專利名稱：一種茶皂苷納米囊及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種茶皂苷納米囊的制備方法及其作為殺菌、抗炎和免疫增強(qiáng)藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
茶皂苷是茶籽或油茶籽中一種主要的五環(huán)三萜化合物。它具有抗菌、抗炎和增強(qiáng)免疫功能等多種生物活性。我國是油茶高產(chǎn)的國家，油茶籽中皂苷的含量占12%，目前提取后作為表面活性劑使用，但在醫(yī)藥中未得到有效利用。國內(nèi)生產(chǎn)的茶皂素多以油茶籽為原料，將油茶籽脫脂后經(jīng)甲醇水或乙醇水提取、干燥所得經(jīng)過技術(shù)改進(jìn)，茶皂素可直接從茶籽餅浸提液中用苯乙烯型共聚樹脂或大孔樹脂吸附分離(中國專利CNl 148598、中國專利申請200810011095. 1、中國專利申請 200810220573. X)，或用大孔樹脂與茶皂素的低濃度有機(jī)溶劑提取液共回流提取(中國專利申請200710168737. 4)，或采用超聲波法提取茶皂素(中國專利CN170686;3)、或采用超濾膜法提取茶皂素(中國專利申請2009100^997. 9)。但以上方法所獲得的均為茶皂素產(chǎn)品， 其茶皂苷的含量只有50 70%。還沒有將茶皂苷制成一種微囊制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，提供一種可有效地分離純化茶皂苷，制成的茶皂苷納米囊及制備方法和應(yīng)用。該納米囊可用于人或魚禽獸作為殺菌、抗炎和免疫增強(qiáng)藥物或添加劑。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種茶皂苷納米囊的制備方法，包括下述步驟(1)茶皂素用水溶解，配制成質(zhì)量濃度5 20 %的溶液，加入正丁醇提取1 3次， 加入茶皂素質(zhì)量1 5%的氫氧化鈉，80 100°C回流2 5小時(shí)；(2)減壓回收正丁醇，用甲醇、乙醇或丙酮溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷；(3)將囊材用乙醇、丙酮或二氯甲烷制成質(zhì)量濃度1 10%的囊材溶液，加入囊材溶液質(zhì)量0. 5 5%的乳化劑、1 10%的茶皂苷，攪拌乳化0. 5 2小時(shí)；(4)將步驟(3)制得的乳液緩慢加入到5 20倍體積PH 2 6含乳化劑0. 1 體積濃度的水溶液中，攪拌1 3小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；(5)將沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊。步驟(1)中所述茶皂素是是自茶葉、茶籽或油茶籽中提取的或自脫脂茶籽中提取的茶皂素水劑或固體干燥物。步驟C3)所述囊材為聚甲基丙烯酸甲酯、聚烷基異氰酸酯、丙烯酸樹脂、苯乙烯、 甲基纖維素、乙基纖維素的一種或幾種。步驟C3)和(4)所述乳化劑為單甘酯、吐溫20、司盤60、蔗糖脂肪酸酯、泊洛沙姆中的一種或幾種。
所述茶皂苷納米囊用于制備殺菌、抗炎及增強(qiáng)免疫功能的藥物制劑，適用于人或魚禽獸等。所述藥物制劑為含有茶皂苷納米囊的單方或復(fù)方制劑，該藥物制劑可以是外用、 口服或注射用藥劑型的任何一種。茶皂納米囊的片劑的制備方法稱取茶皂苷納米囊100質(zhì)量份，加入藥用淀粉、糖粉和糊精按質(zhì)量比7 2 1組成的混合物300質(zhì)量份，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得松散顆粒，過20目篩，晾干，加20質(zhì)量份的硬脂酸鎂，壓片，即得茶皂納米囊的片劑。茶皂苷納米囊的膠囊劑的制備方法稱取茶皂苷納米囊100質(zhì)量份，加入藥用微晶纖維素200質(zhì)量份，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得松散顆粒，過20目篩，晾干，干燥后填充膠囊，即得茶皂苷納米囊的膠囊劑。茶皂苷微米囊的注射劑的制備方法稱取茶皂苷納米囊100質(zhì)量份，加入200質(zhì)量份的甘露醇，用滅菌水溶解后，過0. 3 μ m微孔濾膜，罐裝入安培瓶中，-50°c冷凍干燥M小時(shí)，即得茶皂苷微米囊的凍干粉針注射劑。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果(1)本發(fā)明以茶皂素為原料，經(jīng)過堿解和溶液萃取，除去了膠質(zhì)、蛋白等等結(jié)合物， 得到的茶皂苷純度高、活性好。(2)本發(fā)明制備的茶皂苷納米囊，粒度在200 IOOOnm之間，穩(wěn)定性增強(qiáng)，并可快速被人或動物機(jī)體吸收，緩慢釋放，起到長期作用效果。(3)本發(fā)明制備工藝簡單，反應(yīng)條件易于控制，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1茶皂素IOOg用水1900g溶解，加入等體積正丁醇提取1次，加入2g氫氧化鈉，80°C 回流5小時(shí)。減壓回收正丁醇，用甲醇溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷65g;將聚甲基丙烯酸甲酯IOg用乙醇90g配成囊材溶液，加入0. 5g單甘酯、IOg茶皂苷，攪拌乳化0. 5小時(shí)，得到IOOml的乳液。將上述乳液緩慢加入到5倍體積(500ml)pH 2含0. 1 % (0. 5ml) 吐溫20的水溶液中，攪拌1小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊 20g。實(shí)施例2茶皂素IOOg用水900g溶解，加入等體積正丁醇提取2次，加入3g氫氧化鈉，90°C 回流3小時(shí)。減壓回收正丁醇，用乙醇溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷75g;將聚烷基異氰酸酯5g用丙酮95g配成囊材溶液，加入5g蔗糖脂肪酸酯、3g茶皂苷，攪拌乳化1小時(shí)， 得到IOOml的乳液。將乳液緩慢加入到10倍體積(lOOOml)pH 3含0.5% (5ml)泊洛沙姆的水溶液中，攪拌2小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊Sg。實(shí)施例3茶皂素60g用水340g溶解，加入等體積正丁醇提取3次，加入2g氫氧化鈉，100°C 回流4小時(shí)。減壓回收正丁醇，用丙酮溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷38g;將丙烯酸樹脂3g用丙酮97g配成囊材溶液，加入Ig單甘酯、2g茶皂苷，攪拌乳化1. 5小時(shí)，得到 IOOml的乳液。將乳液緩慢加入到15倍體積(1500ml) pH 5含(15ml)泊洛沙姆的水溶液中，攪拌3小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊5g。實(shí)施例4茶皂素IOOg用水400g溶解，加入等體積正丁醇提取3次，加入2. 5g氫氧化鈉， 100°c回流5小時(shí)。減壓回收正丁醇，用乙醇溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷73g;將苯乙烯8g用二氯甲烷92g配成囊材溶液，加入3g司盤60、8g茶皂苷，攪拌乳化2小時(shí)，得到IOOml的乳液。將乳液緩慢加入到20倍體積(2000ml) pH 6含(20ml)的吐溫20水溶液中，攪拌3小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊15g。實(shí)施例5茶皂素60g用水440g溶解，加入等體積正丁醇提取3次，加入Ig氫氧化鈉，90°C 回流2小時(shí)。減壓回收正丁醇，用甲醇溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷45g;將甲基纖維素Ig用丙酮99g配成囊材溶液，加入Ig單甘酯、2g茶皂苷，攪拌乳化1小時(shí)，得到IOOml 的乳液。將乳液緩慢加入到10倍體積(lOOOml)pH 5含0.3% (3ml)的蔗糖脂肪酸酯水溶液中，攪拌1小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊3g。實(shí)施例6茶皂素90g用水410g溶解，加入等體積正丁醇提取3次，加入2. 5g氫氧化鈉，80°C 回流4小時(shí)。減壓回收正丁醇，用乙醇溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷70g;將乙基纖維素2g用丙酮98g配成囊材溶液，加入Ig司盤60、5g茶皂苷，攪拌乳化2小時(shí)，得到IOOml 的乳液。將乳液緩慢加入到15倍體積(1500ml)pH 4含0.5% (7.5ml)的蔗糖脂肪酸酯水溶液中，攪拌2小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊6. 5g。實(shí)施例7稱取實(shí)施例1 6制得的茶皂苷納米囊100g，加入藥用淀粉、糖粉和糊精按質(zhì)量比 7:2: 1組成的混合物300g，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得顆粒松散，便于壓片狀態(tài)，過20目篩，晾干。加20g硬脂酸鎂，壓片，即得茶皂納米囊的片劑。實(shí)施例8稱取實(shí)施例1 6制得的茶皂苷納米囊100g，加入藥用微晶纖維素200g，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得顆粒松散過20目篩，晾干。干燥后填充膠囊。即得茶皂苷納米囊的膠囊劑。實(shí)施例9稱取實(shí)施例1 6制得的茶皂苷納米囊100g，加入200g甘露醇，用滅菌水溶解后，過0. 3 μ m微孔濾膜，罐裝入安培瓶中，-50°c冷凍干燥M小時(shí)，即得茶皂苷微米囊的凍干粉針注射劑。實(shí)施例10實(shí)施例1-6制得的茶皂苷納米囊的粒徑和包封率實(shí)驗(yàn)方法采用2000年中國藥典第二部附錄IXE粒度和粒度分布測定方法第三法光散射法測定納米囊粒徑；采用丙酮溶解囊材，過濾，稱量揮發(fā)丙酮后的物質(zhì)重量，包封率= (納米囊重量-丙酮揮發(fā)后物質(zhì)重量)/納米囊重量。結(jié)果茶皂苷納米囊粒徑范圍在200 IOOOnm之間，包封率在82 87%。結(jié)果見表一。這表明該采用實(shí)施例1 6法制得的茶皂苷納米囊粒徑分布較均勻，具有較高的包封率。
表一茶皂苷納米囊粒徑分布和包封率
平均粒徑430720560530 650820
(nm)
粒徑范圍200 800300-1000 300-900200-850 300 950300-1000 (nm)
包封率(0/0)86.5%82.0% 82.6%83.3% 87.2%84.9%實(shí)施例11實(shí)施例1-6制備的茶皂苷納米囊的抗炎性和淋巴細(xì)胞增殖能力實(shí)驗(yàn)方法取雄性小鼠90只，隨機(jī)分為9組，每組10只。第1組給生理鹽水，灌胃，為陰性對照組；第2組給阿司匹林200mg/kg，灌胃，為陽性對照組 ’第3 8組分別實(shí)施例1 6制備的茶皂苷納米囊200mg/kg，灌胃，第9組為茶皂苷原藥組。每天1次，10天后，于末次給藥Ih后，在每只動物右耳前后兩面涂二甲苯0. 02ml致炎。各組致炎Ih后，將動物頸椎脫臼致死，沿耳廓基線剪下兩耳，用7mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重。計(jì)算公式腫脹度=右耳片重量-左耳片的重量
腫脹抑制率(％)=陰性對照組平均腫脹度-給藥物平均腫脹度xl00% 、)陰性對照組平均腫脹度另無菌取脾，分離單個脾細(xì)胞，用RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3 X IO6個/ mL。按MTT法用酶標(biāo)儀，以570nm波長測定光密度(0D值)。用加ConA孔的OD值減去不加 ConA孔的OD值表示淋巴細(xì)胞的增殖能力。比較給藥組和對照組的差異情況。結(jié)果致炎Ih后，各組小鼠右耳均可見明顯紅腫。茶皂苷納米囊組對二甲苯致小鼠耳腫脹較陰性組均有明顯的抑制作用，淋巴增殖能力也顯著增強(qiáng)，效果優(yōu)于茶皂苷原藥組。說明本發(fā)明的茶皂苷納米囊有更好的抗炎和提高免疫力作用。結(jié)果見表二。表1茶皂苷納米囊對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的抑制率和淋巴細(xì)胞增殖能力
權(quán)利要求
1.一種茶皂苷納米囊的制備方法，其特征在于，包括下述步驟(1)茶皂素用水溶解，配制成質(zhì)量濃度5 20%的溶液，加入正丁醇提取1 3次，加入茶皂素質(zhì)量1 5%的氫氧化鈉，80 100°C回流2 5小時(shí)；(2)減壓回收正丁醇，用甲醇、乙醇或丙酮溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷；(3)將囊材用乙醇、丙酮或二氯甲烷制成質(zhì)量濃度1 10%的囊材溶液，加入囊材溶液質(zhì)量0. 5 5%的乳化劑、1 10%的茶皂苷，攪拌乳化0. 5 2小時(shí)；(4)將步驟(3)制得的乳液緩慢加入到5 20倍體積pH2 6含乳化劑0. 1 1 % 體積濃度的水溶液中，攪拌1 3小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層；(5)將沉淀物干燥，制得茶皂苷納米囊。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述茶皂素是是自茶葉、茶籽或油茶籽中提取的或自脫脂茶籽中提取的茶皂素水劑或固體干燥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述囊材為聚甲基丙烯酸甲酯、 聚烷基異氰酸酯、丙烯酸樹脂、苯乙烯、甲基纖維素、乙基纖維素的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于，步驟(3)和⑷所述乳化劑為單甘酯、吐溫20、司盤60、蔗糖脂肪酸酯、泊洛沙姆中的一種或幾種。
5.權(quán)利要求1 4任一項(xiàng)所述方法制得的茶皂苷納米囊。
6.權(quán)利要求5所述茶皂苷納米囊的應(yīng)用，其特征在于，所述茶皂苷納米囊用于制備殺菌、抗炎及增強(qiáng)免疫功能的藥物制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述茶皂苷納米囊的應(yīng)用，其特征在于，稱取茶皂苷納米囊100質(zhì)量份，加入藥用淀粉、糖粉和糊精按質(zhì)量比7 2 1組成的混合物300質(zhì)量份，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得松散顆粒，過20目篩，晾干，加20質(zhì)量份的硬脂酸鎂，壓片，即得茶皂納米囊的片劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述茶皂苷納米囊的應(yīng)用，其特征在于，稱取茶皂苷納米囊100質(zhì)量份，加入藥用微晶纖維素200質(zhì)量份，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得松散顆粒，過20 目篩，晾干，干燥后填充膠囊，即得茶皂苷納米囊的膠囊劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述茶皂苷納米囊的應(yīng)用，其特征在于，稱取茶皂苷納米囊100 質(zhì)量份，加入200質(zhì)量份的甘露醇，用滅菌水溶解后，過0. 3 μ m微孔濾膜，罐裝入安培瓶中，-50°C冷凍干燥M小時(shí)，即得茶皂苷微米囊的凍干粉針注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種茶皂苷納米囊及其制備方法和應(yīng)用，即將茶皂素用水溶解后用正丁醇萃取，加入1～5％的氫氧化鈉，80～100℃回流2～5小時(shí)，減壓回收正丁醇，用溶劑溶解沉淀，并結(jié)晶和干燥，得到茶皂苷；將囊材用溶劑制成1～10％囊材溶液，加入0.5～5％乳化劑、1～10％茶皂苷，攪拌乳化0.5～2小時(shí)，將乳液緩慢加入到pH 2～6含乳化劑0.1～1％的水溶液中，攪拌1～3小時(shí)，過微孔濾膜，靜置分層，沉淀物干燥，即制得茶皂苷納米囊。該納米囊可制成殺菌、抗炎和增強(qiáng)免疫功能制劑。該納米囊提高了茶皂苷的穩(wěn)定性，顯著提高其殺菌、抗炎和增強(qiáng)免疫功能效果。
文檔編號A61P31/04GK102499911SQ201110327988
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月25日
發(fā)明者葉勇, 羅月婷 申請人:華南理工大學(xué)