專利名稱：一種具有抑制單胺氧化酶b功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床的應(yīng)用的制作方法
—種具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域由紅曲與淫羊藿組成的具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)元退行性疾病是威脅人類健康的一大類疾病，包括阿爾采默茨病、帕金森病等。其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一直是神經(jīng)科學(xué)研究的重點。單胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO),是ー種線粒體膜復(fù)合酶,可在大腦和周圍神經(jīng)組織中催化ー些生物體產(chǎn)生的胺，氧化脫氨產(chǎn)生過氧化氫.根據(jù)底物選擇性和對抑制劑的靈敏度，單胺氧化酶被分為A和B兩種。單胺氧化酶A對底物血清素(5-HT)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)和抑制劑clorgyline具有高親和性；而單胺氧化酶B則對苯こ基胺(PEA)、苯甲胺和抑制劑cbprenyl具有高親和性.單胺氧化酶B活力的變化則與帕金森氏綜合癥有夫，已證明在老年人神經(jīng)組織內(nèi)單胺氧化酶B水平升高3倍，阿爾采默茨病(AD)患者單胺氧化酶B活性比正常者高，患者腦組織內(nèi)單胺氧化酶A和單胺氧化酶B的mRNA水平也明顯升高，單胺氧化酶抑制劑是ー類由于單胺氧化酶活性過高導(dǎo)致的疾病如抑郁癥，帕金森病和老年性 癡呆等疾病具有預(yù)防和治療作用的藥物，如治療抑郁癥的苯こ肼、異唑肼、異丙肼、苯環(huán)丙胺、嗎氯貝胺、溴法羅明、尼亞拉胺、托洛沙酮、德弗羅沙酮，治療帕金森病藥司立吉蘭，治療高血壓的優(yōu)降寧，抗菌藥物呋喃唑酮、灰黃霉素、異煙肼，抗腫瘤藥物甲基芐肼，復(fù)方藥物益康寧等。這些藥物在臨床應(yīng)用多年，取得一定的療效，但對老年性神經(jīng)元退行性疾病如阿爾采默茨病、帕金森病和抑郁癥的治療還是存在許多困難，主要是這些藥物長期服用均有一些較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，影響這些疾病的治療，目前急需尋找ー些副作用少的，可以長期服用的保健食品，或藥品，解決這些疾病的治療難題。紅曲源于中國，至今已有一千多年的應(yīng)用歷史，是我國傳統(tǒng)的食藥雙效的發(fā)酵產(chǎn)品，古往今來一直被廣泛應(yīng)用于食品著色、釀酒、發(fā)酵食品生產(chǎn)、中藥等各個領(lǐng)域。紅曲最早的藥用記錄為元代的《日用本草》，“破血行藥勢，殺山嵐瘴氣，治打撲傷損”。紅曲味甘，性平，無毒，歸脾、胃、肝、大腸經(jīng)，明代李時珍在《本草綱目》評價它說“此乃人窺造化之巧者也”，“奇藥也”。紅曲為曲霉科真菌紫色紅曲霉Monascus purpureus Went菌絲體及孢子,經(jīng)人工培養(yǎng)使菌絲在粳米內(nèi)部生長，最終整個米粒變?yōu)榧t色所得的制品。近年研究發(fā)現(xiàn)紅曲中含有紅曲色素、紅曲多糖、洛伐他汀、麥角留醇、Y-氨基丁酸、生物黃酮、皂苷、膳食纖維、氨基多糖、輔酶QlO等豐富的生理活性物質(zhì)，1998年，日本學(xué)者證實從紅曲中提取的一系列香豆素衍生物(Monankarins A-D)具有小鼠腦組織MAO B活性抑制作用。紅曲發(fā)酵液提取天然紅色素后剰余的紅曲酶菌絲體，經(jīng)檢測其中脂肪酸組成以不飽和脂肪酸為主(70% )，人體必需脂肪酸亞油酸、亞麻酸的含量占總脂肪的30%以上，可調(diào)節(jié)人體血脂平衡和減少氧化型低密度脂蛋白產(chǎn)生，有效地阻斷氧化應(yīng)激反應(yīng)和心血管疾病的誘發(fā)因素。此外，紅曲菌絲體中豐富的蛋白質(zhì)和水溶性多糖可作為能源物質(zhì)，其中的多糖類物質(zhì)在免疫調(diào)節(jié)及抗氧化、抗衰老的作用等方面都表現(xiàn)出生物活性?，F(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿提取物能顯著抑制利血平拮抗模型小鼠腦及肝臟的ΜΑ0_Α和ΜΑ0_Β活性，淫羊藿苷可以顯著縮短小鼠強(qiáng)迫游泳實驗和懸尾實驗的不動時間，并逆轉(zhuǎn)由于強(qiáng)迫游泳實驗所致的小鼠腦組織ΜΑ0_Α和MAO_B的活性升高，提示淫羊藿提取物有可能通過抑制MAO活性，減少單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝，提高腦組織神經(jīng)遞質(zhì)水平達(dá)到抗抑郁作用。鑒于淫羊藿抗抑郁樣作用，紅曲菌絲體調(diào)節(jié)血脂、抗氧化及其潛在香豆素衍生物的嫩0_8抑制作用，將兩藥組成一組具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品或藥品。用于預(yù)防可治療由于單胺氧化酶B活性升高導(dǎo)致的相關(guān)疾病，就是本發(fā)明的主要目的。發(fā)明內(nèi)容取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，剩下的紅曲菌絲體，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍體積70%乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2 X Ih)，過濾，濾渣再用10倍體積40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，蒸干，制成可供臨床應(yīng)用的保健食品和藥品，這些產(chǎn)品經(jīng)實驗研究，證明對單胺氧化酶B的活性有明顯的抑制作用，可以用來制備抑制單胺氧化酶B活性的保健食品和藥品，作為單胺氧化酶B抑制劑用于預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病。本發(fā)明提出，可取這些天然紅曲和淫羊藿提取物按常規(guī)的藥品生產(chǎn)規(guī)范制成可供臨床應(yīng)用的產(chǎn)品形式，如片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑。這些天然紅曲提取物還可做成餅干、飲料等保健食品應(yīng)用，其中這些天然紅曲提取物作為保健食品餅干的添加量為5 30% ;作為飲料的添加量為I 15%。
實施例一紅藿制劑對動脈硬化小鼠腦組織單胺氧化酶_B活性的影響I材料和方法I. I藥物配制與試劑紅藿制劑的生產(chǎn)方法取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，剩下的紅曲菌絲體，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍體積70%乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2Xlh)，過濾，濾渣再用10倍體積40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，配成實驗用的紅藿制劑，供實驗應(yīng)用，另按同樣工藝配置不含紅曲的淫羊藿對照制劑組和不含淫羊藿的紅曲菌絲體對照制劑組，同時選取血脂康膠囊(北京北大維信生物科技有限公司)作為陽性對照組，采用人與小鼠的體表面積換算，按成人每次服用兩粒血脂康膠囊和小鼠灌胃量為5ml/(kg d)，即取一粒血脂康膠囊溶于19. 2ml蒸餾水配制成血脂康藥液。實驗用動物油則購買新鮮豬腸油煉制。單胺氧化酶_B測定試劑盒和組織蛋白定量測試盒均購于南京建成生物工程研究所。I. 2實驗儀器貝利微粉機(jī)、BiotekSynergy 2 酶標(biāo)儀、Synthetic QuarZ Glass 酶標(biāo)板I. 3動物分組與給藥方案SPF級KM雄性小鼠60只(購于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心)，醫(yī)學(xué)實驗動物許可證號SCXK (粵)2008-0002，體重(35 40) g，按體重隨機(jī)分成正常組、維生素D3+動物油模型組、血脂康組、紅曲菌絲體組、淫羊藿組、紅藿制劑組，每組10只。除正常組小鼠給予等量生理鹽水做平行對照外，其余小鼠均在實驗第I 4天灌胃給予300，OOOIU/(kg d)維生素D3注射液，第5天開始上午灌胃給予動物油造模，下午4個藥物組給予相應(yīng)藥液，模型組則給予等量生理鹽水，灌胃量均為5ml/(kg d)，每周根據(jù)小鼠體重變化調(diào)整灌胃量。I. 4指標(biāo)檢測實驗六周后處死小鼠，迅速取腦、稱重，并計算腦指數(shù)腦指數(shù)=腦重(mg)/體重(g)。按胺氧化__B測定試劑盒說明書的方法，以預(yù)冷的生理鹽水制備腦組織勻漿用于MAO_B的活性測定，以正常組MAO_B活性為100%，計算各組MAO_B相對活性。I. 5統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)以i±s表示，采用SPSS 16. O統(tǒng)計軟件中的單因素方差分析(One-WayAN0VA)進(jìn)行檢驗,方差齊米用Bonferroni檢驗；方差不齊則米用Tajnhane’ s T2檢驗，以P
<O. 05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 2 結(jié)果2. I各組小鼠體重隨時間變化情況除正常組小鼠體重隨時間逐漸增加外，第I周模型組和4個藥物組小鼠體重急劇降低，第2周開始體重迅速増加，其中紅藿制劑組與正常組體重變化趨勢基本一致，其余四組體重變化趨勢基本一致，第5周時體重基本達(dá)到正常水平，第I 5周各時間點小鼠體重高低為正常組>模型組>紅曲菌絲體組>血脂康組>淫羊藿組。第6周實驗結(jié)束時各組小鼠體重與正常組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，模型組和紅曲菌絲體組有超過正常組的趨勢，而血脂康組合淫羊藿組則維持在較低體重水平。2. 2各組小鼠腦指數(shù)和腦組織單胺氧化酶_B活性表I各組小鼠腦指數(shù)與腦組織ΜΑ0_Β活性比較G 土 s, η = 8)
μαο_β活性酶相對活性
組別腦指數(shù)
(U/mgprot)(%)
正常組5.96 土 1.0030,22土 2.46100
模型組6.15±0.4445.16±5.26a149.44
血脂康組7.30±0.33αδ43.31±5.16α143.32
紅曲菌絲體組6.40±0.4248.3丨±9.6丨159.86
淫羊藿組7.28±0.69αλ46.77±6.40α154.77
紅藿制劑組6.61±0.7829.65±2.46*δ98.11注與止常組比較，aP < O. 05 ;與模型組相比較，ΛΡ < O. 05 ;與血脂康組比較，*Ρ
<O. 05。如表I所示，與正常組和模型組相比，血脂康組和淫羊藿組小鼠腦指數(shù)均增高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05)，紅曲菌絲體組和紅藿組腦指數(shù)雖有增高的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與正常組相比，模型組、血脂康組和淫羊藿組小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性升高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05);與模型組和血脂康組相比，紅藿制劑組小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性降低，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P < O. 05)。各組ΜΑ0_Β相對活性高低為紅曲菌絲體組>淫羊藿組>模型組>血脂康組>正常組>紅藿制劑組。3 討論結(jié)合體重和臟器指數(shù)的變化可反映動物機(jī)體中毒效應(yīng)和判斷藥物作用靶器官的毒性綜合情況，本實驗結(jié)果顯示，除正常組小鼠體重隨時間逐漸增加外，其余小鼠第I周出現(xiàn)精神萎靡、肌張力下降、腹瀉、嗜睡、體重急劇下降等急性維生素D3中毒癥狀。隨著中毒癥狀的緩解、動物油脂的攝入增加和藥物的干預(yù)，從第2周開始體重變化大致可分為3類紅藿制劑組體重變化趨勢與正常組基本一致，提示該復(fù)方能夠快速恢復(fù)小鼠各項生理功能和調(diào)節(jié)體內(nèi)脂肪平衡；模型組、紅曲菌絲體組、血脂康組、淫羊藿組小鼠體重則呈直線增加，增幅大于正常組和紅藿制劑組，；第五周開始模型組和紅曲菌絲體組體重超過正常水平，并有繼續(xù)增加的趨勢，而血脂康組和淫羊藿組則一直維持在正常水平之下，推測血脂康和淫羊藿比紅曲菌絲體在維持正常體重方面更有優(yōu)勢。組織器官萎縮及其功能逐漸衰退是衰老的重要表現(xiàn)，尤以腦組織的變化最為顯著，血脂康組和淫羊藿組小鼠雖一直維持較低體重，但腦指數(shù)較正常組和模型組高，表明血脂康和淫羊藿有延緩腦衰老的作用。就理論而言，腦組織富含不飽和脂肪酸，需要利用大量氧來產(chǎn)生能量，因此容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，加之腦組織與其他器官相比相對缺乏抗氧化酶系統(tǒng)，因此腦組織是活性氧自由基的易損部位。腦組織MA0_B異常升高會導(dǎo)致兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)氧化失活，生成大量活性氧自由基導(dǎo)致氧化應(yīng)激，而氧化應(yīng)激是神經(jīng)退行性疾病和血管疾病的發(fā)病機(jī)理。自由基學(xué)說認(rèn)為，衰老與氧化-抗氧化的失衡有一定關(guān)系，氧化劑增多會加速生物分子 的氧化損傷，會引發(fā)神經(jīng)生化和神經(jīng)內(nèi)分泌功能紊亂，從而導(dǎo)致腦生理功能的退化、行為異常，出現(xiàn)憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆，故MA0_B的活性可作為評價腦衰老的一個重要指標(biāo)。本實驗聯(lián)合運用300，OOOIU/ (kg d)維生素D3和動物油誘導(dǎo)小鼠動脈硬化，實驗6周后模型小鼠腦組織MA0_BS性較正常組顯著升高(P < 0. 05)，提示MA0_B參與腦血管硬化的病變過程并加快小鼠腦衰老的趨勢。實驗結(jié)果的另一個重要提示，超生理劑量維生素D3引起的MA0_B活性的升高會導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的氧化損傷。維生素D3與VitD受體形成受體一配體復(fù)合物之后方可發(fā)揮藥理作用，而VitD受體廣泛分布于體內(nèi)多個組織器官，動脈硬化小鼠腦組織MA0_BS性升高的原因可能是超生理劑量的維生素D3上調(diào)細(xì)胞Vit D受體使細(xì)胞攝鈣能力，細(xì)胞鈣超載導(dǎo)致線粒體損傷；由于動脈硬化，腦血管狹窄和微血栓形成，腦組織易發(fā)生缺血缺氧，此時細(xì)胞能量耗竭，膜泵功能降低，細(xì)胞膜內(nèi)外離子失衡導(dǎo)致細(xì)胞線粒體功能障礙，線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損必定會導(dǎo)致MA0_B活性異常變化；高脂飲食所致高膽固醇血癥是氧化應(yīng)激和DNA損傷的誘導(dǎo)因素，加之動脈硬化時腦缺血缺氧產(chǎn)生的氧化應(yīng)激效應(yīng)，腦組織中H2O2的大量積累誘使MA0_B活性升高。已有實驗證明血脂康膠囊具有使高血脂癥大鼠血清SOD水平升高，MDA水平降低而表現(xiàn)抗氧化作用，此外對腦缺血-再灌注的模型大鼠有腦缺血保護(hù)作用。血脂康組小鼠腦MA0_BS性高于正常組(P<0. 05)，但與模型組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明血脂康并非通過抑制腦MA0_B的活性起抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用。淫羊藿提取物(含淫羊藿總黃酮和淫羊藿苷)能顯著抑制利血平拮抗模型小鼠腦及肝臟的MA0_A和MA0_B活性，提示淫羊藿提取物有可能通過抑制MAO活性，減少單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝，提高腦組織神經(jīng)遞質(zhì)水平達(dá)到抗抑郁作用。本實驗中淫羊藿提取物對MA0_B活性的影響與血脂康組相似，無法逆轉(zhuǎn)動脈硬化小鼠MA0_B活性升高的作用。紅曲菌絲體是提取了紅色素之后的物質(zhì)，以不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)和水溶性多糖為主要成分，實驗顯示雖有升高正常小鼠的腦MA0_B活性的趨勢(P = 0. 07)，但與模型組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，推測紅曲菌絲體提取物中不含或僅含微量的MonankarinsA-D，故無顯著的MAO_B抑制作用。上述結(jié)果顯示，動脈硬化小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性顯著升高，但血脂庚、淫羊藿、紅曲菌絲體單方均無法逆轉(zhuǎn)這種作用，而紅曲菌絲體+淫羊藿復(fù)方(紅藿制劑)可使模型小鼠腦組織ΜΑ0_Β活性降至正常水平，與模型組和血脂康相比具有顯著差異，提示該復(fù)方具有延緩腦衰老和預(yù)防神經(jīng)退行性病變的作用，可作為單胺氧化酶B抑制劑用于預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病。由紅曲菌絲體與淫羊藿組成的紅藿制劑對單胺氧化酶B的活性有明顯的抑制作用，可以用來制備抑制單胺氧化酶B活性的保健食品和藥品，作為單胺氧化酶B抑制劑用于 預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病?？扇∵@些天然紅曲和淫羊藿提取物按常規(guī)的藥品生產(chǎn)規(guī)范制成可供臨床應(yīng)用的產(chǎn)品形式，如片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑。這些天然紅曲和淫羊藿提取物還可做成餅干、飲料等保健食品應(yīng)用，其中這些天然紅曲和淫羊藿提取物作為保健食品餅干的添加量為5 30% ;作為飲料的添加量為I 15%。
權(quán)利要求
1.一種由紅曲與淫羊藿組成的具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法及其在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的由紅曲與淫羊藿組成的具有抑制單胺氧化酶B功能的保健食品和藥品的生產(chǎn)方法，其特征為該生產(chǎn)方法是取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，剩下的紅曲菌絲體，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用10倍體積70 %乙醇浸泡24h，85°C回流提取(2 Xlh)，過濾，濾渣再用10倍體積40%乙醇浸泡24h，回流提取(I X Ih)，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，制成可供臨床應(yīng)用的保健食品和藥品。
3.如權(quán)利要求I所述的紅曲與淫羊藿組成的單胺氧化酶B抑制劑的生產(chǎn)方法及在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用，產(chǎn)品形式為片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑。
4.如權(quán)利要求I所述的紅曲與淫羊藿組成的單胺氧化酶抑制劑B的生產(chǎn)方法及在臨床預(yù)防和治療抑郁癥，老年性癡呆和帕金森氏綜合癥的應(yīng)用，其中作為預(yù)防應(yīng)用的產(chǎn)品形式為餅干、飲料。
全文摘要
取天然紅曲經(jīng)乙醇提取紅色素后，烤干，微粉化后，加入等量的淫羊藿，用乙醇浸泡，回流提取，過濾，濾渣再用乙醇浸泡24h，回流提取，過濾，合并3次濾液，減壓濃縮，制成可供臨床應(yīng)用的具有抑制單胺氧化酶B功能保健食品和藥品，這些產(chǎn)品經(jīng)實驗研究，證明對單胺氧化酶B的活性有明顯的抑制作用，可以作為單胺氧化酶B抑制劑用于預(yù)防和治療憂郁癥，帕金森氏病和老年性癡呆等疾病。
文檔編號A61K36/296GK102813692SQ20121018321
公開日2012年12月12日 申請日期2012年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月24日
發(fā)明者吳鐵, 謝愛媚, 崔燎, 司徒永立, 盧旱云 申請人:廣東醫(yī)學(xué)院, 湛江廣醫(yī)醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司