專利名稱：具有生長激素釋放特性的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新化合物，含有它們的組合物及其用于治療因生長激素缺乏所致的醫(yī)學(xué)疾病的用途。
背景技術(shù)：
生長激素是一種能刺激所有能生長的組織生長的激素。此外，還已知生長激素對代謝過程具有多種作用，如刺激蛋白質(zhì)合成和游離脂肪酸的遷移，并引起自碳水化合物到脂肪酸代謝的能量代謝轉(zhuǎn)換。生長激素的缺乏會導(dǎo)致多種嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)病癥，如侏儒癥。
生長激素由垂體釋放。而釋放過程則受到多種激素和神經(jīng)遞質(zhì)直接或間接地嚴(yán)格控制。生長激素釋放激素(GHRH)能夠刺激生長激素釋放，而促生長素抑制素則能抑制生長激素的釋放。在這兩情況下，激素都是由下丘腦釋放，但它們的作用則主要是通過位于垂體中的特異受體介導(dǎo)。能刺激垂體釋放生長激素的其它化合物也業(yè)已有記載。例如，精氨酸，L-3,4-二羥基苯丙氨酸(L-Dopa)，胰高血糖素，加壓素，PACAP(垂體腺苷酸環(huán)化酶活化肽)，蕈毒受體激動劑以及一種合成六肽，GHRP(生長激素釋放肽)通過直接作用于垂體或通過影響下丘腦釋放GHRT和/或促生長素抑制素而釋放內(nèi)源性生長激素。
對需要提高生長激素水平的疾病或病癥來說，生長激素的蛋白質(zhì)性質(zhì)使得除腸胃外施用途徑外的任何用法都行不通。另外，其它直接作用的天然促分泌素如GHRH和PACAP都是長鏈多肽，因此，口服施用它們也是沒有活性的。
先前已有人在例如下列文獻(xiàn)中提出了使用某些化合物來提高哺乳動物體內(nèi)的生長激素水平EP 18 072,EP 83 864,WO 89/07110,WO89/01711,WO 89/10933,WO 88/9780,WO 83/02272,WO 91/18016,WO 92/01711,WO 93/04081,WO 95/17422,WO 95/17423和WO95/14666。
生長激素釋放化合物的結(jié)構(gòu)對其生長激素釋放能力及其生物利用率都十分重要。因此,本發(fā)明的目的是提供具有生長激素釋放特性的新化合物，相對于同一類型已知化合物，它們具有改善性能。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了在正常體外實(shí)驗(yàn)條件下能直接作用于垂體細(xì)胞并從中釋放生長激素的化合物。
這些生長激素釋放化合物可以在體外用作特殊的研究工具，特別是用于了解如何在垂體水平上調(diào)節(jié)生長激素分泌。
此外，本發(fā)明的生長激素釋放化合物還可體內(nèi)施用以增加生長激素釋放。因此，本發(fā)明涉及通式Ⅰ化合物或其可藥用鹽
式Ⅰ其中R1為氫，或任選被芳基取代的C1-6-烷基；a和b獨(dú)立地為1或2；c和d獨(dú)立地為0,1，或2；c+d為0,1,或2；R2,R3,R4,R6,R7,R8,R9,R10,和R11獨(dú)立地為氫，任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的芳基，或任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的C1-6-烷基；R3和R4可一起形成=O或=S；R8和R9可一起形成=O或=S；R5為氫，
或任選被芳基、羥基、C3-6-環(huán)烷基、氨基、COOR25、-CONR26R27、-NR′R″、
或
取代的C1-6-烷基；R,R′和R″獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；R30和R31獨(dú)立地為任選被芳基、羥基、C3-6-環(huán)烷基、或氨基取代的C1-6-烷基；R22,R23,R24,R25,R26和R27獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；當(dāng)R3和R4一起形成=O或=S時，E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)o-(CH2)n-；當(dāng)R3或R4為氫，任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的芳基，或任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的C1-6-烷基時，E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-Q-(CHR20)o-(CH2)n-；R12,R13,R14,R15,R16,R17,R18,R19，和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一同連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；M為-CH=CR21-,-O-,-S-,或價鍵；Q為-CH=CR21,-O-,或-S-；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；G為氫，
其中R28為氫，鹵素，C1-6-烷基，C1-6-烷氧基或芳基；r為0,1,或2；J為氫，
其中R29為氫，鹵素，C1-6-烷基，C1-6-烷氧基或芳基；t為0,1,或2。
式Ⅰ化合物包括其分離、純凈或部分純化形式光學(xué)異構(gòu)體或它們的外消旋混合物。
式Ⅱ-Ⅴ化合物獨(dú)立地為式Ⅰ化合物的優(yōu)選實(shí)施方案，因此，本發(fā)明說明書中有關(guān)式Ⅰ的任何說明也都是對式Ⅱ-Ⅴ的說明。
在上述式Ⅰ化合物的一個實(shí)施方案中，R1優(yōu)選為C1-6-烷基，更優(yōu)選C1-4-烷基，例如甲基。
在上述式Ⅰ化合物的第二個實(shí)施方案中，a優(yōu)選為1。
在上述式Ⅰ化合物的進(jìn)一步實(shí)施方案中，b優(yōu)選為1。
在上述式Ⅰ化合物的更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，c優(yōu)選為0或1。
在上述式Ⅰ化合物的進(jìn)一步實(shí)施方案中，d優(yōu)選為0或1。
在上述式Ⅰ化合物的更進(jìn)一步實(shí)施方案中，c+d優(yōu)選為1。
在上述式Ⅰ化合物的進(jìn)一步實(shí)施方案中，R2優(yōu)選為氫或C1-4-烷基，更優(yōu)選氫。
在上述式Ⅰ化合物的更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，優(yōu)選R3和R4一起形成=O或=S，更優(yōu)選=O。
在上述式Ⅰ化合物的另一實(shí)施方案中，R3和R4各自獨(dú)立地為氫。
在上述式Ⅰ化合物的進(jìn)一步實(shí)施方案中，R5優(yōu)選為氫，C1-6-烷基磺?；缂谆酋；?，或C1-6-烷基，更優(yōu)選C1-4-烷基，例如甲基。
在上述式Ⅰ化合物的更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，R6,R7,R8和R9各自獨(dú)立優(yōu)選為氫或C1-6-烷基，更優(yōu)選C1-4-烷基，例如甲基。
在上述式Ⅰ化合物的進(jìn)一步實(shí)施方案中，R10和R11各自獨(dú)立優(yōu)選為氫或C1-4-烷基，更優(yōu)選氫。
在上述式Ⅰ化合物的更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，E優(yōu)選為R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)o-(CH2)n-；其中R17為氫或C1-4-烷基，優(yōu)選甲基，R18為氫或C1-4-烷基，優(yōu)選甲基，和R19為氫或C1-4-烷基，優(yōu)選甲基，或R18與R19一同連接成C1-6-亞烷基橋，優(yōu)選C1-4-亞烷基橋，例如三亞甲基橋，和n為0或1，優(yōu)選0，p為1,m為1且M為-CH=CR21,其中R21為氫或C1-4-烷基，優(yōu)選甲基，更優(yōu)選E為-CH=CH-CH2-C(CH3)2NH2,-CH=C(CH3)-CH2-C(CH3)2NH2,-CH=CH-CH2-C(CH3)2-NH(CH3)或
在上述式Ⅰ化合物的進(jìn)一步實(shí)施方案中，G優(yōu)選為
或
其中R28為氫或芳基，優(yōu)選苯基，更優(yōu)選G為2-萘基或聯(lián)苯-4-基。在上述式Ⅰ化合物的更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，J優(yōu)選為
或
其中R29為氫或C1-6-烷基，優(yōu)選氫，更優(yōu)選J為苯基或2-噻吩基。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-4-(環(huán)丙基甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-(羥甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代-1,4-二氮雜庚環(huán)-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
哌啶-4-羧酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((2R)-2-((2-萘基)甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)乙基)酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-4-(二甲基氨基甲酰基甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-甲基-5-(甲氨基)己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,6S)-2-芐基-6-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(聯(lián)苯-4-基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-(2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-(2R)-2-芐基-4-甲磺酰基哌嗪-1-羰基)-2-芐氧基乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-甲基-5-甲基氨基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-甲基-5-氨基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-4-(1-氨基環(huán)丁基)丁-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((2R)-3-氧代-2-((2-噻吩基)甲基)哌嗪-1-羰基)乙基)酰胺
(2E)-4-(1-氨基環(huán)丁基)丁-2-烯酸N-((1R)-2-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-甲基-5-甲基氨基-己-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-1-(2-萘基)甲基-2-氧代-2-((2R)-3-氧代-2-((2-噻吩基)甲基)哌嗪-1-基)乙基)-酰胺
(2E)-5-氨基-5-甲基-己-2-烯酸(2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-(1R)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-甲基-酰胺
據(jù)認(rèn)為，由于無天然肽鍵，因此與現(xiàn)有文獻(xiàn)中提出的肽類化合物相比，式Ⅰ化合物顯示出改進(jìn)的抗酶引發(fā)的蛋白水解降解特性?？沟鞍姿饨到庾饔媚芰Φ奶岣?，再加上與已知生長激素釋放肽相比本發(fā)明化合物的體積降低，可望改善它們的生物利用率(與現(xiàn)有文獻(xiàn)中提出的肽相比)。
在上述結(jié)構(gòu)式和本說明書中，下列術(shù)語具有所指定的含義上文所述的C1-6-烷基，或C1-4-烷基基團(tuán)包括具有指定長度的直鏈或支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷基基團(tuán)。直鏈烷基的實(shí)例包括甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，和己基。支鏈烷基的實(shí)例包括異丙基，仲丁基，叔丁基，異戊基，和異己基。環(huán)狀烷基的實(shí)例包括C3-6-環(huán)烷基，例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
上文所述的C1-6-烷氧基基團(tuán)包括具有指定長度的直鏈或支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷氧基基團(tuán)。直鏈烷氧基的實(shí)例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，戊氧基，和己氧基。支鏈烷氧基的實(shí)例包括異丙氧基，仲丁氧基，叔丁氧基，異戊氧基，和異己氧基。環(huán)狀烷氧基的實(shí)例包括環(huán)丙氧基，環(huán)丁氧基，環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基。
在本文中，術(shù)語“芳基”包括芳環(huán)，例如選自下列基團(tuán)的碳環(huán)和雜環(huán)芳環(huán)苯基、萘基、吡啶基、1H-四唑-5-基、噻唑基、咪唑基、吲哚基、嘧啶基、噻二唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻吩基、喹啉基、吡嗪基、或異噻唑基，這些基團(tuán)任選地被一個或多個C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、鹵素、氨基或芳基取代。芳基優(yōu)選為任選被鹵素、氨基、羥基、C1-6-烷基或C1-6-烷氧基取代的苯基、噻吩基、咪唑基、噁二唑基、吡啶基、吲哚基、喹啉基或萘基。
術(shù)語“鹵素”包括氯(Cl)，氟(F)，溴(Br)和碘(I)。
本發(fā)明化合物可能含有一個或多個不對稱中心，因此分離的、純凈或部分純凈形式的立體異構(gòu)體或它們的外消旋混合物也包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
本發(fā)明化合物可以為可藥用鹽形式，如式Ⅰ化合物的可藥用酸加成鹽，包括式Ⅰ化合物與無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)所生成的鹽，例如，可選用的酸包括氫氯酸，氫溴酸，硫酸，乙酸，磷酸，乳酸，馬來酸，鄰苯二甲酸，檸檬酸，戊二酸，葡糖酸，甲磺酸，水楊酸，琥珀酸，酒石酸，甲苯磺酸，三氟乙酸，氨基磺酸或富馬酸。
式Ⅰ化合物可以以可藥用酸加成鹽形式或者如果合適的話以堿金屬或堿土金屬或低級烷基銨鹽形式施用。據(jù)認(rèn)為，這些鹽形式顯示出與游離堿形式大約相同數(shù)量級的活性。
另一方面，本發(fā)明還涉及藥物組合物，該組合物包括作為活性成分的通式Ⅰ化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體或稀釋劑。
包含本發(fā)明化合物的藥物組合物可按照常規(guī)技術(shù)制備，如在Remington's Pharmaceutical Sciences,1985或Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,19版(1995)中所述的方法。組合物可以為常規(guī)制劑形式，例如膠囊劑，片劑，氣霧劑，溶液，懸浮液或局部用藥形式。
所用的可藥用載體或稀釋劑可以是常規(guī)固體或液體載體。固體載體的實(shí)例包括乳糖，石膏粉，蔗糖，環(huán)糊精，滑石，明膠，瓊脂，果膠，阿拉伯膠，硬脂酸鎂，硬脂酸或纖維素的低級烷基酯。液體載體的實(shí)例包括糖漿，花生油，橄欖油，磷脂，脂肪酸，脂肪酸胺，聚氧乙烯或水。
同樣，載體或稀釋劑可包括本領(lǐng)域中已知的任何緩釋材料，如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯，并可單獨(dú)使用或與蠟混用。
如果所用的固體載體是供口服施用的，則可將制劑壓片，以粉狀或顆粒狀形式填充到硬明膠膠囊內(nèi)，或者可以為糖錠或錠劑形式。固體載體的用量可以有較大變化，但通常為大約25mg-大約1g。如果使用液體載體，則制劑可以為糖漿、乳液、軟明膠膠囊或無菌注射液如含水或非水液體懸浮液或溶液等形式。
用常規(guī)壓片技術(shù)制備的典型片劑可包含片芯活性化合物(游離化合物或其鹽形式)100mg膠體二氧化硅(Aerosil)1.5mg微晶纖維素(Avicel)70mg改性纖維素膠(Ac-Di-Sol)7.5mg硬脂酸鎂涂層HPMC大約9mgMywacett 9-40 T大約0.9mg
※使用?；瘑嗡岣视王プ鳛槟ぐ略鏊軇?。
對于經(jīng)鼻施用，該制劑可包含溶于或懸浮在用作氣霧劑的液體載體(特別是含水載體)中的式Ⅰ化合物。載體可包含如助溶劑如丙二醇，表面活性劑，吸收增強(qiáng)劑如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精，或防腐劑如對羥基苯甲酸酯之類的添加劑。
一般地，本發(fā)明化合物被分配成單位劑量形式，每單位劑量包括50-200mg活性成分和可藥用載體。
本發(fā)明化合物的劑量適宜為0.1-500mg/天，如大約5-大約50mg，例如，當(dāng)作為藥物用于患者如病人時，每劑大約10mg。
業(yè)已證實(shí)，通式Ⅰ化合物具有體內(nèi)釋放內(nèi)源性生長激素的能力。因此，本發(fā)明化合物可用于治療需要增加血漿生長激素水平的病癥，如生長激素缺乏的病人或老年患者或牲畜。
因此，本發(fā)明的一個具體方面是涉及用于刺激垂體釋放生長激素的藥物組合物，該組合物包括作為活性成分的通式Ⅰ化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體或稀釋劑。
本發(fā)明的另一方面涉及刺激垂體釋放生長激素的方法，該方法包括對需要這種刺激的受治療者施用有效量的通式Ⅰ化合物或其可藥用鹽。
本發(fā)明的再一方面涉及通式Ⅰ化合物或其可藥用鹽在制備用于刺激垂體釋放生長激素的藥物中的應(yīng)用。
本領(lǐng)域技術(shù)人員都知道，生長激素在人體內(nèi)的現(xiàn)有和潛在用途是變化的和多種多樣的。因此，可施用式Ⅰ化合物來刺激垂體釋放生長激素，然后還具有與生長激素本身類似的作用或用途。生長激素的用途可概述如下激發(fā)老年人釋放生長激素；預(yù)防糖皮質(zhì)激素的代謝副作用，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松，刺激免疫系統(tǒng)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，加快骨折的恢復(fù)，加快復(fù)雜性(complicated)骨折如內(nèi)脫位骨生成(disctractionosteogenesis)的恢復(fù)，治療消耗性繼發(fā)性骨折，治療生長停滯，治療因生長停滯所致的腎衰竭或腎功能不全，治療心肌病，治療慢性肝病，治療血小板減少，治療局限性回腸炎，治療短腸綜合癥，治療慢性阻塞性肺病(COPD)，治療與移植相關(guān)的并發(fā)癥，治療生理性身材矮小，包括生長激素缺乏的兒童和因慢性病造成的身材矮小，治療肥胖癥和與肥胖有關(guān)的生長停滯，治療與普-威綜合癥和特納氏綜合癥有關(guān)的生長停滯；加速燒傷患者的恢復(fù)并縮短住院治療時間；治療子宮生長停滯，骨骼發(fā)育異常，腎上腺皮質(zhì)激素亢進(jìn)和柯興氏癥；誘導(dǎo)脈沖式生長激素釋放；恢復(fù)緊張患者的生長激素，治療骨軟骨發(fā)育不良，努南綜合癥，精神分裂癥，抑郁癥，早老性疾呆病，延遲的創(chuàng)傷愈合和精神失常，治療肺機(jī)能障礙和呼吸器依賴癥，減輕大手術(shù)后的蛋白質(zhì)代謝反應(yīng)，減輕由慢性病如癌癥或AIDS引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)減少；治療胰島素過多癥，包括胰島細(xì)胞增殖癥，用于排卵誘導(dǎo)的佐劑治療；刺激胸腺發(fā)育并防止與年齡有關(guān)的胸腺機(jī)能下降，治療免疫抑制患者，改善肌肉強(qiáng)度和肌肉活動性，保持皮膚厚度，代謝的體內(nèi)平衡，虛弱老人的腎內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，刺激成骨細(xì)胞，骨重塑和軟骨生長，刺激伴生動物的免疫系統(tǒng)并治療伴生動物的衰老病癥，牲畜的生長促進(jìn)劑和促進(jìn)綿羊的羊毛生長。
對于上述指癥，所用劑量取決于所用的式Ⅰ化合物，施用方式和期望的治療方式。不過，為獲得內(nèi)源性生長激素的有效釋放，對病人和動物施用的劑量水平一般為0.0001-100mg/kg體重/天。通常，適于口服，經(jīng)鼻，經(jīng)肺和經(jīng)皮施用的劑量包括大約0.0001mg-大約100mg，優(yōu)選大約0.001mg-大約50mg與可藥用載體或稀釋劑混合的式Ⅰ化合物。
任選地，本發(fā)明藥物組合物可包括式Ⅰ化合物以及一種或多種顯示不同活性的化合物，如抗生素或其它藥理活性物質(zhì)。
施藥途徑可以是能將活性化合物有效地輸送到合適或期望的作用位點(diǎn)，例如經(jīng)口，經(jīng)鼻，經(jīng)肺，經(jīng)皮或胃腸外途徑，其中優(yōu)選口服途徑。
除藥用用途外，式Ⅰ化合物還可用作研究生長激素釋放調(diào)節(jié)的體外工具。
式Ⅰ化合物還可用作評估垂體釋放生長激素能力的體內(nèi)工具。例如，可以在對人施用這些化合物之前或之后采集血清樣品測定生長激素。通過比較每一血清樣品中生長激素的含量，能夠直接測定患者垂體釋放生長激素的能力。
式Ⅰ化合物可以施用于商業(yè)上重要的動物，以提高它們的生長速度和程度，并用于增加產(chǎn)乳量。
式Ⅰ的生長激素促分泌素化合物的進(jìn)一步用途是與其它促分泌素如GHRP(2或6)，GHRH及其類似物，生長激素及其類似物或包括IGF-1和IGF-2在內(nèi)的生長調(diào)節(jié)素結(jié)合使用。
藥理方法可在大鼠垂體原代培養(yǎng)物中體外評估式Ⅰ化合物釋放生長激素的效力和能力。
按照O.Sartor等人(內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology),116,1985,pp.952-957)的改良方法分離大鼠垂體細(xì)胞。從Mφllegaard,Lille Skensved,Denmark采購雄性白化病Sprague-Dawley大鼠(250+/-25克)。將大鼠置于一組籠內(nèi)(每籠4只動物)并放到12小時光照循環(huán)期的房間內(nèi)。室內(nèi)溫度為19-24℃，濕度30-60％。
斷頭處死大鼠并取出垂體。除去垂體神經(jīng)中葉，剩余組織立刻置于冰冷分離緩沖液(Gey培養(yǎng)基(Gibco 041-04030)，補(bǔ)加有0.25％D-葡萄糖，2％非必需氨基酸(Gibco 043-01140)和1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma A-4503))。將組織切成小片并轉(zhuǎn)移到補(bǔ)加有3.8mg/ml胰蛋白酶(Worthington #3707 TRL-3)和330μg/ml DN酶(Sigma D-4527)的分離緩沖液內(nèi)。將這一混合物在95/5％ O2/CO2氣氛下于37℃和70轉(zhuǎn)/分鐘條件下溫?zé)?5分鐘。然后用上述緩沖液將該組織洗滌三次。隨后利用標(biāo)準(zhǔn)巴氏小吸管，將組織抽吸成單細(xì)胞。分散之后，將細(xì)胞通過尼龍濾器(160μm)過濾以除去未消化組織。細(xì)胞懸浮液用補(bǔ)加有胰蛋白酶抑制劑(0.75mg/ml,Worthington#2829)的分離緩沖液洗滌3次，最后再懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)，即補(bǔ)加有25mM HEPES(Sigma H-3375),4mM谷氨酰胺(Gibco 043-05030H),0.075％碳酸氫鈉(Sigma S-8875),0.1％非必需氨基酸，2.5％牛血清白蛋白(FCS,Gibco 011-06290),3％馬血清(Gibco 034-06050),10％新鮮大鼠血清，1nM T3(Sigma T-2752)和40μg/ml地噻米松(Sigma D-4902)，pH7.3的DMEM(Gibco 041-01965)，得到2×105細(xì)胞/ml密度。將這些細(xì)胞接種到微量滴定板(Nunc,Denmark)內(nèi)，每孔200μl，并在37℃和8％CO2下培養(yǎng)3天。
化合物測試培養(yǎng)之后，用刺激緩沖液(補(bǔ)加有1％BSA(Sigma A-4503),0.25％D-葡萄糖(Sigma G-5250)和25mM HEPES(Sigma H-3375)的Hanks平衡鹽溶液(Gibco 041-04020),pH7.3)洗滌細(xì)胞兩次，在37℃預(yù)培養(yǎng)1小時。緩沖液換為90μl刺激緩沖液(37℃)。加入10μl受試化合物溶液，并將滴定板在37℃和5％CO2下溫育15分鐘。潷去培養(yǎng)基，采用rGH SPA試驗(yàn)系統(tǒng)分析GH含量。
所有受試化合物的劑量范圍為10pM-100μM。利用Hill方程(FigP,Biosoft)建立劑量反應(yīng)關(guān)系。效力(最大GH釋放，Emax)用GHRP-6的Emax的百分?jǐn)?shù)表示。能力(EC50)定義為誘導(dǎo)50％GH釋放最大刺激的濃度。
評估式Ⅰ化合物的代謝穩(wěn)定性將化合物溶于水中，濃度為lμg/μl。取25μl這種溶液加到175μl相應(yīng)的酶溶液內(nèi)(導(dǎo)致酶底物之比(w/w)大約為1∶5)。將所得溶液在37℃下放置過夜。取10μl各種降解溶液，采用具有選定分子離子的離子監(jiān)測裝置的流動注射電噴射質(zhì)譜(ESMS)進(jìn)行分析，并與相應(yīng)的零-樣品比較。如果信號與零-樣品相比的降低程度大于20％，則用HPLC和質(zhì)譜分析溶液的剩余部分，以準(zhǔn)確確定降解的程度和位點(diǎn)。
為確定各種溶液降解肽的能力，穩(wěn)定性試驗(yàn)中包含了數(shù)種標(biāo)準(zhǔn)肽(ACTH 4-10，血管緊張肽1-14和胰高血糖素)。
標(biāo)準(zhǔn)肽(ACTH 4-10，血管緊張肽1-14和胰高血糖素)購自Sigma,MO,USA)。
酶(胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，彈性蛋白酶，氨肽酶M和羧肽酶Y和B)均購自Boehringer Mannheim GmbH(Mannheim,德國)。
胰酶混合液胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶/100mM碳酸氫銨，pH8.0(濃度均為0.025μg/μl)。
羧肽酶混合液羧肽酶Y和B/50mM乙酸銨，pH4.5(濃度均為0.025μg/μl)。
氨肽酶M溶液氨肽酶M(0.025μg/μl)/100mM碳酸氫銨，pH8.0。
質(zhì)譜分析采用兩種不同的質(zhì)譜儀進(jìn)行，即配有電噴射離子源的Sciex API Ⅲ三重四極LC-MS儀(Sciex instruments,Thornhill,Ontario)和Bio-Ion 20倍飛行時間等離子體解吸質(zhì)譜儀(Bio-IonNordic AB,Uppsala,Sweden)。
采用API Ⅲ儀，流動注射分析物，利用單離子監(jiān)測法監(jiān)測所述化合物的分子離子峰來定量降解前后化合物的量。利用ABI 140B HPLC裝置(Perkin-Elmer Applied Biosystems Divisions Foster City,CA)控制液體流(MeOH水，1∶1)為100μl/分鐘。儀器參數(shù)設(shè)置為標(biāo)準(zhǔn)操作條件，且SIM采用強(qiáng)度最強(qiáng)的分子離子進(jìn)行(在大多數(shù)情形下，該離子相應(yīng)于雙電荷分子離子)。
此外，使用配有標(biāo)準(zhǔn)儀器設(shè)置的等離子體解吸質(zhì)譜(PDMS)鑒定降解產(chǎn)物，其中點(diǎn)樣在硝酸纖維素涂層靶上進(jìn)行。由此測定的質(zhì)量的準(zhǔn)確度一般好于0.1％。
采用HY-TAVH C-18反相4.6×105mm HPLC柱(Hewlett-Packard Company,Palo Alto,CA)進(jìn)行降解產(chǎn)物的分離和離析，使用標(biāo)準(zhǔn)乙腈TFA分離梯度洗脫。所用HPLC系統(tǒng)為HP 1090M(Hewlett-Packard Company,Palo Alto,CA)。
+穩(wěn)(在降解溶液中24小時后SIM信號強(qiáng)度的減弱小于20％)-不穩(wěn)定(在降解溶液中24小時后SIM信號強(qiáng)度的減弱大于20％)本文所述的任何新特征或特征的組合對本發(fā)明來講都是必不可少的。
化學(xué)方法一些式Ⅰ化合物或中間體可按照下文所示的反應(yīng)流程之一合成。其它實(shí)施例可能需要不同的合成途徑，這取決于化合物的類型。因此，每一實(shí)施例的具體合成見各實(shí)施例中所述。
方法A流程1
在還原條件如氰基硼氫化鈉存在下，醛1可與酯2反應(yīng)形成酯3。氨基基團(tuán)脫保護(hù)后，進(jìn)行環(huán)合得到哌嗪酮4。在適當(dāng)溶劑如N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，借助本領(lǐng)域公知的偶合劑如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽或者是1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽與1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-氮雜苯并三唑的混合物，使酮4與合適的被護(hù)氨基酸5反應(yīng)產(chǎn)生哌嗪酮6。利用本領(lǐng)域公知的以及如T.W.Greene(有機(jī)合成中的保護(hù)基，第2版，John Wiley and Sons,New York 1991)所述的方法進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，例如采用三氟乙酸或氯化氫在乙酸乙酯中脫保護(hù)，然后在適當(dāng)溶劑如N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，利用本領(lǐng)域中公知的偶合劑如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽或者是1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽與1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-氮雜苯并三唑的混合物，偶合所產(chǎn)生的胺7與合適的被護(hù)氨基酸8，并接著用本領(lǐng)域公知的以及如T.W.Greene(有機(jī)合成中的保護(hù)基，第2版，John Wiley and Sons,New York1991)所述的方法進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，例如采用三氟乙酸或氯化氫在乙酸乙酯中脫保護(hù)，得到化合物9，即式Ⅰ化合物。
方法B流程2
二氮雜庚環(huán)酮可如流程2所述按照下面的反應(yīng)合成得到并按照流程1中所述的類似方式結(jié)合到肽上在脫水條件下如分子篩和氰基硼氫化鈉存在下，在如甲醇之類的溶劑中，還原性烷基化化合物11的羰基到氨基酸酯10上，接著除去化合物12中的保護(hù)基。該脫保護(hù)反應(yīng)可引起中間體環(huán)合從而形成化合物13?；衔?3可作為中間體，按照和流程1中關(guān)于中間體4所述相同的方式反應(yīng)，產(chǎn)生式Ⅰ化合物。實(shí)施例制備式Ⅰ化合物的方法以及含有它們的制劑可以用下列實(shí)施例進(jìn)一步說明，但它們不得解釋為是對上述方法及制劑的限制。
化合物的結(jié)構(gòu)通過元素分析(MA)，核磁共振(MER)或質(zhì)譜(MS)鑒定。NMR位移(δ)以百萬分之幾(ppm)表示，并且僅給出特征峰。mp表示熔點(diǎn)并以℃表示。柱色譜采用W.C.Still等人在有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem.),1978,43,2923-2925中所述的方法利用Merck硅膠60(Art 9385)進(jìn)行。用作起始物質(zhì)的化合物或者為已知化合物，或者為可用本領(lǐng)域公知方法易制備的化合物。
縮寫詞TLC薄層色譜DMSO二甲亞砜min分鐘h小時HPLC-分析方法A1.
RP-分析采用218TP54 4.6mm×250mm 5μC-18硅膠柱進(jìn)行，在214,254,276,和301nm處UV檢測(The Seperations Group,Hesperia)，在42℃下以1mL/min流速洗脫。色譜柱用溶在經(jīng)4M硫酸調(diào)節(jié)至pH2.5的0.1M硫酸銨緩沖液中的5％乙腈溶液平衡，注射樣品后，用溶于相同緩沖液中的5％-60％乙腈溶液梯度洗脫，時間50min。
實(shí)施例1(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2R)-2-(2-(叔丁氧羰基氨基)乙基氨基)-3-苯基丙酸甲酯
將(2R)-2-氨基-3-苯基丙酸甲酯(3.2g；15.0mmol)和(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.2g；20.0mmol)(按Dueholm等在Org.Prep.Proced.Int.25(4),457-61(1993)中所述方法制備)溶于甲醇(100ml)與乙酸(5ml)混合物中。加入分子篩(3；100g)，將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。分批加入氰基硼氫化鈉(1.38g；22.0mmol)，并在不攪拌下靜置反應(yīng)混合物12h。過濾反應(yīng)混合物，往濾液內(nèi)加入水(100ml)、碳酸氫鈉/碳酸鈉水溶液(10％；100ml；pH9)和二氯甲烷(50ml)。水相用二氯甲烷(2×50ml)提取，合并有機(jī)相并用硫酸鎂干燥。真空蒸發(fā)有機(jī)相，殘留物通過硅膠柱(4×40cm)層析，使用乙酸乙酯/庚烷(3∶2)為洗脫劑，得到2.07g(2R)-2-(2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基氨基)-3-苯基丙酸甲酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.44(s,9H)；2.55(m,1H)；2.72(m,1H)；2.90(dd,1H)；2.97(dd,1H)；3.11(m,2H)；3.47(t,1H)；3.68(s,3H)；7.15-7.32(芳族5H)；(2R)-2-(2-氨基乙基氨基)-3-苯基丙酸甲酯
將(2R)-2-(2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基氨基)-3-苯基丙酸甲酯(1.32g；4.094mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入三氟乙酸(10ml)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時，然后真空蒸發(fā)溶劑，并將殘留物溶于二氯甲烷(5ml)，再次真空蒸發(fā)。加入二氯甲烷(5ml)，真空蒸發(fā)后得到1.14g(2R)-2-(2-氨基乙基氨基)-3-苯基丙酸甲酯，為三氟乙酸鹽。1H-NMR(DMSO-d6):δ3.03-3.39(m,6H)；3.66(s,3H)；4.45(dd,1H)；7.21-7.39(芳族,5H)(3R)-3-芐基哌嗪-2-酮
將(2R)-2-(2-氨基乙基氨基)-3-苯基丙酸甲酯(0.67g；1.49mmol)和三乙胺(1ml)溶于二氯甲烷(10ml)，并在室溫下攪拌48小時。然后蒸發(fā)反應(yīng)混合物，殘留物通過硅膠柱(2.5×30cm)層析，使用溶于乙醇/二氯甲烷(1∶9)中的7％氨溶液為洗脫劑，得到0.18g(3R)-3-芐基哌嗪-2-酮。1H-NMR(CDCl3):δ1.72(s(br),1H)；2.81-3.48(m,6H)；3.62(dd,1H)；6.92(s(br),
N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
將(2R)-2-(叔丁氧羰基甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(如J.R.Coggins,N.L.Benoitory,加拿大化學(xué)會志(Can.J.Chem)49,1968(1971)所述制得)(0.327g；0.995mmol)溶于二氯甲烷(10ml)。加入1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.135g；0.995mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.199g；1.042mmol)，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物10min。加入(3R)-3-芐基哌嗪-2-酮(0.180g；0.947mmol)和二異丙基乙胺(0.134g；1.042mmol)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時。用10％硫酸氫鈉(20ml)、碳酸氫鈉飽和溶液(20ml)洗滌反應(yīng)混合物，硫酸鎂干燥并真空蒸發(fā)。殘留物通過硅膠柱(2.5×25cm)層析，使用乙酸乙酯為洗脫劑，得到0.405g N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁基酯。
1H-NMR(CDCl3):δ1.12,1.25,1.28(三個單峰,9H)；2.54,2.55,2.78(三個單峰，3H)；4.07,4.42,4.65,4.79,5.01,5.30(六個多重峰；2H)；7.10-7.78(芳族氫，12H)(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，特征峰)。
(3R)-3-芐基-4-((2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)丙?；?哌嗪-2-酮
將N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(0.405g；0.808mmol)溶于二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(5ml)中，并在室溫下攪拌10min。加入水(10ml)和碳酸氫鈉至pH8。將反應(yīng)混合物用二氯甲烷(2×30ml)提取，硫酸鎂干燥并真空蒸發(fā)，得到0.302g(3R)-3-芐基-4-((2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)哌嗪-2-酮。
1H-NMR(CDCl3):δ2.19,2.28(兩個單峰,3H)；3.72,4.66(兩個dd,1H)；4.96,5.32(兩個dd,1H)(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，特征峰)。3-羥基-1,1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯
0℃下，往3-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基丁酸(2.50g,11.5mmol)(參見Schoen等人，醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)1994,vol.37,p.897-906,以及其中引用的參考文獻(xiàn))和三乙胺(1.92ml,13.8mmol)的四氫呋喃(10ml)溶液內(nèi)逐滴加入氯甲酸乙酯(1.10ml,11.5mmol)。將溶液在0℃下攪拌40min。濾出所形成的沉淀物并用四氫呋喃(20ml)洗滌。立即將液體冷卻到0℃，滴加入2M硼氫化鋰的四氫呋喃溶液(14.4ml,28.8mmol)。將溶液在0℃攪拌2h，然后在4小時內(nèi)溫?zé)岬绞覝?。隨后再冷卻到0℃，加入甲醇(5ml)。然后加入1N鹽酸(100ml)，將溶液用乙酸乙酯(2×100ml,3×50ml)提取。用碳酸氫鈉飽和溶液(100ml)洗滌合并的有機(jī)提取物，并用硫酸鎂干燥。真空除去溶劑。硅膠(110g)層析粗產(chǎn)物，用乙酸乙酯/庚烷(1∶2)洗脫，得到1.84g 3-羥基-1，1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.33(s,6H)；1.44(s,9H)；1.88(t,2H)；1.94(br,1H)；3.75(q,2H)；4.98(br,1H).
3-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-甲基丁醛
-78℃下，在草酰氯(1.1ml,12.9mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液內(nèi)加入二甲亞砜(1.22ml,17.2mmol)。將混合物在-78℃下攪拌15min，然后在15min內(nèi)滴加入3-羥基-1,1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(1.75g,8.6mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。將所得溶液在-78℃下再攪拌15min。加入三乙胺(6.0ml,43mmol)，爾后在-78℃攪拌溶液5min，然后溫?zé)嶂潦覝亍Ｈ芤河枚燃淄?100ml)稀釋并用1N鹽酸(100ml)提取。將水相用二氯甲烷(50ml)提取。合并的有機(jī)層用碳酸氫鈉飽和溶液(100ml)洗滌，并用硫酸鎂干燥。真空除去溶劑。粗產(chǎn)物通過硅膠(140g)柱色譜純化，使用乙酸乙酯/庚烷(1∶3)洗脫,得到1.10g 3-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-甲基丁醛。1H-NMR(CDCl3):δ1.39(s,6H)；1.45(s,9H)；2.85(d,2H)；4.73(br,1H)；9.80(t,1H).
(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯
將三乙基膦?；宜狨?1.96ml,9.8mmol)溶于四氫呋喃(30ml)。加入叔丁醇鉀(1.10g,9.8mmol)，并在室溫下攪拌溶液40min。然后緩慢加入3-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-甲基丁醛(1.10g,5.5mmol)的四氫呋喃(6ml)溶液，并在室溫下攪拌溶液75min。隨后用乙酸乙酯(100ml)和1N鹽酸(100ml)稀釋。分離各相.將水相用乙酸乙酯(2×50ml)提取。合并的有機(jī)層則用碳酸氫鈉飽和溶液(60ml)洗滌，爾后用硫酸鎂干燥。真空除去溶劑。粗產(chǎn)物通過硅膠(90g)柱色譜純化，使用乙酸乙酯/庚烷(1∶4)為洗脫劑，得到1.27g(2E)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.30(s,6H)；1.30(t,3H)；1.46(s,9H)；2.62(d,2H)；4.27(q,2H)；4.42(br,1H)；5.88(d,1H)；6.94(td,1H).(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸
將(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯(1.23g,4.54mmol)溶于二噁烷(20ml)。加入氫氧化鋰固體(0.12g,5.00mmol)。加水(10ml)直至獲得清亮溶液。室溫下攪拌溶液16h。然后加水(70ml)稀釋溶液，并用叔丁基甲基醚(2×100ml)提取。水相用1N硫酸氫鈉溶液(pH1)酸化，再用叔丁基甲基醚(3×70ml)提取。合并這些有機(jī)層，用硫酸鎂干燥。真空除去溶劑，得到1.05g(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸。該粗產(chǎn)物直接用于下一步合成。1H-NMR(DMSO-d6):δ1.15(s,6H)；1.35(s,9H)；2.53(d,2H)；5.75(d,1H)；6.57(br,1H)；6.75(td,1H)；12.15(s,1H)。
((3E)-4-(N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-1,1-二甲基丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯
將(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸(0.145g；0.599mmol)溶于二氯甲烷，加入1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.081g；0.599mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.126g；0.658mmol)，并攪拌反應(yīng)混合物15min。然后加入(3R)-3-芐基-4-((2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)丙酰基哌嗪-2-酮(0.24g；0.599mmol)和二異丙基乙胺(0.077g；0.599mmol)，并在室溫下攪拌反應(yīng)混合物12小時。將反應(yīng)混合物用硫酸氫鈉溶液(100ml)和碳酸氫鈉溶液(100ml)洗滌。真空蒸發(fā)有機(jī)相，殘留物通過硅膠柱(2.5×20cm)層析，使用乙酸乙酯為洗脫劑，得到0.332g((3E)-4-(N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)-甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲?；?-1,1-二甲基丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的特征峰)δ1.24(s,3H)；1.27(s,3H)；1.42(s,9H)；2.72(s,3H)；5.30(dd,1H)；5.81(dd,1H)；6.18(d,1H)；6.82(m,1H).
將((3E)-4-(N-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲?；?-1,1-二甲基丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(0.32g；0.511mmol)溶于二氯甲烷(4ml)，加入三氟乙酸(4ml)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物12min。然后加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，并加碳酸氫鈉至pH8。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)后得到0.232g標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CDCl3):δ1.14,1.15,1.22,1.23(四個單峰，6H)；4.05,4.60,4.76,5.12,5.38,5.81(六個雙二重峰，2H)；6.18,6.22(d,1H)；6.70,6.81(兩個多重峰，1H)(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，特征峰)。
ESMS:m/z 527(M+H)+HPLC(A1):rt:31.03min.實(shí)施例2(2E)-5-氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(1,1-二甲基-3-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯
將雙丙酮胺草酸氫鹽(30.0g；146mmol)懸浮在四氫呋喃(400ml)中，加入氫氧化鈉水溶液(1N；146ml)。將二碳酸二叔丁酯(38.3g；175mmol)溶于四氫呋喃(100ml)并滴加到反應(yīng)混合物內(nèi)。室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時。接著加入氫氧化鈉(1N；146ml)，室溫攪拌反應(yīng)混合物12h，然后加入水(200ml)和乙酸乙酯(200ml)。水相用乙酸乙酯(4×200ml)提取。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥并真空除去溶劑。殘留物通過硅膠柱(6×40cm)層析，使用乙酸乙酯/庚烷(1∶3)為洗脫劑，得到28.4g(1,1-二甲基-3-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,6H)；1.42(s,9H)；2.14(s,3H)；2.86(s,2H)；4.85(s,1H).
(E)-5-叔丁氧羰基氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸乙酯
將三乙基膦?；宜狨?4.7g,20.9mmol)溶于四氫呋喃(36ml)。加入叔丁醇鉀(2.3g,20.9mmol)，并在室溫下攪拌反應(yīng)混合物40min。然后將(1,1-二甲基-3-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g ；11.6mmol)溶于四氫呋喃(15ml)，并滴加到反應(yīng)混合物中，然后加熱回流12h。隨后加入乙酸乙酯(100ml)和鹽酸(1N；100ml)并分離各相。水相用乙酸乙酯(3×50ml)提取。合并的有機(jī)層則用碳酸氫鈉飽和水溶液(100ml)洗滌，爾后用硫酸鎂干燥并真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物通過硅膠柱(3×40cm)層析，使用乙酸乙酯/庚烷(1∶2)為洗脫劑，得到2.0g(E)-5-叔丁氧基羰基氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸乙酯。1H-NMR(CDCl3):δ1.25(t,3H)；1.30(s,6H)；1.44(s,9H)；2.21(s,3H)；2.58(s,2H)；4.14(q,2H)；4.48(s,1H)；5.65(s,1H).
(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸
將(E)-5-叔丁氧羰基氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸乙酯(1.95g,6.83mmol)溶于1,4-二噁烷(25ml)和水(15ml)內(nèi)。加入氫氧化鋰(0.18g,7.52mmol)并在室溫下攪拌反應(yīng)混合物12h。加入水(150ml)和叔丁基甲基醚(150ml)。水相用硫酸氫鈉水溶液(10％)稀釋至pH2.5，并用叔丁基甲基醚(3×100ml)提取。合并這些有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并真空蒸發(fā)。殘留物用庚烷(20ml)重結(jié)晶，得到0.6g(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸。1H-NMR(CDCl3)δ1.29(s,6H)；1.44(s,9H)；2.23(s,3H)；2.62(s,2H)；4.45(s,1H)；5.66(s,1H)。
采用與實(shí)施例1類似的方法，進(jìn)行剩余的合成以獲得標(biāo)題化合物。在最后偶合步驟中使用(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸代替(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-5-甲基己-2-烯酸。
1H-NMR(CDCl3)(主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的特征峰)δ1.37(s,6H)；2.09(s,2H)；2.50(s,3H)；2.78(s,3H)；4.67(dd,1H)；5.05(dd,1H)；5.89(s,1H).
ESMS:m/z 541.7(M+H)+HPLC(A1):rt:32.40min。實(shí)施例3(2E)-5-甲基-5-(甲氨基)己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
(2E)-5-(N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基)-5-甲基己-2-烯酸
將(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸(5.00g；20.6mmol)溶于四氫呋喃(70ml)。加入甲基碘(10.3ml；164mmol)，并將溶液冷卻到0℃，隨后分批加入氫化鈉(60％油中分散物)(2.07g；61.6mmol)，并將溶液在室溫下攪拌4天。然后滴加入乙酸乙酯(70ml)和水(60ml)，真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物溶于水(40ml)和乙醚(40ml)。用碳酸氫鈉飽和水溶液(30ml)洗滌有機(jī)相?；旌纤?，加入5％檸檬酸水溶液至pH 3。然后將水相用乙酸乙酯(4×50ml)提取。合并有機(jī)提取液，用水(2×40ml)、硫代硫酸鈉水溶液(5％；40ml)、水(40ml)洗滌，硫酸鎂干燥，并真空除去溶劑。將殘留物溶于乙酸乙酯(45ml)，用硫酸氫鈉水溶液(10％,3×30ml)洗滌，硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到4.00g(2E)-5-(N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基)-5-甲基己-2-烯酸。1H-NMR(CDCl3)δ1.38(s,6H),1.45(s,9H)；280(d,2H)；2.85(s,3H)；5.88(d,1H)；701(q,1H)。
類似實(shí)施例1所述，繼續(xù)進(jìn)行剩余的合成以得到標(biāo)題化合物，但在最后偶合步驟中用(2E)-5-(N-(叔丁氧羰基)-N-甲基氨基)-5-甲基己-2-烯酸替代(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸。
1H-NMR(CDCl3)(主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的特征峰)δ1.38(s,3H)；1.44(s,3H)；2.69(s,3H)；2.88(s,3H)；4.44(dd,1H)；4.52(dd,1H)；6.34(d,1H).
ESMS:m/z 541.9(M+H)+
HPLC(A1):rt:31.37min實(shí)施例4(2E)-5-甲基-5-甲基氨基已-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
該化合物采用實(shí)施例1和3中的方法制備。其中使用L-Boc-丙氨醛代替Boc-甘氨醛。
1H-NMR(CDCl3)(主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的特征峰)δ1.21(d,3H)；1.32(s,3H)；1.40(s,3H)；2.63(s,3H)；2.88(s,3H)；4.42(dd,1H)；4.60(dd,1H)；6.26(d,1H).
ESMS:m/z 555.9(M+H)+HPLC(A1):rt:32.30 min實(shí)施例5(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-(2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺
(3R)-4-叔丁氧羰基-3-芐基哌嗪-2-酮將(3R)-3-芐基哌嗪-2-酮(得自實(shí)施例1)(1.3g)溶于THF(20ml)，加入氫氧化鈉水溶液(1M,7ml)。將Boc-酐(1.8g)溶于THF(10ml)并滴加到上述混合物內(nèi)。攪拌混合物過夜。真空除去THF。加入10ml水，并用乙酸乙酯(2×50ml)提取水相。干燥(硫酸鎂)合并的有機(jī)相，并真空除去溶劑，將殘留物通過硅膠層析，使用乙酸乙酯為洗脫劑，得到750mg 3R-4-叔丁氧羰基-3-芐基哌嗪-2-酮。
1H-NMR(CDCl3)(主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ1.31(s,9H)；2.85(t,1H)；3.10(m,2H)；3.25(m,2H)；3.42(t,2H)；4.80(m,1H)；6.40(s,1H)；7.12-7.35(5個芳族H).
(3R)-4-叔丁氧羰基-1-甲基-3-芐基哌嗪-2-酮
將(3R)-4-叔丁氧羰基-3-芐基哌嗪-2-酮(參見實(shí)施例1)(400mg；1.4mmol)加到KOH(300mg；5.5mmol)和DMSO(3ml)混合物中。加入甲基碘(400mg,2.7mmol)，攪拌混合物1h。然后加入二氯甲烷(20ml)，水洗(5×10ml)有機(jī)相。真空除去溶劑，得到220mg(3R)-4-叔丁氧羰基-1-甲基-3-芐基哌嗪-2-酮。1H-NMR(CDCl3)δ1.21(s,9H)；2.97(s,3H)；4.13(dd,1H)。
類似實(shí)施例1所述，進(jìn)行剩余步驟以得到標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CDCl3)(主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的特征峰)δ1.15(s,6H)；2.30(d,2H)；2.54(s,3H)；2.74(s,3H)；4.05(dd,1H)；5.72(dd,1H)；6.19(d,1H).
ESMS:m/z 541.9(M+H)+HPLC(A1):rt:27.70min。
實(shí)施例6(2E)-5-甲基-5-氨基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺
標(biāo)題化合物采用實(shí)施例1和4中的方法制備。1H-NMR(CDCl3):δ1.09(d,3H)；1.31(s,6H)；2.74(s,3H)；5.12(dd,1H)；6.18(d,1H)。ESMS:m/z 541.7(M+H)+HPLC(A1):rt:32.12min。
實(shí)施例7
(2E)-4-(1-氨基環(huán)丁基)丁-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((2R)-3-氧代-2-((2-噻吩基)甲基)哌嗪-1-羰基)乙基)酰胺
標(biāo)題化合物采用Schoen等在醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.),1994,vol.37,p.897-906中所述的方法制備，其中使用亞甲基環(huán)丁烷代替異丁烯以及用D-噻吩丙氨酸代替D-苯基丙氨酸。1H-NMR(CDCl3):δ3.01(s,3H)；4.76(dd,1H)；5.15(t,1H)；6.34(d,1H)ESMS:m/z 546.0(M+H)+HPLC(A1):rt:31.05min。
實(shí)施例8(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((聯(lián)苯-4-基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺
標(biāo)題化合物采用實(shí)施例1中的方法制備，但使用4,4′-聯(lián)苯丙氨酸代替2-萘基丙氨酸。1H-NMR(CDCl3):δ1.18(s,6H)；2.77(s,1H)；5.31(dd,1H)；5.72(dd,1H)；6.21(dd,1H)。ESMS:m/z 554.1(M+H)+HPLC(A1):rt:34.62實(shí)施例9(2E)-4-(1-氨基環(huán)丁基)丁-2-烯酸N-((1R)-2-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺
標(biāo)題化合物采用Schoen等在醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.),1994,vol.37,p.897-906中所述的方法制備，其中使用亞甲基環(huán)丁烷取代異丁烯以及用Boc-D-丙氨醛代替Boc-甘氨醛。
1H-NMR(CDCl3)(特征峰)δ1.11(d,3H)；2.66(s,3H)；4.97(dd,1H)；5.85(dd,1H)；6.24(d,1H)；6.86(m,1H)ESMS:m/z 554.0(M+H)+HPLC(A1):rt:32.3min.
實(shí)施例10(2E)-5-甲基-5-甲基氨基己-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-1-(2-萘基)甲基-2-氧代-2-((2R)-3-氧代-2-((2-噻吩基)甲基)哌嗪-1-基)-乙基)-酰胺
標(biāo)題化合物類似實(shí)施例1所述制備,其中用D-噻吩基丙氨酸取代D-苯基丙氨酸。1H-NMR(CDCl3):δ1.38(s,3H)；1.41(s,3H)；2.65(s,3H)；2.91(s,3H)；4.47(dd,1H)；ESMS:m/z 547.0(M+H)+HPLC(A1):rt:31.15min。實(shí)施例11(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；?哌嗪-1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺
(3R)-3,4--二芐基哌嗪-2-酮
將(3R)-3-芐基哌嗪-2-酮(4.1g；21.6mmol,如實(shí)施例1所述制備)溶于甲醇(40ml)。加入苯甲醛(2.3g；21.6mmol)，接著加入4分子篩(2g)，在氮?dú)夥障聰嚢杌旌衔?/2h。加入乙酸(1.2ml)，然后在20分鐘內(nèi)分批加入氰基硼氫化鈉(2.0g；32.4mmol)。攪拌反應(yīng)混合物過夜并過濾。蒸發(fā)除去濾液中的溶劑，然后將殘留物溶于乙酸乙酯(15ml)，通過硅膠純化，使用乙酸乙酯為洗脫劑。從而得到2.6g(3R)-3,4--二芐基哌嗪-2-酮。1H-NMR(CDCl3):δ2.50(m,1H)；2.95(m,1H)；3.08(m,1H)；3.15-3.45(m,4H)；3.48(d,1H)；3.96(d,1H)；6.18(s,1H)；7.1-7.3(m,10H).(2R)-1,2-二芐基哌嗪
將(3R)-3,4-二芐基哌嗪-2-酮(2.5g；9.0mmol)的無水四氫呋喃(30ml)溶液置于氮?dú)夥罩校⒃诒±鋮s下攪拌。在15分鐘內(nèi)滴加入氫化鋁鋰(5.0ml；1.0M四氫呋喃溶液)。然后在回流溫度下加熱混合物2h，接著進(jìn)行上部冷卻。再加入另-份氫化鋁鋰(4.0ml；1.0M四氫呋喃溶液)，并回流混合物1h。冷卻混合物，然后加水和4N氫氧化鈉溶液淬火。加入乙酸乙酯(50ml)，過濾混合物。然后真空蒸發(fā)除去溶劑，得到2.0g(2R)-1,2-二芐基哌嗪。1H-NMR(CDCl3):δ2.20(m,1H)；2.55-2.82(m,7H)；3.15(dd,1H)；3.42(d,1H)；4.10(d,1H)；7.1-7.4(m,10H).(2R)-1,2-二芐基-4-甲磺?；哙?
攪拌下，在(2R)-1,2-二芐基哌嗪(2.0g；7.5mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入甲磺酰氯(0.86g；7.5mmol)，并在室溫下攪拌混合物1h。然后加入碳酸鉀(1.1g)，繼續(xù)攪拌1小時。加入二氯甲烷(20ml)和水(10ml)，分離各相。水(10ml)洗有機(jī)相，并用硫酸鎂干燥。真空蒸發(fā)溶劑，得到2.2g(2R)-1,2-二芐基-4-甲磺?；哙?。1H-NMR(CDCl3):δ2.58(m,1H)；2.72(s,3H)；2.85-3.10(m,6H)；3.27(m,1H)；3.45(m,1H)；3.72(d,1H)；3.95(m,1H)；7.1-7.4(m,10H).
(3R)-3-芐基-1-甲磺酰基哌嗪鹽酸鹽
氮?dú)夥障?，?2R)-1,2-二芐基-4-甲磺?；哙?2.2g；6.4mmol)溶于無水1,2-二氯乙烷(20ml))。將混合物置于冰浴中，加入氯甲酸α-氯乙酯(1.0g；7.04mmol)的無水1,2-二氯乙烷(10ml)溶液，保持溫度在0-5℃之間。加完之后，繼續(xù)在冰浴中攪拌15min。然后在油浴中緩慢加熱反應(yīng)混合物到90℃，并在回流溫度下加熱1h。蒸除大部分溶劑，殘留物用冰浴冷卻。加入甲醇(20ml))，并加熱回流混合物1h。冷卻混合物至室溫，緩慢加入乙醚(30ml))，再攪拌混合物30分鐘。過濾分離固體，用乙醚洗滌，干燥后得到0.78g(3R)-3-芐基-1-甲磺?；哙蝴}酸鹽。
M.p.204-208℃1H-NMR(DMSO-d6):δ2.87-3.25(m,8H)；3.35-3.65(m,4H)；7.25-7.40(m,5H).
N-[(1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺酰基哌嗪-1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
將(2R)-(叔丁氧羰基甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(0.86g；2.6mmol)溶于二氯甲烷(25ml)，并將該溶液置于氮?dú)夥罩小＜尤?3R)-3-芐基-1-甲磺?；哙蝴}酸鹽(0.75g；2.6mmol)，N-甲基嗎啉(0.26g；2.6mmol)，1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.39g；2.9mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.55g；2.9mmol)，并在室溫下攪拌混合物過夜。然后加入二氯甲烷(25ml)，水(3×15ml)洗混合物并用硫酸鎂干燥。真空蒸發(fā)溶劑，得到1.3g油狀殘留物。硅膠層析此殘留物，使用庚烷和乙酸乙酯(1∶1)混合物為洗脫劑，從而得到0.65g N-[(1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯固體。
M.p.76-80℃.
(2R)-1-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-2-甲氨基-3-(萘-2-基)丙-1-酮
攪拌下，將N-[(1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺酰基哌嗪-1-基)-(1R)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(0.63g；1.1mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，并置于氮?dú)夥罩?。加入三氟乙?10ml)，攪拌混合物15分鐘。加二氯甲烷(75ml)稀釋反應(yīng)混合物，并置于冰浴中。加入碳酸氫鈉飽和水溶液，隨后加碳酸鉀水溶液至pH10。分離各相并用二氯甲烷(50ml)提取水相。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)提取液，真空蒸發(fā)溶劑，從而得到0.51g(2R)-1-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-2-甲氨基-3-(萘-2-基)丙-1-酮固體。
M.p.165-168℃.
((3E)-4-(N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺酰基哌嗪-1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲?；?-1,1-二甲基-丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯
將(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸(0.49g；2.0mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，并置于氮?dú)夥罩?。加?-羥基-7-氮雜苯并三唑(2.0mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2.0mmol)，并攪拌混合物15分鐘。然后加入1-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-(2R)-2-甲氨基-3-萘-2-基-丙-1-酮(0.51g；1.1mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，隨后攪拌混合物過夜。加入二氯甲烷(50ml)，然后水(2×50ml)洗混合物。合并的水相用二氯甲烷(50ml)提取。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)提取液，然后真空蒸發(fā)溶劑，得到1.0g殘留物。隨后使用庚烷和乙酸乙酯(3∶7)混合物為洗脫劑硅膠層析此殘留物，從而得到0.55g((3E)-4-(N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-1,1-二甲基-丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯。
TLC∶Rf=0.33(庚烷/乙酸乙酯=3∶7)攪拌下，將((3E)-4-(N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基氨基甲?；?-1,1-二甲基-丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(0.54g；0.78mmol)溶于無水二氯甲烷(10ml)，并加入三氟乙酸(10ml)。在室溫下攪拌混合物8min后，加二氯甲烷(50ml)稀釋。將混合物置于冰浴中，先加碳酸氫鈉飽和水溶液，然后加碳酸鉀水溶液至pH為10。分離各相，并用二氯甲烷(20ml)提取水相。然后用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)提取液，并真空蒸發(fā)溶劑。得到0.33g(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺。
1H-NMR(CDCl3):δ1.17(s,3H)；1.20(s,3H)；1.8-3.65(復(fù)雜多重峰)；4.10(d,1H)；4.55+4.88(d+m,1H)；5.82+6.03(t+dd,1H)；6.28(dd,1H)；6.81+6.95(dt+dt,1H)；7.15-7.80(m,12H)。
權(quán)利要求
1.通式Ⅰ化合物或其可藥用鹽
式Ⅰ其中R1為氫，或任選被芳基取代的C1-6-烷基；a和b獨(dú)立地為1或2；c和d獨(dú)立地為0,1，或2；c+d為0,1，或2；R2、R3、R4、R6、R7、R8、R9、R10，、和R11獨(dú)立地為氫，任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的芳基，或任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的C1-6-烷基；R3和R4可一起形成=O或=S；R8和R9可一起形成=O或=S；R5為氫，
或任選被芳基、羥基、C3-6-環(huán)烷基、氨基、COOR25、-CONR26R27、-NR′R″、
或
取代的C1-6-烷基；R,R′和R″獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；R30和R31為任選被芳基、羥基、C3-6-環(huán)烷基、或氨基取代的C1-6-烷基；R22、R23、R24、R25、R26和R27獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；當(dāng)R3和R4一起形成=O或=S時，E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)0-(CH2)n-；當(dāng)R3或R4為氫，任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的芳基，或任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的C1-6-烷基時，E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-Q-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一起連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；M為-CH=CR21,-O-,-S-,或價鍵；Q為-CH=CR21-,-O-,或-S-；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；G為氫，
其中R28為氫，鹵素，C1-6-烷基，C1-6-烷氧基或芳基；r為0,1,或2；J為氫，
其中R29為氫，鹵素，C1-6-烷基，C1-6-烷氧基或芳基；t為0,1,或2。
2．通式Ⅱ化合物或其可藥用鹽
式Ⅱ其中E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一起連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；0和p獨(dú)立地為0或1；M為-CH=CR21-,-O-,-S-,或價鍵；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；和R1、R3、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G、J、a、b、c和d的定義同權(quán)利要求1中所述。
3．通式Ⅲ化合物或其可藥用鹽
式Ⅲ其中E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一起連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；M為-CH=CR21-,-O-,-S-,或價鍵；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；和R8和R9獨(dú)立地為氫,任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的芳基，或任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的C1-6-烷基；和G、J、R1、R2、R5、R6、R7、R22、R23、R24、a和b的定義同權(quán)利要求1中所述。
4．根據(jù)權(quán)利要求2-3中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽，其中R5為氫或任選被芳基、羥基、C3-6-環(huán)烷基、氨基、-COOR25、-CONR26R27、-NR′R″、
或
取代的C1-6-烷基；R、R′和R″獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；R25、R26、和R27獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；和R1、R2、R3、R4、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E、G、J、a、b、c和d的定義同前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述。
5．根據(jù)權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽，其中E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或甲基；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；M為-CH=CR21-,-O-,或價鍵；R21為氫，甲基或芐基；和R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G、J、a、b、c和d的定義同前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述。
6．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽，其中R3和R4獨(dú)立地為氫，任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的芳基，或任選被鹵素、氨基、C3-6-環(huán)烷基、羥基、芳基、-COOR22、或-CONR23R24取代的C1-6-烷基；和R22、R23和R24獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-Q-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一起連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；Q為-CH=CR21-,-O-,或-S-；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；和R1、R2、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G、J、a、b、c和d的定義同權(quán)利要求1中所述。
7．通式Ⅳ化合物或其可藥用鹽
式Ⅳ其中E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-Q-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一起連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；Q為-CH=CR21-,-O-,或-S-；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；和R1、R5、R6、G、J、a和b的定義同權(quán)利要求1中所述。
8．通式Ⅴ化合物或其可藥用鹽
式Ⅴ其中E為
或R17·NH-(CR18R19)p-(CH2)m-M-(CHR20)o-(CH2)n-；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、和R20獨(dú)立地為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R17、R18、和R19中的任何兩個可獨(dú)立地一起連接成C1-6-亞烷基橋；n,m和q獨(dú)立地為0,1,2,或3；o和p獨(dú)立地為0或1；M為-CH=CR21-,-O-,-S-,或價鍵；R21為氫或任選被鹵素、氨基、羥基或芳基取代的C1-6-烷基；R5為氫或任選被芳基、羥基、C3-6-環(huán)烷基、氨基、-COOR25、-CONR26R27、-NR′R″、
或
取代的C1-6-烷基；R、R′和R″獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；R25、R26、和R27獨(dú)立地為氫或C1-6-烷基；和G、J、a、b、R1和R6的定義同權(quán)利要求1中所述。
9．根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽，其中R1為氫或甲基。
10．根據(jù)權(quán)利要求1-8或9的化合物，所述化合物選自(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-4-(環(huán)丙基甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-(2R,5R)-2-芐基-5-(羥甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代-1,4-二氮雜庚環(huán)-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，哌啶-4-羧酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-(2R)-2-((2-萘基)甲基)-3-氧代哌嗪-1-羰基)乙基)酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-4-(二甲基氨基甲?；谆?-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-甲基-5-(甲氨基)己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,6S)-2-芐基-6-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(聯(lián)苯-4-基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-(2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-(2R)-2-芐基-4-甲磺酰基哌嗪-1-羰基)-2-芐氧基乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-3,5-二甲基己-2-烯酸N-((1R)-1-(2R)-2-芐基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-甲基-5-甲基氨基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-甲基-5-氨基己-2-烯酸N-((1R)-1-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-4-(1-氨基環(huán)丁基)丁-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((2R)-3-氧代-2-((2-噻吩基)甲基)哌嗪-1-羰基)乙基)酰胺，(2E)-4-(1-氨基環(huán)丁基)丁-2-烯酸N-((1R)-2-((2R,5R)-2-芐基-5-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基酰胺，(2E)-5-甲基-5-甲基氨基-己-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-1-(2-萘基)甲基-2-氧代-2-((2R)-3-氧代-2-((2-噻吩基)甲基)哌嗪-1-基)乙基)-酰胺，(2E)-5-氨基-5-甲基-己-2-烯酸N-((1R)-2-((2R)-2-芐基-4-甲磺?；哙?1-基)-1-(萘-2-基甲基)-2-氧代乙基)-N-甲基-酰胺，或它們的可藥用鹽。
11．一種藥物組合物，該組合物包括作為活性成分的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽，以及可藥用載體或稀釋劑。
12．根據(jù)權(quán)利要求11的組合物，該組合物為單位劑量形式，其中包括大約10-大約200mg權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽。
13．一種用于刺激垂體釋放生長激素的藥物組合物，該組合物包括作為活性成分的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽，以及可藥用載體或稀釋劑。
14．一種施用于動物以提高生長速度和程度、增加它們產(chǎn)乳量和產(chǎn)毛量、或治療疾病的藥物組合物，該組合物包括作為活性成分的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽，以及可藥用載體或稀釋劑。
15．根據(jù)權(quán)利要求11-14中任一項(xiàng)的藥物組合物，所述組合物供口服、經(jīng)鼻、經(jīng)皮，經(jīng)肺、或胃腸外途徑施用。
16．一種刺激垂體釋放生長激素的方法，該方法包括對需要這種刺激的受治療者施用有效量的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽或權(quán)利要求11-13或15中任一項(xiàng)的組合物。
17．根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽或酯的有效量在大約0.0001-大約100mg/kg體重/天范圍內(nèi)，優(yōu)選大約0.001-大約50mg/kg體重/天。
18．一種用于增加動物生長速度和程度以增加它們的產(chǎn)乳量和產(chǎn)毛量、或用于治療疾病的方法，該方法包括對需要這種增加或治療的受治療者施用有效量的權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽或權(quán)利要求11,12,14或15中任一項(xiàng)的組合物。
19．根據(jù)權(quán)利要求16-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述施用通過口服、經(jīng)鼻、經(jīng)皮、經(jīng)肺或胃腸外途徑完成。
20．權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽在制備藥物中的應(yīng)用。
21．權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽在制備用于刺激垂體釋放生長激素的藥物中的應(yīng)用。
22．權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽在制備供施用于動物以提高生長速度和程度以增加它們的產(chǎn)乳量和產(chǎn)毛量、或治療疾病的藥物中的應(yīng)用。
23．權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽在制備用于下列用途的藥物中的應(yīng)用治療老年人體內(nèi)生長激素釋放激發(fā)病癥；預(yù)防糖皮質(zhì)激素的代謝副作用，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松，刺激免疫系統(tǒng)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，加快骨折的恢復(fù)，治療生長停滯，治療因生長停滯所致的腎衰竭或腎功能不全，治療包括生長激素缺乏的兒童和因慢性病造成的身材矮小在內(nèi)的生理性身材矮小，治療肥胖癥和與肥胖有關(guān)的生長停滯，治療與普-威綜合癥和特納氏綜合癥有關(guān)的生長停滯；加速燒傷患者的恢復(fù)并縮短住院治療時間；治療子宮生長停滯，骨骼發(fā)育異常，腎上腺皮質(zhì)激素亢進(jìn)和柯興氏癥；誘導(dǎo)脈沖式生長激素釋放；恢復(fù)緊張患者的生長激素，治療骨軟骨發(fā)育不良，努南綜合癥，精神分裂癥，抑郁癥，早老性癡呆病，延遲的創(chuàng)傷愈合和精神失常，治療肺機(jī)能障礙和呼吸機(jī)依賴癥，減輕大手術(shù)后的蛋白質(zhì)代謝反應(yīng)，減輕由慢性病如癌癥或AIDS引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)減少；治療胰島素過多癥，包括胰島細(xì)胞增殖癥，用于排卵誘導(dǎo)的佐劑治療；刺激胸腺發(fā)育并防止與年齡有關(guān)的胸腺機(jī)能下降，治療免疫抑制患者，改善肌肉強(qiáng)度和肌肉活動性，保持皮膚厚度，代謝的體內(nèi)平衡，虛弱老人的腎內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，激活成骨細(xì)胞，骨重塑和軟骨生長，刺激伴生動物的免疫系統(tǒng)并治療伴生動物的衰老病癥，牲畜的生長促進(jìn)劑和促進(jìn)綿羊的羊毛生長。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的通式(Ⅰ)化合物,這種化合物可用于治療因生長激素缺乏所致的醫(yī)學(xué)病癥。
文檔編號A61K31/55GK1216537SQ9719405
公開日1999年5月12日 申請日期1997年4月24日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月24日
發(fā)明者T·K·漢森, B·佩什克, K·E·安德森 申請人:諾沃挪第克公司