專利名稱：一種治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的中藥有效部位山香園總黃酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種中草藥山香園葉有效部位的制備方法，具體的說是一種治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的中藥——山香園總黃酮(TFS)的制備方法與其藥物應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性咽炎是發(fā)病率高、病程長、較難治愈的慢性疾病。中醫(yī)稱慢性咽炎為“虛火喉痹”，分為陰虛型、氣虛型和痰熱型等證型，并時有兼證。本病的病變主要是咽部慢性充血、增生等炎癥病變。據(jù)報道在我國咽炎發(fā)病率約占15％；它不僅妨礙患者的正常工作和生活，給患者帶來很大痛苦，也可能引起其他嚴(yán)重感染，加重病情，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，改進(jìn)生活質(zhì)量方面的治療已日益受到人們的重視，治療方案中的比例也日趨增大。傳統(tǒng)藥物其療效不確切、易產(chǎn)生耐藥性、副作用較多，不能從根本上解決患者的痛苦；化學(xué)藥品因其存在一定的副作用，在市場上占據(jù)份額較?。恢兴幃a(chǎn)品因其副作用低，可減輕患病時癥狀而在市場上占據(jù)很大的份額。研制療效確切的中藥品種并按GMP生產(chǎn)，既有廣闊的國內(nèi)市場，又可作為“綠色中藥”進(jìn)軍東南亞、北美與西歐市場，產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益與社會效益將十分顯著。
山香圓(Turpinia arguta Seem)為我國傳統(tǒng)中草藥，系省沽油科山香圓屬植物，其葉具有較好的抗菌消炎作用，臨床上主要用于治療扁桃體炎、咽喉炎、扁桃體膿腫等。山香園總黃酮(TFS)是從中藥山香圓葉提取的有效部位，其主要有效成分為黃酮類成分。山香園總黃酮是現(xiàn)代化中藥的產(chǎn)物，用其制成的膠囊劑等產(chǎn)品為新型治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎中成藥。山香園總黃酮制劑與六神丸治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的對比驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明雖然有效率兩者間無顯著性差異(P＞0.05)，但顯效率與痊愈率總黃酮制劑組為91％與67％，而六神丸組為75％與53％。體內(nèi)抗菌試驗(yàn)表明粗制劑對小鼠腹腔感染金葡萄菌有明顯保護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的中草藥有效部位——山香園總黃酮(TFS)的制備方法與其藥物應(yīng)用。以山香圓苷A計，分光光度法測總黃酮≥50％，測定波長266±2nm。由途徑一制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸、注射劑；由途徑二制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下山香園總黃酮的制備方法將山香園葉經(jīng)過水提醇沉、濾過、濃縮的提取工段→上柱液的處理后用樹脂吸附的富集工段→硅膠吸附的精制工段。還提供了精制工段可選擇的兩條所得山香園總黃酮制成不同劑型藥物的途徑。
一種治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的中藥有效部位山香園總黃酮的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)提取工段乙醇提取山香園葉中草藥得到醇提取液，回收乙醇并濃縮得清膏；(2)樹脂富集工段③上柱液的處理清膏用水稀釋，再加乙醇溶解，過濾得到醇提液，沉淀保存?zhèn)溆茫继嵋夯厥找掖己?，再用水稀釋得上柱液；④樹脂吸附與解吸將上柱液過處理好的D101型或D201型大孔吸附樹脂柱，以水或稀乙醇洗脫樹脂柱上吸附的雜質(zhì)；再用50～95％乙醇洗脫樹脂柱上吸附的有效成份，收集醇洗脫液，回收乙醇并濃縮得到濃縮液；(3)精制工段將樹脂富集工段得到的濃縮液，加入粗硅膠攪勻，再烘干或晾干，然后用乙醇提取硅膠吸附的有效成份，醇提液回收乙醇，真空干燥，研勻，包裝，即得山香園總黃酮的制備方法。
所述的制備方法，其特征在于將樹脂富集工段中上柱液處理后的殘渣，加0.01～0.1mol/L氫氧化鈉溶液，加熱至50～60℃攪拌溶解，離心，過濾，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，靜置，離心，沉淀用乙醇加熱溶解，分次加入粗硅膠拌樣，將樣品均勻吸附于硅膠上，再烘干或晾干；反復(fù)用乙醇回流提取，濾過，得醇提濾液，回收乙醇，真空干燥，研勻，即得總黃酮B，將同批投料藥材的總黃酮A與總黃酮B混勻，即得山香圓總黃酮。
上述方法具體為其特征在于樹脂富集工段中上柱液處理后的殘渣，加0.01～0.1mol/L氫氧化鈉溶液(按投料藥材量的1～2∶1)，加熱至50～60℃攪拌溶解1～2小時，靜置6～12小時，離心，過濾，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，靜置24～48小時，離心，沉淀用適量乙醇(投料藥材量與乙醇比為5～10∶1)，加熱溶解，分次加入粗硅膠(投料藥材量與硅膠比為3～6∶1)拌樣，將樣品均勻吸附于硅膠上；將拌樣硅膠置于100～105℃干燥1～2小時(厚度1～2cm)，取出加3～6倍量乙醇回流提取6～8次，每次1～2小時，濾過，濾液回收乙醇，真空干燥，研勻，即得總黃酮B。
所述的制備方法，其特征在于(1)提取工段取山香圓葉，凈選，切絲(寬1～2cm)加10～12倍量(生藥重量∶溶媒體積，下同)50～95％乙醇浸漬12～24小時，提取1～2小時，過濾，濾液備存；藥渣再加相同濃度乙醇提取2~4次，每次加8～10倍量乙醇，每次1～2小時，濾過，濾液合并，回收乙醇并濃縮，得清膏；(2)樹脂富集工段①上柱液的處理將提取工段得到的清膏，加中性水稀釋至生藥重量∶水體積比為1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，靜置12～24小時，濾過，沉淀留存；濾液回收乙醇后，加中性水稀釋至生藥重量∶水體積至0.5～1∶1，加熱至50℃，即可；②樹脂吸附與解吸將上柱液，加于已處理好的D101型或D201型大孔吸附樹脂柱上，以水或稀乙醇洗脫至洗脫液近無色；再用50～95％乙醇洗脫樹脂柱至洗膠液近無色，收集醇洗脫液，回收乙醇并濃縮得到濃縮液；(3)精制工段將樹脂富集工段得到的醇洗脫的濃縮液，加入40～80目粗硅膠攪勻，濃縮，再加入硅膠、乙醇，攪拌均勻，將樣品均勻吸附于硅膠上為止；將帶樣硅膠置于100～105℃干燥1～3小時，取出，冷至室溫，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小時，濾過，回收乙醇得清膏，真空干燥，研勻，包裝，即得。
山香園總黃酮的制備方法，所述的制備方法，其特征在于(1)提取工段取符合規(guī)定的山香圓葉，切1～2cm絲，取75kg(總黃酮含量以山香圓苷A計1.5％，投入多功能提取罐)，加12倍量80％乙醇，浸漬24小時，加熱提取2小時，濾過，濾液打入濃縮罐；藥渣再加10倍量80％乙醇提取4次、每次1小時，濾過，濾液打入濃縮罐，與第1次提取液合并濃縮，回收乙醇，并濃縮至清膏(34kg，相對密度1.10，60℃)。
(2)樹脂富集工段①上柱液的處理將提取工段得到的清膏，加中性水(pH6.5～7.5，下同)稀釋至生藥∶水比為1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，靜置12～24小時，濾過，沉淀留存(含有黃酮苷元成分)；濾液回收乙醇至無醇味(相對密度1.05～1.10)，加中性水稀釋至生藥∶水至0.5～1∶1，加熱至50℃，即可；②樹脂吸附與解吸將上柱液，加于已處理好的D101型(AB-8型)或D201型大孔吸附樹脂柱上(按生藥∶樹脂體積比＝1～3∶1)，以水或稀乙醇(1～10％)，洗脫至洗脫液近無色(流速視柱徑大小調(diào)節(jié))；再用50～95％乙醇洗脫至洗膠液近無色(不含黃酮類成分，取300ml回收溶劑移至水浴鍋蒸干，殘渣經(jīng)鹽酸-鎂粉反應(yīng)應(yīng)為陰性)，收集醇洗脫液，回收乙醇并濃縮得到濃縮液(相對密度1.15～1.20，50℃)。
(3)精制工段將樹脂富集工段得到的醇洗脫的濃縮液，在相對密度至1.05～1.08時，加入適量的粗硅膠(40～80目，投料藥材量的1～2％)，攪勻，濃縮至上層液相對密度1.10～1.20時，再加入適量硅膠(投料藥材量的5～10％)，再加適量乙醇，攪拌均勻，將樣品均勻吸附于硅膠上為止；將帶樣硅膠置于100～105℃干燥1～3小時(厚度1～3cm)，取出，冷至室溫，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小時，濾過，回收乙醇，真空干燥，研勻，包裝，即得(以山香圓苷A計，分光光度法測總黃酮≥50％，測定波長266±2nm)。
山香園總黃酮用于藥物各種劑型的研制開發(fā)，由途徑一制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸、注射劑；由途徑二制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸。
藥效學(xué)研究根據(jù)中藥藥效研究指導(dǎo)原則，治療本病藥物的藥效學(xué)指標(biāo)之一應(yīng)以抑制細(xì)胞增殖的急性和慢性炎癥為主。山香園總黃酮(TFS)抗炎作用實(shí)驗(yàn)采用了急性、亞急性及免疫性炎癥模型，結(jié)果表明TFS能明顯抑制二甲苯所致鼠耳腫脹、角叉菜性足腫脹、棉球肉芽腫，且療效優(yōu)于陽性對照藥。此外，我們對AA大鼠采用了預(yù)防加治療的方式于致炎后第12天ig給藥，發(fā)現(xiàn)TFS不僅對AA大鼠的原發(fā)性和繼發(fā)性炎癥有較好的治療作用，而且對繼發(fā)性病變以多發(fā)性關(guān)節(jié)炎為特征的慢性周身炎癥也有明顯的改善作用。綜上所述，TFS具有明顯的抗炎作用。
TFS對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3d。末次給藥后1h于小鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯0.05ml，右耳作對照，2h后將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm的打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳片之差為腫脹度。
用TFS(120、240、480mg/kg)ig3d對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳水腫有明顯的抑制作用。見表1。
表1 TFS對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳脹的影響(n·10，X±s)

與模型組比較′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。
*相當(dāng)于生藥量。(下同)TFS對角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹的影響取SD大鼠50只，分組與給藥同前。于每鼠右足趾皮下注射10g/l角叉菜膠0.1ml致炎，分別在致炎前和致炎后1、3、5、7h，用Volumemeter測量致炎側(cè)足容積，以各鼠致炎前、后容積的差值為腫脹度。
TFS(80、160、320mg/kg)ig3d，各時間段均可明顯抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹，與模型組相比均有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。
表2 TFS對角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹的影響(n·10，X±s)

與模型組比較′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。
TFS對棉球誘導(dǎo)大鼠肉芽腫的影響取SD大鼠50只，分組同前。乙醚淺麻醉，無菌條件下，將棉球〔每個(50±1)mg，高壓滅菌后加氨芐西林0.1ml(1mg)，50℃烘干〕，分別植入大鼠兩側(cè)腹股溝皮下。手術(shù)當(dāng)天開始灌胃給藥，連續(xù)7d。第8天頸椎脫臼致死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，減去原棉球凈重，即為肉芽腫凈重，以10mg/kg計算。TFS(80，160，320mg/kg)ig7d對棉球誘導(dǎo)的大鼠肉芽腫有明顯的抑制作用。見表3。
表3 TFS對棉球誘導(dǎo)大鼠肉芽腫的影響(n·10，X±s)

與模型組比較′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。
TFS對AA大鼠原發(fā)性與繼發(fā)性炎癥的影響模型制備將滅活的卡介苗(80℃水浴1h)加入無菌的液體石蠟中，乳化制成Freund完全佐劑?？ń槊绲臐舛葹?0g/l，于每鼠左后足趾皮內(nèi)注射Freund完全佐劑0.1ml致炎。
觀察指標(biāo)取SD大鼠60只，♂，分組同前。致炎前3dig給藥，分別于致炎前，致炎后6h，12h，18h及24h，用Volumemeter檢測致炎前、后大鼠致炎側(cè)足腫脹，以觀察AA大鼠原發(fā)性病變；致炎后12d開始ig給藥，并檢測非致炎側(cè)足腫脹，每4天1次，以致炎前后足容積差為腫脹度。同時進(jìn)行關(guān)節(jié)評分(0～4)0、無紅腫；1、足小趾關(guān)節(jié)紅腫；2、趾關(guān)節(jié)紅腫、足跖均紅腫；3、踝關(guān)節(jié)以下均紅腫；4、包括踝關(guān)節(jié)，全部紅腫；除致炎側(cè)外，三足的積分之和為關(guān)節(jié)總積分，最高為12分，以評分值對AA大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行評估，以觀察AA大鼠繼發(fā)性病變。
TFS對角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹的影響TFS(80、160、320mg/kg)ig3d，各時間段均可明顯TFS對AA大鼠原發(fā)炎癥的影響，致炎前3d ig給藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TFS(80、160、320mg/kg)不同時間段均可明顯抑制AA大鼠的原發(fā)性足腫脹，與模型組相比差異均有顯著性(P＜0.05)。見表4。
表4 TFS對AA大鼠原發(fā)性炎癥的影響(n·10，X±s)

與模型組比較′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。
TFS對AA大鼠繼發(fā)性炎癥的影響TFS(80、160、320mg/kg)ig×10d，不同時間段均可明顯抑制AA大鼠的繼發(fā)性足腫脹和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，與模型組相比均有顯著性差異(P＜0.05)。見表5、6表5 TFS對AA大鼠繼發(fā)性足腫脹的影響(n·10，X±s)

與模型組比較′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。
表6 TFS對AA大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的影響(n·10，X±s)

與模型組比較′ρ＜0.05，″ρ＜0.01。
臨床研究山香園總黃酮原料藥材山香園葉在我國民間醫(yī)藥應(yīng)用治療上述病癥已有幾百年歷史。將該總黃酮制劑作為臨床驗(yàn)證組100例，六神丸(武漢健民制藥廠生產(chǎn))對照組61例，以中醫(yī)病種風(fēng)熱喉痹、喉喑、風(fēng)熱乳蛾(西醫(yī)病種慢性咽炎、慢性扁桃體炎)進(jìn)行臨床研究，結(jié)果顯示兩組病例其中驗(yàn)證組有效率為100％，顯效率平均為91％，痊愈率平均為67％；對照組有效率為98％，顯效率平均為74.5％，痊愈率平均為52.5％。經(jīng)統(tǒng)計分析有效率P＞0.05沒有差異，痊愈率P＜0.05有顯著差異，顯效率P＜0.01有極顯著差異。說明本品在治療風(fēng)熱喉痹、喉喑、風(fēng)熱乳蛾的研究中痊愈率和顯效率明顯優(yōu)于六神丸。在治療風(fēng)熱喉痹(顯效率92.5％)，風(fēng)熱乳蛾(顯效率97％)，比治療喉喑(顯效率75％)效果更好。
本品具有清熱解毒、利咽消腫。用于慢性咽炎、慢性扁桃體炎的治療，也可用于口腔感染、急性咽炎等的治療。
具體實(shí)施例方式
所述的制備方法途徑一(1)提取工段取符合規(guī)定的山香圓葉，切1～2cm絲，稱取75kg(總黃酮含量以山香圓苷A計1.5％，投入多功能提取罐)，加12倍量80％乙醇，浸漬24小時，加熱提取2小時，濾過，濾液打入濃縮罐；藥渣再加10倍量80％乙醇提取4次、每次1小時，濾過，濾液打入濃縮罐，與第1次提取液合并濃縮，回收乙醇，并濃縮至清膏(34kg，相對密度1.10，60℃)。
(2)樹脂富集工段①上柱液的處理將提取后的清膏，加中性水稀釋至生藥重量∶水體積比1∶1，攪勻，加乙醇至含醇量達(dá)40％，攪勻，靜置48小時，離心，濾過，沉淀留存；濾液回收乙醇至無醇味(相對密度1.10～1.15，50℃)，加中性水稀釋至生藥重量∶水體積比1∶1，即75L。
②樹脂吸附與解吸將上柱溶液加熱至50℃，加上已處理好D101型大孔吸附樹脂柱上(30kg)，用10％乙醇洗脫至濾出液呈近無色(流速2BV/hr)；再用70％乙醇洗脫至流出液不含黃酮成分(200ml，回收乙醇，濃縮液移至蒸發(fā)皿，于水浴上蒸干，殘渣經(jīng)鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陰性)。
③精制工段將解吸得到的乙醇液，回收乙醇并濃縮至相對密度約1.08時，加入粗硅膠(40～80目)2kg，攪勻，繼續(xù)濃縮至上層液相對密度約1.15時，分次加入硅膠6kg，拌勻，將樣品均勻吸附于硅膠上，將拌樣硅膠置于105℃干燥2小時，加入3倍量乙醇提取6次，每次2小時，濾過，濾液合并，減壓回收，真空干燥，研勻，得總黃酮730g(總黃酮含量67.1％，轉(zhuǎn)移率約44％)。
途徑二(1)提取工段 同途徑一項(xiàng)下操作(2)樹脂富集工段 同途徑一項(xiàng)下操作(3)精制工段①樹脂解吸后處理得到總黃酮A730g。
②將樹脂富集工段醇沉后的沉淀，加0.05mol/L氫氧化鈉50L，加熱至50℃，攪樣溶解2小時，靜置6小時，離心，過200目濾布，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值1～2，靜置36小時，離心，沉淀加乙醇10L，加熱溶解，分次加入硅膠16kg，拌樣，將樣品均勻吸附于硅膠上，置105℃干燥2小時，加3倍量乙醇，提取6次、每次2小時，濾過，濾液合并，回收乙醇，真空干燥，得到總黃酮B529g，將總黃酮A與總黃酮B合并，得到山香圓總黃酮1259g(總黃酮含量以山香圓苷A計，分光光度法測54.2％，轉(zhuǎn)移率約61％)。
所述的藥物應(yīng)用山香園總黃酮用于藥物各種劑型的研制開發(fā)，由途徑一制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸、注射劑；由途徑二制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸。
權(quán)利要求
1.一種治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的中藥有效部位山香園總黃酮的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)提取工段乙醇提取山香園葉中草藥得到醇提取液，回收乙醇并濃縮得清膏；(2)樹脂富集工段①上柱液的處理清膏用水稀釋，再加乙醇溶解，過濾得到醇提液，沉淀保存?zhèn)溆?，醇提液回收乙醇后，再用水稀釋得上柱液；②樹脂吸附與解吸將上柱液過處理好的D101型或D201型大孔吸附樹脂柱，以水或稀乙醇洗脫樹脂柱上吸附的雜質(zhì)；再用50～95％乙醇洗脫樹脂柱上吸附的有效成份，收集醇洗脫液，回收乙醇并濃縮得到濃縮液；(3)精制工段將樹脂富集工段得到的濃縮液，加入粗硅膠攪勻，再烘干或晾干，然后用乙醇提取硅膠吸附的有效成份，醇提液回收乙醇，真空干燥，研勻，包裝，即得山香園總黃酮的制備方法。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于將樹脂富集工段中上柱液處理后的殘渣，加0.01～0.1mol/L氫氧化鈉溶液，加熱至50～60℃攪拌溶解，離心，過濾，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，靜置，離心，沉淀用乙醇加熱溶解，分次加入粗硅膠拌樣，將樣品均勻吸附于硅膠上，再烘干或晾干；反復(fù)用乙醇回流提取，濾過，得醇提濾液，回收乙醇，真空干燥，研勻，即得總黃酮B，將同批投料藥材的總黃酮A與總黃酮B混勻，即得山香圓總黃酮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于(1)提取工段取山香圓葉，凈選，切絲(寬1～2cm)加10～12倍量(生藥重量∶溶媒體積，下同)50～95％乙醇浸漬12～24小時，提取1～2小時，過濾，濾液備存；藥渣再加相同濃度乙醇提取2~4次，每次加8～10倍量乙醇，每次1～2小時，濾過，濾液合并，回收乙醇并濃縮，得清膏；(2)樹脂富集工段①上柱液的處理將提取工段得到的清膏，加中性水稀釋至生藥重量∶水體積比為1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，靜置12～24小時，濾過，沉淀留存；濾液回收乙醇后，加中性水稀釋至生藥重量∶水體積至0.5～1∶1，加熱至50℃，即可；②樹脂吸附與解吸將上柱液，加于已處理好的D101型或D201型大孔吸附樹脂柱上，以水或稀乙醇洗脫至洗脫液近無色；再用50～95％乙醇洗脫樹脂柱至洗膠液近無色，收集醇洗脫液，回收乙醇并濃縮得到濃縮液；(3)精制工段將樹脂富集工段得到的醇洗脫的濃縮液，加入40～80目粗硅膠攪勻，濃縮，再加入硅膠、乙醇，攪拌均勻，將樣品均勻吸附于硅膠上為止；將帶樣硅膠置于100～105℃干燥1～3小時，取出，冷至室溫，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小時，濾過，回收乙醇得清膏，真空干燥，研勻，包裝，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的山香園總黃酮的制備方法，其特征在于樹脂富集工段中上柱液處理后的殘渣，加0.01～0.1mol/L氫氧化鈉溶液(按投料藥材量的1～2∶1)，加熱至50～60℃攪拌溶解1～2小時，靜置6～12小時，離心，過濾，濾液加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，靜置24～48小時，離心，沉淀用適量乙醇(投料藥材量與乙醇比為5～10∶1)，加熱溶解，分次加入粗硅膠(投料藥材量與硅膠比為3～6∶1)拌樣，將樣品均勻吸附于硅膠上；將拌樣硅膠置于100～105℃干燥1～2小時(厚度1～2cm)，取出加3～6倍量乙醇回流提取6～8次，每次1～2小時，濾過，濾液回收乙醇，真空干燥，研勻，即得總黃酮B。
5.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于(1)提取工段取符合規(guī)定的山香圓葉，切1～2cm絲，取75kg(總黃酮含量以山香圓苷A計1.5％，投入多功能提取罐)，加12倍量80％乙醇，浸漬24小時，加熱提取2小時，濾過，濾液打入濃縮罐；藥渣再加10倍量80％乙醇提取4次、每次1小時，濾過，濾液打入濃縮罐，與第1次提取液合并濃縮，回收乙醇，并濃縮至清膏(34kg，相對密度1.10，60℃)；(2)樹脂富集工段①上柱液的處理將提取工段得到的清膏，加中性水(pH6.5～7.5，下同)稀釋至生藥∶水比為1～2∶1，加乙醇至含醇量30～40％，靜置12～24小時，濾過，沉淀留存(含有黃酮苷元成分)；濾液回收乙醇至無醇味(相對密度1.05～1.10)，加中性水稀釋至生藥∶水至0.5～1∶1，加熱至50℃，即可；②樹脂吸附與解吸將上柱液，加于已處理好的D101型(AB-8型)或D201型大孔吸附樹脂柱上(按生藥∶樹脂體積比＝1～3∶1)，以水或稀乙醇(1～10％)，洗脫至洗脫液近無色(流速視柱徑大小調(diào)節(jié))；再用50～95％乙醇洗脫至洗膠液近無色(不含黃酮類成分，取300ml回收溶劑移至水浴鍋蒸干，殘渣經(jīng)鹽酸-鎂粉反應(yīng)應(yīng)為陰性)，收集醇洗脫液，回收乙醇并濃縮得到濃縮液(相對密度1.15～1.20，50℃)；(3)精制工段將樹脂富集工段得到的醇洗脫的濃縮液，在相對密度至1.05～1.08時，加入適量的粗硅膠(40～80目，投料藥材量的1～2％)，攪勻，濃縮至上層液相對密度1.10～1.20時，再加入適量硅膠(投料藥材量的5～10％)，再加適量乙醇，攪拌均勻，將樣品均勻吸附于硅膠上為止；將帶樣硅膠置于100～105℃干燥1～3小時(厚度1～3cm)，取出，冷至室溫，加入3～6倍量乙醇，提取6～8次，每次1～2小時，濾過，回收乙醇，真空干燥，研勻，包裝，即得(以山香圓苷A計，分光光度法測總黃酮≥50％，測定波長266±2nm)。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種治療慢性咽炎、慢性扁桃體炎的中藥植物藥有效部位——山香園總黃酮(TFS)的制備方法與其藥物應(yīng)用。以山香圓苷A計，分光光度法測總黃酮≥50％，測定波長266±2nm。由途徑一制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸、注射劑；由途徑二制得的總黃酮可制成片劑、咀嚼片、口含片、分散片、膠囊、軟膠囊、口服液、糖漿劑、滴丸。
文檔編號A61K31/7048GK1680355SQ20051003820
公開日2005年10月12日 申請日期2005年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月20日
發(fā)明者余世春 申請人:安徽科創(chuàng)中藥天然藥物研究所有限責(zé)任公司