專利名稱：龍膽地上部分提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及龍膽地上部分提取物的制備方法及其在制藥領(lǐng)域的新用途，屬于藥物資源開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
龍膽為常用中藥材，來源于多種龍膽科藥用植物的干燥根，如龍膽Gentiana scabra Bge.、條葉龍膽 Gentiana manshurica Kitag.、三花龍膽 Gentiana trif Iora Pall.、滇龍膽Gentiana rigescens Franch.等，具有清熱燥濕，瀉肝膽火的功效。近年來， 由于醫(yī)藥市場(chǎng)對(duì)龍膽藥材的需求量不斷增加，天然的龍膽藥材資源已難以保障藥材市場(chǎng)供給，龍膽已經(jīng)開始進(jìn)行大規(guī)模人工種植。人工種植龍膽的生長(zhǎng)周期為二年，采收時(shí)每畝可收獲約100公斤干燥根作為龍膽藥材銷售；在加工龍膽藥材的過程中，龍膽的地上部分還有約150公斤的干燥枝葉沒有利用，被作為生產(chǎn)廢棄物處理。這部分廢棄物如能開發(fā)新的用途，將使龍膽資源得到更為充分的利用，增加種植加工產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種龍膽地上部分提取物的制備方法，以及由該制備方法獲得的龍膽地上部分提取物在制藥中的新用途，使龍膽地上部分的豐富資源得以綜合利用，減少自然資源浪費(fèi)，增加社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。1.本發(fā)明所述的龍膽地上部分提取物按以下步驟制備
1)龍膽的地上部分收割后曬干，切段，加15倍量的水煎煮2小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮為相對(duì)密度在1. 20 1· 30之間的浸膏；
2)將上述浸膏用2倍量的純水溶解，過濾，再將濾液加到裝有體積數(shù)量為浸膏重量 1(Γ12倍的大孔吸附樹脂的色譜柱上，緩慢流過色譜柱，使溶液中的有效成分被吸附于大孔吸附樹脂柱上；
3)已經(jīng)吸附有化學(xué)成分的大孔吸附樹脂色譜柱，先用2倍于色譜柱體積的純水洗脫， 水洗脫溶液棄去；再用2倍于色譜柱體積的45%乙醇洗脫，收集45%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，濃縮為浸膏，干燥，即為龍膽地上部分提取物。上述方法制備的龍膽地上部分提取物，參照《中國藥典》記載的高效液相色譜分析方法測(cè)定龍膽苦苷的含量(《中國藥典》2010年版，一部，第89頁)，含有龍膽苦苷的量在 15% 85%之間。2.龍膽地上部分提取物在制藥中的新用途
龍膽地上部分提取物應(yīng)用于制備治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥的藥物。龍膽地上部分提取物可以單獨(dú)使用，也可以和其它藥物配伍組成復(fù)方使用?？稍邶埬懙厣喜糠痔崛∥锘蚝旋埬懙厣喜糠痔崛∥锏乃幬飶?fù)方中加入藥劑輔料，制成醫(yī)療上可以接受的片劑、膠囊劑、 口服液、顆粒劑等口服劑型。
龍膽地上部分提取物單獨(dú)應(yīng)用于制藥時(shí)，在加入藥劑復(fù)輔料制成的藥物中的重量比在25飛0%之間，其余為藥劑輔料。龍膽地上部分提取物與黃芪、當(dāng)歸和丹參組成復(fù)方組合物應(yīng)用于制藥，在加入藥劑輔料制成的藥物中，含有龍膽地上部分提取物的量為50%，黃芪、當(dāng)歸、丹參的量各占 8. 3%，其余的為藥劑輔料。龍膽地上部分提取物與黃芪、當(dāng)歸、丹參藥物組合的重量比為6
1 1 :1ο龍膽地上部分提取物加入藥劑輔料，可制成醫(yī)療上接受的片劑、膠囊劑、口服液、 顆粒劑。含有龍膽地上部分提取物的藥物復(fù)方組合物中加入藥劑輔料，可制成醫(yī)療上接受的片劑、膠囊劑。龍膽地上部分提取物在制藥中的新用途，經(jīng)以下藥理試驗(yàn)得以確定 1)毒性試驗(yàn)
龍膽地上部分提取物進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)，在最大濃度、最大灌胃體積下灌胃給藥， 動(dòng)物均無死亡，其經(jīng)口服的最大給藥量達(dá)到120g生藥/kg體重。給藥組與對(duì)照組小鼠比較一般狀況無明顯差異，飲食及大小便正常，且外觀、皮毛、行為、呼吸均正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物，未見其它異常反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)束后拉頸處死小鼠，解剖小鼠，肉眼觀察肝、腎、脾、肺、心等主要臟器未見異常。若按照臨床成人用龍膽地上部分30g計(jì)算，其最大給藥量相當(dāng)于臨床成人用量的MO 倍，證明本提取物使用安全。2)抗炎作用試驗(yàn)
用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究試驗(yàn)龍膽地上部分提取物的抗炎作用，試驗(yàn)結(jié)果表明該提取物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的抑制率在30%-45%之間，能顯著降低角叉菜膠所致的大鼠足趾腫脹，在二種動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕系淖饔镁c阿司匹林相當(dāng)，具有明顯的抗炎作用。3)鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)
用腹腔注射醋酸所致小鼠扭體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究試驗(yàn)龍膽地上部分提取物的鎮(zhèn)痛作用，試驗(yàn)結(jié)果表明該提取物能明顯減少小鼠腹腔注射0. 6%的冰醋酸生理鹽水溶液引起的扭體反應(yīng)次數(shù)，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。4)抗肝損傷作用試驗(yàn)
用四氯化碳所致小鼠肝損傷的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，研究試驗(yàn)龍膽地上部分提取物對(duì)肝臟損傷的保護(hù)作用，試驗(yàn)結(jié)果表明該提取物對(duì)四氯化碳所致的小鼠肝損傷有明顯的保護(hù)作用。5)利膽排石作用試驗(yàn)
用家兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究觀察龍膽地上部分提取物對(duì)膽囊活動(dòng)及膽汁分泌的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明該提取物對(duì)膽括約肌有明顯舒張作用，能增加膽囊運(yùn)動(dòng)波數(shù)，增加膽汁分泌，具有利膽排石作用。6)含龍膽地上部分提取物的中藥復(fù)方制劑的藥理作用試驗(yàn)
含有龍膽地上部分提取物和黃芪、當(dāng)歸和丹參提取物的中藥復(fù)方制劑，參照上述1Γ5) 的方法研究試驗(yàn)，結(jié)果表明該復(fù)方制劑使用安全無毒，也具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗肝損傷和利膽排石作用。龍膽地上部分提取物在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用，經(jīng)以下制劑試驗(yàn)得以確定1)含龍膽地上部分提取物的片劑的制備
取龍膽地上部分提取物500克，粉碎，過60目篩制成細(xì)粉，加入淀粉280克和微晶纖維素50克，混合均勻，噴以85%乙醇適量，制成軟材，通過20目篩網(wǎng)制成顆粒，顆粒烘干，通過 40目篩網(wǎng)整粒；取干燥的顆粒，加入硬脂酸鎂10克，混合均勻，壓片，制成含有龍膽地上部分提取物的片劑。片劑中含有龍膽地上部分提取物的量為60%，其余的為藥劑輔料。2)含龍膽地上部分提取物的膠囊劑的制備
用與上述1)相同的方法，制得干燥的顆粒；取干燥的顆粒，加微粉硅膠3克，混合均勻， 裝入藥用硬膠囊殼，即得含有龍膽地上部分提取物的膠囊劑。膠囊劑中含有龍膽地上部分提取物的量為60%，其余的為藥劑輔料。3)含龍膽地上部分提取物的顆粒劑的制備
取龍膽地上部分提取物500克，粉碎，過60目篩制成細(xì)粉，加入糊精400克，混合均勻，噴以80%乙醇適量，制成軟材，通過16目篩網(wǎng)制成顆粒，顆粒烘干，通過14目篩網(wǎng)整粒， 分裝，即得含有龍膽地上部分提取物的顆粒劑。顆粒劑中含有龍膽地上部分提取物的量為 56%，其余的為藥劑輔料。4)含龍膽地上部分提取物的口服液制備
取龍膽地上部分提取物500克，加1500毫升純水，在溫度為65°C的水浴上攪拌溶化，過濾，取濾液，加入50克土溫-80及適量的防腐劑，混合均勻，分裝，即得含有龍膽地上部分提取物的口服液劑?？诜褐苿┲泻旋埬懙厣喜糠痔崛∥锏牧繛?5%，其余的為藥劑輔料。5)含龍膽地上部分提取物的中藥復(fù)方制劑的制備
以龍膽地上部分提取物與黃芪、當(dāng)歸和丹參組成的中藥復(fù)方組合，參照上述制劑試驗(yàn) 1廣2)的方法研究試驗(yàn)，結(jié)果表明，該復(fù)方制劑也可以用類似的方法制成醫(yī)療上可以接受的片劑和膠囊劑。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
1.龍膽的地上部分是目前尚未得到應(yīng)用的生物資源，本發(fā)明提供了龍膽地上部分資源在制藥上的新用途，有利于其資源綜合利用。2.本發(fā)明提供了一種龍膽地上部分提取物的制備方法，該方法工藝簡(jiǎn)明，生產(chǎn)周期短，成本低，適用于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)。3.本發(fā)明提供的龍膽地上部分提取物安全無毒，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)肝臟和利膽排石等作用，可作為藥物單獨(dú)使用，也可以與其它藥物組成復(fù)方使用。4.本發(fā)明提供的龍膽地上部分提取物及其藥物復(fù)方，均能加入適宜的藥劑輔助材料制成醫(yī)療上可以接受的片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑等，用于治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥等肝膽系統(tǒng)疾病。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
曬干的龍膽地上部分100公斤，切成長(zhǎng)約5厘米的段，置2000升容積的多功能提取罐中，加15倍量的水，通蒸汽加熱煎煮2小時(shí)，關(guān)閉蒸汽，用40目篩網(wǎng)過濾；濾液置多功能提取罐中減壓濃縮為相對(duì)密度1. 30的浸膏8公斤。將浸膏用16升純水?dāng)嚾?，過濾，濾液加到裝有96升DlOlA大孔吸附樹脂的色譜柱上，按16升/小時(shí)的速度流過使化學(xué)成分吸附于色譜柱上。已吸附化學(xué)成分的色譜柱先用 192升純水洗脫，水洗脫液棄去；再用192升45%乙醇洗脫，收集45%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，濃縮為浸膏，真空干燥得提取物2. 6公斤。參照《中國藥典》記載的高效液相色譜分析方法測(cè)定龍膽苦苷的含量(《中國藥典》 2010年版，一部，第89頁)，該龍膽地上部分提取物含龍膽苦苷85%。取該龍膽地上部分提取物進(jìn)行毒性和藥理試驗(yàn)，毒性試驗(yàn)結(jié)果表明其無毒，使用安全，藥理試驗(yàn)結(jié)果表明其具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)肝臟、利膽排石等作用，可用于制備治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥的藥物。具體藥物的制備
1)取上述龍膽地上部分提取物1000克，粉碎，過60目篩制成細(xì)粉；另取藥用淀粉560 克、微晶纖維素100克，與龍膽地上部分提取物細(xì)粉在攪拌機(jī)中混合均勻，噴以85%乙醇600 毫升制成軟材；軟材取出，在搖擺顆粒機(jī)上通過20目篩網(wǎng)制成濕顆粒；濕顆粒攤在不銹鋼盤中，置干燥箱中于80°C熱風(fēng)干燥至含水量小于5%，再通過40目篩網(wǎng)整粒，制得干燥的顆粒1600克，備用。取上述制得干燥顆粒800克，加入硬脂酸鎂6克，混合均勻，于壓片機(jī)上壓制成片， 即制得含有龍膽地上部分提取物的片劑。在制成的片劑中含有龍膽地上部分提取物的量為 60%，其余的為藥劑輔料。另取上述制得的干燥顆粒800克，加入微粉硅膠4. 8克，混合均勻，于膠囊填充機(jī)上裝入藥用硬膠囊空殼中，即制得含有龍膽地上部分提取物的膠囊劑。在制成的膠囊劑中含有龍膽地上部分提取物的量為60%，其余的為藥劑輔料。2)取上述龍膽地上部分提取物500克，粉碎，過60目網(wǎng)篩制成細(xì)粉，加入藥用糊精 400克，在攪拌機(jī)中混合均勻，噴以80%乙醇200毫升制成軟材；軟材取出，在搖擺顆粒機(jī)上通過16目篩網(wǎng)制成濕顆粒；濕顆粒攤在不銹鋼盤中，置干燥箱中于80°C熱風(fēng)干燥至含水量小于5%，再通過14目篩網(wǎng)整粒，制得干燥的顆粒840克，干燥的顆粒分裝，即制得含有龍膽地上部分提取物的顆粒劑。在制成的顆粒劑中含有龍膽地上部分提取物的量為56%，其余的為藥劑輔料。3)另取上述龍膽地上部分提取物500克，加1500毫升純水，在溫度為65°C的水浴上慢慢攪拌30分鐘使溶化，溶液用雙層濾紙過濾；取濾液，加入0. 75克苯甲酸，攪拌使苯甲酸溶解，再加入50克土溫-80，混合均勻，分裝，即得含有龍膽地上部分提取物的口服液劑。 在制成的口服液中含有龍膽地上部分提取物的量為25%，其余的為藥劑輔料。按照上述方法和步驟制備的龍膽地上部分提取物，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)肝臟和利膽排石等作用。以龍膽地上部分提取物制成的片劑、膠囊劑、顆粒劑和口服液，可用于治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥等肝膽系統(tǒng)疾病。實(shí)施例2
不同產(chǎn)地的龍膽地上部分曬干，取100公斤，切成長(zhǎng)約5厘米的段，置2000升容積的多功能提取罐中，加15倍量的水，通蒸汽加熱煎煮2小時(shí)，關(guān)閉蒸汽，用40目篩網(wǎng)過濾；濾液置多功能提取罐中減壓濃縮為相對(duì)密度1. 20的浸膏12公斤。將浸膏用M升純水?dāng)嚾?，過濾，濾液加到裝有120升大孔吸附樹脂的色譜柱上，按 24升/小時(shí)的速度流過使化學(xué)成分吸附于色譜柱上。已吸附化學(xué)成分的色譜柱先用240升純水洗脫，水洗脫液棄去；再用240升45%乙醇洗脫，收集45%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑， 濃縮為浸膏，真空干燥得提取物5. 9公斤。參照《中國藥典》記載的高效液相色譜分析方法測(cè)定龍膽苦苷的含量(《中國藥典》 2010年版，一部，第89頁)，該龍膽地上部分提取物含龍膽苦苷31%。該龍膽地上部分提取物，按照“實(shí)施例1”中記載的方法，制成相應(yīng)的片劑、膠囊劑、顆粒劑和口服液，可用于治療肝炎、療膽囊炎、膽結(jié)石癥等肝膽系統(tǒng)疾病。實(shí)施例3
曬干的龍膽地上部分100公斤，按照“實(shí)施例1”記載的技術(shù)方法制備，得到龍膽地上部分提取物12公斤。參照《中國藥典》記載的高效液相色譜分析方法測(cè)定龍膽苦苷的含量 (《中國藥典》2010年版，一部，第89頁)，含龍膽苦苷15%。具體藥物的制備
1)取上述，粉碎，過60目篩制成細(xì)粉，備用。另取中藥材黃芪、當(dāng)歸、丹參的飲片各2公斤，混合，粉碎，過60目篩制成細(xì)粉，備用。將龍膽地上部分提取物細(xì)粉12公斤，黃芪、當(dāng)歸和丹參的細(xì)粉6公斤，以及藥用淀粉6公斤在攪拌機(jī)上混合均勻，噴以85%乙醇12升制成軟材，軟材在搖擺顆粒機(jī)上通過20 目篩網(wǎng)制成濕顆粒，濕顆粒于80°C干燥至含水量小于5%，再通過40目篩網(wǎng)整粒，制得干燥的顆粒20公斤。取該干燥的顆粒10公斤，加入硬脂酸鎂500克，混合均勻，壓制成片，即制得含有龍膽地上部分提取物和黃芪、當(dāng)歸和丹參提取物的中藥復(fù)方的片劑。在制成的片劑中含有龍膽地上部分提取物的量為50%，黃芪、當(dāng)歸、丹參的量各占8. 3%，其余的為藥劑輔料。2)另取上述干燥的顆粒10公斤，加微粉硅膠100克，混合均勻，于膠囊填充機(jī)上裝入藥用硬膠囊空殼中，即制得含有龍膽地上部分提取物和黃芪、當(dāng)歸和丹參提取物的中藥復(fù)方的膠囊劑。在制成的膠囊劑中含有龍膽地上部分提取物的量為50%，黃芪、當(dāng)歸、丹參的量各占8. 3%，其余的為藥劑輔料。龍膽地上部分提取物和黃芪、當(dāng)歸和丹參提取物的中藥復(fù)方，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗肝損傷和利膽排石作用，可以制成片劑和膠囊劑，在醫(yī)療上用于治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥等肝膽系統(tǒng)疾病。
權(quán)利要求
1.龍膽地上部分提取物在制備治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥的藥物中的應(yīng)用。
2.按權(quán)利要求1所述的龍膽地上部分提取物在制備治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥的藥物中的應(yīng)用，其特征在于龍膽地上部分提取物在藥物原料中的重量比為25%飛0%，其余為藥劑輔料。
3.按權(quán)利要求1所述的龍膽地上部分提取物在制備治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥的藥物中的應(yīng)用，其特征在于龍膽地上部分提取物與黃芪、當(dāng)歸和丹參組成復(fù)方組合物應(yīng)用于制藥，在加入藥劑復(fù)輔料制成的藥物中，含有龍膽地上部分提取物的量為50%，黃芪、當(dāng)歸、 丹參的量各占8. 3%，其余的為藥劑輔料，龍膽地上部分提取物與黃芪、當(dāng)歸、丹參藥物組合重量比為6 1 1 :1。
4.按權(quán)利要求廣3所述的龍膽地上部分提取物在制藥中的應(yīng)用，其特征在于可在龍膽地上部分提取物或含有龍膽地上部分提取物的藥物復(fù)方組合物中加入藥劑輔料，制成醫(yī)療上可以接受的片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑。
5.權(quán)利要求廣4所述的龍膽地上部分提取物的制備方法，其特征在于所述的龍膽地上部分提取物是按下列步驟制備(1)龍膽地上部分收割后曬干，切段，加15倍量的水煎煮2小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮為相對(duì)密度在1. 2(Tl. 30之間的浸膏；(2)將上述浸膏以2倍量的純水溶解，過濾，濾液加到裝有體積數(shù)量為浸膏重量1(Γ12 倍的大孔吸附樹脂的色譜柱上，緩慢流過色譜柱，使溶液中的有效成分被吸附于大孔吸附樹脂柱上；(3)已吸附了化學(xué)成分的大孔吸附樹脂柱，先用2倍于柱體積的純水洗脫，再用2倍于柱體積的45%乙醇洗脫，收集45%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，濃縮，干燥，即為龍膽地上部分提取物。
6.一種按權(quán)利要求5所述的龍膽地上部分提取物的制備方法制備的龍膽地上部分提取物，其中含龍膽苦苷的質(zhì)量百分比為159Γ85%。
全文摘要
本發(fā)明是龍膽地上部分提取物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明制備的龍膽地上部分提取物安全無毒，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)肝臟和利膽排石等作用，可單獨(dú)或與其它藥物組成復(fù)方，加入適宜的藥劑輔助材料制成醫(yī)療上可以接受的片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑等，用于治療肝炎、膽囊炎、膽結(jié)石癥等肝膽系統(tǒng)疾病。
文檔編號(hào)A61K36/515GK102488745SQ20111045050
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者周艷林, 李俊, 潘韜文, 鄧菲, 饒高雄 申請(qǐng)人:昆明振華制藥廠有限公司