼炎導(dǎo)致產(chǎn)生的，并應(yīng)該這樣治療。更多的情況是中間的水層的改變，這個改變總是包括這個成分量的減少，伴隨過度的蒸發(fā)，這將導(dǎo)致前述的淚液滲量的上升。在這種情況下，眼藥水中特定的組合物，被稱為“人工淚液”，在富含水分和含有很少或無粘膜模擬(mucomimetic)藥物的制劑中被指出，可能和低水合的角膜隱型眼鏡相聯(lián)系。
當改變發(fā)生在內(nèi)部的粘蛋白層時，情況就微妙了。已經(jīng)知道粘蛋白層的完整性對于維持淚液穩(wěn)定性是必要的因素之一，因為粘蛋白提高了角膜表面的潤濕性，使得水膜持續(xù)和均勻的黏附在暴露表面而保證穩(wěn)定性，并提高了液相粘度，阻止來自結(jié)膜囊的快速流。
至于粘蛋白層的改變，已經(jīng)報導(dǎo)(Miglior M.等，Ioc.cit.)它會隨著粘蛋白缺乏或過多而出現(xiàn)。當粘蛋白缺少或不足時，角膜不可濕潤的，這是由于電解質(zhì)和糖蛋白之間出現(xiàn)的不平衡所致，淚膜變的不穩(wěn)定并被分解，因此產(chǎn)生干燥的部分。在第二種情況中，過多的粘蛋白凝結(jié)成線仍舊阻礙眼睛表面的可濕性，導(dǎo)致干燥區(qū)域的形成并破壞角膜上皮。在這種情況下，也可能在局部眼睛水平，通過應(yīng)用合適配制的“人工淚液”附加合適的粘蛋白成分和粘膜模擬藥物綜合物進行干預(yù)(即各種纖維素衍生物、聚乙烯衍生物如聚乙烯-吡咯烷酮和聚乙烯醇，各種多聚糖和它們的衍生物如右旋糖苷、透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素等等)，或在粘蛋白成分過多的情況中，應(yīng)用溶解粘液的藥物如N-乙酰-半胱氨酸。
更特殊的是，為了淚液黏液的減少和流動，N-乙酰-半胱氨酸主要規(guī)定是局部和系統(tǒng)給藥。作為選擇的，也可以應(yīng)用其他粘液溶解劑，如用羧甲基半胱氨酸、鹽酸溴己新和安溴素(后兩種也有一種沒有較好定義的分泌-刺激作用)進行系統(tǒng)給藥。前述的第一種活性成分有以下結(jié)構(gòu)式 它是天然氨基酸L-半胱氨酸的衍生物，其被證明為臨床有效的治療急性和慢性支氣管肺病癥的粘液溶解劑，因此主要是為這些病癥開處方，大多數(shù)應(yīng)用系統(tǒng)給藥。這個分子被認為是通過“裂解”黏液的二硫鍵(S-S)來發(fā)揮活性的，這樣就降低了其粘滯度。在眼睛中，N-乙酰-半胱氨酸溶液可以溶解黏液線從而降低淚液的粘滯度。
N-乙酰-半胱氨酸(也指以后的N-AC)也是一種相對較強的酸，不能直接應(yīng)用于眼睛表面，但同樣的在合適的中和之后可以。例如，4％按重量計算N-AC水溶液的pH值為1.90，在將它應(yīng)用于眼藥水中之前，所述酸必須被中和，例如用NaOH，來產(chǎn)生相應(yīng)的鈉鹽并使得pH值在可以被人類眼睛忍受的生理范圍之內(nèi)。然而，必須的中和有一個缺點就是，會提高所得溶液的滲量，它從原來的值241mOsm/kg到高滲相應(yīng)的值。在這點上，意大利專利第1151755號(Bruschettini s.r.l.)描述了一種包含N-AC的眼藥水組合物，其中活性成分由磷酸氫二鈉緩沖液和許多重碳酸鈉補充，足以使得溶液的pH值在6.6-7.0范圍。即使是文獻也沒有強調(diào)任何導(dǎo)致的忍耐性的不方便，它呈現(xiàn)出高滲性而作為所推薦制劑的基本特征。
另外一種N-乙酰-半胱氨酸基礎(chǔ)的制劑作為局部眼睛的應(yīng)用在EP-A-O 551848(Zambon Group S.p.A.)中描述，其中所述N-AC溶液，優(yōu)選的4％按重量計算，和聚乙烯醇結(jié)合來獲得活性增加的治療干性角膜結(jié)膜炎的產(chǎn)物。在這種情況中，所述文獻未報導(dǎo)所推薦制劑表現(xiàn)出的滲量值，但從相應(yīng)組合物清楚的得知它們是強高滲的制劑。
實際上，目前商業(yè)上應(yīng)用的N-AC-基礎(chǔ)的眼藥水呈現(xiàn)出的滲量值大大高于“生理的”值300mOsm/kg。對于Brunac商標銷售的產(chǎn)品來說這些值是＞1000mOsm/kg(Bruschettini s.r.l.包含5％的N-AC)，對于Tirocular產(chǎn)品來說大概是900mOsm/kg(ACRAF S.p.A，包含4％的N-AC)。如前面指出的，考慮到避免淚膜過度高滲的重要性，顯而易見的是前述的制劑會刺激和潛在損害角膜表面。如果眼干綜合癥病人的淚液已經(jīng)是高滲了，這個就更加如此，因此相關(guān)的治療就不允許通過施用高滲制劑而加重這些疾病。出于這些考慮，人工淚液等滲制造或優(yōu)選的制成低滲制劑(Holly F.J.，Lamberts D.W.，非等滲溶液對于淚膜滲量的影響(Effect ofnonisotonic solutions on tear film osmolality).Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，20，236(1981))。
還考慮到不用無機堿NaOH而用其他有機堿中和乙酰半胱氨酸的可能性，仍舊獲得強高滲溶液，如下面的實施例所示。
用氫氧化鈉中和N-AC 5.00g增加粘滯度聚合物 1.00gNaOH1.18g無菌蒸餾水 q.s.至l00mlpH＝7.00；滲量＝644mOsm/kg用L-賴氨酸(lisine)中和N-AC 5.00gL-賴氨酸(lisine) 4.50g依地酸鈉 0.10g增加粘滯度聚合物 2.00g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝7.00；滲量＝620mOsm/kg用L-精氨酸中和N-AC 5.00gL-精氨酸 6.20g依地酸鈉 0.10g粘滯劑聚合物 2.00g
無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝7.00；滲量＝656mOsm/kg用L-組氨酸(istidine)中和N-AC4.00gL-組氨酸(istidine) 8.00無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝6.50；滲量＝409mOsm/kg用L-甲基葡糖胺中和N-AC4.00gL-甲基葡糖胺3.40g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝7.30；滲量＝490mOsm/kg用L-甘氨酸碳酸鈉中和N-AC4.00gL-甘氨酸碳酸鈉 3.60g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝7.20；滲量＝1636mOsm/kg用L-葡糖胺中和N-AC4.00gL-葡糖胺4.80g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝7.30；滲量＝631mOsm/kg先前的實施例表明通常應(yīng)用的藥物中和劑導(dǎo)致產(chǎn)生相當高滲的制劑假設(shè)5.0％或4.0％的N-乙酰-半胱氨酸，增加粘滯度聚合物存在或不存在時都是一樣的。
以上的觀點中，提供局部眼睛應(yīng)用的乙酰半胱氨酸基礎(chǔ)的藥物組合物是本發(fā)明的一個目標，這種藥物組合物可方便的應(yīng)用在溶解粘液活性的制劑中來治療眼干綜合癥而不出現(xiàn)對于眼組織的弱耐受性或毒性的缺點，這些通常是和低pH值以及上面所有的，及滲量值大大高于生理值相聯(lián)系。更特別的是，所述眼制劑-雖然利用了乙酰半胱氨酸溶解粘液的特性-必須化學(xué)上是接近中性的，同時是等滲優(yōu)選的是低滲的。
最后，本發(fā)明建議用一種堿試劑中和所述乙酰半胱氨酸，那雖然確實有助于所述制劑作為人工淚液總的發(fā)揮作用，對于滲透壓作用很差，因此使得可以獲得和淚液等滲的N-AC溶液或低滲的溶液。
在對于本發(fā)明研究的設(shè)計中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)右旋糖苷的一種聚陽離子衍生物，二乙基氨基乙基-右旋糖苷(DEAE-右旋糖苷)，它包含通過對于酸解特別穩(wěn)定的酯鍵和右旋糖苷骨架葡萄糖部分相連的二乙基氨基乙基，驚奇的是它通過形成相應(yīng)的鹽對于中和N-乙酰-半胱氨酸的酸性有效，而對于所得溶液的滲透壓沒有作用。與此同時，通過用右旋糖苷聚陽離子衍生物中和N-AC所得的制劑已經(jīng)包含一種增加粘滯度聚合物，已經(jīng)認識到它的存在和眼干綜合癥相聯(lián)系的許多病癥中有益。
DEAE-右旋糖苷，已經(jīng)被認識和應(yīng)用為治療高膽固醇血癥的藥物以及作為常規(guī)抗血脂藥(antilipermic)(美國專利3,627,872和4,160,826)，它通過在堿溶液中將2-氯乙基-二乙基胺和右旋糖苷反應(yīng)獲得，右旋糖苷-一種多聚糖它的結(jié)構(gòu)式如下所示 作為起初的多聚糖，所述二乙基氨基乙基衍生物包括吡喃型葡萄糖單位，主要通過16鍵連接，然而小數(shù)量的13鍵(及更小的程度12和14鍵)負責旁支鏈。平均的分子量大約是500,000并且氮的含量大約是3.2％，相應(yīng)的每三個葡萄糖單位一個陽離子基團。右旋糖苷硫酸鹽相似，DEAE-右旋糖苷是一種多聚電解質(zhì)并且它的特性和起初的聚合物-右旋糖苷有相當大的不同。
作為一種多聚陽離子產(chǎn)物，DEAE-右旋糖苷通常在商業(yè)上以其相應(yīng)的氯化物或硫酸鹽的成鹽形式應(yīng)用。所述的自由堿形式，必須根據(jù)本發(fā)明建議的作為中和N-乙酰-半胱氨酸的初始反應(yīng)劑，例如可以從DEAE-右旋糖苷氯化物(或硫酸鹽)配制，通過根據(jù)下面的方法用陽離子交換樹脂處理。
將陽離子交換樹脂(DOWEX 1×8，30ml)裝填在柱中并用0.1N的NaOH處理來水合和激活它。接著，1N NaOH通過樹脂。將所述樹脂仔細的用水清洗來去除多余的NaOH，將5％的DEAE-右旋糖苷HCL溶液導(dǎo)入柱中。通過減少壓力的蒸發(fā)將柱中包含堿性右旋糖苷的溶液濃縮然后干燥。
為了測定用來配制的N-乙酰-半胱氨酸的中和能力，從前面的操作獲得的自由堿形式的產(chǎn)物，如果需要用0.1N HCL滴定。預(yù)先測定質(zhì)量單位中和劑中包含化學(xué)等價物的量，這項操作可以進行，例如通過“反向滴定”，其中首先在一定量的溶解在蒸餾水中的堿性右旋糖苷中加入過量的強酸(HCL)，然后用強堿(NaOH)滴定過量強酸。這項操作獲得的，通過電勢滴定測得的pH值在附圖中報告。


圖1顯示了在本發(fā)明組合物中應(yīng)用的堿性DEAE-右旋糖苷的滴定曲線。
圖2顯示了評價大鼠眼干綜合癥實驗?zāi)Ｐ椭薪M合物活性的Schirmer實驗的結(jié)果。
圖3顯示了在相同的大鼠實驗?zāi)Ｐ椭型ㄟ^裂隙燈觀察熒光素鈉染色后的角膜的結(jié)果。
暫時將涉及本發(fā)明組合物應(yīng)用實驗的兩張圖擱在一邊，以后再處理，回到堿性DEAE-右旋糖苷滴定，圖1顯示了當應(yīng)用前述步驟處理溶解在5ml蒸餾水中的0.08g堿性DEAE-右旋糖苷，并加入5.0ml N/10 HCL后獲得的電勢滴定曲線。用NaOH電勢滴定過量HCL，在圖中顯示了所得逐漸增加的pH值，顯示了在加入3.6ml堿溶液后曲線點達到pH為7.0。因此，1.4ml(5.0-3.6)的N/10 HCL，例如0.14mEq，中和0.08g堿性DEAE-右旋糖苷。這就可以在研究中估算聚陽離子試劑的等價重量如0.14/0.08＝1.75mEq/g。
根據(jù)上面的觀點，因此就可能容易的實現(xiàn)一種N-AC-基礎(chǔ)的制劑，其活性成分被合適比例的堿性DEAE-右旋糖苷中和，在下面的實施例中將看的更加清楚，它不會對所述組合物的滲量有不利影響，但會獲得有益的等滲眼溶液。
因此，本發(fā)明特別提供了一種以乙酰半胱氨酸為基礎(chǔ)的眼藥水給藥的眼科組合物，它包含用堿性DEAE-右旋糖苷中和的N-乙酰-半胱氨酸并擁有生理上可接受的滲量。更特別的是，已經(jīng)知道所述滲量小于320mOsm/kg，更優(yōu)選的是小于300mOsm/kg，然而所述組合物的pH值在6.0-7.5范圍之間，優(yōu)選的是在6.2-7.0范圍之間。以上的特性使得獲得以眼藥水給藥適合治療眼干綜合癥的溶液-所述溶液優(yōu)選的包含被9％-15％按重量計算之間的堿性DEAE-右旋糖苷中和的3％-5％按重量計算的N-乙酰-半胱氨酸。
根據(jù)本發(fā)明配制的制劑方便的要么配制成溶液，要么藥學(xué)上可接受的眼賦形劑中的含水懸液，并可包含一種或多種其他可能的，在這種制劑藥學(xué)技術(shù)中所知的成分。特別是，除了N-乙酰-半胱氨酸和DEAE-右旋糖苷，所述制劑也可包含較少量的其他黏滯度增加聚合物，如前面文章參考引用的以及下面在舉例制劑中所報導(dǎo)的。習慣的，所述組合物可包含其它佐劑，其中有螯合的試劑、抗微生物試劑和防腐劑，雖然后者通常在眼藥水中是避免的，但如果可能應(yīng)用單一劑量組而不含有防腐劑。
以下實施例報導(dǎo)了根據(jù)本發(fā)明而配制的所述眼科組合物的一些特定的實施方案，以及一些關(guān)于這些組合物發(fā)揮功效和先前文章對比的實驗數(shù)據(jù)。
實施例1考慮到如前面所述的已經(jīng)測定了的等價比例，N-乙酰-半胱氨酸和DEAE-右旋糖苷基礎(chǔ)的低滲制劑根據(jù)下面配方制造N-AC 4.0g堿性DEAE-右旋糖苷12.0g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝6.18；滲量＝245mOsm/kg對于這個制劑，將4gNAC溶解在大約一半所用的水中，并將12g堿性DEAE-右旋糖苷溶解在剩余的水中。然后將所述兩種溶液混合并應(yīng)用0.2μm的無菌過濾器過濾。
除了前述的滲量值，所述組合物表現(xiàn)出21mPa.S的黏滯度和牛頓學(xué)說類型的流動。
實施例2根據(jù)本發(fā)明配制的低滲組合物在這種情況中包含防腐劑，根據(jù)以下配方N-AC 4.0g堿性DEAE-右旋糖苷12.0g苯扎氯胺 0.01g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝6.23；滲量＝245mOsm/kg
對于這個制劑，將NAC、DEAE-右旋糖苷和苯扎氯胺分別溶解在蒸餾水中。然后將所述溶液混合并應(yīng)用0.2μm的無菌過濾器過濾。
如果需要，滲量可通過加入NaCl而達到生理值300mOsm/kg。
實施例3考慮到如上面所述的已經(jīng)測定了的等價比例，并繼續(xù)以上面闡述的實施例中相似的方法進行配制，根據(jù)下面的配方配制一種N-乙酰-半胱氨酸和DEAE-右旋糖苷基礎(chǔ)的低滲制劑N-AC3.0g堿性DEAE-右旋糖苷 9.0g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝6.2；滲量＝185mOsm/kg實施例4用相似的配制步驟獲得一種低滲但更濃縮的制劑，按照下面的配方N-AC5.0g堿性DEAE-右旋糖苷 15.0g無菌蒸餾水 q.s.至100mlpH＝6.5；滲量＝307mOsm/kg下面報導(dǎo)了其他顯示任選的存在其他粘滯度增高劑的制劑實施例，它的濃度通常在0.5-3％按重量計算之間。在所有的情況中，配制的步驟和前面實施例中闡述的相似，并獲得了低滲的產(chǎn)物。
實施例5N-AC4.0g堿性DEAE-右旋糖苷 12.0聚乙烯醇* 0.5無菌蒸餾水 q.s.至100ml*Polyviol W 48/20，Wacker Chemie實施例6N-AC4.0
堿性DEAE-右旋糖苷12.0羥丙基纖維素*0.4無菌蒸餾水 q.s.至100ml*Klucel MF，Aqualon Co.
實施例7N-AC 4.0g堿性DEAE-右旋糖苷12.0透明質(zhì)酸*0.2無菌蒸餾水 q.s.至100ml*Hyalastine，F(xiàn)idia S.p.A實施例8N-AC 4.0g堿性DEAE-右旋糖苷12.0聚乙烯吡咯烷酮* 0.4無菌蒸餾水 q.s.至100ml*Kollidon PF 12，BASF為了評價根據(jù)本發(fā)明方法配制所得組合物的效果，進行了許多實驗，下面報導(dǎo)了一些結(jié)果。
生物適合性的研究生物適合性的研究通過緊密間歇施用如實施例2所描述的50μl制劑在大鼠眼睛活體中進行。沒發(fā)現(xiàn)主要刺激征象。
穩(wěn)定性研究所述制劑經(jīng)過高壓滅菌(120℃，20分鐘)如前文所述，N-乙酰-半胱氨酸降解大約30％(苯扎氯胺存在和不存在)。然而，可能利用通過0.2μm膜過濾進行滅菌，如前面的實施例所實施的那樣。
在DEAE-右旋糖苷存在時用來測定N-AC的分析方法為了評價賦形劑中N-AC的穩(wěn)定性，不可能應(yīng)用HPLC方法或紫外線分光光度測定。因此運用以下的比色方法(Raggi M.A.，Cavrini V.和Di Pietra A.M.，比色法測定藥物劑量形式的乙酰半胱氨酸、青霉胺和巰基丙酰氨基乙酸(Colorimetricdetermination of acetylcysteine，penicillamine and mercaptopropionyl-glycine in pharmaceutical dosage forms)，J.Pham.Sci.，71，1384-1386(1982))。
應(yīng)用的試劑·1，10-二氮菲0.25％(100ml)·鐵溶液4×10-3M(1000ml)·pH4醋酸緩沖液(100ml)·醋酸鈉0.2M(100ml)試劑配方鄰-二氮菲0.25％將0.25g的所述化合物溶解在蒸餾水中，在稍微加熱后，將它用蒸餾水稀釋至需要的體積。所述溶液在黑色玻璃容器中保存3天遠離光線。
鐵溶液將1.92g的FeNH4SO4×12H2O溶解在蒸餾水中，然后用10ml濃縮HCl處理。用蒸餾水稀釋到所需體積。所述溶液在黑色玻璃容器中保存3天遠離光線。
pH 4緩沖液這是通過將75ml 0.1M CH3COOH和25ml 0.1M CH3COONa混合而獲得。如果需要，pH值可以用0.2M CH3COONa溶液調(diào)整。
標準配制將0.163g乙酰半胱氨酸溶解在500ml蒸餾水中。通過以1∶5的比例稀釋，就獲得了所需的濃度。
將體積增加的這種溶液(1-5ml)放置在25ml的燒瓶中，然后連續(xù)加入下面的試劑-6ml鐵溶液-2.5ml鄰-二氮菲0.25％-3.5ml 0.2M NaOAc-4.5ml pH4緩沖液20分鐘后，通過應(yīng)用和樣品同時配制的對照參考測定在515nm處的吸收值。還應(yīng)用上面所述的步驟進行DEAE-右旋糖苷存在時N-AC校準。對于這些樣品，通過應(yīng)用包含聚合物的對照參考以及不含DEAE-右旋糖苷的對照參考進行所述測定。所得光譜是相等的。
通過比較由N-AC獲得的光譜和由還包含多聚物樣品獲得的光譜，就可以證明DEAE-右旋糖苷不干擾吸收，但它會改變其強度。
大鼠眼干綜合癥實驗?zāi)Ｐ椭械幕钚匝芯克鰧嶒炘谝唤M10只新西蘭白化雄大鼠上進行，體重為2-2.5kg并在標準環(huán)境中飼養(yǎng)。實施例2所述的制劑(稱為DEAE/N-AC)不僅和只接受生理溶液的對照組比較，而且和商業(yè)上應(yīng)用的(高滲)包含4％N-AC的制劑比較。
對動物的雙眼一天施用三次硫酸阿托品(AS)溶液滴眼，連續(xù)5天來造成實驗性的眼干病(Burgalassi S.，Panichi L.，Chetoni P.，Saettone M.F.和BoldriniE.，白化大鼠中單眼干模型的發(fā)展以及一些淚液取代物的評價(Development of asimple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tearsubstitutes)，Ophthalmic Res.31，229-235(1999))。在AS給藥5分鐘后，僅僅在右眼滴50μl(相當于一滴)所研究的制劑之一或生理溶液(對照組)。
在合適的時間間隔(在開始處理后的第2，3，4和5天)，動物接受Schirmer實驗并在用熒光素鈉染色后，通過帶有鈷藍過濾器的裂隙燈觀察眼睛表面。
所述Schirmer實驗設(shè)想采用一條標準大小的吸墨水紙和外部第三的較低結(jié)膜穹隆中的材料。所述紙條放置在適當位置持續(xù)固定的時間(3分鐘)。淚液產(chǎn)生的時間以及被淚液沾濕的紙部分的毫米長度提供了淚液分泌的分數(shù)。圖2報告了在各種處理條件下所得的所述實驗結(jié)果。所述圖的縱軸給出了在3分鐘被沾濕紙條的毫米數(shù)。完整線(基線)對應(yīng)于在未處理的動物(21，2毫米)中觀察到的生理平均值。
值得注意的是，在用生理溶液處理過的眼睛中(對照組)，淚液的分泌明顯下降，經(jīng)過持續(xù)5天的觀察。所述高滲的商業(yè)應(yīng)用制劑的Schirmer實驗分數(shù)和對照組的沒有很大的區(qū)別，除了觀察的第二天。根據(jù)本發(fā)明(DEAE/N-AC)配制的制劑代替的產(chǎn)生比基線的那些更好的實驗分數(shù)，如第3天。因此所述制劑看上去能夠有效的對比由阿托品導(dǎo)致的淚液產(chǎn)生減少的作用。
圖3顯示了通過裂隙燈觀察用熒光素鈉染色后的動物角膜后得到的結(jié)果。這項染色使得由AS處理所產(chǎn)生的改變(角膜損害)更加明顯，這種損害通常在眼干綜合癥的眼睛中。對于每一種處理，所述的值表達為在從處理的第3天至第5天檢查的眼睛總數(shù)量中注意到的密集顏色點(和角膜上皮的改變相對應(yīng))的眼睛比例。值得注意的是，和商業(yè)上應(yīng)用的制劑不一樣，根據(jù)本發(fā)明配制的制劑減少了觀察到的改變總數(shù)量實際到0。
本發(fā)明已經(jīng)用對于它的一些特殊實施方案的特定參考書目來揭示，但應(yīng)該明白的是文中的技術(shù)員也可以進行修改和變化，但不離開如附加權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.一種以乙酰半胱氨酸為基礎(chǔ)的以眼藥水為給藥方式的眼科組合物，其特征在于，所述組合物包含被堿性DEAE-右旋糖苷中和的N-乙酰-半胱氨酸并具有生理上可接受的滲量。
2.如權(quán)利要求1所述的眼科組合物，其中，所述滲量低于320mOsm/kg。
3.如權(quán)利要求2所述的眼科組合物，具有低于300mOsm/kg的滲量且pH值在6.0-7.5之間。
4.如權(quán)利要求所述的眼科組合物，其中，所述pH值在6.2-7.0之間。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的眼科組合物，在水中包含3％-5％按重量計算的N-乙酰-半胱氨酸和9％-15％按重量計算的DEAE-右旋糖苷。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的眼科組合物，它為溶液形式或以藥學(xué)上可接受的眼載體中的含水懸液形式。
7.如權(quán)利要求6所述的眼科組合物，還包含其它增加粘度的聚合物。
8.如權(quán)利要求7所述的眼科組合物，其中所述增加粘度的聚合物選自聚乙烯醇、羥丙基纖維素、透明質(zhì)酸、聚乙烯吡咯烷酮、硫酸軟骨素。
9.如權(quán)利要求6或7所述的眼科組合物，還包含防腐劑、抗微生物劑和/或螯合劑。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的眼科組合物，它包含4％按重量計算的N-乙酰-半胱氨酸，12％按重量計算的DEAE-右旋糖苷，pH值在6.2-7之間且滲量在240-300mOsm/kg之間。
全文摘要
一種含有乙酰－半胱氨酸作為活性成分的眼科藥物組合物，它具有溶解粘液的作用并適合眼藥水給藥，其中N－乙酰－半胱氨酸被堿性DEAE－右旋糖苷中和而達到優(yōu)選在6.0－7.5之間的pH水平，并具有生理上可接受的小于320mOsm/kg的滲量。N－乙酰－半胱氨酸中和劑的存在不負面影響組合物的滲量，這使得所述制劑是等滲或甚至是低滲的，這樣避免了刺激和潛在地破壞上述包含N－乙酰－半胱氨酸眼科產(chǎn)品的作用。
文檔編號A61K9/00GK1535138SQ02814952
公開日2004年10月6日 申請日期2002年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月23日
發(fā)明者E·鮑德里尼, E 鮑德里尼, M·F·西托尼, 西托尼, P·切托尼, 心, S·布加拉西, 永 , B·加納西尼, 晌髂 申請人:法米基股份公司