專利名稱：醫(yī)治皮膚的化妝品組合物及方法
技術領域：
本發(fā)明涉及改善皮膚狀況和外貌的美容方法，本發(fā)明還涉及反式-7-十八烷酸在制備用于改善皮膚狀況和外貌的局部用組合物中的用途以及適宜于此的組合物。
皮膚容易因為皮膚性疾病、環(huán)境不合理使用(風、空調、中央供暖)或正常老化過程(慢性老化)而退化，其中正常老化過程還可能由于皮膚受陽光暴曬而加速(光致老化)。近些年，人們對用于改善皮膚外貌和狀況的化妝品組合物和美容方法的需求有巨大增長。
消費者越來越喜歡“抗老化型”化妝品，這種化妝品可以醫(yī)治或延遲慢性老化和光致老化皮膚的可見征兆，如皺紋、痕紋、下垂、色素沉著過度和老年斑。
除抗衰老外，消費者還常常需要來自化妝品的其它益處?！懊舾行云つw”的概念也增加了消費者對改善敏感、干和/或易剝落皮膚外貌及緩解紅色和/或受刺激皮膚的化妝品的要求。消費者還期望能夠醫(yī)治斑點、丘疹、瑕疵等的化妝品。
很多人對他們皮膚色素沉著的程度都很在意。例如，具有老年斑或雀斑的人希望這些色素沉著的斑點不要太明顯。其它人希望減少由于接觸陽光或增白他們天然皮膚顏色而引起的皮膚發(fā)暗。為滿足這種需要，人們做了很多嘗試去開發(fā)能夠減少黑素細胞中色素產(chǎn)生的產(chǎn)品。然而，所鑒別出的物質往往具有不期望的副作用，例如皮膚刺激性。
所以，這些物質不適宜于美容使用，或者他們僅能在一定濃度下涂敷，而在這種濃度下它們的皮膚增白效果不盡人如意。使用不同增白物質的組合被認為可以降低不利的副作用，但使用這種組合的同時由于競爭性效果而存在皮膚增白效果被降低的危險。因此，需要改進皮膚增白化妝品的有效性，特別是致使它們不刺激皮膚。
反式-7-十八烷酸作為一種物料是已知的，并且可從Sigma商購獲得。
現(xiàn)在，意想不到地發(fā)現(xiàn)了反式-7-十八烷酸的一些另外的未公開的特性，它可用于化妝品組合物中，用于給皮膚局部性涂敷，提供前面所未公開的護膚有益效果。
現(xiàn)在，我們發(fā)現(xiàn)通過給皮膚涂敷含有反式-7-十八烷酸或其衍生物的化妝品組合物，可以獲得對正常皮膚慢性老化或光致老化狀況的有效醫(yī)治和預防，如皺紋、痕紋、下垂、色素沉著過度和老年斑。我們還發(fā)現(xiàn)在化妝品組合物中使用反式-7-十八烷酸，除抗衰老外，還可以有利地提供其它皮膚有益效果，如緩解敏感性和/或受刺激皮膚，提高彈性和減少干性/易剝落性及增白皮膚。
由此，本發(fā)明的第一個方面是提供一種用于給人皮膚涂敷的局部用組合物，該組合物含有有效量的反式-7-十八烷酸。
本發(fā)明的另一個方面是提供一種美容方法，該美容方法用于提供選自以下護膚有益效果中的至少一種醫(yī)治/預防起皺、下垂、老化和/或光損害的皮膚；促進皮膚中的膠原沉積，促進皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強組織修復；增白皮膚；通過形成增強防護層改善皮膚狀況和回彈性；醫(yī)治干且易剝落的皮膚；緩解受刺激、紅色和/或敏感性皮膚；改善皮膚質構、光滑性和/或牢固性和醫(yī)治低增生性疾病，如皮膚薄化，該方法包括給皮膚涂敷含有反式-7-十八烷酸和/或其衍生物的局部用組合物。
本發(fā)明還包括反式-7-十八烷酸和/或其衍生物在制備局部用組合物中的用途，其中所說的局部用組合物用于提供選自以下護膚有益效果中的至少一種醫(yī)治/預防起皺、下垂、老化和/或光損害的皮膚；促進皮膚中的膠原沉積，促進皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強組織修復；增白皮膚；通過形成增強防護層改善皮膚狀況和回彈性；醫(yī)治干且易剝落的皮膚；緩解受刺激、紅色和/或敏感性皮膚；醫(yī)治低增生性疾病，如皮膚薄化以及改善皮膚質構、光滑性和/或牢固性。
由此，本發(fā)明的方法和反式-7-十八烷酸的用途可以提供抗老化的有益效果，從而促進皮膚的光滑和柔順，同時使彈性得到改進并且使皺紋和老化皮膚的外貌得到減少或延遲，并且具有改進的皮膚顏色?？梢赃_到皮膚外貌、質構和狀況的總體改進，特別是在皮膚的光亮性、清晰性和總體的年輕外貌方面。本發(fā)明的方法和用途還對緩解和平緩敏感性和/或受刺激皮膚是有益的。反式-7-十八烷酸對涂敷至人皮膚上用以減少黑色素產(chǎn)生并由此增白其所涂敷的皮膚也可以是有用的。因此，本發(fā)明的方法可以有利地提供多方面的護膚有益效果。
本文中所用的術語“醫(yī)治”，其范圍包括通過防止或減少起皺，并且增加皮膚的柔韌性、牢固性、光滑性、柔順性和彈性和皮膚增白，來減少、延遲和/或防止上述提及的狀況，如起皺、老化、受光損害和/或受刺激皮膚，并且總體上增強皮膚的品質和改進其的外貌和質構。本發(fā)明的反式-7-十八烷酸和/或衍生物的美容方法和用途，對醫(yī)治已經(jīng)起皺、老化、受光損害和受刺激狀況的皮膚或者對醫(yī)治年青人皮膚以預防或減少由于正常老化/光老化過程導致前述退化性改變可以是有效的。
本發(fā)明還包括含有反式-7-十八烷酸部分的游離酸的衍生物。優(yōu)選的衍生物包括取代酸的羧基得到的化合物，如酯類(例如，視黃醇酯，甘油三酸酯，甘油單酸酯，甘油二酸酯，磷酯)，酰胺類(例如神經(jīng)酰胺衍生物)，鹽類(例如，堿金屬和堿土金屬鹽，銨鹽)；和/或在C18碳鏈上取代得到的化合物，如α-羥基和/或β-羥基衍生物。
在甘油三酸酯衍生物的情形中(當其水解時可提供本發(fā)明所需的高度不飽和脂肪酸)，包括在甘油主鏈上的反式-7-十八烷酸取代基的所有位置異構體。甘油三酸酯中必須含有至少一個反式-7-十八烷酸部分。例如，在甘油主鏈上的三個可酯化的位置中，第1和2位可以與反式-7-十八烷酸酯化并且在第3位可以被另一種脂類所酯化，或者，甘油主鏈可以在第1和3位被反式-7-十八烷酸所酯化并且在第2位與另一種脂類酯化。
由此，富含反式-7-十八烷酸的油也可適宜在本發(fā)明中使用。
盡管在本說明書中使用的術語“反式-7-十八烷酸”，但應當理解的是它還包括含有反式-7-十八烷酸部分的衍生物。“反式-7-十八烷酸部分”是指反式-7-十八烷酸衍生物的反式-7-十八烷酸的脂肪?；糠?s)。
可在本發(fā)明中使用的活性、反式-7-十八烷酸是以有效量存在于局部用組合物中的。據(jù)發(fā)現(xiàn)，反式-7-十八烷酸以明顯低的含量時是具有活性的。正常情況下，這種活性成分所存在的總量為組合物重量的1×10-8％至10％。更優(yōu)選0.0000001％至5％，并且首選0.00001％至2％，以便以最低成本獲得最大有益效果。
本發(fā)明所用的組合物中還含有皮膚/美容可接受的賦形劑，以作為活性反式-7-十八烷酸或其衍生物的稀釋劑、分散劑或載體起作用。這些賦形劑可以包括護膚產(chǎn)品中常用的物質，如水、液體或固體潤膚劑，硅油，乳化劑，溶劑，保濕劑，增稠劑，粉末，推進劑等等。
賦形劑通常占組合物重量的5％至99.9％，優(yōu)選25％至80％，并且當不含其它化妝品輔劑時可以占組合物的其余量。
除活性反式-7-十八烷酸外，組合物中還可以含有其它特定的有益皮膚的活性物，如防曬劑、其它皮膚增白劑和皮膚曬黑劑。賦形劑中也可以進一步含有輔劑，如香料，遮光劑，防腐劑，著色劑和緩沖劑。特別優(yōu)選的輔劑包括已知可以改善皮膚狀況的抗氧化劑、護膚有益活性劑和增濕劑。
為制備本發(fā)明方法中所用的局部用組合物，可以使用制備護膚產(chǎn)品的常用方式。通常，按常規(guī)方式將活性組分摻入皮膚可接受的載體中。適宜地，可以將活性組分首先溶解或分散在欲摻入組合物中的水或其它溶劑或液體的一部分中。優(yōu)選的組合物是水包油型或油包水型乳液。
組合物可以是呈常規(guī)的護膚產(chǎn)品的形式，如霜膏、凝膠或洗液等。組合物還可以是呈所謂“用后洗去型”產(chǎn)品的形式，例如洗浴或淋浴用凝膠，其中可以含有用于活性物的傳遞系統(tǒng)，用來促進在清洗過程中與皮膚的附著。首選產(chǎn)品是“駐留型”產(chǎn)品，一種欲涂敷至皮膚上并且在將其涂敷至皮膚上后無需立即仔細清洗的產(chǎn)品。
組合物可以按任何適宜的方式包裝，如按常規(guī)方式包裝在罐、瓶、管、滾球等中。
本發(fā)明的方法可以每天向需要醫(yī)治的皮膚上使用一次或更多次。皮膚外貌的改善通常是在2周至6周后可見到，取決于皮膚狀況、本發(fā)明方法中所用的活性組分的濃度、所用的組合物的量、涂敷的次數(shù)及所需求的有益效果。通常來說，從適宜的容器或涂敷器中向皮膚上涂敷少量的組合物，例如0.1至5ml，并且用手或手指或適宜的裝置，鋪展到皮膚上面和/或揉搓至皮膚之內。隨后可以非必須地進行清洗步驟，這取決于組合物是配制成“駐留型”產(chǎn)品還是“用后需沖洗型”產(chǎn)品。
為使本發(fā)明可以更容易理解，給出以下的實施例，這些實施例僅是舉例說明性的。
實施例以下實施例顯示了反式-7-十八烷酸的抗老化有益效果。
從我們共同申請的未結案歐洲專利申請99908956.8可以知道，可以使用局部視黃酸處理來引起前膠原I和核心蛋白聚糖的體內增量調節(jié)。為此，該申請中標題“在局部視黃酸處理后對前膠原I和核心蛋白聚糖在皮膚中的體內增量調節(jié)用于比較目的的鑒定”(Identificationof procollagen I and decorin upregulation in skin in vivo followingtopical retinoic acid treatment for comparative purposes)下的一段內容引入本文作為參考。
實施例1人真皮成纖維細胞中前膠原-I和核心蛋白聚糖合成的測定過程制備真皮成纖維細胞條件培養(yǎng)基使用補充有10％胎牛血清的Dulbeccos Modified Eagles培養(yǎng)基(DMEM)，將初級人包皮成纖維細胞的第2代(P2)以10000細胞/cm2接種至12-孔平板中，并且于5％二氧化碳和4％氧的環(huán)境下保持24小時。之后，將細胞用不含血清的DMEM沖洗，然后在新鮮的不含血清的DMEM保溫培育另外60小時。然后，再將成纖維細胞單細胞層用不含血清的DMEM沖洗。于最終體積為0.4ml/孔新鮮不含血清的DMEM中，將測試用試劑和賦形劑對照添加至細胞中，一式三份，并且保溫培育另外24小時。將此成纖維細胞條件培養(yǎng)基直接分析，或者在液氮中驟凍并且在-70℃下保藏用作以后分析。然后，將細胞計數(shù)并且將以下的斑點印跡分析中獲得的數(shù)據(jù)標準化成細胞數(shù)。
真皮成纖維細胞條件培養(yǎng)基中的前膠原-I和核心蛋白聚糖蛋白質的斑點印跡試驗在用賦形劑處理的真皮成纖維細胞(作為對照)或測試試劑處理的真皮成纖維細胞所獲得的條件培養(yǎng)基的樣品中，補充20mM二硫蘇糖醇(200mM儲備溶液的1∶10稀釋液)和0.1％十二烷基硫酸鈉(10％儲備溶液的1∶100稀釋液)，充分混合，然后在75℃下保溫培育2分鐘。通過將以10000細胞/cm2接種于175cm2燒瓶中并且保持在如上所述不含血清的DMEM中的成纖維細胞所獲得的純的成纖維細胞條件培養(yǎng)基系列稀釋，產(chǎn)生試驗用標準樣。
隨后，使用96-孔Bio-Dot儀器(來自Bio-Rad)按制造商指南中的所述，將試驗樣品一式三份地涂敷至Immobilon-P轉移膜的預濕片上。每孔使用大約200μl培養(yǎng)基。讓培養(yǎng)基在重力作用下濾過膜(30分鐘)，之后將膜用PBS(200μl)沖洗兩次。讓這些PBS洗液在重力作用下濾過膜(2×15分鐘)。然后，將Bio-Dot儀器與真空歧管連接，并且在抽吸條件下進行第三和最后一次PBS沖洗。將儀器拆卸下來，取出膜并且按需要快速切割，之后放入封閉緩沖劑中4℃下過夜。
將用于核心蛋白聚糖分析而制備的膜用存在于PBS中的3％(w/v)BSA/0.1％(v/v)吐溫20封閉，而將用于前膠原-I分析的膜用存在于PBS中的5％(w/v)干燥非脂乳粉/0.05％吐溫20封閉。第二天，將膜用人前膠原-I(MAB1912；大鼠單克隆；Chemicon Int.Inc.，Temecula，CA)或人核心蛋白聚糖(兔克隆；Biogenesis)的初級抗體的1∶10000稀釋液室溫下探測2小時。隨后，將膜用TBS/0.05％吐溫20沖洗(3×5分鐘)，然后按需要用125I-結合抗-大鼠或抗-兔F(ab′)2片段(Amersham)的1∶1000稀釋液在室溫下保溫培育1小時。
將此Immobilon條再用TBS/吐溫20沖洗(3×5分鐘)，之后室溫下空氣干燥。將干燥的膜包裹在賽璐玢中并且暴置于分子動態(tài)型(Molecular Dynamics)存儲熒光屏下16-18小時。暴置時間結束后，使用ImageQuantTM軟件，將暴露的屏幕通過phosphorimager(MolecularDynamics Phosphorimager SF)掃描。通過計算機輔助圖像分析，使用ImageQuantTM中的定量分析工具，測定斑點強度，標準化成細胞數(shù)，并且相對于賦形劑處理的對照的數(shù)值為100任意單位，確定各種測試用試劑對核心蛋白聚糖和前膠原-I合成的影響。
表1說明反式-7-十八碳烯酸以及使用量對人真皮成纖維細胞中的前膠原-1和核心蛋白聚糖的合成的影響，為了結果標準化，相對賦形劑處理的數(shù)值為100任意單位，確定測試物質的結果。
表1
表1的結果說明，相比于對照，反式-7-十八烷酸對人真皮成纖維細胞中的前膠原-I和核心蛋白聚糖的合成具有明顯的增量調節(jié)作用。
皮膚中的核心蛋白聚糖含量與皮膚狀況和外貌的改進有關系。皮膚中核心蛋白聚糖含量增加對皮膚中的膠原的受控和恰當沉積來說是重要的，而膠原的受控和恰當沉積與很多皮膚益處有關系，如皺紋消除和受光損害皮膚的真皮修復。
實施例2評價活性物對角質形成細胞角質化包膜產(chǎn)生的影響的方法-角質形成細胞分化的標記使用Dubleccos Modified Eagles培養(yǎng)基(DMEM)，0.03mM鈣，將第三代(P3)人包皮角質形成細胞以4000細胞/孔接種至96孔平板中。讓細胞生長3天，然后處理。處理用賦形劑是DMSO。處理4天后，收獲細胞并且用100μl磷酸緩沖的鹽水(PBS)沖洗三次。然后將細胞在1％Triton X100、50mM Tris pH 8.0、0.02mM Leupeptin、0.02mM胃蛋白酶抑制劑中萃取。然后，試驗60μl/孔萃取物的DNA濃度(ng/孔)，Pico Green DNA試驗，分子探針。
然后將細胞在200μl PBS中洗滌，并且向每個孔添加100μl的2％SDS、20mM DTT。然后將平板用Titertek平板密封器(ICN)密封并且于密閉性潮濕環(huán)境(即，用濕紙襯里的密封帶夾層箱)中60℃下保溫培育過夜。然后，使用斑點印跡儀器(Bio-rad)，在重力作用下讓萃取物濾過PVDF轉移膜(Bio-rad)。然后將膜在蒸餾水中洗滌，之后銀染色(Bio-rad銀染色試劑盒)。然后使用Phoretix數(shù)組軟件(PhoretixInternational)分析經(jīng)染色的斑點印跡膜。
結果示于表2、3和4。
表2角質化包膜試驗-在1.2mM鈣中生長
*p＜0.05表3角質化包膜試驗-在1.2mM鈣中生長
*P＜0.05這些實驗證明在高鈣中，反式-7-十八烷酸是增生增強劑。
表4角質化包膜試驗
**P＝0.002這些結果說明，在低鈣中，低濃度的反式-7-十八烷酸引發(fā)角質化包膜的產(chǎn)生，其說明角質形成細胞分化得到增強。
實施例3器官培養(yǎng)-TGase方法材料Dettol(Reckitt & Coleman，Hull，UK)，含glutamax的DMEM(Dulbecco′Modified Eagle′s Medium)，ABAM(抗生素/抗真菌劑×100)溶液(50,000單位青霉素G，50,00μg鏈霉素硫酸酯和125μg兩性霉素B/5mL(Gibco BRL，Paisley，UK))，氫化可的松21-半琥珀酸酯(鈉鹽)(Sigma Co.，Poole，UK)，35×10mm陪替氏培育皿(Nunclon，F(xiàn)isherScientific提供，Loughborough，UK)，微型Marbrook塑料三角架(C.A.Hendley Ltd提供，UK)，Nybolt尼龍篩網(wǎng)(John Staniar Ltd，UK)，無菌一次性4mm活組織檢查穿孔器(Steifel Labs Ltd，Bucks，UK)。
生物素化的單丹磺酰尸胺，Alexa Fluor 488 streptavidin，延長抗褪色溶液(Prolong antifade solution)(分子探針，Cambridge Bioscience提供，UK)，清蛋白，牛(BSA)，氯化鈣CaCl2，三羥甲基氨基甲烷(TRIZMA堿)，乙二胺四乙酸(EDTA)，碘化丙錠(Sigma Co.，Poole，UK)，鹽酸(HCl)，Merck，Poole，Dorset，UK))。
器官培養(yǎng)方法仔細去除皮下脂肪和肌肉來制備豬后背皮膚，得到3-4mm厚的皮膚樣品。刮去豬毛并且將豬皮在水中洗滌，除去任何殘余的血液或污垢。將此皮膚樣品切成7cm×7cm方形并且在5％Dettol(無菌)中室溫(RT)下保溫培育1hr。然后在含ABAM(培養(yǎng)基的5mL/500mL)的DMEM中保溫培育1hr。
將氫化可的松21-半琥珀酸酯(100lig/mL，無菌過濾)添加至DMEM+ABAM中。在含有3ml培養(yǎng)基(DMEM/ABAM/氫化可的松)的陪替氏培育皿上建立三角架和篩網(wǎng)，產(chǎn)生反的彎液面。
從皮膚中取出穿孔活組織并且放在篩網(wǎng)上(4塊每皿)，然后在37℃、5％CO2條件下保溫培育24hr，之后處理。培養(yǎng)基每日更換。
原位TGase方法制備10mM生物素化的單丹磺酰尸胺存在于0.013M HCl中的儲備溶液并且儲存于-20℃下。從儲備溶液中，制備底物緩沖液0.1mM生物素化的單丹磺酰尸胺，5mM CaCl2于100mM TrisHCl中。用200mMEDTA代替5mM CaCl2作為陽性對照。
將豬皮活組織在液氮中驟凍并且在-20℃下儲藏。切成切片(5-8微米厚，Brights低溫恒溫器)并且在室溫(RT)下空氣干燥10分鐘。將切片在存在于0.1M Tris/HCl的1％BSA(pH8.4)中RT下保溫培育30分鐘，然后在底物緩沖液中RT下保溫培育2小時。將玻片在存在于PBS中的25mM EDTA中洗滌5分鐘，以便停止反應，接著在PBS中洗滌兩次。然后，將剝玻片在Alexa fluor 488鏈霉抗生物素(1∶250)中RT下保溫培育30分鐘，然后如前在PBS中洗滌。將玻片用10g/ml碘化丙錠對比染色10秒，然后在水中洗滌并且在延長抗褪色溶液中固定。使用顯微鏡(Leica，Leitz DMRB，Leitz ploemopak濾波塊L3，MiltonKeynes，Bucks.UK)觀察切片并且使用圖像捕抓(Image Grabber)PC軟件(Neotech Ltd.E astleigh，Hampshire，UK)抓取圖像。
將豬器官培育物如上所述用各種濃度的反式-7-十八烷酸萃取物處理48小時。按所述試驗豬器官活組織切片中的TGase活性，其TGase試驗的結果示于下表5中。
表5轉谷氨酰胺酶活性(熒光背景)
這個數(shù)據(jù)顯示在1μM濃度下，反式-7-十八烷酸可引發(fā)完整無損豬皮表皮中的轉谷酰胺交聯(lián)活性，這說明阻擋層的回彈性有所增強。
實施例4以下配方描述了適宜用于本發(fā)明方法和用途的水包油型霜膏。所述的百分數(shù)以組合物的重量計。
*Brij 56是鯨蠟醇POE(10)**Alfol 16RD是鯨蠟醇實施例5以下配方描述了本發(fā)明的乳液霜膏。
上述實施例4和5的局部用組合物都提供了適宜的美容醫(yī)治效果，當將其涂敷至由于老化或光老化而受損的皮膚上時可以改進起皺、老化、受光損害和/或受刺激皮膚的外貌，或者當涂敷至年輕人的皮膚上時可以有助于防止或延遲這種退化性改變。組合物可以按常規(guī)方式來加工。
權利要求
1.一種局部用組合物，含有(a)有效量的反式-7-十八烷酸或其衍生物；和(b)皮膚可接受的賦形劑。
2.提供選自以下護膚有益效果中至少一種的美容方法醫(yī)治/預防起皺、下垂、老化和/或光損害的皮膚；促進皮膚中的膠原沉積，促進皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強組織修復；增白皮膚；通過形成增強防護層改善皮膚狀況和回彈性；醫(yī)治干且易剝落的皮膚；緩解受刺激、紅色和/或敏感性皮膚；醫(yī)治低增生性疾病，如皮膚薄化；和改善皮膚質構、光滑性和/或牢固性；所說的方法包括給皮膚涂敷含有反式-7-十八烷酸和/或其衍生物的局部用組合物。
3.反式-7-十八烷酸和/或其衍生物在制備局部用組合物中的用途，其中所說的局部用組合物用于提供選自以下護膚有益效果中的至少一種醫(yī)治/預防起皺、下垂、老化和/或光損害的皮膚；促進皮膚中的膠原沉積，促進皮膚中的核心蛋白聚糖產(chǎn)生，增強組織修復；增白皮膚；通過形成增強防護層改善皮膚狀況和回彈性；醫(yī)治干且易剝落的皮膚；緩解受刺激、紅色和/或敏感性皮膚；醫(yī)治低增生性疾病，如皮膚薄化和改善皮膚質構，光滑性和/或牢固性。
全文摘要
本發(fā)明提供一種通過局部涂敷組合物來醫(yī)治老化、敏感、干、易剝落、起皺和/或光損害皮膚的美容方法，其中所說的組合物含有反式－7－十八烷酸和/或其衍生物。本發(fā)明還涉及適宜于這種美容治療的組合物。
文檔編號A61K8/30GK1561196SQ02819325
公開日2005年1月5日 申請日期2002年8月8日 優(yōu)先權日2001年8月10日
發(fā)明者S·L·布拉奇福德, R·S·金格, A·E·馬耶斯, J·S·羅格斯, P·R·亞特斯 申請人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司