專利名稱：口服乙肝抗原特異性免疫因子及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種采用乙肝疫苗免疫過的、HBsAb陽性(乙肝表面抗體陽性)的機體外周血單個核細胞，體外經(jīng)復(fù)合淋巴因子活化后，經(jīng)特殊方法獲得帶有乙肝抗原免疫記憶的小分子活性肽。該肽類通過口服給藥途徑能將乙肝抗原特異性免疫活性轉(zhuǎn)移給受體，激活機體自身的免疫系統(tǒng)，達到清除HBVDNA(乙肝病毒分子)的目的。
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的傳染病，該病為嚴重危害我國人民健康的疾病之一，在我國該病毒的攜帶者近2億人，肝硬化及肝癌患者中90%為乙肝患者。因此，尋找治療乙型肝炎(HBV)的有效方法一直為醫(yī)學(xué)界的攻關(guān)課題。
有研究表明，乙型肝炎患者外周血淋巴細胞的IL-2產(chǎn)生能力及外源性IL-2作用下的增殖能力均顯著低于正常人群。目前認為這可能與患者外周血產(chǎn)生IL-2的細胞數(shù)量減少所致。OKT4細胞是IL-2主要產(chǎn)生細胞，而乙型肝炎患者OKT4細胞數(shù)目減少。乙型肝炎患者的細胞免疫功能在破壞受感染的肝細胞和清除病毒中起重要作用，CTL能選擇性地殺傷表達HBcAg的肝細胞。NK細胞在抗御HBV感染中亦有一定作用。細胞免疫殺傷受感染的肝細胞除通過直接細胞毒作用外，還通過淋巴因子。乙型肝炎患者IL-2活性降低可導(dǎo)致上述細胞免疫功能低下，使機體不能有效地清除受感染的并有病毒復(fù)制的肝細胞，從而造成患者的慢性感染狀態(tài)。Onji 1987年用IL-2治療CAH，經(jīng)治療后患者細胞免疫功能明顯增強，部分患者HBsAg和HBeAg消失，出現(xiàn)HBeAg和HBeAg，證實IL-2能促進機體對HBV產(chǎn)生應(yīng)答以溶解受感染的肝細胞外，還能降低DNA-P的活性，抑制HBV復(fù)制。Kakuma1988年用IL-2治療20例CAH患者也取得了良好的效果。
曾有報道，血清抗乙型肝炎病毒抗體陽性的外周血淋巴細胞殺傷乙型肝炎病毒感染的靶細胞的能力明顯高于抗體陰性者。隨后又有報道，乙肝病毒抗體陽性者的血清可以增加抗體陰性者淋巴細胞殺傷乙肝病毒細胞的能力。因此我們用乙肝疫苗免疫機體，HBsAb陽性者，抽取外周血，培養(yǎng)對乙型肝炎病毒具有免疫力的特異性T細胞，擴增后經(jīng)粉碎等復(fù)雜的提取工藝，制成乙肝抗原特異性免疫活性肽。該免疫活性肽經(jīng)乙肝患者口服后，能傳遞或轉(zhuǎn)移對乙肝抗原特異的細胞免疫效應(yīng)，加強受體非抗原依賴性效應(yīng)，激活機體自身的免疫系統(tǒng)，提高內(nèi)源性免疫，使患者抗病毒免疫力(內(nèi)源及外源)顯著增強，達到清除HBV及HBV感染細胞的作用。使患者HBsAg、HBeAg、HBeAg轉(zhuǎn)陰，達到治愈的目的。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下依照本發(fā)明制備的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”，是采用乙肝疫苗免疫過的、HBsAb(乙肝表面抗體)陽性的機體外周血單個核細胞，體外經(jīng)復(fù)合淋巴因子活化后，經(jīng)過生物酶化處理后獲得帶有乙肝抗原免疫記憶的小分子活性肽，然后加入右旋糖酐、甘露醇和乳糖，制成干燥顆粒后，裝于醫(yī)用膠囊或制成片劑，然后裝瓶。
依照本發(fā)明制備的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”的方法是采用乙肝疫苗免疫過的、HBsAb(乙肝表面抗體)陽性的機體外周血單個核細胞，體外經(jīng)復(fù)合淋巴因子活化后，經(jīng)倒置顯微鏡觀察細胞數(shù)量，及經(jīng)過一系列檢測，證明細胞的活性及數(shù)量符合要求后，按每單位13的比例加入三蒸水或0.95%的生理鹽水，然后加入中性蛋白酶或胃蛋白酶進行消化沉淀，按每單位加入0.5%的正辛醇10滴左右;將所得混合物置于超聲粉碎機內(nèi)，在4℃環(huán)境條件下，超聲粉碎1～1.5小時，使細胞裂解;然后在4℃左右環(huán)境中。用離心機在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘棄沉淀物，取上清物;再在所取的上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶于25℃的環(huán)境條件下，在PH值為7.6含鈣的環(huán)境中裂解;將裂解物置于4℃環(huán)境中，用10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速進行離心30分鐘，取上清物，棄沉淀。再用10000分子量的超濾膜進行超濾，再將超濾所得物置于90℃環(huán)境中變性60分鐘，再加輔型劑，除菌、干燥。干燥后所得即為乙肝抗原特異性免疫因子粉末，將其裝于醫(yī)用口服膠囊或制成片劑，裝瓶。室溫保存仍具有穩(wěn)定性和生物活性，可保存1～2年。
本發(fā)明的優(yōu)點在于依照本發(fā)明的制備方法制得的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”能有效的防止胃酸和胃蛋白酶的水解，通過人體的胃、腸進入血液，將表達乙型肝炎表面抗體陽性的免疫信息傳遞給受體，激活人體的免疫系統(tǒng)，使乙肝病人的乙肝表面抗原與抗體結(jié)合，使其結(jié)合成為較大分子的免疫復(fù)合體，在人體的巨嗜細胞的作用下，將其消化吞噬，達到治療乙型肝炎的目的。
權(quán)利要求
1.一種治療乙型肝炎的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”，其特征在于它由經(jīng)乙肝疫苗免疫過的、HBsAb(乙肝表面抗體)陽性的機體外周血單個核細胞、右旋糖酐、甘露醇和乳糖組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”的制備方法，其特征在于(1)取經(jīng)乙肝疫苗免疫過的、HBsAb(乙肝表面抗體)陽性的機體外周血單個核細胞，體外經(jīng)復(fù)合淋巴因子活化后，按每單位的比例加入13比例的三蒸水或0.95%生理鹽水，中性蛋白酶或胃蛋白酶，消化沉淀;(2)在(1)的沉淀物中每單位加入0.5%的正辛醇10滴左右，將所得混合物置于超聲粉碎機內(nèi)，在4℃環(huán)境條件下，超聲粉碎1～1.5小時，使細胞裂解;(3)將(2)所得物在4℃左右環(huán)境中，用離心機在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，棄沉淀物，取上清物;(4)在(3)所得物上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶于25℃的環(huán)境條件下，在PH值為7.6含鈣的環(huán)境中裂解;(5)將(4)所得裂解物置于4℃環(huán)境中，用10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速進行離心30分鐘取上清物，棄沉淀。(6)將(5)所得物用10000分子量的超濾膜進行超濾，再將超濾所得物置于90℃環(huán)境中變性90分鐘;(7)將(6)所得物再加輔型劑，除菌、干燥、裝膠囊或制成片劑，裝瓶。
全文摘要
一種用于治療乙肝的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”，是利用生物酶分離方法從經(jīng)乙肝疫苗免疫過的、HBsAb(乙肝表面抗體)陽性的機體外周血單個核細胞，體外經(jīng)復(fù)合淋巴因子活化、擴增后再經(jīng)一系列特殊方法制備的傳遞特殊的免疫信息的小分子肽類。該“口服乙肝抗原特異性免疫因子”由經(jīng)乙肝疫苗免疫過的、HBsAb(乙肝表面抗體)陽性的機體外周血單個核細胞、右旋糖酐、甘露醇和乳糖組成，其制備方法包括消化沉淀→超聲粉碎→裂解→離心→裂解→離心→超濾→賦型→干燥等制備過程，制得的“口服乙肝抗原特異性免疫因子”對乙肝病毒有清除和殺滅的作用。
文檔編號A61K39/395GK1112445SQ9410606
公開日1995年11月29日 申請日期1994年5月27日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月27日
發(fā)明者徐飛 申請人:徐飛