專利名稱：螺旋藻多糖在制備防治有機磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及涉及螺旋藻多糖的應用，具體涉及螺旋藻多糖在制備預防與治療因有機磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應用。
背景技術：
有機磷農(nóng)藥(OPs)是一類高效、低殘留的農(nóng)藥，已經(jīng)成為當今中國使用的最廣譜農(nóng)藥。有機磷農(nóng)藥的使用為農(nóng)、林、漁業(yè)的增產(chǎn)豐收立下了汗馬功勞，但隨著有機磷農(nóng)藥的廣泛使用，其在蔬菜水果等食物中的殘留現(xiàn)象也較為普遍。雖然大多數(shù)人已經(jīng)注意預防有機磷農(nóng)藥的急性中中毒，但有機磷農(nóng)藥的長期、低劑量、慢性暴露對人類健康的影響，尤其是對男性生殖力影響，還未引起人們的足夠重視。有機磷農(nóng)藥具有生殖毒性，對男性生殖系統(tǒng)的影響更為顯著。國內(nèi)外流行病學研究發(fā)現(xiàn)，在長期遭受有機磷農(nóng)藥污染的地區(qū)或者農(nóng)藥廠的工人，男性精子的數(shù)量和質(zhì)量均受到影響，造成精子數(shù)量減少、精子存活率和活動度下降、精子畸形率增加，最終導致男性不育人數(shù)明顯增多(Recio-Vega R, Ocampo-Gomez G, Borja-Aburto VH, etal.Organophosphorus pesticide exposure decreases sperm quality-associationbetween sperm parameters and urinary pesticide levels. J Appl Toxicol,2008Jul,28 (5) =674-680.)。我們和國內(nèi)外多位學者的研究發(fā)現(xiàn)，有機磷農(nóng)藥對雄性生殖生殖系統(tǒng)具有損傷作用，有機磷農(nóng)藥可直接作用于睪丸、附睪、前列腺、精囊等組織，破壞其結(jié)構(gòu)，最終導致男性生殖力的下降(Koureas M, Tsakalof A, Tsatsakis A, et al. Systematic reviewof biomonitoring studies to determine the association between exposure toorganophosphorus and pyrethroid insecticides and human health outcomes. ToxicolLett,20110ct 15.)。因此探討有機磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性作用機制，尋找有效的干預藥物，對于保護我國人民的身體健康及優(yōu)生優(yōu)育至關重要。螺旋藻多糖(Spriulina polysacchrides)是采用現(xiàn)代生物化學技術與工藝,從螺旋藻中提取的，含多種且生物活性更高的純天然生物制品。螺旋藻多糖對體內(nèi)腹水型肝癌細胞有顯著的抑制作用；螺旋藻多糖對電離輻射的損傷具有明顯的防護效果，還能顯著減輕小鼠骨髓細胞的輻射遺傳損傷；螺旋藻多糖通過抑制機體內(nèi)自由基氧化反應，降低脂質(zhì)過氧化作用，減少組織脂褐質(zhì)的形成，可以達到減緩機體衰老的作用；螺旋藻多糖還具有增強骨髓細胞增殖活力、促進DNA修復合成作用，有良好抗輻射功能和降低放療、化療副作用；螺旋藻多糖能提高機體非特異性的細胞免疫功能，而且能促進機體轉(zhuǎn)異性體液免疫功能，提高低御病菌、病毒入侵的能力；螺旋藻多糖還可作為肝炎、糖尿病、胃潰瘍的輔助治療。螺旋藻多糖無任何毒副作用，可以長期服用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種螺旋藻多糖的新用途，即在制備防治因有機磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應用。更進一步的說是在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致精子活率降低、精子畸形率升高、睪丸組織SOD活性升高、睪丸組織MDA含量增多、睪丸組織LDH活性下降的藥物中的應用。其中所述疾病為因有機磷農(nóng)藥所致的雄性生殖毒性疾病，主要包括精子數(shù)量降低、精子活動性下降、變性精子數(shù)量增多、精液減少、精子畸形率升高、生殖器畸變、睪丸疾病、前列腺疾病、精囊疾病、男性不育等。本發(fā)明所述有機磷農(nóng)藥為久效磷、辛硫磷、對氧磷、三唑磷等常用有機磷農(nóng)藥。本發(fā)明所屬藥物是指以螺旋藻多糖為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫(yī)療上可接受的制齊U，如片劑、丸劑或膠囊劑等。本發(fā)明通過動物實驗研究發(fā)現(xiàn)服用螺旋藻多糖可達到防治低濃度有機磷農(nóng)藥所 致雄性生殖毒性的效果，螺旋藻多糖的治療有效量，應按照治療者的年齡、身體狀況、接觸有機磷農(nóng)藥量等確定。本發(fā)明所述的螺旋藻多糖是螺旋藻的主要活性成分，其具有免疫調(diào)節(jié)活性，能起至IJ抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗細菌、抗電離輻射、降低放療、化療副作用等作用，并且目前尚未發(fā)現(xiàn)其有任何毒副作用。螺旋藻多糖可以通過市售得到，也可以通過多種方法提取獲得，提取方法成熟。本發(fā)明人以高毒有機磷農(nóng)藥久效磷和低毒有機磷農(nóng)藥辛硫磷為代表，研究了低濃度有機磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性作用，發(fā)現(xiàn)有機磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性作用主要是引起雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降；精子數(shù)量減少、精子活率降低、精子畸形率增加；誘導睪丸組織SOD活性升高、LDH活性降低、MDA含量降低引起，睪丸組織氧化損傷，從而引起如精子數(shù)量降低、精子活動性下降、變性精子數(shù)量增多、精液減少、生殖器畸變、睪丸疾病、前列腺疾病、精囊疾病、男性不孕等一系列疾病。 本發(fā)明通過動物實驗觀察了有機磷農(nóng)藥對雄性小鼠的生殖毒性作用，以及螺旋藻多糖對有機磷農(nóng)藥雄性生殖毒性的抑制作用。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，螺旋藻多糖能抑制(如久效磷和辛硫磷)有機磷農(nóng)藥所致的雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降；精子數(shù)量減少、精子活率降低、精子畸形率增加；睪丸組織SOD活性升高、LDH活性降低、MDA含量降低引起，睪丸組織氧化損傷；螺旋藻多糖能抑制有機磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性。本發(fā)明的有益效果在于1.本發(fā)明提供了有機磷農(nóng)藥對雄性生殖毒性作用的直接證據(jù)，并以此尋找有效的干預藥物。2.本發(fā)明提供了螺旋藻多糖的醫(yī)藥新用途，其對有機磷農(nóng)藥引起的雄性生殖毒性具有很好的抑制和保護作用。螺旋藻多糖能抑制有機磷農(nóng)藥(如久效磷和辛硫磷)所致的雄性小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降；精子數(shù)量減少、精子活率降低、精子畸形率增加；睪丸組織SOD活性升高、LDH活性降低、MDA含量降低引起，睪丸組織氧化損傷；螺旋藻多糖能抑制有機磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性。
3、本發(fā)明對長期接觸有機磷農(nóng)藥的人尤其是農(nóng)藥廠的工人和農(nóng)民具有深遠的意義，能起到保護男性及其子代身體健康、提高生活質(zhì)量、降低不孕不育、優(yōu)生優(yōu)育、延長壽命等作用。
具體實施例方式以下通過試驗例來進一步闡述本發(fā)明中螺旋藻多糖的醫(yī)藥新用途及其有益效果，但不用來限制本發(fā)明的范圍。試驗例I :螺旋藻多糖抑制久效磷所致雄性生殖毒性的試驗研究I材料與方法I. I 材料久效磷(40%的水溶性制劑，青島農(nóng)藥廠)，螺旋藻多糖(中國海洋大學生命學院提供)，超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒均購自南京建成生物公司。I. 2實驗動物及分組選擇健康SPF級雄性昆明小鼠90只，體重在(25 ± 2) g之間，購自新鄉(xiāng)醫(yī)學院動物實驗中心。適應性飼養(yǎng)7d，室溫(25±2)°C，濕度50%-55%。將小鼠隨機分為6組，每組15只。分別為正常對照組(A)、螺旋藻多糖對照組(B)、久效磷對照組(C)、螺旋藻多糖低劑量保護組(D)、螺旋藻多糖中劑量保護組(E)。其中對照組(A)不給藥，給予蒸餾水，螺旋藻多糖對照組(B)給予螺旋藻多糖200mg/kg，久效磷對照組(C)給予O. 20mg/kg,螺旋藻多糖低劑量保護組(D)給予螺旋藻多糖100mg/kg+久效磷 O. 20mg/kg,螺旋藻多糖中劑量保護組(E)給予螺旋藻多糖200mg/kg+久效磷O. 20mg/kg,螺旋藻多糖高劑量保護組(F)給予螺旋藻多糖400mg/kg+久效磷O. 20mg/kg。并保證充足的飲水和飼料供應。在連續(xù)60d采用灌胃方式進行染毒，染毒劑量為10ml/kg，每天I次。I. 3統(tǒng)計學方法采用SPSS 10. O軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料實驗數(shù)據(jù)均以x±s進行表示，多組間比較采用方差齊性檢驗和單因素方差分析(One Way AN0VA)。進一步進行組間兩兩比較時，若方差齊時，采用SNK檢驗；若方差不齊時，采用Games-Howell檢驗。計數(shù)資料實驗數(shù)據(jù)均以率表示，組間兩兩比較采用X2檢驗。以P <0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2方法與結(jié)果染毒60天后，稱量體重，處死小鼠，立即取出雙側(cè)睪丸及附睪，剝離周圍脂肪組織和結(jié)締組織準確稱量睪丸和附睪的重量，計算睪丸及附睪的臟器系數(shù)；將雙側(cè)附睪置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中剪碎，制備精子懸液。采用血細胞計數(shù)法計數(shù)上述精子懸液中的精子數(shù)，并換算為每克附睪精子數(shù)；取混勻的精子懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片于光鏡下觀察精子活動力，按WHO推薦的方法，按精子的泳動狀態(tài)將精子活動度分為四級1級直線運動明顯活躍，活動良好；11級直線運動，活動稍差；ΙΠ級精子向前移動的能力差，在原處移動或作旋轉(zhuǎn)運動;IV級:精子無任何活動，每只至少檢查400個精子，計算精子活率(精子活率=Ι+ΙΙ+ΙΠ級精子數(shù)/I+II+III+IV級精子數(shù)X100% );將部分精子懸液作涂片，空氣干燥后，用甲醇固定5min，干燥后用2%伊紅水溶液染色lh，用水輕沖，干燥，在光鏡下，每只小鼠檢查至少檢查400個精子，記錄精子的畸形類型和數(shù)量，凡精子輪廓不清，有頭無尾，或頭部與其它精子或碎片重疊，或兩個以上精子重疊，或明顯屬人為剪碎者均不計算，畸形類型主要分為無鉤、香蕉形、無定形、胖頭、尾折疊、雙頭、雙尾等，畸形率以百分率表示(％);取睪丸組織加入適量的冰生理鹽水，在冰浴條件下用玻璃勻漿器研磨制成睪丸組織勻漿，然后在低溫(4°C)條件下以2000rpm，離心lOmin，靜置片刻，取上清液，參照試劑盒說明書，檢測睪丸勻漿液中SOD、LDH活性和MDA含量。表I螺旋藻多糖對久效磷所致小鼠睪丸和附睪臟器系數(shù)下降的保護作用(η = 15)睪丸臟器系數(shù)附睪臟器系數(shù)
組別
(g/100g 體重)(g/100g 體重)A0·76±0·07Δ0·26±0·03Δ
B0.78±0.05Λ0.27±0.06Λ
C0.63±0.09*O. 18±0.05*D0.66±0.04* O. 21±0.07*E0·69±0·03Λ 0·23±0·04Λ
F0.72±0.06Λ 0.24±0.02Λ注與A組比較*Ρ < O. 05，與C組比較Λ P < O. 05。表I顯示，與正常對照組(A)相比，久效磷對照組(C)睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)均下降，差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05)。螺旋藻多糖保護組能抑制久效磷染毒引起的小鼠睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)下降，以螺旋藻多糖高劑量保護組(F)作用最顯著，螺旋藻多糖高劑量保護組(F)睪丸臟器系數(shù)和附睪臟器系數(shù)，與久效磷對照組(C)相比有顯著差異(P <0.05)，與正常對照組(A)相比，沒有顯著差異(Ρ>0.05)。表2螺旋藻多糖對久效磷所致小鼠精子數(shù)量、精子活率下降及畸形率升高的保護作用(η = 15)
精子數(shù)暈計數(shù)精子數(shù)精子活率精子畸形率
組別
(Χ106)(個)(%)(%)
A72·36±17·42Λ600078· 7±7·21Λ 7·37±0. 72Λ
B74. 63土丄8. 37Λ600080. 68±6. 82Λ 6. 53±0. 5iA
C44. 86±6. 21*600048. 74±7. 29* 26. 37±4.67*
D51. 73±7. 08*Λ600060. 36±8. 32*Λ 17. 74±2. 39*
E59. 55±10. 23*Λ600069. 15± 10. 37*Λ 11. 58±0. 92*Λ
F67. 79±15.64Δ600074.89±8. 54Λ 8.54Λ注與A組比較*Ρ < O. 05，與C組比較Λ P < O. 05。表2可見，與正常對照組(A)相比，久效磷磷對照組(C)小鼠精子數(shù)量和精子活率下降，精子畸形率升高，差異有統(tǒng)計學意義(P <0.05)。螺旋藻多糖保護組能抑制久效磷染毒引起的小鼠精子數(shù)量和精子活率下降及精子畸形率升高，以螺旋藻多糖高劑量保護組(F)作用最顯著，螺旋藻多糖高劑量保護組(F)小鼠精子數(shù)量、精子活率及精子畸形率，與久效磷對照組(C)相比有顯著差異(P < O. 05)，與正常對照組(A)相比，沒有顯著差異(P> O. 05)。
表3螺旋藻多糖對久效磷所致小鼠睪丸組織氧化損傷的保護作用(η = 15)
權利要求
1.一種螺旋藻多糖在制備防治因有機磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于所述雄性生殖毒性疾病為精子數(shù)量降低、精子活動性下降、變性精子數(shù)量增多、精液減少、生殖器畸變、睪丸疾病、前列腺疾病或精囊疾病。
3.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于螺旋藻多糖在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致精子活率降低的藥物中的應用。
4.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于螺旋藻多糖在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致精子畸形率升高的藥物中的應用。
5.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于螺旋藻多糖在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致睪丸組織SOD活性升高的藥物中的應用。
6.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于螺旋藻多糖在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致睪丸組織MDA含量增多的藥物中的應用。
7.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于螺旋藻多糖在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致睪丸組織LDH活性下降的藥物中的應用。
8.根據(jù)權利要求1-7任一項所述的應用，其特征在于所述的有機磷農(nóng)藥為久效磷、辛硫磷、對氧磷或三唑磷。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種螺旋藻多糖在制備防治因有機磷農(nóng)藥所致雄性生殖毒性疾病的藥物中的應用，更進一步的說是在制備抑制因有機磷農(nóng)藥所致精子活率降低、精子畸形率升高、睪丸組織SOD活性升高、睪丸組織MDA含量增多、睪丸組織LDH活性下降的藥物中的應用。以高毒有機磷農(nóng)藥久效磷和低毒有機磷農(nóng)藥辛硫磷為代表，研究了螺旋藻多糖對因低濃度有機磷農(nóng)藥暴露所致的雄性生殖毒性的預防和治療作用，證明螺旋藻多糖能抑制有機磷農(nóng)藥的雄性生殖毒性，有較好的劑量依賴性，從而提出螺旋藻多糖作為活性物質(zhì)在制備因有機磷農(nóng)藥所致的雄性生殖毒性藥物中的應用。
文檔編號A61P15/00GK102631366SQ20121009588
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月1日 優(yōu)先權日2012年4月1日
發(fā)明者周亞莉, 孫春莉, 屈艷, 張莉莉, 牛志國, 王艷華, 閆建國, 馬玉龍, 魏紀東 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學院