專利名稱：朝天罐總黃酮提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物的加工提取，特別是以植物朝天罐opiparaC.Y.Wu et C. Chen全株植物為原料的朝天罐總黃酮提取工藝。
背景技術(shù)：
朝天罐opipara C. Y. Wu et C. Chen),為野牡丹科金錦香屬多年生草本植物，分布于我國貴州、廣西、臺灣、長江流域各省及越南、泰國等國家，為廣西少數(shù)民族地區(qū)常用本草藥材[中國科學(xué)院植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京科學(xué)出社，1984:238.]。主要以根入藥，又名罐子草根，其味甘、微苦，性平，歸腎、大腸經(jīng)，功能益腎、止血、解毒，主治腰膝酸軟，咯血，痢疾，咽喉痛等；亦可全株入藥，用于小兒風(fēng)熱、久咳、咯血、胃痛、白帶、月經(jīng)不調(diào)、胎漏下血、痔瘡出血及癌癥等[廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].南寧廣西人民出版社，1986: 164.]。朝天罐藥材資源豐富，我國中東部與西南各省均產(chǎn)，為民間常用的的中草藥之一。 至2012年7月30日，已公開的、與朝天罐有關(guān)的專利文獻共計4條，全部為發(fā)明專利，均為朝天罐的應(yīng)用。朝天罐總黃酮和提取工藝，其中包括提取方法，提取溶劑、時間、次數(shù)和液料比、尚未見有專利文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種高效且能放大進行工業(yè)生產(chǎn)的朝天罐總黃酮提取工藝。實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是
一種朝天罐總黃酮提取工藝，包括如下步驟
(1)將朝天罐藥材粉碎成粉末；
(2)將藥材粉末置于圓底燒瓶中，加入乙醇，用回流提取法提??；
(3)過濾，并用乙醇洗滌濾渣；
(4)合并過濾液和洗滌液，用乙醇定容后，得到含黃酮的溶液；
(5)顯色后測定吸光度，帶入回歸方程，計算出總黃酮含量。步驟(2)所述乙醇濃度為50、5% ;藥材粉末與乙醇的料液比(g:ml)=l:l(T30，提取時間f2h，提取次數(shù)廣3次。步驟(2)的優(yōu)選參數(shù)為乙醇的濃度為75%，藥材粉末與乙醇的料液比(g:mL)=1:20，提取時間為lh，提取次數(shù)3次，這些均由具體實施方式
中的實驗得出。本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明提供了一種朝天罐總黃酮的提取工藝，工藝條件簡單，可進行工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式朝天罐總黃酮提取工藝1.儀器與試藥 1.1儀器
UV2550紫外分光光度計(日本島津公司)；B2200S-T型超聲儀(上海必能信超聲有限公司)；WF-4000C型常壓微波快速反應(yīng)系統(tǒng)(上海屹堯分析儀器有限公司)；BT224S電子分析天平(北京賽多利斯儀器 系統(tǒng)有限公司)；單道微量可調(diào)移液槍(芬蘭ThermoFinnpipette) ；R-200 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士 BUCHI 公司)。I. 2 試藥
蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品(批號10080-9705，中國藥品生物制品檢定所)；乙醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號20080818);亞硝酸鈉(分析純，天津市博迪化工有限公司，批號20080904);硝酸鋁(分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號20080404);氫氧化鈉(分析純，重慶市川江化學(xué)試劑廠，批號20080822);甲醇(分析純，天津市博迪化工有限公司，批號:200807)；
水為超純水。其他均為分析純。朝天罐新鮮藥材購于桂林藥材市場，經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室杜澤鄉(xiāng)副教授鑒定為為野牡丹科植物朝天罐opipara C. Y. Wu et C. Chen的全株。取藥材根部陰干，粉碎，備用。2.方法與結(jié)果[3_5]
2.I測定波長的選擇
取適量對照品與朝天罐樣品溶液，分別置于5mL容量瓶中，加75%乙醇至I. 6mL,再加入
0.2mL亞硝酸鈉溶液(SOg*!/1)，搖勻，放置5min ;加入0. 2mL硝酸鋁溶液(lOOg^L—1)，搖勻，放置6min ;加入2mL氫氧化鈉溶液(40g*L_i),用蒸懼水定容至刻度,搖勻,放置15min顯色，立即測定；在200 800nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果表明對照品與樣品溶液在505nm處均有最大吸收，故選擇505nm為測定波長。2. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
精密稱定蘆丁對照品5. 17mg，置5mL量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，得濃度為1.034mg^mr1 的對照品溶液。取對照品溶液 0. 04mL, 0. 08mL, 0. 16mL, 0. 24mL, 0. 32mL, 0. 40mL,分別置5 mL量瓶中，按“2. I”項操作，自“加75%乙醇至，I. 6mL”起，依法測定吸光度，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)、濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程為A=19. 79C+0. 0034(r=0. 9999)，線性范圍 0. 00827 0. 08272mg*mL'2. 3供試品溶液的制備
取朝天罐藥材粉末(60目)0. 2g，精密稱定，加入75%乙醇10mL，水浴回流提取I. 5h，重復(fù)2次。過濾，濾渣用75%乙醇洗滌，合并并濃縮濾液，置于IOmL容量瓶中，放冷，75%乙醇定容至刻度，搖勻，得供試品溶液。2. 4方法學(xué)考察
2.4. I穩(wěn)定性考察
精密量取朝天罐供試品溶液0. 5mL，按“2. I”項操作，自“置5mL量瓶中”起，顯色后每隔5min測定一次吸光度，共6次，RSD=3. 09%，表明在測定時間30min內(nèi)樣品穩(wěn)定性良好。2. 4. 2精密度考察
取某一濃度對照品溶液0. 5mL,按“2. I”項操作，自“置5mL量瓶中”起，顯色后測定吸收度，連續(xù)6次，RSD=O. 18%。表明儀器精密度良好。2. 4. 3重現(xiàn)性考察
精密稱取同一批樣品6份，每份約0. 2g，按“2. 3”項下方法平行制備，每份取0. 5mL,按“2. I”操作顯色后，測定吸光度，帶入回歸方程，計算總黃酮含量平均含量1.90%，RSD二2. 33%。表明該方法重現(xiàn)性良好。2. 4. 4加樣回收率實驗
精密稱取已知含量的朝天罐粉末6份，每份約0. lg，均加入已知含量的蘆丁對照品l.Omg，按“2. 3”項下方法平行制備，每份取0.5mL，按“2. I”操作顯色后，測定各份樣品中吸光度，帶入回歸方程計算總黃酮的含量，計算得本法平均加樣回收率=98. 09%。RSD二
3.0%。見表I
表I樣品加樣回收率實驗(/7=6)
權(quán)利要求
1.朝天罐總黃酮提取工藝，其特征在于包括如下步驟 (1)將朝天罐藥材粉碎成粉末； (2)將藥材粉末置于圓底燒瓶中，加入乙醇，用回流提取法提??； (3)過濾，并用乙醇洗滌濾渣； (4)合并過濾液和洗滌液，用乙醇定容后，得到含黃酮的溶液； (5)顯色后測定吸光度，帶入回歸方程，計算出總黃酮含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取工藝，其特征在于步驟(2)所述乙醇濃度為50、5%;藥材粉末與乙醇的料液比(g:ml)=l:l(T30，提取時間f2h，提取次數(shù)廣3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的提取工藝，其特征在于步驟(2)所述乙醇濃度為75%，藥材粉末與乙醇的料液比(g:ml)=l:20，提取時間lh，提取次數(shù)3次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種朝天罐總黃酮提取工藝，采用如下方案取朝天罐藥材粉末置于圓底燒瓶中，用75%的乙醇回流提取；過濾，濾渣用提取液洗滌，合并濃縮濾液，用乙醇定容后，利用紫外分光光度計進行比色測定。該工藝條件簡單可行，為更有效的來發(fā)利用朝天罐資源提供了理論參考和實驗指導(dǎo)，可進行工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61P11/04GK102772457SQ20121029095
公開日2012年11月14日 申請日期2012年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月16日
發(fā)明者張可鋒, 段小群, 高雅 申請人:桂林醫(yī)學(xué)院