專利名稱：二氟五肽衍生物消炎劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用作消炎劑的新的肽衍生物。
一些具有各種生物活性的多肽衍生物是已知的。以下的參考文獻公開了這類多肽衍生物1980年12月30日頒布的Claeson、Simonsson和Arielly的美國專利第4242329號;1982年2月23日頒布的Bajusz、Hasenohrl、Barabas和Bagdy的美國專利第4316889號;1983年8月16日頒布的Bajusz、Hasenohrl、Barabas和Bagdy的美國專利第4399065號;1983年8月30日頌布的Umezawa、Takeuchi、Aoyagi、Ishii、Saino和Someno的美國專利第4401594號;1984年10月23日頒布的Bajusz、Hasenohrl、Barabas和Bagdy的美國專利第4478745號;1985年7月9日頒布的Kasafirek、Fric、Slaby和Robalova的美國專利第4528133號;1986年6月24日頒布的Dutta、Stein、Trainor和Wildonger的美國專利第4596789號;1986年11月18日頌布的Hassall、Johnson和Roberts的美國專利第4623639號;1987年10月27日頒布的Bajusz、Hasenohrl、Bagdy、Barabas、Dioszegi、Fittler、Jozsa、Horvath和Jozst的美國專利第4703036號;1989年11月14日頒布的Trainor和Stein的美國專利第4880780號;1989年11月28日頒布的Abe、Yaginuma、Nagasawa和Kuroiwa的美國專利第4883863號;1990年2月20日頒布的Mizoue、Okazaki、Hanada、Omura和Amamoto的美國專利第4902781號;1990年5月8日頒布的Trainor和Stein的美國專利第4923890號;1991年11月19日頌布的Abeles和Gelb的美國專利第5066643號;1984年2月2日公開的Galpin和Wilby的PCT專利申請第84/00365號;1987的5月7日公開的Hoover的PCT專利申請第87/02675號;1972年11月9日公開的Toray Inds.Inc.的日本特許申請昭47-30618號;1974年7月19日公開的Mitsubishi Chem.Ind.KK的日本特許申請昭57-145846號;1982年3月25日公開的Daiichi Kagaku Yaku的日本特許申請昭58-164563號;1988年7月20日公開的Merrell Dow Pharmaceuticals，Inc.的歐洲專利申請第0275101號;Aoyagi、Miyata、Nanbo、Kojima、Matsuzaki、Ishizuka、Takeuchi和Umezawa的“亮肽素的生物活性”，The Journal of Antibiotics，Vol.XXII，No.11(Nov.1969)，pp.558～568;Bajusz、Barabas、Tolnay、Szell和Bagdy的“三肽醛對凝血酶和胰蛋白酶的抑制作用”，Int.J.Peptide Protein Res.，Vol.12(1978)，pp.217～221;Gaal、Bacsy和Rappay的“用蛋白酶抑制劑BOC-DPhe-Phe-Lys-H處理過的已培養(yǎng)的前垂體細胞對陽離子鐵蛋白的吸收”Histochemistry，Vol.88(1988)，PP.401～406;Makara、Rappay、Garamvolgyi、Nagy、Danko和Bajusz的“三肽醛Boc-DPhe-Phe-Lysinal，一種新的垂體細胞中的Ca2+通道抑制劑”European Journal of Pharmacology，Vol.151(1988)，pp.147～149;Nagy、Makara、Horvath、Rappay、Kurcz和Bajusz的“三肽醛蛋白酶抑制劑在試管內可以抑制催乳激素和生長激素的釋放”，Endocrinology，Vol.116，No.4(1985)，pp.1426～1432;Rappay、Makara、Bajusz和Nagy的“各種蛋白酶利用前垂體細胞抑制劑減少催乳激素和生長激素的釋放”Life Sciences，Vol.36(1985)，pp.549～555。
本發(fā)明的目的是提供用作消炎劑的新的二氟五肽衍生物。
本發(fā)明的另一個目的是提供能減少與類風濕關節(jié)炎有關的骨吸收作用和/或異位骨形成作用的新的二氟五肽衍生物。
本發(fā)明還有一個目的是提供包含某些二氟五肽衍生物的新的藥物組合物。
本發(fā)明再一個目的是提供使用本發(fā)明化合物治療以炎癥為特性的疾病的方法。
本發(fā)明涉及具有以下結構的消炎化合物
式中(a)-X選自含有4至約15個碳原子的環(huán)烷基;含有6至約15個碳原子的、至少有二個支鏈的支化烷基;及含有6至約15個碳原子的芳烷基;
(b)n為0至約2的整數(shù);
(c)-V-選自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-、-SO2-和-P(O)(OH)-;
(d)-Q為氫;或直鏈或支鏈烷基，它是飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的，含有1至約6個碳原子;或者-Q和-X被共價鍵連結，形成一包括已鍵合有-Q的氮原子和從約5至約20個碳原子的環(huán)狀部份;
(e)Z是-O-或-NH-;當V是-OC(O)-時，-Z-是-NH-;
(f)-R1選自直鏈或支化的烷基、它是飽和的或含有1或2個雙鍵的，含1至約6個碳原子;含3至約10個碳原子的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和環(huán)烷基;其脂族部份是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基;而鍵合到-R1的碳原子既可處于D構型也可處于L構型;
(g)-R2選自直鏈的或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有1至約6個碳原子的烷基;含3至約10個碳原子的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的環(huán)烷基;其脂族部份是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基;而鍵合到-R2的碳原子是處于L構型;
(h)-R3是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m為一個從1至約6的整數(shù)，-A-是一共價鍵或對-苯基或對-環(huán)己基，-B-是一共價鍵或-NH-;而鍵合到-R3的碳原子是處于L構型;
(i)-R4選自直鏈或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有1至約6個碳原子的烷基;含有3至約10個碳原子的，飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的環(huán)烷基;其脂族部份是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基;而鍵合到-R4的碳原子是處于L構型;
(j)-R5是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m是一個從0至約6的整數(shù)，-A-是一共價鍵或對-苯基或對-環(huán)己基，-B-是一共價鍵或-NH-;而鍵合到-R5的碳原子是處于L構型;和(k)-Y是氫原子或甲基。
本發(fā)明還涉及包含以上化合物的藥物組合物，以及使用這樣的化合物和組合物來治療炎癥或疼痛的方法。
此處所用的術語“烷基”，除另有說明外，是指含碳鏈，它既可以是直鏈的、支化的，也可以是環(huán)狀的;它既可以是飽和的也可以是不飽和的;它既可以是未取代的也可以是已取代的。這里所用的“環(huán)烷基”可含有烷基和環(huán)狀環(huán)本身所示碳原子總數(shù)的全部或一部分。環(huán)烷基包括單環(huán)烷基、雙環(huán)烷基和/或三環(huán)烷基。
優(yōu)選的烷基是此段中所指出的那些，特殊情況除外。優(yōu)選的烷基是飽和的。優(yōu)選的烷基是未取代的。優(yōu)選的烷基取代基選自鹵素、氨基、羥基、烷氧基、氰基、硝基、芳基和三氟甲基。這里所用的“烷氧基”是-O-烷基。優(yōu)選的取代烷基是單一、二-或三取代的烷基，特別是單基取代的烷基。
此處所用的術語“芳基”，除非另有說明，均指未取代的或已取代的芳環(huán)。除非在特殊情況另有指出外，優(yōu)選的芳基是本段中所指出的芳基。優(yōu)選的芳基是苯基和萘基，特別是苯基。優(yōu)選的芳基是單-、二-、三-或未取代的;更優(yōu)選的芳基是單基取代的或未取代的，特別是未取代的。優(yōu)選的芳基取代基包括烷基、鹵素、氨基、羥基、烷氧基、氰基、硝基和三氟甲基。
此處所用的術語“芳烷基”指用芳基取代的烷基。優(yōu)選的芳烷基是芳甲基。
此處所用的術語“脂族的”意指芳烷基的開鏈含碳部分。
這里使用下列縮略詞。用于氨基酸的縮略詞既可以指氨基酸本身，或更經常是指作為肽或肽衍生物結構的一部分的氨基酸部分。
Arg 精氨酰基Orn 鳥氨?；鵏eu 亮氨?；鵊ly 甘氨?；鵷-Bug 叔丁甘氨酰基Phe 苯丙氨?；鵄doc 金剛基氧羰基Z 芐氧羰基Boc 叔丁氧羰基DECP 二乙基氰基膦酸根Me 甲基Et 乙基TEA 三乙胺DMF 二甲基甲酰胺TFA 三氟乙酸根
ipa 異丙醇Bn 芐基Lys 賴氨?；鵄c 乙?；鵗LC 薄層色譜TSA 甲苯磺酸THF 四氫呋喃HOBt 羥基苯并三唑DCC 二環(huán)己基碳化二亞胺DIPEA N，N-二異丙基乙胺Chg 環(huán)己基甘氨?；鵆ha 環(huán)己基丙氨酰基Nal 萘丙氨?；鵗rp 色氨?；鵄dg 金剛基甘氨?；鵳Gphe 對-胍基苯丙氨?；?，5-Dmadoc 3，5-二甲基金剛基氧羰基eBroc 內-冰片基氧羰基Noc 萘基氧羰基Moc 甲基氧羰基Ad 金剛?；鵉moc 芴基甲氧羰基Ada 金剛烷乙酰基Adac 金剛基氨基羰基
Mnoc 嗎啉基Norad 降金剛?；鵋adoc 高金剛基氧羰基Foc 葑氧羰基Imoc 異
氧羰基Ipoc 異松莰基氧羰基AC 乙?；鵇MF 二甲基甲酰胺HPLC 高壓液相色譜本發(fā)明的新的消炎化合物是具有以下化學結構式的那些
在結構式(Ⅰ)中，n是從0至約2的整數(shù);優(yōu)選的n是0或1。
在結構式(Ⅰ)中，-R1選自直鏈或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鏈的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基;飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從3至約10碳原子的環(huán)烷基;其脂族部分是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基。優(yōu)選的-R1是飽和的烷基。優(yōu)選的烷基是未取代的烷基或是芳烷基，特別是芐基和萘亞甲基。優(yōu)選的環(huán)烷基是環(huán)狀的C3～C8(更優(yōu)選是C5～C6)甲基或金剛基甲基。優(yōu)選的-R1是疏水的，最好其疏水性緊靠-R1所鍵合的碳原子。優(yōu)選的-R1的具體例子包括叔丁基，1，1-二甲基丙基，異丙基，異丁基，仲丁基，新戊基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基，金剛基，金剛基甲基，芐基，萘亞甲基;最優(yōu)選的-R1是叔丁基。
在結構式(Ⅰ)中，與-R1鍵合的碳既可是處于D構型也可是處于L構型，優(yōu)選為D構型。當-Z-是-NH時，結構-Z-CH(R1)-C(O)-是一氨基酸部分(在下文中以-AA1-表示);對于-AA1-，優(yōu)選的氨基酸部分包括t-Bug、Val、Ile、Leu、Chg、Cha、Phe、Nal、Trp和Adg;更優(yōu)選的是t-Bug、Val和Ile;最優(yōu)選的-AA1-是t-Bug。
在結構式(Ⅰ)中，-R2選自直鏈或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基;飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從3至約10個碳原子的環(huán)烷基;其脂族部分是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基。優(yōu)選的支化或環(huán)狀烷基是飽和的。優(yōu)選的支化或環(huán)狀烷基是未取代的。優(yōu)選的支化烷基含有從3至5個碳原子;最優(yōu)選的支化烷基是異丁基。優(yōu)選的環(huán)烷基含有C3～C7的(更優(yōu)選是含有C5～C6的)被鍵合到亞甲基、亞乙基或正亞丙基(優(yōu)選為亞甲基或亞乙基，更優(yōu)選為亞甲基)的環(huán)，而亞甲基、亞乙基或正亞丙基被鍵合到結構式(Ⅰ)中的與-R2鍵合的碳原子上。優(yōu)選的芳烷基是芐基、對羥芐基和萘亞甲基。更優(yōu)選的-R2選自異丙基、異丁基、仲丁基、環(huán)己基甲基、芐基和萘亞甲基;最優(yōu)選的是芐基。
在結構式(Ⅰ)中，與-R2鍵合的碳原子是處于D或L構型。結構-NH-CH(R2)-C(O)-是-氨基酸部分(以下稱為-AA2-);對于-AA2-，優(yōu)選的氨基酸部分包括Phe、Nal、Cha、Leu和Ile;最優(yōu)選的-AA2-是Phe。
在結構式(Ⅰ)中，-R3是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m是一個從1至約6的整數(shù)，-A-是一共價鍵、對-苯基或對-環(huán)己基，而-B-是一共價鍵或-NH-。當-A-是一共價鍵時，m優(yōu)選為2～5、更優(yōu)選為2～4、特別優(yōu)選為3或4。當-A-是對-苯基或對-環(huán)己基時，m優(yōu)選為1～4、更優(yōu)選為1～3、特別優(yōu)選為1。-A-優(yōu)選為共價鍵。-B-最好是-NH-。更優(yōu)選的-R3是3-胍基-正-丙基或4-氨基-正-丁基。
在結構式(Ⅰ)中，與-R3鍵合的碳原子是處于D構型或L構型，優(yōu)選為L構型。結構-NH-CH(R3)-C(O)-是一氨基酸部分(以下稱為-AA3-);對于-AA3-，優(yōu)選的氨基酸部分包括Arg、Lys、高-Arg、對氨基-Phe、對脒基-phe和對-Gphe;最優(yōu)選的-AA3-是Lys。
在結構式(Ⅰ)中，-R4選自直鏈或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基;飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從3至約10個碳原子的環(huán)烷基;其脂族部分是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基。優(yōu)選的支化或環(huán)狀烷基是飽和的和未取代的。優(yōu)選的支化烷基含有從3至5個的碳原子;最優(yōu)選的支化烷基是異丁基。優(yōu)選的環(huán)烷基含有一個C3～C7、更優(yōu)選為C5～C6的環(huán)，該環(huán)被鍵合到亞甲基、亞乙基或正亞丙基(優(yōu)選為亞甲基或亞乙基，而更優(yōu)選為亞甲基)上，而亞甲基、亞乙基或正亞丙基被鍵合到結構式(Ⅰ)中的與-R4鍵合的碳原子上。優(yōu)選的芳烷基是芐基、對羥芐基和萘亞甲基。更優(yōu)選的-R4選自異丙基、異丁基、仲丁基、環(huán)己基甲基、芐基和萘亞甲基;最優(yōu)選的是芐基。
在結構式(Ⅰ)中，與-R4鍵合的碳原子是處于D或L構型。結構-NH-CH(R4)-C(O)-是一氨基酸部分(以下稱為-AA4-);對于-AA4-，優(yōu)選的氨基酸部分包括Phe、Nal、Cha、Leu和Ile;最優(yōu)選的-AA4-是Leu。
在結構式(Ⅰ)中，-R5是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中m是從1至約6的一個整數(shù)，-A-是一共價鍵、對-苯基或對-環(huán)己基，而-B-是一共價鍵或-NH-。當-A-是一共價鍵時，m優(yōu)選為2～5、更優(yōu)選為2～4、特別優(yōu)選為3或4。當-A-是對-苯基或對-環(huán)己基時，m優(yōu)選為1～4、更優(yōu)選為1～3、特別優(yōu)選為1。-A-最好是一共價鍵。-B-最好是-NH-。更優(yōu)選的-R5是3-胍基-正丙基或4-氨基-正丁基。
在結構式(Ⅰ)中，與-R5鍵合的碳原子處于D或L構型，優(yōu)選為L構型。結構-NH-CH(R5)-C(O)-是一氨基酸部分(以下稱為-AA5);對于-AA5，優(yōu)選的氨基酸部分包括Arg、高-Arg、Lys、對脒基-Phe、對氨基-Phe。和對-GPhe;最優(yōu)選的-AA5-是Arg。
在結構式(Ⅰ)中，-Y是氫或甲基。
在結構式(Ⅰ)中，-Z-是-O-或-NH-。優(yōu)選的-Z-是-NH-。
在結構式(Ⅰ)中，-V-選自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-、-SO2-和-P(O)(OH)-。優(yōu)選的-V-選自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-。更優(yōu)選的-V-是-OC(O)-或-N(Q)C(O)-。最優(yōu)選的-V-是OC(O)-。當-V-是-OC(O)-時，-Z-是-NH-。
在結構式(Ⅰ)中，-X選自含有從4至約15個碳原子的環(huán)烷基;含有從6至約15個碳原子和至少2個分枝的支化烷基;含有從6至約15個碳原子的芳基。優(yōu)選的-X含有從6至12個碳原子;更優(yōu)選的-X含有從8至10個碳原子。-X的優(yōu)選烷基部分是飽和的。優(yōu)選的-X是未取代的、或是已被未取代的烷基或芳基取代的。優(yōu)選的環(huán)烷基是單環(huán)烷基、雙環(huán)烷基、三環(huán)烷基，更優(yōu)選的是雙環(huán)烷基和三環(huán)烷基，特別是三環(huán)烷基。優(yōu)選的環(huán)烷基在每個環(huán)中含有5或6個碳原子、更優(yōu)選為含有6個碳原子。很優(yōu)選的-X是金剛基。優(yōu)選的芳基-X是未取代的或用烷基取代的芴基、萘基和苯基。特別優(yōu)選的芳基-X包括萘基和芴基。當-X是芳基或環(huán)烷基時，n優(yōu)選為1。
在結構式(Ⅰ)中，當-V-是-N(Q)C(O)-或-N(Q)C(S)-時，-Q選自氫;直鏈或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基;或者-Q和-X以共價鍵相連，形成一環(huán)狀部分，該環(huán)狀部分包括與-Q結合的氮和從約5至約20個碳原子。優(yōu)選的-Q-X-含有從6至15個碳原子;更優(yōu)選的-Q-X-含有從8至12個碳原子。優(yōu)選的-Q-X-是未取代的，或被未取代烷基或芳基所取代的。優(yōu)選的環(huán)狀
是單環(huán)的、雙環(huán)的或三環(huán)的;更優(yōu)選的是單環(huán)的。最優(yōu)選的-Q是氫。
在結構式(Ⅰ)中，優(yōu)選的X-(CH2)n-V-(以下稱作X′-)包括Adoc、Ad、Fmoc、Ada、Adac、Mnoc、Norad、Hadoc、Foc、Imoc、Ipoc、3，5-Dmadoc、eBroc、Noc和Moc;更優(yōu)選的-X′是Adoc、Ipoc和eBroc;最優(yōu)選的-X′是Adoc。
本發(fā)明的優(yōu)選的消炎化合物包括以上化合物的藥物上可接受的鹽。特別優(yōu)選的鹽包括由強酸和上述化合物加成形成的鹽。特別優(yōu)選的是-R3或-R5或它們兩者被質子化這種加成鹽，在-R3和R5部分上形成正電荷。本發(fā)明的優(yōu)選化合物通常以水合物形式與一個或多個的水分子相締合。
本發(fā)明的優(yōu)選消炎化合物包括下列化合物Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMeAdoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Gly-Arg-OMeAdoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-D-Phe-Arg-OMeAdoc-D-tBug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-D-Arg-OMeMnoc-D-Phe-Phe-Arg-C(O)-CF2C(O)-Leu-Lys-OMeeBroc-D-t-Bug-Phe-pGphe-C(O)CF2C(O)-Ala-Arg-OMeIpoc-D-Nal-Phe-Arg-C(O)CF2C(O)-Gly-Arg-OMeAdoc-D-Phe-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OHNoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Ala-Lys-OMe藥物組合物本發(fā)明的藥物組合物是包含一種安全和有效量的上文所定義的二氟五肽衍生物和一種藥物上可接受的載體。這類組合物典型地包含從約0.1%至95%重量的二氟五肽衍生物，優(yōu)選為從約1%至約90%，而更優(yōu)選為從約5%至約75%。
此處所用的術語“藥物上可接受的載體”意指一種或多種配伍的固態(tài)或液態(tài)填料稀釋劑或包封物，它們適于向人或低等動物施藥。此處所用的術語“配伍的”意指藥物組合物的各組分能與本發(fā)明的二氟五肽衍生物以在通常的使用條件下不發(fā)生明顯降低組合物藥效的相互作用的方式相雜混及它們之間的彼此雜混。當然，藥物上可接受的載體必須具有足夠高的純度和足夠低的毒性，使它們適于施給被治療的人或低等動物。
能用作藥物上可接受的載體的某些例子是糖類，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉類，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉;纖維素及其衍生物類，諸如羧甲基纖維素、乙基纖維素和乙酸纖維素;粉狀黃蓍膠;麥芽;明膠類;滑石;硬脂酸;硬脂酸鎂;硫酸鈣;植物油，諸如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和可可油;多無醇，諸如丙二醇、甘油、山梨(糖)醇、甘露糖醇和聚乙二醇;藻酸;無致熱質的水;等滲鹽水;磷酸鹽緩沖溶液類;可可脂(栓劑基料);乳化劑類，諸如Tweens ;潤濕劑類和潤滑劑類，諸如十二烷基硫酸鈉;著色劑類;調味劑類;穩(wěn)定劑類;抗氧劑類;防腐劑類;以及用于藥物配方中的其他非毒性配伍物。其他配伍的藥物添加劑和活性物質可被包含在用于本發(fā)明組合物中的藥物上可接受的載體中。
連同本發(fā)明的二氟五肽衍生物一起使用的藥物上可接受的載體的使用濃度足以形成實用的大小與劑量的關系。總的說，藥物上可接受的載體總量一般占本發(fā)明藥物組合物重量的約5%至約99.9%、優(yōu)選為從約10%至約99%、而更優(yōu)選為從約25%至約95%。
在藥物組合物中，本發(fā)明的二氟五肽衍生物的總的單劑量一般為從約1mg至約1000mg、優(yōu)選為從約50mg至約800mg、更優(yōu)選為從約100mg至約500mg。
對與本發(fā)明的二氟五肽衍生物一起使用的藥物上可接受的載體的選擇是根據(jù)施予治療物質的方式確定的。優(yōu)選的施予本發(fā)明活性物質的方式是注射、吞服、吸入以及局部施予。
制造可注射劑的方法和材料可見Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版.，1985，第85章，p.1518，其整個公開內容在這里被收入作參考。一般說來，三種可注射劑量形式是優(yōu)選的(1)水溶液，(2)非水溶液;以及(3)乳液?？勺⑸鋭┝啃问降湫偷睾袕募s0.001mg/ml至約10mg/ml、優(yōu)選為從約0.4mg/ml至約0.6mg/ml的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的優(yōu)選的可注射劑量組合物包括pH為從約3至約8(更優(yōu)選的pH為從約4至約6)的滅菌水溶液或乳液。
在其中可吞服而施予本發(fā)明的二氟五肽衍生物的優(yōu)選藥物載體是公開在以下專利中的類蛋白微膠囊1990年1月23日頒發(fā)的Kantor、Steiner和Pack的美國專利第4895725號;1990年5月15日頒發(fā)的Steiner和Rosen的美國專利第4925673號;1990年12月11日頒發(fā)的Steiner的美國專利第4976968號;1991年1月8日頒發(fā)的Steiner的美國專利第4983402號;所有四份專利均全文被引入本文作參考。
產生抗炎性和鎮(zhèn)痛性的方法本發(fā)明還包括通過給需要這樣治療的人或低等動物施以安全和有效量的本發(fā)明的二氟五肽衍生物的方法在人或低等動物產生抗炎性和/或鎮(zhèn)痛性的方法。在整個治療期間可以以單劑或復合劑形式重復施予這一數(shù)量。雖然劑量高于本文中所介紹的劑量時對減輕炎癥和產生鎮(zhèn)痛作用是有效的，但是對個別的治療對象必須小心以防止不良的副作用。本發(fā)明的二氟五肽衍生物和組合物能被用來減輕由疾病和創(chuàng)傷引起的深層組織、肌肉、腱、囊和關節(jié)的各種疾病的炎癥，并被用來治療的防止疼痛。
施予本發(fā)明的二氟五肽衍生物的優(yōu)選方式是通過注射、吞服、吸入和局部施予。具體的施予方式包括但并不限于口服;注射，如肌肉、靜脈、腹膜、皮內和皮下注射;吸入;以及局部施予，如經皮膚的、口的、粘膜的和舌下的施予。
這里所用的術語“安全與有效量”意指在正確的醫(yī)學判斷范圍內，二氟五肽衍生物或組合物的量足夠高，以明顯地改善所治的病況，但又足夠低以避免嚴重的副作用(處于合理的效益/危險比)。二氟五肽衍生物或組合物的安全與有效量是隨所治療的具體病情、被治療病人的年齡與體質、病的嚴重性、治療的持續(xù)時間、協(xié)同療法的性質、所用的具體作用物、所用的特定的藥物上可接受的載體、以及在主治醫(yī)生的知識與經驗之內的喜愛因素而變化的。
本發(fā)明的二氟五肽衍生物的每日劑量范圍為從每公斤體重約0.1毫克至約50毫克，更優(yōu)選的為每公斤體重約1毫克至約100毫克、還要優(yōu)選的是從每公斤體重約2毫克至約50毫克。每日可以施予1至約4服單劑量、優(yōu)選為每日約2至約3服單劑量。通過注射施予的二氟五肽衍生物的優(yōu)選量為從約0.1毫克/公斤/日至約50毫克/公斤/日，更優(yōu)選為從約1毫克/公斤/日至約10毫克/公斤/日。通過口服施予的二氟五肽衍生物的優(yōu)選量為從約1毫克/公斤/日至約500毫克/公斤/日，更優(yōu)選為從約5毫克/公斤/日至約100毫克/公斤/日。通過吸入法施予的二氟五肽衍生物的優(yōu)選量為從約0.1毫克/公斤/日至約500毫克/公斤/日，更優(yōu)選為從約5毫克/公斤/日至約100毫克/公斤/日。局部施予的二氟五肽衍生物的優(yōu)選量為從約1毫克/公斤/日至約500毫克/公斤/日，更優(yōu)選為從約50毫克/公斤/日至約250毫克/公斤/日。
合成本發(fā)明化合物的方法下列非限制性方案和例子說明合了成本發(fā)明的二氟五肽衍生物的方法。
Ⅰ.Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)-CF2-C(O)-Leu-Arg-OMe的合成Adoc-D-t-Bug-OH向處于0℃的48.8g(0.370M)的D-叔丁基甘氨酸在371ml的1N NaOH和159ml的二噁烷中的溶液，加入33.9g(0.40M)的NaHCO3，接著在3小時內滴加80.0g(0.40M)的氟甲酸金剛酯在371ml的二噁烷中的溶液。在該溫度下攪拌混合物0.5小時并移開冷卻浴。將溶液攪拌3小時并用1N NaOH調整pH至10。用EtOAc提取此溶液并將殘留的水相酸化至pH＝3。用EtOAc提取此酸性溶液，干燥，并除去溶劑，得到118g產物。TLC(94/5/1-CH2Cl2/ipa/AcOH)，說明它是均勻的，Rf＝0.90。
Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn向115g(0.37M)的Adoc-D-t-Bug-OH和L-Phe-OBn.pTSA(0.36M)在1LCH2Cl2中的溶液中加入74.6g(0.74M)的TEA，接著添加60.8g(0.37M)的DECP，并將所生成的溶液攪拌過夜。除去溶劑并將產物再溶在EtOAc中，接著依次用鹽水、0.4N HCl、以及飽和的NaHCO3液進行洗滌。將溶液干燥并除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離，得到186g產物。TLC(85/15，己烷/EtOAc)，Rf＝0.40。
Adoc-D-tBug-Phe-OH(1)在氮氣氛中向一干燒瓶中添加34.0g載在碳上的5%Pd。將燒瓶冷卻到-78℃并添加200ml無水脫氣甲醇。向此淤漿添加8.8ml甲酸(88%)，隨后添加36.0g Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn(0.066M)在100ml甲醇和4.4ml甲酸中的混合物。撤去冷卻浴并將淤漿攪拌2小時。此時添加另外200ml溶在甲醇中的4.4%甲酸，并將淤漿攪拌過夜。在氮氣氛中通過玻璃纖維濾紙過濾此混合物。將濾液穿過硅藻土床進行再過濾以除去全部痕量的催化劑。除去溶劑，生成17.3g產物。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)OEt(3)向79.2g(1.21M)活性鋅在0.600L的THF中的溶液添加2.36g溴二氟乙酸乙酯并將此溶液進行回流。一旦開始回流就滴加236g(1.16M)溴二氟乙酸乙酯和176g(0.485M)(2)在1.80L THF中的混合物。就(2)的合成而言，見Burkhart，J.，N.Peet和P.Bey的“制備肽基α-酮酯的新方法”一文，Tetrahedron Letters，Vol.31，No.10，pp.1385～1388(1990)。將溶液回流1小時，冷卻并用飽和的KHSO4進行驟冷。驟冷后的產物用EtOAc稀釋并依次用飽和的KHSO4、飽和的NaHCO3和鹽水洗滌。此過程之后是用MgSO4干燥和除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離，生成68.0g純產物。Rf＝0.20，75/25己烷/EtOAc。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)ONa(4)向1.00g(0.002M)的(3)在10ml甲醇中的溶液添加2ml的1N NaOH，并將此溶液在室溫下攪拌5小時和除去溶劑。將殘余物溶解在少量水中并用乙醚提取此牛奶狀溶液。把水從含水相中除去并通過將殘余物置于真空室中24小時使其充分干燥?；厥盏?.069g的產物。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe(5)向0.500g(1.03mmol)的(4)和0.470g(1.26mmol)的Leu-Arg(NO2)OMe·HCl在30ml DMF中的溶液，一次加入0.019g(1.26mmol)HOBt。隨后滴加入在3ml DMF中的0.260g(1.26mmol)DCC。最后，添加0.003ml DIPEA并對此溶液攪拌48小時。在真空下去掉DMF并將殘余物溶解在EtOAc中。將溶液轉移到分液漏斗并用0.1N HCl、飽和的NaHCO3液、以及鹽水洗滌。用MgSO4干燥此乙酸乙酯層，過濾并除去溶劑。對殘余物在硅膠上進行色層分離而得到0.420g產物。Rf＝0.68(90/10CH2Cl2/MeOH)。
ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe·HCl向在200ml二噁烷中的(5)(17.3g，0.022M)溶液添加66.8ml(0.220m)的在二噁烷中的3.3M HCl，并將此混合物攪拌1小時。此時添加另外5ml的在二噁烷中的3.3M HCl，并將此溶液攪拌另外的0.25小時。除去溶劑并將殘余物置于真空下。在氮氣氛下用乙醚研磨此固體殘余物并過濾之?；厥盏?6.0g白色固體。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(OH)-CF2-C(O)-Leu-Arg-(NO2)-OMe(6)向16.0g先前反應的殘余物(0.022M)和11.1g的(1)(0.024M)在300ml CH2Cl2中的溶液中，滴加入6.69ml(0.048M)的TEA，接著滴加3.64ml(0.024M)的DECP。將此溶液攪拌過夜并除去溶劑。殘余物被溶解在EtOAc中并依次用0.1N HCl、飽和的NaHCO3液、以及鹽水洗滌。將溶液干燥并除去溶劑，得26.6g產物，在硅膠上進行色層分離該產物，得到12.7g純產物。其Rf＝0.85，90/10-CH2Cl2/MeOH。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe向14.3g(0.034M)Dess-Martin Periodinane在1.15L CH2Cl2中的淤漿，添加入0.910ml的無水吡啶，接著滴加在2.3L CH2Cl2中的12.7g(0.011M)的(6)。就制備Dess-Martin Periodinane而言，可參見Dess.D.和J.Martin的文章，Journal of Organic Chemistry，Vol.48，pp.4155～4156(1983)。將淤漿攪拌2小時并添加在飽和的NaHCO3液中的58.7g(0.24M)Na2S2O4，并將生成的溶液攪拌0.5小時。把各相分開并用乙酸乙酯提取水相。將合并的有機相干燥并除去溶劑，得到13.9g產物，它未經純化而用于下一步的反應。(Rf＝0.30，95/5 CH2Cl2/MeOH)。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMe(7)向在200ml無水DMF中的13.4g(0.012M)前述反應殘余物的溶液添加6g鈀黑，并對生成的淤漿進行0.5小時的脫氣。向此淤漿添加8ml在二噁烷中的3.3M HCl。反應物被置于Paar搖動器上并進行6小時的氫化。將此淤漿濾過硅藻土，除去溶劑。對殘余物進行反相高效液體色譜分離(CH3CN/H2O)，得到6.5g產物。
Ⅱ.Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(O)-CF2-C(O)-Ala-Arg-OMe的合成在0℃和3小時內，向在371ml的1N NaOH和159ml二噁烷中的48.8g(0.370M)D-叔丁基甘氨酸，添加在371ml二噁烷中的33.9g(0.40M)氟甲酸金剛酯。在此溫下將混合物攪拌0.5小時，撤去冷卻浴。將溶液攪拌3小時并用1N NaOH將pH調整至10。用EtOAc提取此溶液并將剩下的水相酸化至pH＝3。此酸性溶液用EtOAc提取，干燥并除去溶劑，得到118g產品，TLC(94/5/1-CH2Cl2/i-pa/AcOH)，Rf＝0.90表明它是均勻的。
Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn向115g(0.37M)的Adoc-D-t-But-OH和L-Phe-OBn.pTSA(0.36M)在1L CH2Cl2中的溶液添加74.6g(0.74M)TEA，接著添加60.8g(0.37M)DECP，并將生成的溶液攪拌過夜。除去溶劑并將產物再溶解在EtOAc中，再依次用鹽水、0.4N HCl、以及飽和的NaHCO3液洗滌。將溶液干燥并除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離，得到186g產物。TLC(85/15-己烷/乙酸乙酯)，Rf＝0.40。
Adoc-D-t-Bug-Phe-OH (1)向氮氣氛下的干燥燒瓶中添加34.0g載在碳上的5%Pd。將燒瓶冷卻至-78℃并添加200ml無水脫氣甲醇。向此淤漿添加8.8ml甲酸(88%)，隨后添加36.0g Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn(0.066M)在100ml甲醇和4.4ml甲酸中的混合物。撤去冷卻浴并對淤漿攪拌2小時。此時添加另外的200ml在甲醇中的4.4%甲酸，并將淤漿攪拌過夜。在氮氣氛下通過玻璃纖維濾紙過濾此混合物。將濾液通過硅藻土床再過濾以除去所有痕量的催化劑。除去溶劑后得到17.3g產物。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)OEt(3)向79.2g(1.21M)活性鋅在0.600L THF中的溶液添加2.36g溴二氟乙酸乙酯，將此溶液進行回流。一旦開始回流馬上將在1.80L THF中的236g(1.16M)溴二氟乙酸乙酯和176g(0.485M)的(2)的混合物滴加入。把溶液回流加熱1小時后將其冷卻，并用飽和的KHSO4驟冷。驟冷的產物以EtoAC稀釋并依次用飽和的KHSO4、飽和的NaHCO3和鹽水洗滌。經以上過程后接著用MgSO4干燥并除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離得到68.0g純產物。Rf＝0.20，75/25-己烷/乙酸乙酯。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CF2-C(O)ONa(4)向1.00g(0.002M)的(3)在10ml甲醇中的溶液添加入2ml的1N NaOH，在室溫下攪拌此溶液5小時并除去溶劑。將殘余物溶在少量水中并用乙醚提取此牛奶狀溶液。從含水相中除去水并且通過將殘余物置于真空下24小時使其被徹底干燥。0.069g產物被回收。
α-Boc，ε-Z-Lys-C(OH)-CH2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe(5)向0.500g(1.03mmol)的(4)和0.470g(1.26mmol)的Leu-Arg(NO2)-OMe·HCl在30ml的DMF中的溶液中一次添加0.019g(1.26mmol)的HOBt。之后接著滴加在3mlDMF中的0.260g(1.26mmol)DCC，最后，加入0.003ml DIPEA并將溶液攪拌48小時。真空除去DMF并將殘余物溶于EtOAc中。將此溶液轉移到分液漏斗并用0.1N HCl、飽和的NaHCO3、以及鹽水進行洗滌。用MgSO4干燥此乙酸乙酯層，過濾并除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離，得到0.420g產物。Rf＝0.68，90/10 CH2Cl2/MeOH。
ε-Z-Lys-C(OH)-CH2-C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe·HCl向在200ml二噁烷中的(5)(17.3g，0.022M)的溶液內添加66.8ml(0.220m)在二噁烷中的3.3M HCl。將此混合物攪拌1小時。此時添加另外的在二噁烷中的3.3M HCl 5ml，并對溶液攪拌另外的0.25小時。除去溶劑并將殘余物置于真空中。在氮氣氛下用乙醚研磨此固體殘余物?；厥盏?6.0g的白色固體。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(OH)-CH2C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe(6)向16.0g(0.022M)先前反應的粗產物和11.1g(1)(0.024M)在300ml CH2Cl2中的溶液，滴加入6.69ml(0.048M)的TEA，接著滴加3.64ml(0.024M)DECP。溶液被攪拌過夜并除去溶劑。剩余物被溶在EtOAc中并依次用0.1N HCl、飽和的NaHCO3液、以及鹽水洗滌。干燥此溶液并除去溶劑，得到26.6g粗產物，在硅膠上進行色層分離得到12.7g的純產物。Rf＝0.85，90/10-CH2Cl2/MeOH。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg(NO2)-OMe
向14.3g(0.034M)Dess-Martin Periodinane在1.15L CH2Cl2中的淤漿中添加0.910ml的無水吡啶，接著滴加入在2.3L CH2Cl2中的12.7g(0.011M)的前述反應產物。將此淤漿攪拌2小時并添加在飽和的NaHCO3中的58.7g(0.24M)Na2S2O4。將所生成的溶液攪拌0.5小時。分開各個相并用乙酸乙酯提取水相。將合并的有機相干燥并除去溶劑，得到13.9g產物，它無需純化而被用于下一步反應(Rf＝0.30，95/5 CH2Cl2/MeOH)。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMe·TFA(7)向13.4g(0.012M)前述反應的粗產物在200ml無水DMF中的溶液中添加6g鈀黑，將生成的淤漿脫氣0.5小時。向此淤漿添加8ml的在二噁烷中的3.3M HCl。反應物被置于Paar搖動器上并氫化6小時。穿過硅藻土過濾此淤漿并除去溶劑。剩余物經反相HPLC進行色層分離(CH3CN/H2O/TFA)，得到6.5g產物。
α-Boc，γ-Bn，γ-Z-Orn-C(OH)-CF2-C(O)OEt(9)向在無水THF中的5.67g(0.087M)活性鋅溶液中添加1.0g溴二氟乙酸乙酯，并將溫度升高以進行回流。此時，加入在THF中的15.2g(0.037M)的-Bn，-Z-Boc-鳥氨醛(8)和16.9g(0.083M)的溴二氟乙酸乙酯，接著使淤漿回流0.5小時。將溶液冷卻并用飽和的KHSO4進行驟冷。用EtOAc稀釋此溶液并用飽和的KHSO4、飽和的NaHCO3和鹽水進行洗滌。將溶液干燥并除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離得到6.58g產物。Rf＝0.22，99/1-CH2Cl2/ipa。
α-Boc，γ-Bn，γ-Z-Orn-C(OH)-CF2-C(O)ONa將酯(9)(0.965g，1.71mmol)溶于15ml甲醇中并添加1N NaOH 1.71ml。將溶液攪拌3小時并除去溶劑。將殘余物置于真空中過夜并用于下一步的反應中其量為0.870g。
α-Boc，γ-Bn，γ-Z-Orn-C(OH)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe(10)向在80ml無水DMF中的0.870g(1.56mmol)先前反應的粗產物和0.579g(1.90mmol)Ala-Arg(NO2)-OMe·HCl的溶液中添加0.283g(2.09mmol)的HOBt，接著依次添加在20ml DMF中的0.392g(1.90mmol)DCC和0.068ml(0.39mmol)的DIPEA。在室溫下攪拌此混合物18小時并除去溶劑。將殘余物溶于EtOAc中并用0.1N HCl、飽和的NaHCO3和鹽水洗滌。溶液被干燥并除去溶劑。在硅膠上進行色層分離，產生0.520g產物(Rf＝0.20和0.22)。
α-Boc-Orn-C(OH)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe將三肽(10)(0.338g，0.43mmol)溶于10ml的DMF中并添加0.15g鈀黑。對此淤漿進行脫氣并加入0.20ml在二噁烷中的4.0M HCl。混合物在Paar裝置上被氫化過夜并通過硅藻土進行過濾。將殘余物再溶解在甲醇中并添加0.20g的Pd(OH)2。將此淤漿在50psi在Paar裝置上氫化24小時。通過硅藻土過濾此淤漿并除去溶劑。殘余物無需提純而被用于下一步的反應中。
α-Boc-Arg(Z)2-C(OH)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe(11)將粗胺(0.220g，0.39mmol)溶于THF中并添加0.325g(0.91mmol)的N，N-Bis-Z-S-甲基-異硫脲。向此溶液中添加0.150g Hg(OAc)2(0.47mmol)，并將此混合物攪拌過夜。此溶液用EtOAc稀釋并依次用0.1N HCl、飽和的NaHCO3和鹽水洗滌。干燥此有機相并除去溶劑。殘余物在硅膠上進行色層分離后得到0.170g作為非對映體混合物的產物。Rf＝0.60，0.62，5%MeOH/CH2Cl2。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg(Z)2-C(OH)-CH2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe(12)向在5ml二噁烷中的0.228g(0.262mmol)(11)的溶液中添加0.656ml在二噁烷中的HCl。將此溶液攪拌1小時并再添加0.656ml的在二噁烷中的HCl。在再攪拌1小時后，除去溶劑并將殘余物置于真空下過夜。將水解產物溶于5ml CH2Cl2中并與0.120g(0.262mmol)的Adoc-D-t-Bug-Phe-OH相混合。向該溶液添加0.073ml(0.525mmol)的TEA，接著添加0.043ml的DECP。將所生成的混合物攪拌過夜。除去溶劑并對殘余物在硅膠上進行色層分離，得到作為非對映體混合物的0.086g產物。Rf＝0.65，0.68，4%ipa/CH2Cl2。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg(Z)2-C(O)-CF2-C(O)-Ala-Arg(NO2)-OMe向在5ml CH2Cl2中的0.094g(0.16mmol)Dess Martin periodinane的淤漿，通過注射器添加溶于0.5ml×××的0.091g(0.052mmol)的(12)。將此混合物攪拌0.5小時并添加在飽和的NaHCO3中的0.385g(1.55mmol)Na2S2O3。0.5小時后，用EtOAc提取此溶液，并分開有機相，用MgSO4干燥。除去溶劑，產生0.94g粗產物。Rf＝0.68，0.71，4%ipa/CH2Cl2。
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(O)-CF2-C(O)-Ala-Arg-OMe·TFA(13)將粗醇溶于2ml DMF中并加入50mg鈀黑。把此淤漿進行脫氣并加入0.040ml的在二噁烷中的4.0M HCl。在50psi下在Paar裝置中將此混合物氫化20小時。通過硅藻土過濾此淤漿，并除去溶劑。殘余物在反相柱(CH3CN/H2O/TFA)上進行色層分離，得到0.044g的純產物。
N，N′-雙羰基芐氧基-S-甲基-異硫脲(14)向在冷(0℃)的1N NaOH(36.0ml，36.0mmol)中的S-甲基異硫脲硫酸鹽二聚物(5.00g，18.0mmol)的溶液中，通過各別加料漏斗滴加11.3ml(79.0mmol)氯甲酸芐酯和79.0ml(79.0mmol)1N NaOH。將此淤漿在0℃下攪拌0.5小時，在室溫下攪拌1.5小時。用乙酸乙酯提取此溶液，用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)此濾液。在硅膠上進行色層分離得到2.62g純產物。Rf＝0.40(15%EtOAc/石油醚)。
Ⅲ.N-封端的連接部分的合成Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn在氬氣氛下向5ml的在甲苯中的15%碳酰氯溶液中添加0.140ml TEA(1.00mmol)。接著通過注射器滴加入在1ml甲苯中的0.112g(0.750mmol)1-金剛胺。將所得的淤漿攪拌0.3小時并通過用氬氣吹洗除去過量的碳酰氯。通過抽吸穿越燒結玻板漏斗濾出固體，除去溶劑。殘余物再溶解于二氯甲烷中并在氬氣氛下冷卻到0℃。向此溶液中添加0.140ml TEA(1.00mmol)，接著一次加入0.100g(0.250mmol)d-t-Bug-Phe-OBn·HCl。取出生成的溶液。經在硅膠上進行色層分離得0.350g產物。
將此化合物氫化，隨之與(11)的水解產物偶合，生成一化合物，后者被成功地加工成另一種N-封端的連接成份。
化合物的活性測定方法下面的非限制性方法是測定本發(fā)明的二氟五肽衍生物的消炎和/或鎮(zhèn)痛活性的方法。
已知對若干酶抑制作用的測定能預言化合物的消炎活性。這樣的酶測定法可用來測定本發(fā)明化合物的活性。這樣的酶測定法包括以下的各點豬胰激肽釋放酶(PPK)-見參考文獻A、E和F;人尿激肽釋放酶(HUK)-見參考文獻E和F;人血漿激肽釋放酶(HPK)-見參考文獻B和E;人血纖維蛋白溶酶(HP)-見參考文獻B和C;以及尿激酶(UK)-見參考文獻D。所指出的文獻是以下的一些，它們被引入本文作為參考文獻
(A)Lottenberg，R.，U.Christensen，C.M.Jackson & P.L.Coleman，“Assay of Coagulation Proteases Using Peptide Chromogenic and Fluorogenic Substrates，”Methods in Enzymology，Vol.80，Academic Press，New York，NY(1981)，pp.341-361;(B)Geiger，R.“Kallikrein，”Methods of Enzymatic Analysis，Vol.V，3rd Edition，Bergmeyer，ed.，Academic Press，New Nork，NY(1984)，pp.129-143;(C)Morris，J.P.，S.Blatt，J.R.Powell，D.K.Strickland & F.J.Castellino，“Role of Lysine Binding Regions in the Kinetic Properties of Human Plasmin，”Biochemistry，Vol.20，No.17(August 18，1981)p.4811;(D)Wohl，R.C.，L.Summaria & K.C.Robbins，“Kinetics of Activation of Human Plasminogen by Different Activator Species at pH 7.4 and 37℃”The Journal Biological Chemistry，Vol.255，No.5(March 10，1980)，pp.2005-2013;(E)Okunishi，H.，J.Burton & J.Spragg，“Specificity of Substrate Analogue Inhibitors of Human Urinary Kallikrein，”Hypertension，Vol.7，No.3，Suppl.1(May-June，1985)，pp.I-72-175;(F)Amundsen，E.，J.Putter，P.Friberger，M.Knos，M.Larsbraten & G.Claeson，“Methods for the Determination of Glandular Kallikrein by Means of a Chromogenic Tripeptide Substrate，”In Kinins-II part A，F(xiàn)uji，S.，et al.，eds.，Plenum Press，New York，NY(1979)pp.83-95.
活性的其他有效測定法是基于公開在Imperiali，B.和R.H.Abeles的“Inhibition of Serine Proteases by Peptidyl Fluoromethyl Ketones”，Biochemistry，Vol.25(1986)pp.3760～3767中的測定慢束縛酶抑制作用的方法。為了研究人血纖維蛋白溶酶、豬胰激肽釋放酶和人血漿激肽釋放酶的緩慢束縛抑制作用，對該方法按以下所述進行了改進。
反應反應混合物含78mM的Tris-Hcl緩沖劑、pH7.4，78mM NaCl，0.2mg/ml的牛血清蛋白，0.2mM S-2251(D-Val-Leu-Arg-對硝基N(某)酰苯胺)，0.5U/ml血纖蛋白溶酶(1μM)，以及可變濃度的被研究的試驗化合物。反應混合物的總體積為1ml。血纖蛋白溶酶的儲液為1U/ml(在50%甘油中)。S-2251的酶裂解所釋放的對-硝基苯胺所導致的吸光度變化使用一測度設定在A400-410～A470-490的HP-8450分光光度計系統(tǒng)進行監(jiān)控。溫度為30℃。
計算K觀測和Vs(穩(wěn)定狀態(tài)抑制速率)是使用Labtech Notebook 軟件，通過為綜合的速率方程式(ⅰ)選配連續(xù)曲線(前20分鐘)而測定的。從Vs和未抑制的速率V(方程式ⅱ)為每次操作計算出所估計的K1值，而(S)＝0.2mM和Km＝0.77mM。
(ⅰ)A＝Vst-[(Vs-Vo)/K觀測][1-exp(-K觀測t)]+Ao(ⅱ)K1＝(I)/[(V/Vs-1)(1+(S)/Km)]然后將不同次操作的K觀測相對于試驗化合物濃度的點連成線。Y＝mx+b(見方程式ⅲ)相配;然后計算K開＝m[1+(S)/Km]和K關＝b。最后，由方程式ⅳ計算K1。
(ⅲ)K觀測＝(I)[(V/Vs-1)(1+(S)/Km)](ⅳ)K1＝K關/K開已知幾種體內測定可用來預言化合物的消炎活性。這樣的體內測定適用于測定本發(fā)明化合物的活性。這樣的體內測定公開在被收作本文的參考文獻的以下參考文獻中
Winter，C.A.，E.A.Risley，G.V.Nuss，“Carrageenin-Induced Edema in Hind Paw of the Rat as an Assay for Antiinflammatory Drugs，”Proc.Soc.Exp.Biol.，N.Y.，Vol.111(1962)，pp.544-547;Vander Wende，C. & S.Margolin，“Analgesic Tests Based Upon Experimentally Induced Acute Abdominal Pain in Rats，”Federal Proceedings.，Vol.15(1956)，p.494;Blackham，A.，J.W.Burns，J.B.Farmer，H.Radziwonik，J.Westwick，“An X-Ray Analysis of Adjuvant Arthritis in the Rat.The Effect of Prednisolone and Indomethacin，”Agents and Actions，Vol.7/1(1977)，p.145-151;Winter，C.A. & G.W.Nuss，“Treatment of Adjuvant Arthritis in Rats with Anti-Inflammatory Drugs”Arthritis and Rheumatism，Vol.9，No.3(June，1966)，pp.394-404;and Francis，M.D.，K.Hovancik & R.W.Boyce，“NE-58095A Diphosphonate Which Prevents Bone Erosion and Preserves Joint Architecture in Experimental Arthritis，”Int.J.Tiss.Reac.，Vol.XI，No.5(1989)，pp.239-252.
使用本化合物的組合物與方法下列非限制性的實施例例舉性地說明本發(fā)明所關注的組合物與用途。
實施例 Ⅰ按常規(guī)方法制成藥片，每片含有以下的組成組分 數(shù)量(mg)Noc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-Leu-Arg-OMe 400微晶纖維素 200預膠化淀粉 200Povidone K-30 40硬脂酸鎂 20
給病人口服施藥，每次一片，一日四次，以減輕由于關節(jié)炎引起的關節(jié)炎癥。
實施例 Ⅱ按常規(guī)方法制成洗劑，洗劑具有以下組成組分 數(shù)量(%)eBroc-D-tBug-Phe-Arg-C(O)CF2C(O)-Gly-Arg-OMe 2.5甘油 4.0對羥基苯甲酸甲酯 0.2對羥基苯甲酸丙酯 0.1Carbopol934 0.15NaOH 0.46棕櫚酸鯨蠟醇十八烷醇酯 1.0硬脂酸 0.5羊毛脂脂肪酸 0.5鯨蠟醇 3.0黃原膠 0.3硬脂酰-2-乳酸鈉 0.75肉豆蔻酸異丙酯 2.0水 適量將一克洗劑局部敷施到皮膚的燒傷面上，一日二次以減輕發(fā)炎和疼痛。
實施例 Ⅲ按常規(guī)方法配制溶液，每2ml該溶液含有以下組成組分 數(shù)量(mg)Adoc-D-Phe-Phe-Lys-C(O)CF2C(O)-D-Phe-Arg-OH 80氯芐烷銨 40滅菌鹽水溶液 適量將該溶液的2ml劑量肌肉注射給關節(jié)炎病人以減輕發(fā)炎和疼痛。
實施例 Ⅳ按常規(guī)方法配制此溶液，該溶液含以下組成組分 數(shù)量(%)Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(O)CF2C(O)-Ala-Arg-OH 5.0氯芐烷銨 0.02羧甲基纖維素鈉 0.01鹽水溶液 適量將0.2ml劑量的此溶液通過吸入施給所需的病人以減輕由于哮喘引起的上呼吸道不適。
盡管對本發(fā)明的具體實施方案已作介紹，但是對本領域的熟練人員來說，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，顯然是能夠對本發(fā)明作出種種變化和改進的。所附的權利要求書被用來覆蓋所有處于本發(fā)明范圍內的這樣的改進。
權利要求
1.一類具有以下結構的化合物，及其藥物上可接受的鹽和水合物
其中(a)X選自含有從4至約15個碳原子的環(huán)烷基；含有至少二個分支和從6至約15個碳原子的支化烷基；以及含有從6至約15個碳原子的芳基；(b)n是一個選自從0至2的整數(shù)；(c)-V-選自-OC(O)-、-N(Q)C(O)-、-N(Q)C(S)-、-C(O)-、-SO2-以及-P(O)(OH)-；(d)-Q是氫；或者是直鏈或支鏈的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至6個碳原子的烷基；或者-Q和-X以共價鍵連結，形成一包含鍵合有-Q的氮原子和從約5至約20個碳原子的環(huán)狀部份；(e)Z是-O-或-NH-；當V是-OC(O)-時，-Z-是-NH-；(f)-R1選自直鏈的或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基；飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從3至約10個碳原子的環(huán)烷基；以及其中脂族部份是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基；而鍵合到-R1的碳原子既可處于D構型也可處于L構型；(g)-R2選自直鏈的或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基；飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從3至約10個碳原子的環(huán)烷基；以及其中脂族部份是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基；而鍵合到-R2的碳原子既可處于D構型也可處于L構型；(h)-R3是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)=NH，其中m是一個選自1至約6的整數(shù)，-A-是一共價鍵或對-苯基或對-環(huán)己基，-B-是一共價鍵或-NH-；而鍵合到-R3的碳原子處于L構型；(i)-R4選自直鏈的或支化的、飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從1至約6個碳原子的烷基；飽和的或帶有1或2個雙鍵的不飽和的、含有從3至約10個碳原子的環(huán)烷基；以及其中脂族部份是飽和的并含有1或2個碳原子的芳烷基；而鍵合到-R4的碳原子既可處于D構型也可處于L構型；(j)-R5是-(CH2)m-A-NH2或-(CH2)m-A-B-C(NH2)=NH，其中m是一個從1至約6的整數(shù)，-A-是一共價鍵或對-苯基或對-環(huán)己基，-B-是一共價鍵或-NH-；而鍵合到-R5的碳原子既可處于D構型也可處于L構型；以及(k)-Y是氫或甲基。
2.權利要求1的化合物，其中-V-是-OC(O)-或-NHC(O)-，而-Z-是-NH-。
3.權利要求2的化合物，其中(a)n是0或1;(b)m是一個從1至5的整數(shù);以及(c)-R1、-R2和-R4選自含有從1至約5個碳原子的直鏈或支化烷基，含有從3至約6個碳原子的環(huán)烷基，以及芐基。
4.權利要求3的化合物，其中-X是含有從8至約12個碳原子的飽和的和未取代的雙環(huán)或三環(huán)烷基，或者是含有從約8至約12個碳原子的未取代的芳基。
5.權利要求4的化合物，其中(a)-R3是-(CH2)m-A-NH2，其中-A-是一共價鍵，而m是從3至5;和(b)-R5是-(CH2)m-A-B-C(NH2)＝NH，其中-A-是一共價鍵，-B-是-NH-，而m是從2至約4。
6.權利要求5的化合物，其中-Y是甲基，-V-是-OC(O)-，而X是三環(huán)烷基。
7.權利要求6的化合物，其中-R1和-R4是含有從1至約4個碳原子的、飽和的和未取代的直鏈或支化烷基，而-R2是芐基。
8.一類具有以下結構的化合物，及其藥物上可接受的鹽和水合物
<p>在此所用術語“minoxidil”(長壓定)意指下式結構化合物
“Minoxidil”化學上稱為2，4-嘧啶二胺，6-(1-哌啶基)-3-氧化物。Minoxidil是Rogaine 中的活性成分，由Upjohn Company，Kalamazoo，Michigan出售用作刺激頭發(fā)生長的局部使用溶液。</p><p>在此所用術語“芳香酶抑制劑”涉及一組已知的甾族和非甾族的化合物，它阻止雄激素轉化為雌激素，例如Gormley等在國際專利公開WO92/18132中所公開。芳香酶抑制劑由Gormley等公開，當其與5-α-還原酶抑制劑結合使用時，可用于治療良性前列腺肥大。</p><p>用于本發(fā)明組合物中和方法中的優(yōu)選芳香酶抑制劑是4-(5，6，7，8-四氫咪唑并[1，5-α]吡啶-5-基)芐腈(fadrazol)。Fadrazole在US4728645中公開。此外，所有Gormley等在國際專利公開WO92/18132中公開的作為具有芳香酶抑制活性的化合物是本文所用的優(yōu)選芳香酶抑制劑。</p><p>如在此所用，當本文所述的5-α-還原酶抑制劑和另外的一種或多種活性成分一起使用時，所述5-α-還原酶抑制劑可與所述另<claim>13.權利要求12的化合物，其中X′選自金剛基氧基羰基、內冰片基氧基羰基和異松莰氧基羰基。
14.權利要求13的化合物，其中-AA1是叔丁基甘氨?；?X′是金剛基氧基羰基和-Y是甲基。
15.權利要求10的化合物，其中-Y是甲基。
16.一種藥物組合物，它包含(1)權利要求1、5、7、8、10、14或15中的任一種化合物;以及(2)一種藥物上可接受的載體。
17.一種治療發(fā)炎或疼痛的方法，它包括向需要這樣治療的人或低等動物施以安全和有效量的權利要求1、5、8、10或14中的任一種化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及消炎化合物，其結構如式。本發(fā)明還涉及包含以上化合物的藥物組合物，以及使用這樣的化合物和組合物來治療炎癥或疼痛的方法。
文檔編號A61K38/08GK1095072SQ93119938
公開日1994年11月16日 申請日期1993年12月22日 優(yōu)先權日1992年12月22日
發(fā)明者J·M·麥伊弗 申請人:普羅格特-甘布爾公司