專(zhuān)利名稱(chēng)：陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制備牛、豬或其他哺乳動(dòng)物肺表面活性提取物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及無(wú)機(jī)材料，包括陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制備牛、豬或其他哺乳動(dòng)物肺表面活性提取物中的用途。
背景技術(shù)：
牛、豬或其他哺乳動(dòng)物肺表面活性提取物(PQ是指牛、豬或其他哺乳動(dòng)物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液，經(jīng)分離、提取、純化得到的產(chǎn)物，所述產(chǎn)物包含多組分磷脂和表面活性物質(zhì)蛋白，是預(yù)防與治療早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征(NRDS)的重要急救藥，已在全球大多數(shù)國(guó)家和地區(qū)應(yīng)用，目前應(yīng)用較多的是意大利Chiesi制藥的豬肺磷脂注射液(Curosurf )、美國(guó)雅培公司的子公司Ross生產(chǎn)的全牛肺提取制劑Survanta (Survanta因有效成分卵磷脂含量低，添加了合成的磷脂組分)以及美國(guó)ONY公司的 InfasurfS),前兩種制劑都是從全肺勻漿提取液中分離得到的，后一種是從小牛肺的灌洗液中提取得到的。從動(dòng)物肺提取的肺表面活性提取物，無(wú)論其原材料是全肺勻漿提取液，還是肺灌洗液，均需要處理大量的、含有多組分磷脂和表面活性物質(zhì)蛋白的混懸液或乳濁液。在現(xiàn)有技術(shù)中，主要是通過(guò)離心如多級(jí)離心、差速離心或梯度離心，然后再通過(guò)有機(jī)溶劑提取、層析純化或超臨界提純等步驟制備肺表面活性提取物。其中多級(jí)離心、差速離心或梯度離心步驟用時(shí)長(zhǎng)，能耗大，收率低，生產(chǎn)成本高?，F(xiàn)有技術(shù)中也有不使用離心技術(shù)，而采用有機(jī)膜或復(fù)合有機(jī)材料作為用于過(guò)濾原材料(肺灌洗液或全肺勻漿提取液)的過(guò)濾材料，但是有機(jī)膜或復(fù)合有機(jī)材料會(huì)與磷脂、蛋白成分相互吸附，活性產(chǎn)物的收率較低。因此，需要尋找一種不影響收率，同時(shí)降低能耗和生產(chǎn)成本的工業(yè)化PS制劑的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，采用無(wú)機(jī)材料作為分離提取肺表面活性提取物的過(guò)濾材料，可在提高活性產(chǎn)物收率的同時(shí)，分別降低能耗和生產(chǎn)周期。為此本發(fā)明采用與現(xiàn)有技術(shù)不同、能更有效地分離提取肺表面活性提取物的無(wú)機(jī)材料，解決了 PS制劑生產(chǎn)周期長(zhǎng)、能耗高、收率低的問(wèn)題，更利于肺表面活性物質(zhì)提取的產(chǎn)業(yè)化。在本發(fā)明中，選擇無(wú)機(jī)材料作為過(guò)濾材料，將哺乳動(dòng)物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液進(jìn)行濃縮后，得到截留液僅為肺灌洗液或全肺勻漿提取液的1/5 1/100，截留液的活性成分與肺灌洗液(或全肺勻漿提取液)一致，總磷脂收率大于90%，卵磷脂收率大于 90%，表面活性物質(zhì)蛋白收率大于85% (以重量計(jì))。截留液經(jīng)提純步驟制得肺表面活性提取物，在最終制備的肺表面活性提取物中，總磷脂含量大于90%，卵磷脂約占總磷脂的 70-80%，表面活性物質(zhì)蛋白含量為1-2% (以重量計(jì))。采用本發(fā)明制備的肺表面活性提取物，其活性組分、各組分的比例與原工藝一致，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)包括表面活性也與現(xiàn)有技術(shù)制備的PS產(chǎn)品一致。其中，以最終制備的肺表面活性提取物中的總磷脂和過(guò)濾前的哺乳動(dòng)物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液為基礎(chǔ)計(jì)算最終總磷脂收率。所得最終總磷脂收率比現(xiàn)有技術(shù)提高10-15%。本發(fā)明所使用的哺乳動(dòng)物的肺灌洗液或全肺勻漿提取液可以采用本領(lǐng)域公知技術(shù)(例如，〈〈Surfactant Replacement Therapy)), Donald L. Shapiro and Robert H. Notter et al，Alan R. Liss Inc. New York，1989年)從哺乳動(dòng)物的肺制備。所述哺乳動(dòng)物包括牛、豬或其他哺乳動(dòng)物。在本發(fā)明中，所述無(wú)機(jī)材料通常與磷脂、蛋白組分不產(chǎn)生相互吸附，可以使得到的截留液僅為肺灌洗液或全肺勻漿提取液的1/5 1/100，總磷脂收率大于90%，卵磷脂收率大于90%，表面活性物質(zhì)蛋白收率大于85% (以重量計(jì))。所述無(wú)機(jī)材料的實(shí)例包括，但不限于陶土材料，陶土材料經(jīng)過(guò)各種物理、化學(xué)方法處理制成的無(wú)機(jī)材料，如陶瓷材料，以及玻璃材料等。在本發(fā)明中，無(wú)機(jī)材料孔徑為10-1000nm，優(yōu)選10-350nm。在本發(fā)明中，無(wú)機(jī)材料優(yōu)選微孔陶瓷材料或微孔玻璃材料，其可以采用微孔陶瓷濾管或微孔玻璃濾管的形式。因此，本發(fā)明涉及選自陶土材料、陶瓷材料或玻璃材料的無(wú)機(jī)材料在制備牛、豬或其他哺乳動(dòng)物肺表面活性提取物中的用途。采用下述兩種方法檢測(cè)本法制備的肺表面活性提取物，與原工藝相比，其相關(guān)指標(biāo)達(dá)到國(guó)際同類(lèi)PS制劑標(biāo)準(zhǔn)(1)體外活性檢測(cè)-最低表面張力使用經(jīng)國(guó)家藥典會(huì)技術(shù)鑒定的，專(zhuān)門(mén)用于檢測(cè) PS制劑表面活性的可控閉泡式表面張力儀(CB-1型，具體參見(jiàn)可控閉泡式表面張力測(cè)定儀專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)，CN 94200787. 5)，檢測(cè)本發(fā)明所制備樣品的表面張力(可控閉泡式表面張力測(cè)定儀的研制；中國(guó)醫(yī)療器械雜志，1994年第2期)。結(jié)果表明，當(dāng)本發(fā)明的肺表面活性提取物在l_5mg/ml濃度范圍內(nèi)時(shí)，其表面張力可在1分鐘內(nèi)迅速降低到lmN/m以下，說(shuō)明其可在氣液界面迅速擴(kuò)散，具有優(yōu)良的生理活性；(2)體內(nèi)活性試驗(yàn)將豚鼠經(jīng)生理鹽水灌洗肺部制成肺表面活性物質(zhì)缺乏模型， 然后經(jīng)氣管插管給予本發(fā)明所制備的肺表面活性提取物，觀察給藥前后豚鼠血氧分壓和肺順應(yīng)性變化(具體參見(jiàn)劉傳合，董聲煥等，兩種肺表面活性劑藥效的實(shí)驗(yàn)比較。中國(guó)新藥雜志，1997年第6卷第2期)，以評(píng)價(jià)PS制劑的藥效。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明所制備的肺表面活性提取物，可在5-10分鐘內(nèi)迅速改善豚鼠的血氧飽和度，在30-60分鐘內(nèi)將豚鼠的肺順應(yīng)性恢復(fù)到正常水平的70-80%左右，改善迅速，療效顯著。本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，處理量大，總磷脂收率高，生產(chǎn)周期縮短約40-50%， 能耗下降60 %左右，工業(yè)化程度大大提高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 參照Donald L. Shapiro禾口 Robert H. Notter 等的文獻(xiàn)(《Surfactant Replacement TherapyKAlan R. Liss Inc. New York，1989年)中記載的方法，采用自制牛肺灌洗液1000L 制備牛肺表面活性提取物，不同之處在于使用江蘇久吾公司的微孔陶瓷濾管(孔徑350nm) 過(guò)濾步驟代替離心步驟。對(duì)牛肺灌洗液進(jìn)行濃縮過(guò)濾后，得到截留液50L。截留液經(jīng)提取純化處理制得牛肺表面活性提取物185g?？偭字瑴y(cè)定采用鉬蘭法，先將樣品用硫酸或高氯酸消化，再用鉬酸銨顯色；卵磷脂測(cè)定采用HPLC法(蒸發(fā)光散射檢測(cè)器)；蛋白測(cè)定使用BCA試劑盒(美國(guó)Sigma公司)，用前將試劑BCA試劑與Cu試劑按體積比50 1混合，檢測(cè)波長(zhǎng)560nm左右。截留液檢測(cè)結(jié)果肺灌洗液或全肺勻漿提取液經(jīng)濃縮過(guò)濾后，總磷脂收率92%， 卵磷脂收率95 %，表面活性物質(zhì)蛋白收率為90 %。牛肺表面活性提取物檢測(cè)結(jié)果總磷脂含量為93%，卵磷脂占總磷脂的比例為 80%，表面活性物質(zhì)蛋白含量為1.5%。表面活性檢測(cè)結(jié)果牛肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測(cè)定儀進(jìn)行檢測(cè)，樣品在最低濃度(lmg/ml)條件下，表面張力可在30秒內(nèi)降到0.8mN/m。豚鼠試驗(yàn)結(jié)果顯示，本法所制牛肺表面活性提取物可在30分鐘內(nèi)明顯提高豚鼠的肺順應(yīng)性，根據(jù)劑量(40到70mg/kg體重)不同可使肺順應(yīng)性恢復(fù)到正常水平的 75-85%。最終產(chǎn)物的總磷脂收率為50%，全部生產(chǎn)周期為3工作日，總能耗約400千瓦時(shí)。實(shí)施例2 使用實(shí)施例1所述方法，采用自制豬全肺勻漿提取液1000L制備豬肺表面活性提取物，不同之處僅在于使用I^all公司微孔玻璃濾管(孔徑lOnm)代替微孔陶瓷濾管。豬全肺勻漿提取液進(jìn)行濃縮過(guò)濾后，得到截留液40L。制得豬肺表面活性提取物184g。使用實(shí)施例1所述方法進(jìn)行檢測(cè)，截留液總磷脂收率90%，卵磷脂收率92%，表面活性物質(zhì)蛋白收率88 % ；豬肺表面活性提取物總磷脂含量90 %，卵磷脂占總磷脂的比例為 75%，表面活性物質(zhì)蛋白含量1.2%。表面活性檢測(cè)結(jié)果豬肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測(cè)定儀進(jìn)行檢測(cè)，樣品在1. 5mg/ml濃度條件下，表面張力可在60秒內(nèi)降到0. 95mN/m ；豚鼠試驗(yàn)結(jié)果顯示，本實(shí)施例方法所制豬肺表面活性提取物(70到100mg/kg體重)可在30分鐘內(nèi)將豚鼠的肺順應(yīng)性恢復(fù)到正常水平的70% -80%。最終產(chǎn)物的總磷脂收率為46. 2%，全部生產(chǎn)周期為2. 7工作日，總能耗約370千瓦時(shí)。實(shí)施例3 自制牛肺灌洗液1000L，使用現(xiàn)有梯度離心方法(Donald L. Shapiro和Robert H. Notter 等的〈〈Surfactant Replacement Therapy)), Alan R. Liss Inc. New York, 1989年) 進(jìn)行處理得到粗品，該粗品經(jīng)提取純化制得牛肺表面活性提取物130g，終產(chǎn)物總磷脂收率為35 %，全部生產(chǎn)周期為8工作日，總能耗約1000千瓦時(shí)。表面活性檢測(cè)結(jié)果牛肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測(cè)定儀進(jìn)行檢測(cè)，樣品在最低濃度條件(lmg/ml)下，表面張力可在30秒內(nèi)降到1. 0mN/m。豚鼠試驗(yàn)結(jié)果顯示，本法所制牛肺表面活性提取物(70到100mg/kg體重)可明顯提高豚鼠的肺順應(yīng)性，在30分鐘內(nèi)肺順應(yīng)性恢復(fù)到正常水平的70-80%左右。實(shí)施例4 自制豬肺勻漿液1000L，使用實(shí)施例3的方法進(jìn)行處理得到粗品，該粗品經(jīng)提取純化制得豬肺表面活性提取物107g，終產(chǎn)物總磷脂收率為27 %，全部生產(chǎn)周期為7. 2工作日， 總能耗約925千瓦時(shí)。表面活性檢測(cè)結(jié)果豬肺表面活性提取物采用CB-I型可控閉泡式表面張力測(cè)定
5儀進(jìn)行檢測(cè)，樣品在最低濃度條件(lmg/ml)下，表面張力可在30秒內(nèi)降到1. 19mN/m。豚鼠試驗(yàn)結(jié)果顯示，本法所制豬肺表面活性提取物(70到100mg/kg體重)可明顯提高豚鼠的肺順應(yīng)性，在30分鐘內(nèi)肺順應(yīng)性恢復(fù)到正常水平的65% -75%左右。對(duì)比實(shí)施例1、2、3和4，可以發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明實(shí)施例1和2的方法與現(xiàn)有技術(shù)實(shí)施例 3和4的離心方法相比，最終總磷脂收率提高15-20%，生產(chǎn)周期縮短約40-60%，能耗下降 60 %左右，工業(yè)化程度大大提高。
權(quán)利要求
1.選自陶土材料、陶瓷材料或玻璃材料的無(wú)機(jī)材料在制備牛、豬或其他哺乳動(dòng)物肺表面活性提取物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述無(wú)機(jī)材料孔徑為lO-lOOOnm。
3.權(quán)利要求1的用途，其中所述無(wú)機(jī)材料孔徑為10-350nm。
4.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的用途，其中所述無(wú)機(jī)材料是微孔陶瓷濾管或微孔玻璃濾管。
全文摘要
本發(fā)明涉及陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制備牛、豬或其他哺乳動(dòng)物肺表面活性提取物中的用途。
文檔編號(hào)A61K35/42GK102553355SQ201110261440
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月6日
發(fā)明者于順廷, 周宜遂, 寇同欣, 張宇, 楊小杉 申請(qǐng)人:北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司