專利名稱：一種從含羞草中提取總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于黃酮提取方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種從含羞草中提取總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
含羞草為豆科(Fabaceae)含羞草屬(Mimosaceae)植物含羞草(Mimosa pudica) 的全草，為亞灌木狀草本植物，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、望江南、怕丑草，剌 含羞草等。含羞草原產(chǎn)于熱帶美洲，1645年由荷蘭人引入臺(tái)灣，主要分布在我國(guó)華 東、華南、西南等地的山坡叢林、路旁、濕地，今作為觀賞植物廣為栽培?！度珖?guó)中
草藥匯編》載含羞草"甘、濯、涼，具有清熱利尿、化痰止咳、安神lM的作用。 《廣西本草選編》記載"味甘微濯，性涼，有小毒。有安神鎮(zhèn)靜，涼血止血功效。
臨床多用于急性肝炎，神經(jīng)衰弱，失眠，肺結(jié)核咳血，血尿，小兒疳積，結(jié)膜炎，跌 打損傷，帶狀皰疹等癥。近年來有關(guān)于它治療糖尿病療效較好的報(bào)道。
含羞草中的主要化學(xué)成分為黃酮苷、酚類、氨基酸、有機(jī)酸、植物甾醇類等成分， 在含羞草較多的活性成分中，尤以黃酮苷類的含量較高且活性突出。現(xiàn)已從含羞草中 分離得到的黃酮類化合物包括有葒草苷、異葒草苷、5，7,3' ，4'-四羥蒼6~C-[P-D-斧糖- (1—4) ]-P-D-葡糖黃酮碳苷、5,7，3' ，4' -四羥基-8-C-D-芹糖-(1—4) ]-e-D-葡糖黃酮碳苷、5，7，4，-三羥基-6-C-[。-L-鼠李糖(1—2)] -》-D-葡糖黃酮碳苷、7,8,3， ，4，-四羥基-6"C-[a-L-鼠李糖-(1—2)]-D-葡 糖黃酮CT、7，8,3， ，4，-四羥基-8-C-[a-L-鼠李||~(1—2)]-3-D"葡糖黃酮碳苷 等，其中所含的葒草苷、異荮草苷等黃酮苷類成分結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，不宜被 破壞，具 有抗氧化、降血壓、增加冠脈流量、降血脂、抗菌消炎等方面的活性。目前，尚未見 到從含羞草中提取純化總黃酮類化合物的報(bào)道。近年來從中草藥中提取黃酮類化合物的方法多采用超聲提取法、回流提取法及冷浸提取法，采用這些方法存在溶齊鵬量大、 提取時(shí)間長(zhǎng)、操作麻煩、工作效率較低等缺點(diǎn)，且分離純化黃酮類成分多采用反復(fù)硅 膠柱色譜，操作步驟多，有機(jī)溶劑用量大，尤其是常要用到氯仿、甲醇等有害^U, 對(duì)環(huán)境造成污染，生產(chǎn)成本高。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種快速?gòu)暮卟?中提取總黃酮的方法的技術(shù)方案，該方法工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，總黃酮的轉(zhuǎn)移率高。 所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟
1) 將含羞草全草晾干后粉碎成粗粉，過篩；
2) 將含羞草粗粉m滲漉筒中，用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇進(jìn)行滲漉，收 集滲漉液；
3) 滲漉液真空M，回收乙醇，得到 液；
4) 脫色處理步驟3)得到的繊液用活性織聲脫色，抽濾，除去活性碳，
5) 步驟4)得到的濾液真空濃縮，得到濾液濃縮液；
6) 大孔樹脂純化將步驟5)得到的濾液濃縮液通過大孔吸附樹脂分離富集， 然后先用H20洗脫，再依次用10 70%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，最后用70%丙酮洗脫， 分別收集3倍柱體積的各部位洗脫液，合并10 70%含水乙醇各部位的洗脫液，將合 并的洗脫液艦鄉(xiāng)，得到洗脫繊夜；
7) 二次大 L樹脂純化將步驟6)中得到的洗脫l縮液通過大孔吸附樹脂柱分 離富集，然后先用H20洗脫，再依次用10 70%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，最后用70% 丙酮洗脫，分別收集3倍柱體積的各部位洗脫液，合并20 60%含水乙醇各部位的洗 脫液，將合并的洗脫液Mil^t縮、再進(jìn)一步真空濃縮干燥，即得含羞草總黃酮提取物 干粉。
5戶，的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟l)中含羞草全草挑
選后打成粗粉，過20 40目篩。
所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟2)中將含羞草粗粉 m滲漉筒中，用50 80%的含水乙醇浸泡12 14小時(shí)后，用含羞草粗粉8 16倍 量的50 80%含水乙醇進(jìn)行滲漉提取，流速為4 6 mL/min，收集滲漉液。
阮述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟3)中滲漉液在水浴 溫度5(TC以下真空自，回收乙醇，得到 液。
所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟4)中將、 液用粉 末狀活性炭在50。C以下超聲脫色30-60分鐘，活性炭的用量為含羞草粗粉用量的2-5 %，脫色1 2次，抽濾，除去活性炭，濾液備用。
戶皿的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟5)中將濾液在50 °。以下真空 ，得到濾液^L縮液。
戶，的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟6)、步驟7)中選用 20 60%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫。
戶，的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟6)、步驟7)中所述 的 為5(TC以下真空MI。
所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟6)中將洗脫WI液 真空亂縮千燥，得到干粉，將干粉加7jC溶解后進(jìn)入下步工藝。
大孔吸附樹脂是近代發(fā)展起來的一類有機(jī)高聚物吸附劑，廣泛應(yīng)用于中草 藥成分的提取分離。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所試用大孔吸附樹脂對(duì)糖類、生 物堿、黃酮等進(jìn)行吸附，并在此基礎(chǔ)上用于天麻、赤勺、靈芝和照山白等中草 藥的提取分離，結(jié)果表明大孔吸附樹脂是分離中草藥水溶性成分的一種有效方 法，除無機(jī)礦物質(zhì)外，其它中藥有效部位均可不同程度的被樹脂吸附純化。
上述一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其工藝簡(jiǎn)單、操作方便、設(shè)，資少、
6M^、了溶劑用量，無環(huán)境污染，生產(chǎn)成本低。采用紫外法測(cè)定所得到的總黃酮提取物
干粉，提取物中總黃酮的含量為42.60%左右，其中葒草苷含Ki8.84X左右，總黃 酮的轉(zhuǎn)移率達(dá)76.56%左右，總黃酮的轉(zhuǎn)移率高。
本申請(qǐng)文件中涉及的百M(fèi)量除另有說明外，液體的百M(fèi)量為體積比，固體的 百M(fèi)量為重量比。
具體實(shí)施例方式
現(xiàn)結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，具體工藝步驟如下所述
1)原料處理將含羞草全草杉隨后打成粗粉，過20-40目篩；2)提取將含羞
草粗粉m滲漉筒中，用50%含水乙醇浸泡14小時(shí)后，用含羞草粗粉16倍量的50 %含水乙醇進(jìn)行滲漉提取，流速為5mL/min，收集滲漉液；3) Mffi濃縮提取液在 7jC浴鵬5CTC以下真空、Mg，回收乙醇，得到含2 mL 鄉(xiāng)、W每g含羞草粗粉；4) 脫色處理將步驟3)得到的濃縮液用粉末狀活性炭在5(TC以下超聲脫色30射中， 話性炭的用量為含羞草粗粉用量的2%，脫色l次，抽濾，除去活性碳，濾液備用； 5) MS濃縮將步驟4)得到的濾液繼續(xù)在5(TC以下真空濃縮到含lniL濾液WI液 /每g含羞草粗粉；6)大孔樹脂純化將步驟5)得到的濾液 液通過DiaionHP-20 大孔吸附樹脂分離富集，然后先用H20洗脫，再依次用10%含水乙醇、20%含水乙醇、 40%含水乙醇、60%含水乙醇、70°/。含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，最后用70%丙酮洗脫，分別 收集3倍柱^l只的各部位洗脫液，合并10-70%含水乙醇各部位的洗脫液，將合并的 洗脫液在5(TC以下真空濃縮，得到洗脫濃縮液；7) 二次大 L樹脂純化將步驟6) 中得到的洗脫濃縮液通過Diaion HP-20大孔吸附樹脂柱分離富集，然后先用H20洗 脫，再依次用10%含水乙醇、20%含水乙醇、40%含水乙醇、60%含水乙醇、70%含水乙 醇進(jìn)行梯度洗脫，最后用70%丙酮洗服分別收集3倍柱體積的各部位洗脫液，合并 20-60%含水乙醇各部位的洗脫液，將合并的洗脫液在50"以下真空 、千燥，即 得含羞草總黃酮提取物干粉。上述步驟6)中用H20洗脫除掉水溶性雜質(zhì)，步驟7)
7中用H20和10%含水乙醇洗脫除掉7夂溶性雜質(zhì);最后都用70%丙酮洗脫除掉全部雜質(zhì)， 再生大孔吸附樹脂。步驟6)中還可以將洗脫濃縮液真空濃縮^B喿，得到干粉，將干 粉加水溶解后進(jìn)入下步工藝。
申請(qǐng)人在步驟2)中采用60%含水乙醇、70%含水乙醇或80%含水乙醇浸泡后滲漉， 含羞草粗粉浸泡時(shí)間為12小時(shí)，提取用含水乙醇用量為含羞草粗粉的8倍、10倍、 12倍或14倍量，流速為4 mL/min或6 mL/min;在步驟4)中活性炭的用量為含羞 草粗粉用量的3%或4%，超聲脫色時(shí)間為40辦中、50分鐘或60 6H中，脫色2次， 每次脫色處理均加入同樣量的活性炭；在步驟6)中采用15%含水乙醇、30%含水乙醇、 50%含水乙醇、60%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，合并15-60%含水乙醇各部位；或者采用 20%含水乙醇、35%含水乙醇、45%含水乙醇、65°/。含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，合并20-65% 含水乙醇各部位；在步驟7)中分別采用15%含水乙醇、25%含水乙醇、45%含水乙醇、 60%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，合并25-60%含水乙醇各部位；或者采用20%含水乙醇、 30%含水乙醇、40%含水乙醇、50%含水乙醇、60%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，合并30-60% 含水乙醇各部位；其它方法和上述具體工藝步驟相同，也基本旨繼到本發(fā)明所述的技 術(shù)效果。
上述步驟2)中用含羞^1i粉8 16倍量的意思是若含羞草粗粉為lkg，則溶劑 用量為8 16升。步驟3)中得到含2 mL濃縮、^/每g含羞草粗粉的意思是濃縮液 的濃縮程度由含羞草粗粉重量來決定，若含羞草粗粉為lg，則、 液體積為2毫升。 步驟5)中含1 mL搶液鄉(xiāng)M/每g含羞草粗粉的意思是濾液鄉(xiāng)液的、鵬禾號(hào)由 含羞草粗粉重量來決定，若含羞草粗粉為lg，則濾液 it縮液的的體積為1毫升。
本發(fā)明所述的從含羞草中提取總黃酮的方法，工藝簡(jiǎn)單、操作方便、設(shè) 資少、 M^了翻,量，無環(huán)境污染，生產(chǎn)成本低。采用紫外法測(cè)定所得到的總黃酮提取物 干粉，提取物中總黃酮的含量為42.60%左右，其中葒草苷含敏8.84%左右，總黃 酮的轉(zhuǎn)移率達(dá)76.56%左右，總黃酮的轉(zhuǎn)移率高。
權(quán)利要求
1、一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于包括以下步驟1)將含羞草全草晾干后粉碎成粗粉，過篩；2)將含羞草粗粉裝入滲漉筒中，用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇進(jìn)行滲漉，收集滲漉液；3)減壓濃縮滲漉液真空濃縮，回收乙醇，得到濃縮液；4)脫色處理步驟3)得到的濃縮液用活性炭超聲脫色，抽濾，除去活性碳，濾液備用；5)減壓濃縮步驟4)得到的濾液真空濃縮，得到濾液濃縮液；6)大孔樹脂純化將步驟5)得到的濾液濃縮液通過大孔吸附樹脂分離富集，然后先用H2O洗脫，再依次用10～70％含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，最后用70％丙酮洗脫，分別收集3倍柱體積的各部位洗脫液，合并10～70％含水乙醇各部位的洗脫液，將合并的洗脫液減壓濃縮，得到洗脫濃縮液；7)二次大孔樹脂純化將步驟6)中得到的洗脫濃縮液通過大孔吸附樹脂柱分離富集，然后先用H2O洗脫，再依次用10～70％含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，最后用70％丙酮洗脫，分別收集3倍柱體積的各部位洗脫液，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脫液，將合并的洗脫液減壓濃縮、再進(jìn)一步真空濃縮干燥，即得含羞草總黃酮提取物干粉。
2、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟l) 中含羞草全草挑選后打成粗粉，過20 40目篩。
3、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟2) 中將含羞草粗粉裝入滲漉筒中，用50 80%的含水乙醇浸泡12 14小時(shí)后，用含羞 草粗粉8 16倍量的50 80%含水乙醇進(jìn)行滲漉提取，^il為4 6 mL/min，收集滲 漉液。
4、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟3)中滲漉液在水浴溫度5(TC以下真空濃縮，回收乙醇，得到濃縮液。
5、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟4)中將^it縮液用粉末狀活性炭在5(TC以下超聲脫色30-60射中，活性炭的用量為含羞草粗粉用量的2-5%，脫色1 2次，抽濾，除去活性炭，濾液備用。
6、 如權(quán)禾腰求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟5)中將濾液在50°C以下真空 ，得到濾液,縮液。
7、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟6)、步驟7)中選用20 60%含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫。
8、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟6)、步驟7)中呢悉的MiSM為5(rc以下真空^1。
9、 如權(quán)利要求1所述的一種從含羞草中提取總黃酮的方法，其特征在于步驟6)中將洗脫,液真空^L縮^B喿，得到干粉，將干粉加水溶解后進(jìn)入下步工藝。
全文摘要
一種從含羞草中提取總黃酮的方法，屬于黃酮提取方法技術(shù)領(lǐng)域。包括以下步驟含羞草粉碎成粗粉，過篩；將含羞草粗粉用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇進(jìn)行滲漉；滲漉液減壓濃縮得到濃縮液；濃縮液用活性炭超聲脫色，濾液備用；濾液減壓濃縮得濾液濃縮液；大孔樹脂純化濾液濃縮液通過大孔吸附樹脂分離富集，用H₂O和10～70％含水乙醇進(jìn)行梯度洗脫，合并10～70％含水乙醇各部位的洗脫液減壓濃縮；洗脫濃縮液二次大孔樹脂純化，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脫液減壓濃縮、再進(jìn)一步真空濃縮干燥，得含羞草總黃酮提取物干粉。采用上述方法得到的提取物中總黃酮含量為42.60％左右，總黃酮轉(zhuǎn)移率達(dá)76.56％左右。
文檔編號(hào)A61K36/48GK101474240SQ20091009573
公開日2009年7月8日 申請(qǐng)日期2009年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月22日
發(fā)明者珂 袁 申請(qǐng)人:浙江林學(xué)院