專利名稱：氮基喜樹堿衍生物的制作方法
引言發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及可用于治療各種癌癥的新型喜樹堿衍生物。
背景技術(shù)：
喜樹堿(經(jīng)?？s寫為“CPT”)，一種具有植物毒性的生物堿，首先由Wall和同事于1966年從旱蓮木(紫樹科)的木材和樹皮中分離出來，顯示具有抗鼠白血病L1210體系的抗腫瘤活性。該化合物是在環(huán)E具有20S構(gòu)型的具有不對稱中心的五核環(huán)體系。該五核環(huán)體系包括吡咯并[3，4-b]喹啉(環(huán)A、B和C)、一共軛吡啶酮環(huán)D)、和具有20_-羥基的六元內(nèi)酯(環(huán)E)。喜樹堿本身基本上不溶于水。因此，早期在臨床上以水溶性羧酸鈉鹽評價喜樹堿。顯然，該羧酸鹽事實上是E環(huán)打開形成鈉鹽的化合物。該鈉鹽產(chǎn)生嚴重的毒性并且具有非常小的抗癌活性。因此早期對喜樹堿的工作在開始第II階段試驗之后就終止了。然而，當發(fā)現(xiàn)它抑制拓撲異構(gòu)酶(一種在分子事件如復制和轉(zhuǎn)錄期間DNA旋轉(zhuǎn)和松弛所需的酶)時又恢復了對該化合物的興趣。在文獻中已報道了大量該分子的合成和改性，并且在幾年內(nèi)已制備了新的衍生物。例如，托泊替堪(9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT)和藥薯(7-乙基-10[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基CPT)顯示出臨床有用的活性。本發(fā)明定義了一系列新的可用于治療各種癌癥的20S酯。這些新型化合物具有比CPT和其它CPT衍生物高的效力和低的毒性。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個方面是下式(I)的化合物，
其中R是RaRbN(CH2)m，m是1-10的整數(shù)(優(yōu)選2)，并且Ra和Rb各自獨立地是取代有1-5個取代基的低級烷基，所述1-5個取代基獨立地選自鹵素、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基或氨基；任選取代有1-5個取代基的苯基，所述1-5個取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、甲酰基、低級烷基羰基、羥基羰基、低級烷基羰基氧基、芐氧基、任選取代的哌啶基、低級烷氧基羰基和低級烷基羰基氨基；3-7個碳原子的環(huán)烷基，任選取代有1-5個獨立地選自以下的取代基鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基和低級烷基羰基氨基；低級烷氧基；或RaRb與N一起形成一環(huán)狀胺或亞氨基環(huán)；R2是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、-C(O)H、低級烷氧基羰基、三低級烷基甲硅烷基、低級烷基羰基氧基、低級烷基羰基氨基、低級烷基羰基氧基甲基、取代的乙烯基、1-羥基-2-硝基乙基、烷氧基羰基乙基、氨基羰基、烷基羰基、烷基羰基甲基、芐氧基甲基、芐基羰基氧基甲基或一-或二低級烷氧基甲基；
R3是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、CH2NR7R8(其中R7和R8各自獨立地是H-、1-6個碳原子的烷基、任選取代的苯基、羥基低級烷基、氨基低級烷基或一-或二烷基氨基低級烷基或者R7和R8與-N-一起代表一環(huán)狀氨基-)、-C(O)H、CH2R9(其中R9是低級烷氧基、CN、氨基低級烷氧基、一-或二-低級烷基氨基低級烷氧基、低級烷硫基、氨基低級烷硫基或一-或二-低級烷基氨基低級烷硫基)或NR10R11(其中R10和R11各自獨立地是氫、低級烷基、苯基、羥基低級烷基、氨基低級烷基或一-或二-低級烷基或者R10和R11，與-N-一起代表一環(huán)狀氨基)、二烷基氨基烷基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基；和R4是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、氨基低級烷基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、氨基甲?；趸⒌图壨榛驶趸虻图壨榛驶被蛘逺4與R3一起是亞甲基二氧基；R5是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基；和R6是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基。
本發(fā)明的另一方面是一種可用于治療溫血動物的癌癥的藥物組合物，該組合物包括本文定義的本發(fā)明化合物和藥用可接受的賦形劑。
本發(fā)明的另一方面是一種治療溫血動物的癌癥的方法，該方法包括給予治療有效量的本文定義的本發(fā)明化合物。該化合物通過適當給藥，例如經(jīng)口、局部或非腸道以治療有效劑量給予。
本發(fā)明的另一方面是本發(fā)明化合物的制備方法，將喜樹堿(CPT)或CPT類似物與式R-C(O)X的化合物反應(yīng)，其中R是RaRbN(CH2)2，其中Ra和Rb如本文定義的，并且X是例如溴根、氯根、羥基、1-11個碳原子的烷氧基。
通過閱讀接下來的說明書，本發(fā)明的其它方面對本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。
詳述概述一般說來，本發(fā)明可以認為是CPT或CPT類似物的(20S)酯。正如本文前面所述的，CPT是在第20位具有一個羥基的(S)立體異構(gòu)體。根據(jù)本發(fā)明的方法以立體專一轉(zhuǎn)化且高產(chǎn)率地將該羥基酯化形成相應(yīng)的(20S)酯。由于鏈中具有帶負電個體，因此所得酯是唯一的，據(jù)信這有助于穩(wěn)定喜樹堿分子中的E環(huán)。本發(fā)明的新型化合物在小鼠中具有抗腫瘤活性并且通常能很好地耐受。它們可用于治療各種類型的癌癥，并且可以配制成藥用制劑，例如經(jīng)口、局部或非腸道給藥。
盡管不希望受任何特定作用機理或這些化合物如何工作的理論解釋所限制，但是據(jù)信這些20S酯部分通過穩(wěn)定CPT分子的該E環(huán)產(chǎn)生其效果。這些酯可以通過以下實現(xiàn)這一點通過位阻防止酶進入該E環(huán)、通過該酯鏈中存在的吸電子基團，即氮原子、和通過CPT分子的E環(huán)末端與該酶的氫鍵或范德華力抑制結(jié)合并由此抑制酶活性作用該E環(huán)。
定義術(shù)語“CPT”是喜樹堿的簡稱，還稱作(S)-4-乙基-4-羥基-1H-吡喃并-[3’，4’6，7]吲嗪醇[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮。該化合物易于從許多源，例如Sigma Chemical Co.，St.Louis，Mo獲得。喜樹堿的化學式及其編號系統(tǒng)如下
該化合物在第20位有一羥基，將其酯化制得本發(fā)明的化合物。
術(shù)語“烷基”是指具有指示碳原子數(shù)的一價飽和烴基。例如，“C1-6烷基”或“1-6個碳原子的烷基”或“Alk 1-6”將是指在結(jié)構(gòu)中含有1-6個碳原子的烷基?！癈1-20烷基”是指具有1-20個碳原子的任何烷基。烷基可以是直鏈(即線性的)或支鏈。低級烷基是指1-6個碳原子的烷基。低級烷基的代表性實例包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、異丙基、異丁基、異戊基、戊基、仲丁基、叔丁基、叔戊基等。高級烷基是指7個或更多碳原子的烷基。這些包括正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十二烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、正二十烷基等，及其支化變體。這些自由基可以任選在不顯著干擾落入本發(fā)明范圍的化合物的制備并且不顯著降低這些化合物的功效的位置取代有取代基。烷基可以任選取代有1-5個取代基，這些取代基獨立地選自鹵素、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基或氨基。
術(shù)語“烷氧基”是指式RO-的一價自由基，其中R是如本文定義的烷基。低級烷氧基是指1-6個碳原子的烷氧基，其中高級烷氧基是7個或更多碳原子的烷氧基。代表性的低級烷氧基包括甲氧基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、正戊氧基、正己氧基、異丙氧基、異丁氧基、異戊氧基、戊氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、叔戊氧基等。高級烷氧基包括相應(yīng)于本文所述的高級烷基的那些。該自由基可以任選在不顯著干擾落入本發(fā)明范圍的化合物的制備并且不顯著降低這些化合物的功效的位置取代有取代基。該自由基可以任選取代有1-5個取代基，這些取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基或氨基。
術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有3個或更多成環(huán)碳原子的一價、脂環(huán)族、飽和烴基。盡管已知的環(huán)烷基化合物可以具有高達30個或更多碳原子，通常在環(huán)中有3-7個碳原子。后者例如包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。該自由基可以任選在不顯著干擾落入本發(fā)明范圍的化合物的制備并且不顯著降低這些化合物的功效的位置取代有取代基。該環(huán)烷基任選取代有1-5個取代基，這些取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基和低級烷基羰基氨基。
術(shù)語“羥基羰基”是具有式-C(O)OH的一價自由基。
術(shù)語“低級烷氧基羰基”是具有式-C(O)OAlk的一價自由基，其中Alk是低級烷基。
術(shù)語“低級烷基羰基氧基”是具有式-OC(O)Alk的一價自由基，其中Alk是低級烷基。
術(shù)語“低級烷基羰基氨基”是具有式-NHC(O)Alk的一價自由基，其中Alk是低級烷基。
“鹵素”取代基是選自氯、溴、碘和氟的一價鹵素自由基。“鹵代化合物”是取代有1個或多個鹵素取代基的那些。
“苯基”是通過從苯環(huán)除去一個氫原子形成的自由基。該苯基任選取代有1-5個取代基，這些取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羰基、羥基羰基、低級烷基羰基氧基、芐氧基、任選取代的哌啶基、低級烷氧基羰基和低級烷基羰基氨基。
氨基甲酰基氧基”是式R13R14NC(O)O-的一價自由基(即氨基羰基氧基)，其中R13和R14一起與氮原子形成環(huán)氨基，或者R13和R14各自獨立地是氫、低級烷基、羥基低級烷基、羥基低級烷基、氨基低級烷基、低級環(huán)烷基、苯基(取代或未取代的)或芐基(取代或未取代的)。實例包括氨基羰基氧基、甲基氨基羰基氧基、二甲基氨基羰基氧基、[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基、1-嗎啉基羰基氧基、1-吡咯烷基、1-哌嗪羰基氧基和本文描述的其它的。
“5-元雜環(huán)”是含有碳和至少一個其它元素(通常是氮、氧或硫)并且可以完全飽和、部分飽和或不飽和(即性質(zhì)上為芳族)的5-元閉環(huán)的一價自由基。通常該雜環(huán)將含有不超過2個雜原子。僅有一個雜原子的不飽和5-元雜環(huán)的代表性實例包括2-或3-吡咯基、2-或3-呋喃基和2-或3-噻吩基。相應(yīng)的部分飽和或完全飽和的自由基包括3-吡咯啉-2-基、2-或3-吡咯烷基、2-或3-四氫呋喃基和2-或3-四氫噻吩基。代表性的具有2個雜原子的不飽和5-元雜環(huán)自由基包括咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基等。也包括相應(yīng)的完全飽和和部分飽和的自由基。該雜環(huán)自由基通過雜環(huán)中可以利用的碳原子相連。該自由基可以任選在不顯著干擾落入本發(fā)明范圍的化合物的制備并且不顯著降低這些化合物的功效的位置取代有取代基。該環(huán)任選取代有1或2個取代基，這些取代基選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基和低級烷基羰基氨基。
“6-元雜環(huán)”是含有碳和至少一個其它元素(通常是氮、氧或硫)并且可以完全飽和、部分飽和或不飽和(即性質(zhì)上為芳族)的6-元閉環(huán)的一價自由基。通常該雜環(huán)將含有不超過2個雜原子。僅有一個雜原子的不飽和6-元雜環(huán)的代表性實例包括2-、3-或4-吡啶基、2H-吡喃基和4H-吡喃基。相應(yīng)的部分飽和或完全飽和的自由基包括2-、3-或4-哌啶基、2-、3-或4-四氫吡喃基等。代表性的具有2個雜原子的不飽和6-元雜環(huán)包括3-或4-噠嗪基、2-、4-或5-嘧啶基、2-吡嗪基等。也包括相應(yīng)的完全飽和和部分飽和的自由基，例如2-哌嗪。該雜環(huán)自由基通過雜環(huán)中可以利用的碳原子相連。該自由基可以任選在不顯著干擾落入本發(fā)明范圍的化合物的制備并且不顯著降低這些化合物的功效的位置取代有取代基。該環(huán)任選取代有1或2個取代基，這些取代基選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基和低級烷基羰基氨基。
“環(huán)氨基”是具有不多于1個其它雜原子(如氮、氧或硫)的飽和5-、6-或7-元環(huán)胺環(huán)的一價自由基或者與另一個碳環(huán)或幾個碳環(huán)稠合的5-、6-或7-元環(huán)胺的一價自由基。代表性實例包括例如1-吡咯烷基、1-哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、3-苯并哌啶基等。它們可以經(jīng)過取代或未經(jīng)過取代。如果經(jīng)過取代，通常它們具有不多于2個選自以下的取代基低級烷基、低級環(huán)烷基、羥基低級烷基、苯基(取代或未取代的)、芐基(取代或未取代的)、氨基羰基甲基、低級烷基氨基羰基甲基、氨基、一-或二-低級烷基氨基、環(huán)氨基或5-或6-元雜環(huán)。
“亞氨基環(huán)”是環(huán)酰亞胺，其中環(huán)狀結(jié)構(gòu)的氮在每一側(cè)與羰基相連，這樣依次與碳原子相連形成一環(huán)。亞氨基環(huán)將包括例如鄰苯二甲酰亞胺(它可以在苯環(huán)上被取代)、馬來酰亞胺、1，8-萘二甲酰亞胺(可以在萘環(huán)上取代，例如3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺、4-硝基萘二甲酰亞胺、4-溴-萘二甲酰亞胺等)。其它對本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。
其它化學術(shù)語是本領(lǐng)域技術(shù)人員借助標準教科書和詞典所理解的標準含義給出的。
術(shù)語“MTD”是最大允許劑量的縮寫。
術(shù)語“nM”是納摩爾的縮寫。
術(shù)語“ip”是腹膜內(nèi)的縮寫。
本發(fā)明的化合物本發(fā)明的一個方面是下式的化合物 其中R是RaRbN-(CH2)m，m是1-10的整數(shù)(優(yōu)選2)，并且Ra和Rb各自獨立地是取代有1-5個取代基的低級烷基，所述1-5個取代基獨立地選自鹵素、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基或氨基；任選取代有1-5個取代基的苯基，所述1-5個取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、甲?；⒌图壨榛驶?、羥基羰基、低級烷基羰基氧基、芐氧基、任選取代的哌啶基、低級烷氧基羰基和低級烷基羰基氨基；3-7個碳原子的環(huán)烷基，任選取代有1-5個獨立地選自以下的取代基鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基和低級烷基羰基氨基；低級烷氧基；或RaRb與N一起形成環(huán)狀胺或亞氨基環(huán)；R2是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、-C(O)H、低級烷氧基羰基、三低級烷基甲硅烷基、低級烷基羰基氧基、低級烷基羰基氨基、低級烷基羰基氧基甲基、取代的乙烯基、1-羥基-2-硝基乙基、烷氧基羰基乙基、氨基羰基、烷基羰基、烷基羰基氧基甲基、芐氧基甲基、芐基羰基氧基甲基或一-或二低級烷氧基甲基；R3是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、CH2NR7R8(其中R7和R8各自獨立地是H-、1-6個碳原子的烷基、任選取代的苯基、羥基低級烷基、氨基低級烷基或一-或二烷基氨基低級烷基或者R7和R8與-N-在一起代表環(huán)氨基-)、-C(O)H、CH2R9(其中R9是低級烷氧基、CN、氨基低級烷氧基、一-或二-低級烷基氨基低級烷氧基、低級烷硫基、氨基低級烷硫基或一-或二-低級烷基氨基低級烷硫基)或NR10R11(其中R10和R11各自獨立地是氫、低級烷基、苯基、羥基低級烷基、氨基低級烷基或一-或二-低級烷基或者R10和R11與-N-在一起代表環(huán)氨基)、二烷基氨基烷基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基；R4是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、氨基低級烷基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、氨基甲?；趸?、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基或者R4與R3一起是亞甲基二氧基；R5氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基；和R6是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基。
一個優(yōu)選方面是式(I)的化合物，其中R2-R6各自是H(或者優(yōu)選本文后面給出的)，m是2，并且RaRbN是環(huán)氨基或環(huán)亞氨基。
另一優(yōu)選方面是式(I)的化合物，其中R2-R6各自是-H(或者優(yōu)選本文后面給出的)，m是2，并且RaRbNCH2-CH2是以下環(huán)氨基乙基或環(huán)亞氨基乙基之一


本發(fā)明的其它方面包括本文前面所述的化合物，但是其中R2、R3、R4、R5和R6各自可以是除了氫之外的取代基。它們例如包括本文后面所述的優(yōu)選小組R6是氫的式(I)的化合物，特別是R4和R5一起是亞甲基二氧基并且其中R2是氫的化合物。這些化合物中特別感興趣的是R3是硝基、氨基、甲基、氯、氰基、乙酰氧基或乙?；被幕衔铩?br> R5和R6都是氫的式(I)的化合物，特別是R3是氫；R2是(3-氯-正丙基)二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、乙酰氧基甲基、氰基、乙?；蚁┗⒁已趸驶?乙烯基、氰基乙烯基、2，2-二氰基乙烯基、(2-氰基-2-乙氧基羰基)乙烯基、乙氧基羰基乙基、甲基、乙基或正丙基；和R4是羥基、乙酰氧基、氨基、硝基、氰基、氯、溴、氟、低級烷基、高級烷基、低級烷氧基、氨基甲?；趸蚣柞；幕衔?。其中，更感興趣的是R2是乙基且R4是氨基甲?；趸幕衔铩?yōu)選的氨基甲?；趸〈?-吡嗪基羰基氧基、4-(異丙基氨基羰基甲基)-1-吡嗪基-羰基氧基或[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基羰基氧基。
R2、R5和R6各自是氫的式(I)的化合物，例如R3是氨基、硝基、氰基、鹵素、OH、低級烷基氨基、二-低級烷基氨基、低級烷基、低級烷氧基、1-哌啶基、1-嗎啉基、氨基甲基、低級烷基氨基甲基、環(huán)烷基氨基甲基、二-低級烷基氨基甲基、環(huán)氨基甲基、乙酰氧基、乙?；被?、低級烷氧基甲基、ω羥基低級烷基氨基甲基、氰基甲基和R4是羥基、乙酰氧基、氰基、硝基、氨基、鹵素、甲酰基、低級烷氧基、氨基甲?；趸幕衔?。
R2、R3、R5和R6各自都是氫并且R4是-OC(O)烷基1-20的化合物。本發(fā)明的藥物組合物本發(fā)明的這一方面是一種可用于治療溫血動物的癌癥的藥物組合物，該組合物包括本文定義的本發(fā)明化合物以及一種藥用可接受的賦形劑。該組合物按照已知的配制技術(shù)制備以提供適用于經(jīng)口、局部、皮膚、直腸、經(jīng)吸入、非腸道(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或腹膜內(nèi))給藥等的化合物。制備本發(fā)明組合物的詳細指導通過參照the Mack PublishingCo.，Easton，Pa.18040出版的第18或19版的Remington’sPharmaceutical.Sciences找到。將這些相關(guān)部分加入本文作為參考。
包括單位劑量或多倍劑量形式，每種在某些臨床設(shè)置方面具有益處。該單位劑量將含有在治療癌癥的方案中經(jīng)計算產(chǎn)生所需效果的預定量的活性化合物。多倍劑量形式尤其可用于需要多份的單劑量或分劑量以獲得所需結(jié)果的時候。這些劑量形式都可以具有該特定化合物的唯一特性所指或者直接依賴于該唯一特性的規(guī)格、待獲得的特定治療效果、以及制備治療癌癥用的特定化合物的領(lǐng)域中固有的任何限制。
單位劑量將含有足夠治療患者的癌癥的治療有效量，并且可以含有約1.0-1000mg的化合物，例如約50-500mg。
該化合物優(yōu)選以例如可攝取的片劑、口腔片劑、膠囊、囊片、酏劑、懸劑、糖漿、糖錠、圓片、錠劑等的合適制劑經(jīng)口給藥。通常，最直接的制劑是片劑或膠囊(單獨或者合稱為“口服劑量單位”)。合適的制劑是按照可以獲得的標準配制技術(shù)制備的，該技術(shù)可以將化合物的特性與可用于配制適宜組合物的賦形劑相匹配。片劑或膠囊將優(yōu)選含有約50-約500mg的式(I)化合物。
該形式可以快速釋放化合物，或者可以是緩釋制品。該化合物可以包封在硬或軟膠囊中，可以壓制成片劑，或者可以與飲料、食品或其它物料一起加入到膳食中。最終組合物和制品的百分比當然可以變化，并且可以方便地占最終形式，例如片劑的重量的1-90％之間。這種治療有用的組合物中的量使得將獲得合適劑量。制備本發(fā)明的優(yōu)選組合物，以便口服劑量單位形式在劑量單位稱重為5-1000mg時含有約5.0-約50％重量(％w)。
口服劑量單位的合適制劑也可以含有粘合劑，例如黃芪膠、金合歡膠、玉米淀粉、明膠；甜味劑，例如乳糖或蔗糖；崩解劑，例如玉米淀粉、海藻酸等；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；或者風味劑，例如薄荷、冬綠油，等等。其它各種物質(zhì)可以涂層存在，或者以其它方式改進口服劑量單元的物理形式?？诜┝繂卧梢酝坎加邢x膠、糖或二者。糖漿或酏劑可以含有該化合物，含有蔗糖作為甜味劑，含有對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯作為防腐劑，含有染料和風味劑。所用的任何物質(zhì)應(yīng)是藥用上可接受的并且基本上無毒。有用的賦形劑類型的細節(jié)可以在第九版的“RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy，”Mack Printing Company，Easton，PA中找到。特別是參見第91-93章有更完整的討論。
化合物可以非腸道地給藥，例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)。載體或賦形劑或者賦形劑混合物可以是溶劑或含有例如各種極性或非極性溶劑、其合適混合物或油的分散介質(zhì)。本文所用的“載體”或“賦形劑”是指藥學上可接受的載體或賦形劑并包括任何和所有的溶劑、分散劑或介質(zhì)、涂層、抗微生物劑、等滲/低滲/高滲劑、吸收改進劑，等等。將這些物質(zhì)和試劑用于藥用活性物質(zhì)在本領(lǐng)域為公知。除了任何常規(guī)介質(zhì)或試劑不能與該活性成分相容的范圍之外，還考慮了其在治療組合物中的用途。而且，其它或補充的活性成分也可以加入到該最終組合物中。
可以在合適稀釋劑如水、乙醇、甘油、液體聚乙二醇、各種油、和/或其混合物、以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它物質(zhì)中制備該化合物的溶液。
適合注射使用的藥用形式包括無菌溶液、分散液、乳液和無菌粉末。最終形式必需在加工和貯藏條件下是穩(wěn)定的。而且，最終藥用形式必需防止污染，因此必需能夠抑制微生物如細菌或真菌的生長?？梢越o予單一靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)劑量?；蛘撸梢允褂镁徛L時間輸注或多次短時間每日輸注，典型地持續(xù)1-8天。也可以每隔一天或者每隔幾天一次劑量。
通過將化合物以所需量加入到一種或多種溶劑中，并且上面所列或者本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它組分可以根據(jù)需要加入，從而制得無菌的可注射溶液。無菌的可注射溶液是通過將該化合物以所需量加入到該合適溶劑以及根據(jù)需要的各種其它組分中制得的。然后進行殺菌步驟，例如過濾。典型地，通過將該化合物加入到無菌載體(也含有如上所述的分散介質(zhì)和所需的其它組分)中制備分散液。在為無菌粉末的情況下，優(yōu)選方法包括真空干燥或冷凍干燥，其中加入任何所需的組分。
在所有情況下，所述的最終形式必需無菌并且還必需能夠容易地通過注射設(shè)備如中空針。通過適當選擇溶劑或賦形劑可以獲得并保持適當粘度。而且，可以使用分子或微粒涂層如卵磷脂，適當選擇分散液的粒徑，或者使用具有表面活性劑性能的物質(zhì)。
通過加入一種或多種抗微生物劑如三氯叔丁醇、抗壞血酸、對羥基苯甲酸酯類、硫柳汞等可以實現(xiàn)防止或抑制微生物生長。也可以優(yōu)選包括改變其張力的試劑如糖或鹽。
盡管本發(fā)明的化合物易溶于水，但是在某些情況下，例如本發(fā)明的化合物不太易溶于水的情況下，可提供脂質(zhì)體遞送。通過將本發(fā)明的化合物加入、包封、包圍或誘捕到脂質(zhì)載體或脂質(zhì)體中、上，或者被脂質(zhì)囊泡或脂質(zhì)體或膠束包封、包圍或誘捕，該體系將本發(fā)明的化合物束縛。
已成功地使用脂質(zhì)體將藥物給予癌癥患者，并且已顯示臨床上可用于遞送抗癌藥如阿霉素、柔紅霉素和順鉑絡(luò)合物。Forssen等人，Cancer Res.1992，523255-3261；Perex-Soler等人，CancerRes.1990，504260-4266；和Khokhar等人，J.Med.Chem.1991，34325-329，將它們?nèi)募尤氡疚淖鳛閰⒖肌?br> 類似地，也已使用膠束將藥物遞送給患者，(Broden等人，ActaPharm Suec.19267-284(1982))并且已使用膠束作為藥物載體并用于遞送靶藥物(D.D.Lasi c，Nature 335279-280(1992)；和Supersaxo等人，Pharm Res.81280-1291(1991))，包括癌癥藥物，(Fung等人，Biomater.Artif.Cells.Artif.Organs 16439以及下列等等(1988)；和Yokoyama等人，Cancer Res.513229-3236(1991))，將它們?nèi)亩技尤氡疚淖鳛閰⒖肌?br> 可以將含有本發(fā)明化合物的脂質(zhì)體和/或膠束給予癌癥患者，典型地經(jīng)靜脈內(nèi)給予。而且制備可用于本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物的指導可以在美國專利6,096,336中找到，將其加入本文作為參考。
本發(fā)明的治療方法本發(fā)明的另一方面是一種治療溫血動物的癌癥的方法，該方法包括給予治療有效量的本文定義的本發(fā)明化合物。通過藥用上可接受的給藥路徑如口、非腸道(例如，肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi))、透皮、直腸、通過吸入等將用于本發(fā)明的化合物以治療有效劑量給予需要這些化合物的合適對象。
術(shù)語癌癥應(yīng)廣義上認為是惡性新生物、異常組織塊、超過正常組織的生長以及與正常組織的生長不協(xié)調(diào)，并且在引起該變化的刺激物停止之后保持相同過度方式的生長。異常組織塊無目的，并且事實上是自主的在宿主身上滋生。癌癥也可以認為是惡性腫瘤。新生物的進一步討論在“Robbins Pathologic Basis of Disease，”第六版，R.S.Cotran、V.Kumar和T.Collins，第8章(W.B.SaundersCompany)中找到。將第8章的信息加入本文作為參考。下表A提供了癌癥類型的實例，即可以通過給藥本發(fā)明化合物治療的惡性腫瘤或新生物。
表A源組織 惡性由實質(zhì)細胞型組成間充質(zhì)腫瘤結(jié)締組織和和衍生物 纖維肉瘤脂肉瘤軟骨肉瘤成骨肉瘤內(nèi)皮和相關(guān)組織血管 血管肉瘤淋巴管 淋巴肉瘤滑膜 滑膜瘤間皮 間皮瘤顱蓋 侵入性腦瘤血細胞和相關(guān)細胞造血干細胞 白血病淋巴組織 惡性淋巴瘤肌肉平滑肌 平滑肌肉瘤橫紋肌橫紋肌肉瘤上皮瘤復層扁平上皮 鱗狀細胞或表皮樣癌皮膚或附件的基質(zhì)細胞 基質(zhì)細胞癌上皮內(nèi)層腺或管腺癌乳頭狀癌囊腺癌呼吸道支氣管原癌支氣管腺癌(良性腫瘤)神經(jīng)外胚層惡性黑素瘤腎上皮細胞腎細胞癌肝細胞肝細胞癌尿道上皮細胞(過渡型) 過渡細胞癌胎盤上皮細胞(滋養(yǎng)層) 絨膜癌睪丸上皮細胞(生殖細胞)精原細胞瘤胚癌多個新生細胞-混合瘤，經(jīng)常得自一個胚層唾液腺唾液腺源的惡性混合瘤胸葉狀惡性囊性肉瘤腎原基Wilms瘤多個新生細胞型得自多個胚層-畸形的性腺或胎性剩余部分中的全不成熟畸胎瘤，畸胎肉瘤能細胞因此本發(fā)明的化合物可用于治療白血病和實體腫瘤，例如結(jié)腸、結(jié)腸-直腸、卵巢、乳房、前列腺、肺、腎以及黑素瘤。采用的劑量范圍將取決于給藥路徑以及治療的患者的年齡、體重和健康狀況。這些化合物可以通過例如非腸道路徑，例如肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或通過大丸注入給藥。
本文所用的本發(fā)明的CPT衍生物的“治療有效量”打算指的是將抑制癌生長、或者延緩癌生長、或者殺死惡性細胞，并使惡性腫瘤消退和減輕，即減少這些腫瘤的體積或大小或者完全消除該腫瘤的量。
就哺乳動物，包括人而言，這些有效量可以體表面積為基礎(chǔ)給藥。劑量的相互關(guān)系隨不同大小的動物和物種而變化，并且E.J.Freireich等人，Cancer Chemother.Rep.，50(4)219(1966)針對人(以mg/m2體表面積為基礎(chǔ))進行了描述。體表面積可以大致由個體的身高和體重確定(參見例如Scientific Tables，GeigyPharmaceuticals，Ardsley，N.Y.第537-538頁(1970))。合適的劑量范圍是每m2體表面積1-1000mg等價的本發(fā)明化合物，例如50-500mg/m2。
就所有的給藥路徑而言，可以改變這些劑量的精確給藥時間以獲得最佳結(jié)果。通常，如果使用英脫利匹特20作為這些CPT衍生物的載體時，到達患者的CPT衍生物的實際劑量將較少。這是由于CPT衍生物在注射器、針和制備容器的壁上有一些損失，這對于英脫利匹特20懸液是普遍的。當使用例如棉籽油的載體時，由于CPT衍生物沒有這么大地粘附到注射器等的表面上，因此上述損失并不普遍。
本發(fā)明提供的該方法的另一重要特征涉及按照本文教導給藥的CPT衍生物的相對低的表觀總體毒性?？梢允褂酶鞣N標準判斷總體毒性。例如，對象的體重損失超過最初記錄的體重(即治療之前)的10％可以認為是一個毒性信號。此外，對象的總體移動性和活性的損失以及腹瀉或膀胱炎的信號也可以解釋為毒性的證據(jù)。
本發(fā)明的方法本發(fā)明的另一方面是本發(fā)明化合物的制備方法，包括將喜樹堿(CPT)或CPT類似物與式R-C(O)X的化合物反應(yīng)，其中R是RaRbN(CH2)m，Ra和Rb如本文定義的，并且X是例如溴根、氯根、羥基、1-11個碳原子的烷氧基(例如-O(CH2)nCH3，其中n是1-10的整數(shù))或者R-C(O)O-(R是如本文前面定義的)。優(yōu)選X是OH。以RaRbN(CH2)mC(O)X所示的化合物可以是指氨基鏈烷酸或氨基鏈烷酸衍生物，例如其中m是2時，它是“氨基丙酸″”或“氨基丙酸衍生物”。獲得這種氨基鏈烷酸(例如氨基丙酸)的一種方法是通過將合適的氨基RaRbNH或亞氨基RaRbNH(或其酸加成鹽)與ω-鹵代鏈烷酸(例如3-鹵代丙酸酯)反應(yīng)，然后水解該酯形成酸。優(yōu)選的鹵代丙酸酯的實例包括3-溴丙酸乙酯、3-氯丙酸乙酯或3-碘丙酸乙酯。其它相應(yīng)的烷基酯(例如，甲酯、丙酯等，可以使用，但是優(yōu)選乙酯)。優(yōu)選3-溴丙酸乙酯。在一些情況下，由相應(yīng)的氨基丙酸制備?；u可能是有用的。這些?；u是通過將相應(yīng)的氨基丙酸與鹵化劑(例如SOCl2、PCl3、POCl3、PCl5、PBr3等)反應(yīng)獲得的。優(yōu)選?；?。一旦制備該酸或其衍生物，將其與CPT反應(yīng)形成CPT的(S)-20-酯，即本發(fā)明的化合物。該反應(yīng)順序可以概括如下1.
(X＝OH，烷氧基)(A) (B)(C)2.
(X＝烷氧基)(D)2’(X＝OH) (D’)3.(或類似物)(I)在步驟1中，反應(yīng)條件將隨所用的準確反應(yīng)物而變化。一般說來，用于該反應(yīng)的溶劑可以是含水或非水的。優(yōu)選，溶劑將是可與水混溶的極性有機溶劑，例如低級鏈烷醇(優(yōu)選乙醇)。其它有用的極性溶劑的實例包括甲醇、丙醇、丙酮和二甲基聚酰胺(DMF)。該反應(yīng)通常在有堿金屬鹽如碳酸氫鈉的情況下進行。反應(yīng)溫度將隨反應(yīng)物和這些溶劑而變化，并且在約20℃-約180℃的范圍內(nèi)，優(yōu)選在回流溫度下，直到自由胺消失，即不再檢測到。結(jié)束反應(yīng)所需的時間通常不大于約20小時，優(yōu)選不大于約6小時。
在步驟2中，通過水解反應(yīng)將式(C)的化合物轉(zhuǎn)變成式(D)的化合物，通常分兩步進行。該步驟的反應(yīng)條件將隨反應(yīng)的化合物而變化。一般說來，用于該轉(zhuǎn)化的溶劑可以是含水的，優(yōu)選溶劑是水，或者僅有水或者與水混性有機溶劑一起。特別有用的溶劑的實例是水和二噁烷的混合物。第一階段反應(yīng)的pH是堿性的，例如在10-14的范圍內(nèi)，優(yōu)選約12-14。合適的無機堿如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉，是有用的。反應(yīng)溫度將在約0℃-約60℃的范圍內(nèi)，優(yōu)選約20℃-約25℃。結(jié)束反應(yīng)所需的時間通常不大于10小時，優(yōu)選不大于約4小時。然后用合適酸如鹽酸將該混合物酸化至pH小于4，例如3，并按照標準化學合成方法用合適溶劑如乙酸乙酯萃取(如果需要的話)。經(jīng)常最終丙烯以固體沉淀并過濾出來。
在步驟2’中，在合適條件下通過與鹵化劑如SOCl2、PCl3、POCl3、PCl5、PBr3等反應(yīng)將式C的化合物(即氨基丙酸)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酰基鹵。
在本方法的步驟3中，式(D)或(D’)的化合物與CPT或CPT類似物以大致等摩爾量在適合形成本發(fā)明化合物20-(S)立體異構(gòu)體的條件下反應(yīng)。反應(yīng)在有合適的偶合劑如碳二亞胺化合物，例如二異丙基碳二亞胺，但是優(yōu)選1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和4-(二甲基氨基)吡啶(DMAP)的情況下在有合適溶劑，優(yōu)選非水的非極性溶劑的情況下進行。該步驟中有用的溶劑的實例包括鹵代鏈烷，例如二氯甲烷或三氯甲烷)和DMF。二氯甲烷是特別有用的。反應(yīng)溫度在約20℃-約40℃的范圍內(nèi)，優(yōu)選約20℃-約25℃。結(jié)束反應(yīng)所需的時間通常不大于約20小時。經(jīng)常小于約10小時。應(yīng)注意，R2-R6之一是RaRbN(CH2)-C(O)O-與R是RaRbN(CH2)2一起的式(I)的化合物是通過將R2-R6(特別是R4)是羥基的CPT類似物反應(yīng)獲得的。在這種情況下，該化合物(例如10羥基CPT)，與2摩爾當量的氨基丙酸反應(yīng)得到二取代的CPT衍生物。
制備本發(fā)明優(yōu)選化合物的另一方法涉及用合適的酸酐開始，將其轉(zhuǎn)化為亞氨基丙酸，依次按照上述3步反應(yīng)順序?qū)⑵渑cCPT或CPT類似物反應(yīng)得到本發(fā)明的化合物。該酸酐轉(zhuǎn)化可以如下所示 通常該酸酐與β-丙氨酸在有合適溶劑和催化劑的情況下反應(yīng)。合適溶劑包括極性、水混性溶劑，例如醇類、丙酮、二噁烷等。優(yōu)選乙醇。合適的催化劑是二甲基氨基吡啶(DMAP)。通常，該反應(yīng)在回流溫度下進行不到10小時，例如約3小時。加入水使得該化合物沉淀，然后干燥得到稱作(D)的最終亞氨基丙酸。然后該化合物與CPT或CPT類似物反應(yīng)得到本發(fā)明的化合物。
在上面的反應(yīng)順序的步驟1中，式(A)所代表的合適胺包括以下物質(zhì)1-(3-三氟甲基)苯基哌嗪；1-(4-芐基)哌嗪；1-[4-(3-甲氧基苯基)]哌嗪；1-[4-(4-硝基苯基)]哌嗪；1-(4-苯基)哌嗪；1-[4-(2-氯苯基)]哌嗪(以其HCl鹽)；1-[4-(4-氟苯基)]哌嗪；3-[4-(4-乙?；交?哌嗪；4-芐基哌啶；哌啶；哌嗪；嗎啉；等。
本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本說明書的指導將想到其它代表性的胺。
在步驟2中，式(C)所代表的合適的3-環(huán)氨基丙酸酯包括以下物質(zhì)3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸乙酯；3-(4-芐基-1-哌嗪基)丙酸乙酯；3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸乙酯；3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸乙酯；3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸乙酯；3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸乙酯；3-(4-芐基-1-哌啶基)丙酸乙酯；3-[4-(4-乙酰基苯基)-1-哌嗪基]丙酸乙酯；等。
在步驟3中，合適的CPT類似物是如本文獻中所述在7、9、10、11或12位取代的CPT的化合物。該CPT類似物可以取代有本領(lǐng)域已知的取代基或者可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過本文給出的內(nèi)容制備。教導這些類似物如何制備或者這些類似物可以購自哪里的代表性文章在以下雜志(將其加入本文作為參考)中找到1.J.Med.Chem.1998，41，31-372.J.Med.Chem.2000，43，3970-39803.J.Med.Chem.1993，36，2689-27004.J.Med.Chem.1991，34，98-1075.J.Med.Chem.2000，43，3963-39696.Chem.Pharm.Bull.39(10)2574-2580(1991)7.Chem.Pharm.Bull.39(6)1446-1454(1991)8.ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY，1999年12月第2862-2868頁9.European Journal of Cancer，第34卷第10期第1500-1503頁，199810.CANCER RESEARCH 55，753-760，1995年2月15日11.Anti-Cancer Drug Design(1998)，13，145-157
12.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 8(1998)415-418合適的CPT類似物包括如下，其中名稱后面的圓括號中的數(shù)字是指上面所列的雜志文章喜樹堿(CPT)；(20S)-7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA-藥薯)；(20S)-9-硝基CPT(1)；(20S)-7-氯-正丙基二甲基甲硅烷基CPT(2)；(20S)-10-羥基-7-氯-正丙基二甲基甲硅烷基CPT(2)；(20S)-10-乙酰氧基-7-氯-正丙基二甲基甲硅烷基CPT(2)；(20S)-7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT(2)；(20S)-10-羥基-7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT(2)；(20S)-10-乙酰氧基-7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT(2)；(20S)-9-羥基CPT(3)；(20S)-9-氨基CPT(3)；(20S)-10-氨基CPT(3)；(20S)-9-氨基-10-羥基CPT(3)；(20S)-9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT(3)；(20S)-9-甲基氨基CPT；(20S)-9-甲基CPT(3)；(20S)-9-二甲基氨基CPT；(20S)-9-氯CPT(3)；(20S)-9-二甲基氨基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；(20S)-9-氟CPT(3)；(20S)-9-哌啶基CPT；(20S)-9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(3)；(20S)-9-嗎啉基甲基CPT(4)；
(20S)-10-羥基CPT(3)；(20S)-9，10-二氯CPT(3)；(20S)-10-溴CPT(3)；(20S)-10-氯CPT(3)；(20S)-10-甲基CPT(3)；(20S)-10-氟CPT(3)；(20S)-10-硝基CPT(3)；(20S)-10，11-亞甲基二氧基CPT(3)；(20S)-10-甲?；鵆PT(3)；(20S)-10-壬基羰基氧基CPT(12)；(20S)-10-十一基羰基氧基CPT(12)；(20S)-10-十五基羰基氧基CPT(12)；(20S)-10-十七基羰基氧基CPT(12)；(20S)-10-十九基羰基氧基CPT(12)；(20S)-9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT(3)；(20S)-9-(4-甲基哌嗪基甲基)-10-羥基(CPT)(4)；(20S)-9-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基甲基]-10-羥基CPT(4)；(20S)-9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；(20S)-9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT(3)；(20S)-9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；(20S)-9-乙酰氧基-10，11-亞甲基二氧基CPT；(20S)-9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；(20S)-9-氨基甲基-10-羥基CPT；(20S)-9-乙氧基甲基-10-羥基CPT(4)；(20S)-9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；(20S)-9-正丙基氨基甲基-10-羥基CPT(4)；(20S)-9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(4)；(20S)-9-環(huán)己基氨基甲基-10-羥基CPT(4)；(20S)-9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT(4)；
(20S)-9-(三甲基銨基)甲基-10-羥基CPT，甲磺酸鹽(4)；(20S)-9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT(4)；(20S)-9-氰基甲基-10-羥基CPT(4)；(20S)-CPT-7-醛(5)；(20S)-10-甲氧基CPT-7-醛(5)；(20S)-7-乙酰氧基甲基CPT(5)；(20S)-7-乙酰氧基甲基-10-甲基CPT(5)；(20S)-7-氰基-10-甲氧基CPT(5)；(20S)-7-氰基CPT(5)；(20S)-7-甲?；蚁┗鵆PT(5)；(20S)-7-乙氧基羰基乙烯基CPT(5)；(20S)-7-氰基乙烯基CPT(5)；(20S)-7-(2，2-二氰基乙烯基)CPT(5)；(20S)-7-(2-氰基-2-乙氧基羰基)乙烯基CPT(5)；(20S)-7-乙氧基羰基乙基CPT(5)；(20S)-7-乙基CPT(6)；(20S)-7-正丙基CPT(6)；(20S)-7-乙酰氧基甲基CPT(6)；(20S)-7-正丙基羰基氧基甲基CPT(6)；(20S)-7-乙氧基羰基CPT(6)；(20S)-7-乙基-10-羥基CPT；(20S)-7-乙基-10-乙酰基氧基CPT；(20S)-7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；(20S)-7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；(20S)-7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；和CPT的(20S)-7-乙基-10-氨基甲酰基氧基衍生物，例如(20S)-7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-哌啶基羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-(1-哌嗪)羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-(4-異丙基氨基羰基甲基哌嗪)羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[4(1-吡咯烷基)哌嗪]羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[(4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[4-(二-正丙基氨基)-1-哌啶基]羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[(4-(二-正丁基氨基)-1-哌啶基]羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[4-(1-吡咯烷基)-1-哌啶基)]羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基CPT(7)；(20S)-7-乙基-10-[N-甲基-N-2-(二甲基氨基)乙基氨基]羰基氧基CPT(7)等。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將想到，按照上面文章中所述的教導并用本領(lǐng)域想到的適當步驟改變，可以制備其它類似的化合物。
在步驟3中，式(D)的合適的3-氨基丙酸包括如下3-苯二甲酰亞氨基丙酸；3-馬來酰亞氨基丙酸；3-(3-硝基1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸；3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸；3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞氨基)丙酸；3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]-丙酸；3-[(4-芐基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸；3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸；
3-(1-哌啶基)丙酸；3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸；3-[4-(4-乙?；交?1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(3，4-二氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(3，4-亞甲基二氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(4-氯苯基)-1-哌啶基]丙酸；3-(4-甲酰基-1-哌嗪基)丙酸；3-(4-乙基-1-哌嗪基)丙酸；3-[4-(4-氯苯基)苯基甲基-1-哌嗪基]丙酸；3-(4-氰基-4-苯基-1-哌啶基)丙酸；3-反式-4-肉桂?；?1-哌嗪基)丙酸；3-[4-(2-甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(2，3-二甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸；3-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]丙酸；3-[4-(2-嘧啶基)-1-哌嗪基]丙酸；3-(4-環(huán)己基-1-哌嗪基)丙酸；3-[4-(-(2-吡啶基)芐基-1-哌嗪基]丙酸；3-(4-嗎啉基)丙酸；3-(1-吡咯啉基)丙酸；4-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丁酸；5-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]戊酸；等。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將想到，其它類似的3-氨基丙酸可以從商業(yè)源獲得或者通過用于步驟3的本領(lǐng)域想到的步驟制備，從而制備本發(fā)明的化合物。通過將CPT類似物表中所示的化合物與式(D)化合物表中所示的化合物按照反應(yīng)條件的方案反應(yīng)，將獲得本發(fā)明的化合物。這些化合物將呈現(xiàn)或大或小程度的所需特性。本文提供的是這類化合物中優(yōu)選小組的指導。
實施例給出以下實施例提供代表性化合物，它們作為本發(fā)明的一部分包括在本發(fā)明內(nèi)。這些實施例還描述了有助于確定這些化合物的效用的體外和體內(nèi)試驗。實施例1-15中的喜樹堿酯是由相應(yīng)的氨基丙酸和喜樹堿制備的。所有這些實施例中將使用化學式命名適當化合物(例如NaHCO3是碳酸氫鈉)。在命名這些化合物時，通常使用兩種方案。每個實施例的篇頭所用的一種方案是指該化合物為丙酸的喜樹堿20S-酯。所用的另一方案是指該化合物為喜樹堿-20-O-3-丙酸酯。每一方案意味著命名相同化合物。例如，在實施例1中，3-苯二甲酰亞氨基丙酸的喜樹堿-20S-酯是與喜樹堿-20-O-3-苯二甲酰亞氨基丙酸酯相同的化合物。
實施例1本實施例解釋如何制備未取代和取代的2-苯二甲酰亞氨基丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-苯二甲酰亞氨基丙酸的喜樹堿-20S-酯(000503)將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-苯二甲酰亞氨基丙酸(12.7mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到12mg喜樹堿-20-O-3-苯二甲酰亞氨基丙酸酯，mp158-161℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.39(s，1H，Ar-H)、8.23(d，1H，Ar-H)、7.95(d，1H，Ar-H)、7.84(t，1H，Ar-H)、7.80(s，2H，Ar-H)、7.69(t，1H，Ar-H)、7.63(s，2H，Ar-H)、7.24(s，1H，Ar-H)、5.67(d，1H，H17)、5.40(d，1H，H17)、5.28(s，2H，H5)、4.00(t，2H，NCH2)、2.98(m，2H，COCH2)、2.25(d，2H，CH2)、0.97(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氧基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；
7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例2本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-馬來酰亞氨基丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-馬來酰亞氨基丙酸的喜樹堿-20S-酯(010104)將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-馬來酰亞氨基丙酸(10mg，0.059mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到6 mg喜樹堿-20-O-3-馬來酰亞氨基丙酸酯，mp 243-245℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.40(s，1H，Ar-H)、8.24(d，1H，Ar-H)、7.96(d，1H，Ar-H)、7.85(t，1H，Ar-H)、7.68(t，1H，Ar-H)、7.26(s，1H，Ar-H)、7.18(s，1H，Ar-H)、6.67(s，1H，Ar-H)、5.65(d，1H，H17)、5.41(d，1H，H17)、5.30(s，2H，H5)、3.84(t，2H，NCH2)、2.93(m，2H，COCH2)、2.25(d，2H，CH2)、0.97(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；
9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例3本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-(3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-(3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的喜樹堿-20S-酯(001117)1.3-(3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的合成將3-硝基-1，8-萘二甲酸酐(243mg，1.0mol)、β-丙氨酸(90mg，1.0mol)、DMAP(10mg，0.1mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流3小時。然后加入15ml水。將該混合物過濾，固體用水洗滌，然后在爐中干燥，得到224mg 3-(3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸灰色固體，mp250-255℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ9.39(d，1H，Ar-H)、8.85(d，1H，Ar-H)、8.70(d，1H，Ar-H)、8.61(d，1H，Ar-H)、8.00(t，1H，Ar-H)、4.25(t，2H，NCH2)、2.62(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-[3-(3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸酯]的合成將喜樹堿(10mg，0.027mmol)、3-(3-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)-丙酸(18mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到12mg標題化合物，mp225-227℃。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；
9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例4本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的喜樹堿-20S-酯(001128)1.3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的合成將4-硝基-1，8-萘二甲酸酐(243mg，1.0mol)、β-丙氨酸(125mg，1.4mol)、DMAP(10mg，0.1mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流3小時。然后加入15ml水。將該混合物過濾，固體用水洗滌，然后在爐中干燥，得到227mg 3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸灰色固體，mp220-222℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.69(t，1H，Ar-H)、8.60(m，2H，Ar-H)、8.54(d，1H，Ar-H)、8.08(t，1H，Ar-H)、4.25(t，2H，NCH2)、2.62(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-[3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸酯]的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)-丙酸(13mg，0.041mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到10mg喜樹堿-20-O-[3-(4-硝基-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸酯]，mp263-265℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.76(d，1H，Ar-H)、8.69(d，1H，Ar-H)、8.63(d，1H，Ar-H)、8.40(s，1H，Ar-H)、8.24(d，1H，Ar-H)、8.18(d，1H，Ar-H)、7.96(d，1H，Ar-H)、7.89(t，1H，Ar-H)、7.84(t，1H，Ar-H)、7.69(t，1H，Ar-H)、7.27(d，1H，Ar-H)、5.65(d，1H，H17)、5.42(d，1H，H17)、5.28(s，2H，H5)、4.52(t，2H，NCH2)、2.96(dm，2H，COCH2)、2.25(d，2H，CH2)、0.93(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；
9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氧基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例5本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的喜樹堿-20S-酯(001220)1.3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸的合成將4-溴-1，8-萘二甲酸酐(277mg，1.0mol)、β-丙氨酸(120mg，1.3mol)、DMAP(10mg，0.1mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流3小時。將該混合物過濾，固體用乙醇洗滌，然后在爐中干燥，得到300mg 3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸灰色固體，mp220-225℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.58(t，2H，Ar-H)、8.35(d，1H，Ar-H)、8.24(d，1H，Ar-H)、8.01(t，1H，Ar-H)、4.25(t，2H，NCH2)、2.59(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-[3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸酯]的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)-丙酸(19mg，0.056mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到12.3mg喜樹堿-20-O-[3-(4-溴-1，8-萘二甲酰亞胺)丙酸酯]，mp250-252℃(度)。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.61(d，1H，Ar-H)、8.49(d，1H，Ar-H)、8.38(s，1H，Ar-H)、8.36(d，1H，Ar-H)、8.19(d，1H，Ar-H)、7.94(m，2H，Ar-H)、7.84(t，1H，Ar-H)、7.75(t，1H，Ar-H)、7.68(t，1H，Ar-H)、7.29(s，1H，Ar-H)、5.65(d，1H，H17)、5.43(d，1H，H17)、5.28(s，2H，H5)、4.50(t，2H，NCH2)、3.00(dm，2H，COCH2)、2.25(d，2H，CH2)、0.94(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氧基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；
7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例6本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]-丙酸的喜樹堿-20S-酯(001101)1.3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-(3-三氟甲基苯基)哌嗪(510mg，2.2mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流3小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中。混合物在室溫下攪拌過夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到500mg 3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸白色固體，mp228-230℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.47(t，1H，Ar-H)、7.29(t，2H，Ar-H)、7.15(d，1H，Ar-H)、3.36(m，10H，NCH2)、2.89(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸(19mg，0.063mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到11.4mg喜樹堿-20-O-3-[4-(3-三氟甲基苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯，mp87-90℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.35(s，1H，Ar-H)、7.99(d，1H，Ar-H)、7.89(d，1H，Ar-H)、7.64(dt，2H，Ar-H)、7.30(s，1H，Ar-H)、7.17(t，1H，Ar-H)、6.99(d，1H，Ar-H)、6.93(s，1H，Ar-H)、6.85(d，1H，Ar-H)、5.69(d，1H，H17)、5.42(d，1H，H17)、5.28(s，2H，H5)、3.22(m，6H，NCH2)、2.71(m，6H NCH2和COCH2)、2.25(d，2H，CH2)、0.99(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；
9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙酰基氧基CPT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例7本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[(4-芐基)哌嗪-1-基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[(4-芐基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯(001204)1.3-[(4-芐基)-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-(4-芐基)哌嗪(380mg，2.16mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到265mg 3-[(4-芐基)-1-哌嗪基]丙酸，mp165-166℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.38(m，4H，Ar-H)、3.40-2.60(m，14H，NCH2和COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[(4-芐基)-1-哌嗪基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[(4-芐基)哌嗪-1-基]丙酸(14.3mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到8mg喜樹堿-20-O-3-[(4-芐基)-1-哌嗪基]丙酸酯，mp206-208℃(度)。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.40(s，1H，Ar-H)、8.20(d，1H，Ar-H)、7.95(d，1H，Ar-H)、7.83(t，1H，Ar-H)、7.68(t，1H，Ar-H)、7.23(m，6H，Ar-H)、5.67(d，1H，H17)、5.42(d，1H，H17)、5.29(q，2H，H5)、3.40(s，2H，NCH2Ar)、2.73(d，4H，NCH2CH2CO)、2.52(bs，8H，NCH2)、2.25(d，2H，CH2)、0.98(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；
7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例8本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯(001129)1.3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-(4-(3-甲氧基苯基))哌嗪(384mg，2mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到191mg 3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸，mp180-183℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ10.75(bs，1H，COOH)、7.15(t，1H，Ar-H)、6.58(d，1H，Ar-H)、6.53(s，1H，Ar-H)、6.44(d，1H，Ar-H)、4.00-3.00(m，10H，NCH2)、2.88(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪-1-基]丙酸(15.3mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到16mg喜樹堿-20-O-3-[4-(3-甲氧基苯基)-1-哌嗪-1-基]丙酸酯，mp98-100℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.35(s，1H，Ar-H)、8.06(d，1H，Ar-H)、7.91(d，1H，Ar-H)、7.71(t，1H，Ar-H)、7.64(t，1H，Ar-H)、7.31(s，1H，Ar-H)、7.05(t，1H，Ar-H)、6，60-6.30(m，3H，Ar-H)、5.68(d，1H，H17)、5.41(d，1H，H17)、5.28(q，2H，H5)、3.79(s，2H，NCH2)、3.73(s，3H，OCH3)、3.20(t，4H，NCH2)、2.80-2.60(m，6H，NCH2，CH2CO)、2.25(dm，2H，CH2)、1.00(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；
9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氧基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例9本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯(010105)1.3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-(4-(4-硝基苯基))哌嗪(414mg，2mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到300mg 3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸，mp250-252℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ11.90(bs，1H，COOH)、8.11(d，2H，Ar-H)、7.14(d，2H，Ar-H)、3.34(t，10H，NCH2)、2.88(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸(16mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到mg喜樹堿-20-O-3-[4-(4-硝基苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯，mp255-257℃(度)。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.34(s，1H，Ar-H)、7.98(d，1H，Ar-H)、7.91(d，2H，Ar-H)、7.88(d，1H，Ar-H)、7.63(m，2H，Ar-H)、7.30(s，1H，Ar-H)、6.56(d，2H，Ar-H)、5.69(d，1H，H17)、5.43(d，1H，H17)、5.28(q，2H，H5)、3.39，3.33(d，4H，NCH2)、2.76-2.56(t，8H，NCH2)、2.25(dm，2H，CH2)、100(t，3H CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氧基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；
7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例10本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸的喜樹堿-20S-酯(010108)1.3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸的合成將1-(4-苯基)哌嗪(324mg，2mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到246mg 3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸，mp213-215℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.26(t，2H，Ar-H)、7.00(d，2H，Ar-H)、6.87(t，1H，Ar-H)、3.37(t，10H，NCH2)、2.83(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-(4-苯基哌嗪-1-基)丙酸(13.4mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到mg喜樹堿-20-O-3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙酸酯，mp200-202℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.34(s，1H，Ar-H)、7.98(d，1H，Ar-H)、7.91(d，2H，Ar-H)、7.88(d，1H，Ar-H)、7.63(m，2H，Ar-H)、7.30(s，1H，Ar-H)、6.56(d，2H，Ar-H)、5.69(d，1H，H1 7)、5.43(d，1H，H17)、5.28(q，2H，H5)、3.39，3.33(d，4H，NCH2)、2.76-2.56(t，8H，NCH2)、2.25(dm，2H，CH2)、1.00(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；
9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例11本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯(010117)1.3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-[4-(2-氯苯基)]哌嗪一鹽酸鹽(466mg，2mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到246mg 3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸，mp210-213℃。
通過1HNMR(D2O，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.44(d，1H，Ar-H)、7.29(t，1H，Ar-H)、7.18(d，1H，Ar-H)、7.10(t，1H，Ar-H)、3.64-3.08(m，10H，NCH2)、2.85(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸(15mg，0.056mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到mg喜樹堿-20-O-3-[4-(2-氯苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯，mp190-192℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.38(s，1H，Ar-H)、8.07(d，1H，Ar-H)、7.91(d，1H，Ar-H)、7.71(t，1H，Ar-H)、7.64(t，1H，Ar-H)、7.30(s，1H，Ar-H)、7.28(d，1H，Ar-H)、6.98(t，1H，Ar-H)、6.88(t，1H，Ar-H)、6.70(d，1H，Ar-H)、5.68(d，1H，H17)、5.42(d，1H，H17)、5.28(q，2H，H5)、3.06(s，4H，NCH2)、2.76-2.56(t，8H，NCH2)、2.25(dm，2H，CH2)、1.00(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；
9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例12本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯(010124)1.3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-[4-(4-氟苯基)]哌嗪(360mg，2.0mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到482mg 3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸，mp178-180℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.09(d，2H，Ar-H)、7.04(t，2H，Ar-H)、3.40-3.32(m，101H，NCH2)、2.91(t，2H，COCH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]-丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[4-(4-氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸(15mg，0.056mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到12mg喜樹堿-20-O-3-[4-(氟苯基)-1-哌嗪基]丙酸酯，mp162-165℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.36(s，1H，Ar-H)、8.05(d，1H，Ar-H)、7.92(d，2H，Ar-H)、7.72(t，1H，Ar-H)、7.65(t，2H，Ar-H)、7.28(s，1H，Ar-H)、6.79(m，2H，Ar-H)、6.65(m，2H，Ar-H)、5.71(d，1H，H17)、5.43(d，1H H17)、5.27(q，2H，H5)、3.11(t，4H，NCH2)、2.83-2.50(m，8H，CH2)、2.25(dm，2H，CH2)、0.98(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；
9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例13本實施例解釋如何制備未取代和取代的喜樹堿-20-O-3-(1-哌啶基)丙酸酯。
A.喜樹堿-20-O-3(1-哌啶基)丙酸酯(001124)將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-(1-哌啶基)丙酸(10mg，0.063mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到5mg喜樹堿-20-O-3-(1-哌啶基)丙酸酯，mp175-177℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.39(s，1H，Ar-H)、8.20(d，1H，Ar-H)、7.94(d，1H，Ar-H)、7.83(t，1H，Ar-H)、7.67(t，1H，Ar-H)、7.26(s，1H，Ar-H)、5.70(d，1H，H17)、5.41(d，1H，H17)、5.29(s，2H，H5)、2,79(d，4H，NCH2)、2.52(bs，4H，NCH2CH2CO)、2.25(d，2H，H18)、1.62(6H，CH2)、1.00(s，3H，CH3)B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；
9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例14本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸酯的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸酯的喜樹堿-20S-酯(010122)1.3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸的合成將4-芐基哌啶(350mg，2.0mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到346mg，3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸，mp214-215℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.29(t，2H，Ar-H)、7.19(m，3H，Ar-H)、3.40(d，，2H，NCH2)、3.22(d，4H，CH2)、2.86(m，5H，CH2CH2CO和H4)、2.56(s，2H，Ar-CH2)、1.74(m，5H，CH2)。
2.喜樹堿-20-O-3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸(14mg，0.056mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH 9∶1)分離所得固體，得到10mg喜樹堿-20-O-3-[1-(4-芐基)哌啶基]丙酸酯，mp195-197℃。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.39(s，1H，Ar-H)、8.22(d，1H，Ar-H)、7.95(d，1H，Ar-H)、7.83(t，1H，Ar-H)、7.67(t，1H，Ar-H)、7.22(m，3H，Ar-H)、7.15(d，1H，Ar-H)、7.04(d，2H，Ar-H)、5.69(d，1H，H17)、5.42(d，1H，H17)、5.29(q，2H，H5)、2.90(d，2H，NCH2)、2.79(d，4H，NCH2)、2.42(d，2H，Ar-CH2)、2.25(dm，2H，CH2)、1.94-1.20(m，5H，CH2CHCH2)、1.00(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT
7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；被?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙酰基氧基CPT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例15本實施例解釋如何制備未取代和取代的3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯。
A.3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸的喜樹堿-20S-酯(010201)1.3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸的合成將1-[4-(4-乙?；交?]哌嗪(408mg，2.0mmol)、3-溴丙酸乙酯(500mg，2.7mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)和乙醇(15ml)的反應(yīng)混合物回流6小時，直到胺完全消失。將該混合物過濾之后，將所得固體溶解在5ml二噁烷和14ml 5％氫氧化鈉溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后用濃鹽酸酸化。固體經(jīng)過濾并用水洗滌，然后干燥，得到330mg 3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸，mp204-206℃。
通過1HNMR(DMSO-d6，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ7.86(d，2H，Ar-H)、7.07(d，2H，Ar-H)、3.40-3.32(m，10H，NCH2)、2.82(t，2H，COCH2)、2.48(s，3H，COCH3)。
2.喜樹堿-20-O-3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸酯的合成將喜樹堿(10mg，0.029mmol)、3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸(16mg，0.058mmol)、EDCI(25mg，0.13mmol)、DMAP(2mg，0.02mmol)和二氯甲烷(3ml)的混合物于室溫下攪拌20小時，然后向該溶液中加入二氯甲烷(20ml)。有機層用水(20ml)、飽和NaHCO3水溶液(10ml)和鹽水(20ml)洗滌，然后在MgSO4上干燥。在減壓下除去溶劑之后，通過柱色譜法(洗脫劑CHCl3∶CH3OH9∶1)分離所得固體，得到8.7mg喜樹堿-20-O-3-[4-(4-乙?；交?-1-哌嗪基]丙酸酯，mp218-220℃(度)。
通過1HNMR(CDCl3，600MHz)進行化學結(jié)構(gòu)分析δ8.34(s，1H，Ar-H)、8.02(d，1H，Ar-H)、7.88(d，1H，Ar-H)、7.72(d，2H，Ar-H)、7.62(m，2H，Ar-H)、7.31(s，1H，Ar-H)、6.66(d，2H，Ar-H)、5.69(d，1H，H17)、5.42(d，1H，H17)、5.28(q，2H，H5)、3.35(d，4H，NCH2)、2.79-2.60(t，8H，NCH2)、2.50(s，3H，COCH3)、2.25(dm，2H，CH2)、1.00(t，3H，CH3)。
B.通過用其它喜樹堿類似物替換本實施例的A部分中的喜樹堿制備本發(fā)明的其它化合物。在命名喜樹堿類似物時，使用標準編號體系，同時使用“CPT”作為喜樹堿的縮寫。其它喜樹堿類似物包括以下10，11-亞甲基二氧基CPT；9-硝基CPT；9-氨基CPT；9-氨基-10-羥基CPT；
9-甲基氨基CPT；9-二甲基氨基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT(AKA托泊替堪)；9-哌啶基CPT；9-嗎啉基CPT7-乙基-10-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰基氧基)-CPT(AKA藥薯)；7-叔丁基二甲基甲硅烷基CPT；7-叔丁基二甲基甲硅烷基-10-羥基CPT；9-硝基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-甲基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氯-10，1-亞甲基二氧基CPT；9-氰基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙?；趸?10，11-亞甲基二氧基CPT；9-乙酰基氨基-10，11-亞甲基二氧基CPT；9-氨基甲基-10-羥基CPT；9-甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-二甲基氨基甲基-10-羥基CPT；9-(2-羥基乙基)氨基甲基-10-羥基CPT；9-嗎啉基甲基-10-羥基CPT；7-乙基-10-羥基CPT；7-乙基-10-乙?；趸鵆PT；7-甲基-10-氨基羰基氧基CPT；7-正丙基-10-哌啶基羰基氧基CPT；7-乙基-10-(2-二甲基氨基)乙基CPT；等。
實施例16本實施例提供細胞生長和測定本發(fā)明化合物對細胞生長的影響的指導。所有細胞購自DCTDC Tumor Repository，NCI，NIH。
細胞簇形成試驗將400個細胞(HCT 116，PC-3)或500個細胞(VM46)鋪板在60mm含有2.7ml培養(yǎng)基(改進的McCoy’s 5a培養(yǎng)基)(含10％胎牛血清和100u/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素)的陪替氏培養(yǎng)皿中。這些細胞在CO2恒溫箱中于37℃下培養(yǎng)5小時，用于附著到陪替氏培養(yǎng)皿的底部。以10倍最終濃度在培養(yǎng)基中制備新鮮的藥物，然后將0.3ml的該原液加入到該培養(yǎng)皿中的2.7ml培養(yǎng)基中。然后將這些細胞與藥物一起于37℃下培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)結(jié)束時，將含有藥物的培養(yǎng)基傾析出，培養(yǎng)皿用4ml的Hank’s平衡鹽溶液(HBSS)沖洗，加入5ml新鮮培養(yǎng)基，并將這些培養(yǎng)基返回到恒溫箱中用于形成簇。使用簇計數(shù)器分別計數(shù)培養(yǎng)7天之后HCT116細胞和PC-3細胞的細胞簇以及培養(yǎng)8天之后VM46細胞的細胞簇。計算HCT 116細胞的細胞存活率(％/)，如表I所示。
可以確定每一測定化合物的ID50值(產(chǎn)生50％簇形成抑制的藥物濃度)。本實施例中所述的指導可用于其它細胞，例如DU-145。
表I該表提供了對細胞系HCT116在實施例16中進行的體外功效試驗的結(jié)果。
實施例17本實施例提供了本發(fā)明化合物在C3H/HeJ小鼠上進行體內(nèi)毒性試驗的指導。
在C3H/HeJ小鼠(體重18-22g)上評價本發(fā)明化合物的急性毒性。通過Gad和Chengelis(參見例如“Acute ToxicologyTesting，”第2版，Shayne O.Gad和Christopher P.Chengelis，第186-195頁(Academic Press))所述的標準步驟測定MTD40(40天的最大允許劑量)值。在這些連續(xù)型研究中，2只小鼠給予40和100 mg/kg的低和適中劑量。如果以這些劑量沒有發(fā)生嚴重且不可逆的毒性(需要安樂死)，以180mg/kg開始一對新的動物，它比100mg/kg高1.8倍。以1.8的系數(shù)連續(xù)增加劑量(在3對動物上約3個劑量，即每一藥物劑量給予2只小鼠)，直到出現(xiàn)嚴重且不可逆的毒性(需要安樂死)。然后將另一對動物以最高非致死劑量開始，并以系數(shù)1.15連續(xù)增加劑量。這樣進行的結(jié)果是兩個劑量，如果出現(xiàn)嚴重且不可逆的毒性并且需要安樂死，那么一個顯然是非致死的，另一個是致死的，它們以系數(shù)1.15間隔。以每一劑量給藥6只小鼠。如果在較低劑量沒有出現(xiàn)嚴重且不可逆的毒性，并且至少一個在較高劑量出現(xiàn)嚴重且不可逆的毒性，那么該較低劑量被認為是該MTD。本發(fā)明的化合物通過腹膜內(nèi)注射給予C3H/HeJ小鼠。以每日檢查小鼠持續(xù)45天評價藥物毒性。報道的毒性參數(shù)是MTD40。該MTD定義為在一個處理組不引起嚴重不可逆毒性，但是至少一個動物出現(xiàn)嚴重且不可逆的毒性并且在接下來的較高劑量安樂死的最高劑量。
實施例18本實施例提供了本發(fā)明化合物在患MTG-B瘤的C3H/HeJ小鼠上進行體內(nèi)功效試驗的指導。
在患MTG-B的C3H/HeJ小鼠上進行本發(fā)明化合物的研究。將這些腫瘤植入小鼠的脅腹中并在7-10天達到直徑8mm(268.08mm3)之后，這些腫瘤以指數(shù)地生長。此時開始治療，第一天的治療指定為計算和繪圖的第0天。使用一次注射和Q2D×3的方案(每2天總共3次以1/3 MTD治療)對小鼠以腹膜內(nèi)注射3個藥物劑量水平(1/3、1/2、1×MTD)?；?mm直徑腫瘤的小鼠對照組僅用載體治療。藥物治療之后，每天2次地觀察動物。當一個腫瘤達到1.5g時，將患該腫瘤的小鼠安樂死。記錄從第0天用抗癌藥物治療的小鼠的存活天數(shù)(T)以及從第0天對照小鼠的存活天數(shù)(C)。使用式T/C％＝(用抗癌藥物治療的小鼠的存活天數(shù)T/對照小鼠的存活天數(shù)C)×100％計算腫瘤生長抑制值(T/C％)。
每天可以用測徑規(guī)測定腫瘤大小。以可互換值1mm3＝1mg為基礎(chǔ)使用二維固體腫瘤(長L和寬W)的每日量度(mm)計算腫瘤重量[腫瘤重量＝(長×寬2)/2]。通過計算治療組和對照組腫瘤達到1,000mg所需的中時(以天計)確定腫瘤生長延遲(T-C值)。測定腫瘤加倍時間(Td)，并通過式log細胞殺死＝(T-C值)/(3.32×Td)計算腫瘤細胞殺死?？梢杂^察并記錄治療之后的消退效果(完全消退消退在觸診極限以下；部分消退治療塊減少50％以上的消退)。
通常，對照小鼠的存活時間是6天?？梢杂嬎阌帽景l(fā)明化合物治療的小鼠超出的存活天數(shù)(與對照相比)與用紫杉酚治療的小鼠超出的存活天數(shù)(與對照相比)的比例。例如，如果該小鼠存活18天，而相比較紫杉酚治療的小鼠存活9天，那么CD/紫杉酚比將是18-6/9-6＝12/3＝4。
實施例19本實施例提供在有不同血液組分的情況下測定喜樹堿衍生物的內(nèi)酯環(huán)(E)的水解動力學的指導?？梢允褂枚緾18逆相高效液相色譜(HPLC)試驗。有關(guān)描述可在以下參考文獻中找到J.Med.Chem.2000，43，3970-3980；Anal.Biochem.1993，212，285-287；和Biochemistry 1994，33，10325-10336。
還參見J.Med.Chem.1998，41，31-37。
實施例20
本實施例提供了測定拓撲異構(gòu)酶I的抑制的指導。該步驟是一個完整的細胞試驗并且是一種在Cancer Res.1986，46，2021-2026中找到的公開步驟的改進。最接近的文獻可以在J.Med.Chem.1993，36 2689-2700的2699中找到。本文使用前面步驟的改進定量拓撲異構(gòu)酶I介導的DNA在完整細胞中的分裂量。在培養(yǎng)物中生長的HL-60細胞的DNA通過加入[3H]胸腺嘧啶核苷標記。將這些細胞與帶測定和溶解的化合物接觸，并且將蛋白質(zhì)沉淀。與拓撲異構(gòu)酶I以可分裂的復合物形成的放射性DNA與蛋白質(zhì)一同沉淀。用液體閃爍計數(shù)器計數(shù)這些顆粒對可分裂的復合物形成量定量。
權(quán)利要求
1.下式的化合物 其中R是RaRbN-(CH2)m，m是1-10的整數(shù)，并且Ra和Rb各自獨立地是取代有1-5個取代基的低級烷基，所述1-5個取代基獨立地選自鹵素、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基或氨基；任選取代有1-5個取代基的苯基，所述1-5個取代基獨立地選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、甲酰基、低級烷基羰基、羥基羰基、低級烷基羰基氧基、芐氧基、任選取代的哌啶基、低級烷氧基羰基和低級烷基羰基氨基；3-7個碳原子的環(huán)烷基，任選取代有1-5個獨立地選自以下的取代基鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基和低級烷基羰基氨基；低級烷氧基；或RaRb與N一起形成一環(huán)狀胺或亞氨基環(huán)；R2是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、甲?；?、低級烷氧基羰基、三低級烷基甲硅烷基、低級烷基羰基氧基、低級烷基羰基氨基、低級烷基羰基氧基甲基、取代的乙烯基、1-羥基-2-硝基乙基、烷氧基羰基乙基、氨基羰基、烷基羰基、烷基羰基氧基甲基、芐氧基甲基、芐基羰基氧基甲基或一-或二低級烷氧基甲基；R3是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、甲?；⒌图壨檠趸驶?、CH2NR7R8(其中R7和R8各自獨立地是H-、1-6個碳原子的烷基、任選取代的苯基、羥基低級烷基、氨基低級烷基或一-或二烷基氨基低級烷基或者R7和R8與-N-一起代表一環(huán)狀氨基-)、CH2R9(其中R9是低級烷氧基、CN、氨基低級烷氧基、一-或二-低級烷基氨基低級烷氧基、低級烷硫基、氨基低級烷硫基或一-或二-低級烷基氨基低級烷硫基)或NR10R11(其中R10和R11各自獨立地是氫、低級烷基、苯基、羥基低級烷基、氨基低級烷基或一-或二-低級烷基或者R10和R11與-N-一起代表一環(huán)狀氨基)、二烷基氨基烷基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基；和R4是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、氨基低級烷基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、甲?；⒌图壨檠趸驶?、氨基甲酰基氧基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基或者R4與R3一起是亞甲基二氧基；R5是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、甲?；⒌图壨檠趸驶?、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基；和R6是氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、RC(O)O(R定義如本文前面的)、氰基、硝基、氨基、鹵代低級烷基、鹵代低級烷氧基、羥基羰基、甲酰基、低級烷氧基羰基、低級烷基羰基氧基或低級烷基羰基氨基。
2.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，m是2并且RaRbN-(CH2)m是
3.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
4.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
5.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
6.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
7.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
8.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
9.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
10.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
11.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
12.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
13.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
14.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
15.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
16.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
17.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
18.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
19.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
20.如權(quán)利要求1的化合物，其中R2-R6各自是H，并且RaRbN-(CH2)m是
21.如權(quán)利要求1的化合物，其中m是2，R2、R3、R4、R5和R6各自是氫，并且RaRbN是一環(huán)狀氨基或一亞氨基環(huán)。
22.如權(quán)利要求21的化合物，其中RaRbN是一環(huán)狀氨基。
23.如權(quán)利要求21的化合物，其中RaRbN是一亞氨基環(huán)。
24.一種可用于治療溫血動物的癌癥的藥物組合物，該組合物包括如權(quán)利要求1所述的化合物和藥用可接受的賦形劑。
25.如權(quán)利要求24的藥物組合物，適合口服。
26.如權(quán)利要求24的藥物組合物，適合IV給藥。
27.如權(quán)利要求24的藥物組合物，適合IM給藥。
28.一種使用如權(quán)利要求1所述的化合物與一種藥用可接受的賦形劑混合形成可用于治療溫血動物的癌癥的藥物組合物的方法。
29.如權(quán)利要求28的方法，其中該動物是人。
30.如權(quán)利要求28的方法，其中該化合物經(jīng)口給藥。
31.如權(quán)利要求28的方法，其中該化合物經(jīng)IV給藥。
32.如權(quán)利要求28的方法，其中該化合物經(jīng)非腸道給藥。
33.一種如權(quán)利要求1的化合物的制備方法，該方法包括將(a)與(b)反應(yīng)(a)式R-C(O)X的化合物，其中R是如權(quán)利要求1定義的RaRbN(CH2)2，并且X是羥基、氯根、或者R-C(O)-O(其中R是如本文前面定義的)(b)下式的化合物 其中R2、R3、R4、R5和R6如權(quán)利要求1定義的。
34.如權(quán)利要求29的方法，其中反應(yīng)是在有偶合劑1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽以及催化劑4-(二甲基氨基)吡啶的情況下進行。
全文摘要
本申請?zhí)峁┝讼矘鋲A類似物的(20S)酯類。這些化合物是氨基鏈烷酸或亞氨基鏈烷酸與喜樹堿的(20S)酯，它任選在喜樹堿環(huán)的7、9、10、11和12位上取代。這些化合物可用于治療癌癥。
文檔編號A61P11/00GK1511159SQ02809054
公開日2004年7月7日 申請日期2002年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月1日
發(fā)明者楊立錫, 泮顯道, 王慧娟 申請人:加利福尼亞太平洋醫(yī)學中心, 威斯特天主教保健中心