專利名稱：一種治療支氣管哮喘的中藥組合物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法，特別涉及一種治療支氣管哮喘的中藥 組合物及其制備方法。
背景技術：
支氣管哮喘(Bronchial athma)是以支氣管痙攣為主要表現(xiàn)的臨床常見、難治、急 危重癥疾病，屬中醫(yī)哮(喘)病范疇。據(jù)世界衛(wèi)生組織新近統(tǒng)計，全球約有1.6億患者，美 國哮喘的患病率高達4%，日本為3 %，意大利農(nóng)村5 %，城市7 %，我國約為2 %，全國約有2 千多萬患者。隨著工業(yè)的發(fā)展，大氣污染的嚴重，生活環(huán)境變態(tài)反應源增多，哮喘的發(fā)病率 上升，老年人的哮喘發(fā)病率也在增高。2001年1月，世界衛(wèi)生組織就曾發(fā)表過《哮喘防治的 全球戰(zhàn)略》，由于該病反復發(fā)作，起病急，多見于兒童及青壯年，且易引發(fā)肺氣腫、肺源性心 臟病，致喪失勞動能力和生活能力，在我國亦將其列為常見難治急危重疾病。從西醫(yī)角度來講支氣管哮喘(哮病)是由多種細胞(如嗜酸性粒細胞、肥大細 胞、T淋巴細胞、中性粒細胞、氣道上皮細胞等)和細胞組份(cellularelements)參與的氣 道慢性炎癥性疾患。這種慢性炎癥導致氣道高反應性的增加，通常出現(xiàn)廣泛多變的可逆性 氣流受限，并引起反復發(fā)作性的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀常在夜間和(或)清晨發(fā)作、 加劇，多數(shù)患者可自行緩解或經(jīng)治療緩解。西醫(yī)解除支氣管痙藥物如茶堿類藥物氨茶堿 (治療劑量10-20mg/ml和中毒劑量20mg/ml非常接近，易出現(xiàn)毒性反應，臨床上使用藥物血 濃度監(jiān)測儀控制用量，并有心血管方面的副作用)、β _腎上腺素受體興奮劑(腎上腺素、麻 黃堿等，僅用于無高血壓及心血管疾病者)、腎上腺素皮質激素類(引起醫(yī)源性胃潰瘍、高 血壓、水鈉潴留、脂肪堆積、糖尿病等，且容易產(chǎn)生依賴和抵抗)等。中醫(yī)有關哮病的論述始見于《黃帝內經(jīng)》；宋代王執(zhí)中首次將哮與喘分開，但無詳 細論述，直至元代朱丹溪才開始明確將哮喘作為獨立病名；“哮”證與“喘”證分開論述源自 明代虞搏。哮病的發(fā)生與先天稟賦異質、元氣不足，外邪侵襲、飲食所傷，病后體弱、正氣不 足，邪氣內擾、氣機失宜，五臟病變、累及于肺等因素有關。目前用于解除支氣管痙攣的中藥尚無高效靶效應，仍沿用傳統(tǒng)的辨證用藥。中藥 復方遠期療效顯著，但方子大，起效慢，服用不便。近年來開發(fā)的單味中藥制劑(如杜鵑、牡 荊、洋金花等)在臨床上有較好的祛痰、平喘療效，但以祛痰為主，平喘效果尚無法與雖有 諸多副作用，但卻能較快緩解癥狀的西藥相比。因此，尋求治療支氣管哮喘(哮病)的有效藥物是臨床實踐的迫切需要。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的在于公開一種治療支氣管哮喘的中藥組合物；本發(fā)明的另一個目的在于公開一種治療支氣管哮喘的中藥組合物的制備方法；本發(fā)明的另一個目的在于公開一種治療支氣管哮喘的中藥組合物滴丸劑及其制 備方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)本發(fā)明所述的一種治療支氣管哮喘的中藥組合物，其原料藥組成為(重量比)胡頹葉5-20重量份、淫羊藿4-18重量份、五味子2_12重量份。上述治療支氣管哮喘的中藥組合物，其原料藥組成優(yōu)選為胡頹葉9-15重量份、淫羊藿6-12重量份、五味子4_9重量份。上述治療支氣管哮喘的中藥組合物，其原料藥組成優(yōu)選為胡頹葉10重量份、淫羊藿9重量份、五味子5重量份。上述治療支氣管哮喘的中藥組合物，其原料藥組成優(yōu)選為胡頹葉14重量份、淫羊藿9重量份、五味子7重量份。上述治療支氣管哮喘的中藥組合物，其原料藥組成優(yōu)選為胡頹葉12重量份、淫羊藿9重量份、五味子6重量份。胡頹子(Elaeagnus pungens Thunb.)為胡頹子科胡頹子屬植物胡頹子的葉。上 述各原料藥均可以從《中國部頒標準》、《藥典》或《中藥大詞典》等中選擇功能近似的藥物替換。本發(fā)明還提供了上述治療支氣管哮喘的中藥組合物制劑的制備方法，該方法為 胡頹葉、淫羊藿、五味子按上述比例經(jīng)常規(guī)工藝方法提取后加入藥學可接受的輔料制成藥 劑學可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑； 所述常規(guī)工藝方法包括水提取或醇提取或先水提取再醇提取或先醇提取后再水提取，經(jīng)上 述常規(guī)提取后還可以過大孔樹脂柱進一步富集有效成分；上述常規(guī)工藝水提取方法可以為每次10-30倍量，提取1-4次，每次1_3小時；上述常規(guī)工藝醇提取方法可以為30_80%乙醇、4-15倍量、分別提取1_3小時；所述過大孔樹脂柱方法為提取液濾過，濾液通過大孔樹脂，先用4-6倍量水或 20 %以下濃度的乙醇洗脫，洗脫液棄取，再用加50-80 %乙醇1-10倍洗脫，收集洗脫液，減 壓回收乙醇至無醇味，得純化提取液。本發(fā)明還進一步提供了上述治療支氣管哮喘的中藥組合物制劑的制備的優(yōu)選方 法，該方法為A、胡頹子有效成分的提取Al 胡頹子水煎煮提取，每次8-12倍量、0.5-2小時，提取2-4次；合并提取液濾 過，濾液濃縮；采用大孔樹脂富集有效成分，水洗脫除雜，用50-70%乙醇為洗脫劑洗脫；洗 脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，為胡頹子葉提取物I ；或A2 7-10倍量的50_70%乙醇提取2_3次，分別提取1_3小時，合并提取液，濾過， 濾液減壓回收乙醇，濃縮備用，為胡頹子葉提取物II ；B、五味子有效成分的提取五味子7-10倍量40-60%乙醇提取2_3次，分別提取 1-3小時，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮備用；C、淫羊藿有效成分的提取淫羊藿葉每次加水20-40倍水量，煎煮提取2-4次， 每次1-3小時；提取液濾過，合并濾液，濃縮；采用大孔樹脂富集有效成分，水洗脫體積為 6-12BV ；洗脫溶劑為60-80%乙醇；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用；將上述胡頹子葉提取物I或II，或I和II與五味子提取物、淫羊藿提取物混合均 勻，加入藥學可接受的輔料制成藥劑學可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑；所述胡頹子葉提取物I和II與五味子提取物、淫羊藿提 取物混合均勻的情況中，胡頹子葉提取物I由胡頹子原料處方量中的一半制得，胡頹子葉 提取物II由胡頹子原料處方量中的另一半制得。本發(fā)明還進一步提供了上述治療支氣管哮喘的中藥組合物制劑的制備的最優(yōu)選 方法，該方法為A、胡頹子有效成分的提取Al 胡頹子水煎煮提取，每次10倍量、1小時，提取3次；合并提取液濾過，濾液濃 縮至1 1(藥材濾液為g ml)；采用大孔樹脂富集有效成分，提取物的上樣液濃度為 0. Ig生藥/ml，2BV/h的速度上樣；4BV/h的水洗脫除雜，用60%乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫流 速為3BV/h、洗脫體積為4BV;洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，為胡頹 子葉提取物I ；或A2 8倍量的60%乙醇提取，分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取液，濾過，濾液 減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25(50°C )，備用，為胡頹子葉提取物II。B、五味子有效成分的提取五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取 液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用。C、淫羊藿有效成分的提取淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時。提取液濾過，合并濾 液，濃縮成1 1(藥材g 濾液ml)；選用大孔樹脂富有效成分，上樣液濃度為0.5g生藥/ ml ；上樣量為Ig生藥/ml樹脂；吸附速度為0. 5ml/min ；洗脫速度為1. Oml/min ；水洗脫體 積為IOBV ；洗脫溶劑為70%乙醇，用量為6BV。洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為 細粉備用；上述大孔樹脂柱可以選自AB-8樹脂、D-IOl樹脂、HPD-IOO或HPD-450樹脂；將上述胡頹子葉提取物I或II，或I和II與五味子提取物、淫羊藿提取物混合均 勻，加入藥學可接受的輔料制成藥劑學可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、 凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑；所述胡頹子葉提取物I和II與五味子提取物、淫羊藿提 取物混合均勻的情況中，胡頹子葉提取物I由胡頹子原料處方量中的一半制得，胡頹子葉 提取物II由胡頹子原料處方量中的另一半制得。上述提取液的用量中所述“倍量”是指相比較所提取的原藥材的重量比。所述藥學可接受的輔料為填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味 劑、防腐劑、基質等。填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗 糖等；崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、 低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑 石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖 維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精 鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼 泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括: PEG6000, PEG4000,蟲蠟等。本發(fā)明還提供一種治療支氣管哮喘的中藥組合物滴丸劑，該滴丸劑中
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原料藥(胡頹葉、淫羊藿、五味子)提取物為20-33%，基質為PEG4000和PEG6000， PEG4000 PEG6000 = 6-11 1 ；其中載藥量優(yōu)選 30%，PEG4000 PEG6000 = 8 1 ；所 述提取物既可以是胡頹葉、淫羊藿、五味子合提物，優(yōu)選為上述胡頹子葉提取物I或II，或I 和II與五味子提取物、淫羊藿提取物混合。本發(fā)明還提供一種治療支氣管哮喘的中藥組合物滴丸劑的制備方法，該方法為以20-33%的載藥量加入基質(PEG4000 PEG6000 = 6-11 1)中，混勻，冷凝溫 度控制在2V -60C ；滴制條件為滴制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm ；制備滴丸。上述本發(fā)明組合物中除了以原料藥投料的形式外，還可以直接以提取物的形式投 料，具體比例關系可以根據(jù)原料藥投料量進行換算，胡頹葉提取物、淫羊藿提取物、五味子 提取物可以為市售，也可以按照上述方法及現(xiàn)有技術教導的方法制備；其中提取物為醇提 過柱精制物、水提過柱精制物、醇提物或水提物中的任意一種或幾種的組合。本發(fā)明組合物所治的支氣管哮喘(哮病)乃因肺腎不足所致，屬本虛標實，本虛為 主之證；肺不主氣、腎不納氣導致了哮病的持續(xù)難愈。方中胡頹葉性味歸經(jīng)酸、微苦，歸肺 經(jīng)；長于肺寒咳喘或肺虛久咳、氣喘證。處方中胡頹葉斂肺，平喘止咳用為君藥；淫羊藿(仙 靈脾)性味歸經(jīng)辛溫，歸肝腎經(jīng)；善治陽虛喘咳證。處方中淫羊藿補腎壯陽，平喘止咳、祛 痰用為臣藥。五味子溫；酸、甘；歸肺、心、腎經(jīng)；收斂固澀，益氣生津，補腎寧心；用于久嗽虛 喘，短氣脈虛等。處方中五味子收逆氣而安肺亦用為臣藥。三藥君臣相須為用。全方共成 平喘止咳、培元固本之效。仙靈平喘滴丸(實施例1制備的產(chǎn)品)中藥的活性成分，有效部位明確。在臨床 應用上療效確切，而且具有抗菌、抗病毒作用，不激惹心臟，未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。分別灌胃給予小鼠本發(fā)明組合物制劑0. 39g/kg、0. 78g/kg和1. 17g/kg，豚鼠 0. 27g/kg、0. 54g/kg和1. 08g/kg仙靈平喘滴丸，可以明顯延長氨水所致咳小鼠、枸櫞酸所 致咳豚鼠的咳嗽出現(xiàn)潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，表現(xiàn)出明顯的鎮(zhèn)咳作用；明顯增加小鼠支氣管 酚紅排出量，表現(xiàn)出明顯的祛痰作用，對磷酸組織胺所致豚鼠“喘哮”發(fā)作也有明顯的抑制 作用，延長喘息和抽搐潛伏期，表現(xiàn)出明顯的平喘作用；對巴豆油所致小鼠急性耳腫脹和角 叉菜膠所致大鼠足跖腫脹也有一定的抑制作用，說明本發(fā)明組合物制劑具有一定的抗急性 滲出性炎性腫脹的作用；體外抑菌實驗觀察到本發(fā)明組合物制劑對金黃色葡萄球菌、肺炎 球菌、乙型溶血性鏈球菌等呼吸道常見致病菌都有明顯的抑菌作用，體內實驗觀察到本發(fā) 明組合物制劑明顯降低金黃色葡萄球菌和肺炎球菌感染小鼠的死亡率，說明本發(fā)明組合物 制劑具有明顯的體內抑菌作用。臨床研究結果表明以多項癥狀、體征(咳嗽、咯痰、喘息、哮鳴音)評價，治療組 “仙靈平喘處方”治療支氣管哮喘慢性持續(xù)期(中醫(yī)哮證，屬肺腎不足型)30例患者，臨控者 11例，顯效者11例，有效者7例，無效者1例，顯控率73. 34%，有效率93. 34%;對照組“玉 屏風散合七味都氣丸處方”治療支氣管哮喘慢性持續(xù)期(中醫(yī)哮證，屬肺腎不足型)10例患 者，臨控者1例，顯效者4例，有效者3例，無效者2例，顯控率50%，有效率80%?！跋伸`平 喘處方”治療支氣管哮喘慢性持續(xù)期(中醫(yī)哮證，屬肺腎不足型)的臨床療效優(yōu)于對照組的 療效。在癥狀與體征的改善上，“仙靈平喘處方”在平喘減少哮鳴音方面優(yōu)于對照組，治療組 與治療組在止咳方面有相似的作用。在觀察中無不良反應發(fā)生。臨床實驗結果表明治療組與對照組治療前后淋巴細胞轉化實驗及補體C3變化比較，兩組患者經(jīng)治療后，淋巴細胞轉化實驗及補體C3含量均有不同程度的增高，經(jīng)統(tǒng)計 學(t檢驗)處理P <0.05，呈現(xiàn)顯著意義，說明兩組治療皆有免疫防御增強作用。兩組間 比較無差異(P > 0. 05)，初步說明二者具有一定的一致性。治療組與對照組治療前后PGE2、 TXB2變化比較，治療組治療后PGE2含量增高，經(jīng)統(tǒng)計學(t檢驗)處理P<0. 05有顯著差異； 對照組雖有增加，但P > 0.05無統(tǒng)計學意義。此說明治療組在緩解支氣管痙攣，降低氣道 阻力以平喘方面的作用好于對照組。兩組治療后，TXB2含量均有不同程度的下降，P < 0. 05 差異顯著，組間P > 0. 05無差異。表明兩組在降低肺血管阻力，調節(jié)肺微循環(huán)，進一步改善 肺功能方面具有一致性。治療組與對照組治療前后IgG IgA IgM(酶標法測定)比較，兩組 治療均對免疫球蛋白IgG含量有所影響，治療后呈不同程度降低，兩組治療前后自身比較P <0. 05，統(tǒng)計學上有顯著差異，說明兩組對氣道痙攣與阻塞的相關因素有正性影響。治療組 與對照組治療前后血IgE IgA，痰IgE IgA(放免法測定)比較，兩組治療后，痰、血IgA含量 提高，痰、血IgE含量下降，經(jīng)統(tǒng)計學處理P < 0. 05，組間P > 0. 05。初步表明兩組在肺的 免疫防御機制的調節(jié)方面具有積極作用。治療組與對照組對肺功能(FEVifPEFKFVC)均 有不同程度的改善，而且治療組更加明顯。經(jīng)統(tǒng)計學處理兩組治療前后自身及組間比較經(jīng) 統(tǒng)計學處理皆P < 0. 05有顯著性差異。本發(fā)明中所述仙靈平喘滴丸為實施例1制備的產(chǎn)品。下述實驗例及實施例對本發(fā) 明做進一步解釋，但不構成本發(fā)明的限制。實驗例1藥效學試驗實驗材料試驗藥物仙靈平喘滴丸，每粒滴丸0.05g，每粒含藥相當于生藥量0.45g，批號 010909，為中藥復方制劑，由北京中醫(yī)藥大學中藥學院制藥系制劑室提供。由蒸餾水將制 劑分別配成1. 95 %、3. 9%、5. 85%和2. 7 %、5. 4%、10. 8 %的混懸液(指滴丸容解物)備 用。劑量設計依據(jù)臨床成人每次20粒，每天3次，一日共60粒，每日服用成藥量3g，合每 日服用相當于生藥量27g。劑量設計依據(jù)根據(jù)體表面積計算動物用量小鼠20g =成人 量 3X0. 0026 = 0. 0078g，0. 0078X50 = 0. 39g/kg(相當于生藥量 3. 51g/kg)為等效量，中 劑量為 0. 39X2 = 0. 78g/kg(相當于生藥量 7. 02g/kg)，高劑量 0. 39X3 = 1. 17g/kg(相 當于生藥量10. 53g/kg)。大鼠和豚鼠均為成人量X0. 018為200g的用量，做為等效量為 3X0. 018 = 0. 054g，0. 054X5 = 0. 27g/kg(相當于生藥量 2. 43g/kg)，中劑量 0. 27X2 = 0. 54g/kg(相當于生藥量4. 86g/kg)，高劑量0. 27X4 = 1. 08g/kg(相當于生藥量9. 72g/ kg)。給藥劑量均以滴丸容解物量表示。陽性對照藥磷酸可待因，15mg/片，人每日15_30mg，沈陽第一制藥廠，批號 980907 ；氯化銨，人每日0. 5-lg，北京化工廠產(chǎn)品，分析純，批號911103 ；氨茶堿0. Ig/片， 人每日0. 2-lg，山東新華制藥股份有限公司，批號20001221 ；地塞米松，濟南永寧制藥有限 公司，0. 75mg/片，人每日1. 5-7. 5mg批號0011109 ；鹽酸環(huán)丙沙星，濟南東風制藥廠，200mg/ 片，人每曰200-600mg批號0108034。試驗動物昆明種小鼠，18_22g，早$各半，山東大學實驗動物中心提供，合格證號 魯動質字20001002 ；英國種豚鼠，180-240g、早$各半，山東大學實驗動物中心提供，合格 證號魯動質字20001004 ；Wister種大鼠，山東大學實驗動物中心提供，合格證號魯動質 字 20001003。
主要試劑酚紅，上海試劑三廠，批號920924 ；枸櫞酸，99. 5 %，青島化工試劑廠， 批號930725 ；溴化乙酰膽堿，上海生物制品研究所，純度98%，批號940311 ；磷酸組織胺，上 海試劑三廠，純度98 %，批號980409。主要儀器uniC0 2100紫外可見光分光光度儀，上海合利分析儀器公司。ZS-200A 型水電分離、超聲霧化器，天津中亞科技開發(fā)公司。9B303型電子天平，梅特勒-中國公司 (上海)產(chǎn)品。實驗方法及結果1鎮(zhèn)咳試驗1. 1對氨水引咳小鼠的止咳作用[2] :18-20g小鼠60只，雌雄各30只，隨機分為5 組，生理鹽水對照組，0. 39g/kg、0. 78g/kg和1. 17g/kg仙靈平喘滴丸(容解物)每組各12 只，另設可待因(沈陽第一制藥廠產(chǎn)品，批號980907，配成2mg/ml的懸液)20mg/kg對照組 12只，給藥容量都是0. 2ml/10g,仙靈平喘滴丸藥液濃度為1. 95%,3. 9%,5. 85%的懸液。 除可待因組外，其它四組均為連續(xù)給藥二天，每天一次ig，禁食10h，藥后90min，而可待因 為禁食10h，一次性給藥90min后，5組小鼠均依次置3L燒杯中，由ZS2001A型超聲霧化器 由底面給予25%的氨水霧化3S，觀察各小鼠咳嗽出現(xiàn)潛伏期及2min內咳嗽次數(shù)，t檢驗統(tǒng) 計比較組間差異，結果如表1所示。表1仙靈平喘滴丸對氨水所致小鼠咳嗽的止咳作用X 土SD 與生理鹽水對照組比，**P < 0. 01 ***P < 0. 001實驗結果表明，仙靈平喘滴丸對氨水所致小鼠咳嗽具有明顯的止咳作用，不僅延 長咳嗽反應潛伏期，還減少咳嗽次數(shù)。1. 2對枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的止咳作用180-240g豚鼠，雌雄各半，每組雌雄 各5只，共分為生理鹽水對照組，仙靈平喘滴丸，0. 27g/kg組(2. 7% lml/100g)、0. 54g/ kg(5. 4% lml/lOOg)和 1. 08g/kg 組(10.8% lml/lOOg)，另設可待因 20mg/kg 組，前 4 組 均為連續(xù)給藥二次，每天一次，禁食10h，末次給藥90min，可待因組為禁食10h，一次性給藥 90min后，各豚鼠置10L玻璃罩內，由底部超聲霧化給予17. 5%的枸櫞酸液lmin，記錄各豚 鼠咳嗽反應出現(xiàn)的時間(潛伏期)和5min內的咳嗽次數(shù)，t檢驗比較組間差異，結果如表2 所示。表2仙靈平喘滴丸對枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的止咳作用X 土SD 與生理鹽水對照組比，**P < 0. 01 ***P< 0.001實驗結果表明，仙靈平喘滴丸對枸櫞酸所致豚鼠咳嗽具有明顯的鎮(zhèn)咳作用，不僅 延長咳嗽出現(xiàn)的潛伏期，而且減少一定時間內的咳嗽次數(shù)。2祛痰試驗——小鼠酚紅法18-22g小鼠60只，隨機分為5組，每組雌雄各6只，生理鹽水對照組和3個劑量 仙靈平喘滴丸組與1. 1相同，另設一 2%的氯化銨組(氯化銨，北京化工廠產(chǎn)品，分析純)， 給藥容量與1. 1相同，連續(xù)給藥二天，每天一次。禁食10h，末次給藥60min后小鼠給予 0. 25%酚紅液0. 2ml/10g · ip (相當于酚紅50mg/kg)，注射酚紅后30min，脫頸處死小鼠， 由5% NaHCO3液5ml沖洗各小鼠呼吸道三次(7號針頭由喉結處剝離氣管，剪開，針頭插入 氣管內約0. 6cm)，收集沖洗液3000r/minX IOmin離心，由722光柵分光光度計(上海分析 儀器三廠產(chǎn)品)，于456nm處測OD值，并配0. 01 %的標準液(lug/ml)測OD值二次，取平均 值為標準值，各樣本OD值/標準值X lug/ml,即為每鼠酚紅排出量藥物組_對照組/對照 組X 100%為增加量(％ )，結果如表3。表3對小鼠呼吸道酚紅排出量的影響(X士S ug/ml) 實驗結果提示仙靈平喘滴丸明顯增加小鼠呼吸道酚紅的排出量，說明本發(fā)明組合 物制劑具有明顯的祛痰作用。3平喘試驗_組織胺豚鼠引喘法180-240g豚鼠50只，隨機分為5組，每組10只，生理鹽水對照組和三個劑量的 仙靈平喘滴丸組同1.2相同，陽性對照組為氨茶堿(山東新華制藥有限股份公司，批號 00001221) 40mg/kg(0. Ig/ 片，2 片，0. 2ml 配成 50ml lml/100g ig)生理鹽水組和三個劑量 的仙靈平喘滴丸給藥方式和劑量同1. 2，連續(xù)給藥二天，禁食10h，末次給藥90min后，將豚 鼠置IOL玻璃罩內，由底面超聲霧化給予4%溴化乙酰膽堿(上海生物制品研究所提供，純度98% )0.2%磷酸組織胺(上海試劑三廠產(chǎn)品，純度98% )液的等量混合液(含乙酰膽 堿2%，組織胺0. 1%) 15S，記錄各豚鼠喘息出現(xiàn)潛伏期，抽搐出現(xiàn)潛伏期和IOmin內抽搐次 數(shù)，t檢驗比較組間差異，如表4。表4仙靈平喘滴丸對組織胺所致豚鼠哮喘的抑制作用X 士SD 與生理鹽水對照組比，< 0. 010.001實驗結果表明，仙靈平喘滴丸在> 0. 7g/kg劑量時對組織胺引發(fā)的豚鼠哮喘發(fā)作 有明顯的抑制作用，表現(xiàn)出明顯的平喘作用。4抗炎試驗4. 1對小鼠耳腫脹的抑制雄性20_22g小鼠60只，隨機分組同1. 1，每組12只，陽性對照組為地塞米松(濟 南永寧制藥有限公司產(chǎn)品，批號001109)，生理鹽水對照組和仙靈平喘滴丸三個劑量組給藥 同1. 1，連續(xù)給藥二天，末次給藥30min，陽性對照藥(地塞米松3mg/kg)為一次性給藥，給 藥30min，各組小鼠均右耳廓給予2%的復方巴豆油20 μ 1涂耳片反正兩面，4h后，處死小 鼠，由直徑9mm的打孔器打下左右耳片，用梅特勒-托利多9B303電子天平稱重，右耳重-左 耳重=腫脹度，對照組腫脹度_藥物組腫脹度/對照組腫脹度為藥物抑炎率，結果如表5。表5消炎平喘膠囊對小鼠巴豆油致耳腫脹的影響X 土SD 與生理鹽水對照組比，**P < 0. 01 ***P< 0.001實驗結果提示仙靈平喘滴丸有一定的抑制急性滲出性炎癥的作用，但不明顯，抑 炎率< 30%。4. 2對角叉萊膠大鼠足跖腫脹的影響180-220雄性大鼠50只，隨機分為生理鹽水對照組10只，仙靈平喘滴丸 0. 27g/kg、0. 54g/kg、1.08g/kg 三個不同劑量(分別給予 2. 7 %、5. 4 %、10. 8 % )的懸液 lml/100g · ig另設地塞米松lmg/kg陽性對照組。生理鹽水對照組和消痰平喘三個不同
生理鹽水對照組12 仙靈平喘滴丸0.39g/kg12
仙靈平喘滴丸0. 78g/kg12
仙靈平喘滴丸1. 17g/kg12
地塞米松3mg/kg12劑量組均為連續(xù)給藥二天，禁食IOh后，末次給藥前先測未致炎各大鼠右足跖體積，然后給 藥，并給予的角叉菜膠(遼寧中藥研究所產(chǎn)品)0. 2ml/只，左足跖筋膜下注射。地塞米 松為一次給藥，給藥前先測正常足跖體積，再給角叉萊膠致炎，然后分別于致炎后1、2、4、6、 8h分別測各大鼠右足跖體積(為一按三通管帶刻度的專用測定大鼠足體積裝置)，各不同 時間各組大鼠足跖體積變化，腫脹度=(致炎前體積-致炎后體積)/致炎前體積X 100%， 各組腫脹度如表6，t檢驗進行組間統(tǒng)計比較。表6對大鼠足跖腫脹的影響(X±S)ml 與生理鹽水對照組比，*P < 0. 01 **P<0. 01 ***P < 0. 001實驗結果仙靈平喘滴丸對大鼠角叉菜膠引起的足腫脹有一定的抑制作用，說明 本發(fā)明組合物制劑有一定的抗炎作用。5.對標準呼吸道常見致病菌的抑菌作用5. 1體外抑菌試驗——試管二倍稀釋法，由山東省衛(wèi)生防疫站菌種室引進金黃色 葡萄球菌ATCC25925，肺炎雙球菌ATCC25273，乙型溶血型鏈球菌ATCC27027和大腸桿菌 ATCC21922菌種，并由菌種室協(xié)助進行體外抑菌試驗。培養(yǎng)基為牛肉營養(yǎng)內湯+綿羊血 (95 5)，培養(yǎng)基和仙靈平喘滴丸容解物，高壓消毒后，以培養(yǎng)基二倍稀釋法，將容解物由 0. 05g/ml稀釋至0. 00078125g/ml不同濃度，另設不含滴丸容解物的細菌對照組，每個濃度 均為10個試管，各試管均加于0. 1ml，稀釋至10_3的新鮮菌液，于37°C培養(yǎng)箱內24h后，取 各試管鏡檢，觀察抑菌效果，無菌生(_)；有菌生長(+)，每種菌種10個試管均無細菌生長， 為最少抑菌濃度Mic，結果如表7 (表中只列0. lg/ml 0. 00125g/ml)。表7仙靈平喘滴丸體外抑菌濃度Mic 注㈠為無菌生長，(+)為無菌生，+為1-2管有菌生長10 20%，++為30 40%，+++為50 80%，++++為80 100%，培養(yǎng)基對照10個試管均有細菌生長100%。 由試驗結果可見本發(fā)明組合物制劑對呼吸道常見致病菌金葡菌的抑菌Mic為0. 00625g/ml，對乙型溶血性鏈球菌和肺炎雙球菌的抑菌濃度Mic為0. 0125g/ml，說明本發(fā)明組合物 制劑有一定的抑菌作用。各菌種不同濃度細菌生長狀況如表8 (無菌生長百分比)％。表8各菌種不同濃度細菌生長狀況 無菌生長試管數(shù)+IOX 100%，即為上表百分數(shù)。5. 2對金黃色葡萄球感染小鼠的保護作用由省防疫站菌種室提供金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液，以5%的胃膜素生理鹽水二倍稀 釋為含菌量約9父108、4. 5X 108、9Χ 107、4· 5 X 107、9 X IO6五個濃度，給予18_22g小鼠ip，每 個濃度10只小鼠，觀察3天，記錄小鼠死亡狀況，確定最少全部致死濃度為9X 107。18-20g小鼠60只，雌雄各30只，隨機分為5組，生理鹽水對照組，仙靈平喘滴 丸 0. 39g/kg，0. 78g/kg、1. 17g/kg (分別給 1. 95 %、3. 9 %、5. 85 % 的懸液)，給藥容量都 0. 2ml/10g(同1. 1)，陽性對照藥為環(huán)丙沙星0. 2g/kg，連續(xù)給藥3天，末次給藥后給予5% 胃膜素稀釋至9 X IO7的新鮮金黃色葡萄球菌ATCC25925菌液0. 2ml/10g ip,進行細菌攻 擊。記錄7天內各組小鼠死亡狀況，攻出后24小時、48小時，各組均分別給藥。實驗結果 如表9。表9對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護作用 實驗數(shù)據(jù)由華西醫(yī)科大學醫(yī)學實驗統(tǒng)計軟件按質反應資料統(tǒng)計方法-X2檢驗，直 接概率法計算機統(tǒng)計如下表10。表10
13 結果說明，仙靈平喘滴丸對金黃色葡萄球菌感染小鼠有一定的保護作用，減少死亡率。6.對呼吸道臨床分離常見致病菌的抑菌作用6. 1體外抑菌作用，本實驗由山東省防疫站菌種室協(xié)助按國家相關要求完成，結果 如表11表11仙靈平喘滴丸對臨床分離呼吸道常見致病菌的體內抑菌作用 注“ + ”無細菌生長即有抑制作用；“_”有細菌生長即無抑制作用仙靈平喘滴丸對金黃色葡萄球菌、乙型溶血型鏈球菌、肺炎球菌和流感嗜血桿菌 的MIC分別為3. 12-25,3. 12-25,3. 12-12. 5,1. 56-12. 5mg/ml。仙靈平喘滴丸對引起上呼吸 道感染的主要致病菌金黃色葡萄球菌、乙型溶血型鏈球菌、肺炎球菌、流感嗜血桿菌均具有 抑制作用。6. 2對臨床分離肺炎球菌感染小鼠的保護作用根據(jù)預試驗結果，18_22g小鼠110只，雌雄各半，隨機分為5組，每組早$各11只， 分組給藥同5. 2，連續(xù)給藥三天，末次給藥2h、禁食12h后給予由山東省防疫站菌種室提供 的含菌量為8 X IO7個/ml肺炎球菌(省防疫站98年分離于省千佛山醫(yī)院呼吸科，菌株編號 98065)培養(yǎng)液由胃膜增毒液0.2ml/10g，ip，觀察72h，記錄各組小鼠死亡數(shù)，計算死亡率， 由直接概率法檢驗進行統(tǒng)計比較結果如表12仙靈平喘滴丸對肺炎球菌感染小鼠的保護作用 小鼠大部分于菌苗攻擊24h內死亡，死亡小鼠呈瘀血狀.各給藥組與水對照組 由直接概率法進行統(tǒng)計學檢驗，結果仙靈平喘滴丸0. 39g/kg，P < 0. 05 ；0. 78g/kg組和 1. 17g/kg 組，P 均< 0. 01 ；環(huán)丙沙星 0. 2g/kg 組 P < 0. 01。說明本發(fā)明組合物制劑對呼吸道常見致病菌肺炎球菌感染小鼠有明顯的保護作用。試驗結論由藥效實驗觀察到本發(fā)明組合物制劑對氨水所致小鼠咳嗽、枸櫞酸所致豚鼠咳嗽 均有明顯的抑制作用，表現(xiàn)出明顯的止咳作用；明顯增加小鼠呼吸道酚紅排出量，表現(xiàn)出明 顯的祛痰作用，對組織胺所致豚鼠哮喘具有明顯的保護作用，表現(xiàn)出顯著的平喘作用；另外 對大鼠和小鼠滲出性炎癥都有一定的抑制作用；體外實驗證實本發(fā)明組合物制劑對呼吸道 常見致病菌具有一定的抑菌作用，對金黃色葡萄球菌和肺炎球菌感染小鼠有明顯的保護作 用。藥效學實驗表明本發(fā)明組合物制劑具有肯定的平喘、祛痰、止咳和一定的抗炎作用，對 呼吸道常見致病菌也有一定的抑菌作用，適用于肺腎不足的中醫(yī)“哮病”患者。
究設計。
實驗例2臨床實驗設計類型與原則
一、研究設計類型先導性臨床試驗；采用分段隨機分組、對照(3
1)、雙盲的研
.、臨床試驗研究需要的樣本量樣本量為40例。、分段隨機方法采用SASV8軟件，進行分段隨機分組；40例住院或門診患者，分為治療組和對照組，治療組30例，對照組10例。四、盲法設計采用雙盲測量方法；對研究者(測量者即醫(yī)技人員、資料管理者和統(tǒng)計分析工作 者)與研究對象(患者)施盲。五、對照試驗組西醫(yī)常規(guī)治療+仙靈平喘方藥對照組西醫(yī)常規(guī)治療+經(jīng)典方藥玉屏散合七味都氣丸。說明西藥常規(guī)治療采用同一標準，舒弗美，0. 1克/每片，每次一片，每早晚各一次。仙靈平喘方藥淫羊藿9g胡頹葉12g、淫羊藿9g、五味子6g，湯劑。經(jīng)典方藥玉屏散合七味都氣丸炙黃芪15克、防風10克、白術10克、熟地12克、 丹皮10克、澤瀉10克、茯苓12克、山萸肉10克、山藥12克、五味子6克，湯劑研究人群一、研究人群的一般資料(一)、性別、年齡治療組與對照組男女構成比較，P > 0. 05，無顯著差異，具有可比性。治療組與對照組患者年齡比較，P > 0. 05,具有可比性。( 二 )、職業(yè)分布治療組與對照組病程比較，P > 0. 05，具有可比性。(三)病程表13 病程比較 治療組與對照組病程比較，P > 0. 05，具有可比性。(四)主要癥狀、體征表14 癥狀體征比較 治療組與對照組在主要癥、征方面比較，P > 0. 05，具有可比性。綜上資料表明，治療組與對照組患者的基本資料類似，具有可比性。二、研究人群的確定(一 )疾病診斷、病情分級及療效判定標準1氣管哮喘診斷標準中華醫(yī)學會呼吸病學分會哮喘學組《支氣管哮喘防治指南 (2003年)》。慢性持續(xù)期是指在相當長的時間內，每周均不同頻度和(或)不同程度地出 現(xiàn)癥狀(喘息、氣急、胸悶、咳嗽等)。2情程度的劃分2.1 喘息輕度⑴喘息偶有發(fā)作，程度輕，不影響睡眠或活動。中度(++)病情介于輕度⑴及重度(+++)之間。重度(+++)喘息明顯，不能平臥，影響睡眠及活動。2. 2 咳嗽輕度(+):白天間斷咳嗽，不影響正常生活和工作。中度(++)癥狀介于輕度⑴及重度(+++)之間。重度(+++)晝夜咳嗽頻繁或陣咳，影響休息和睡眠。2. 3 咯痰少(+)晝夜咯痰10 15ml，或夜間及清晨咯痰5 25ml。中(++)晝夜咯痰51 100ml，或夜間及清晨咯痰26 50ml。多(+++)晝夜咯痰IOOml以上，或夜間及清晨咯痰50ml以上。痰液性狀、顏色，應加以觀察記錄。2. 4哮鳴音少⑴偶聞，或在咳嗽、深呼吸后出現(xiàn)。中(++)散在。多(+++)滿布。臨床病情程度的判定，按就診時之癥狀及肺部哮鳴音，任何一項夠重度者為重度， 夠中度者為中度，均不足者為輕度。3支氣管哮喘慢性持續(xù)期中醫(yī)肺腎不足的辨證診斷標準(參照中華人民共和國國家標準GB/16751. 2-1997，《中醫(yī)臨床診療術語證候部分.肺系證類》，國家技術監(jiān)督局 1997. 3. 4 發(fā)布，1997. 10. 01 實施制定)喘息、氣急、胸悶、咳嗽，動則為甚；或咳嗽無力；或吐痰清稀，或吐痰多；聲低，或 有自汗，畏風；舌淡胖，苔白膩，脈沉細或弱。(二)試驗病例標準1納入病例標準1. 1支氣管哮喘慢性持續(xù)期(癥狀〈每周1次，短暫出現(xiàn)夜間哮喘癥狀<每個月2 次，F(xiàn)EVl占預計值％彡80%或PEF彡80%個人最佳值，PEF或FEVl變異率< 20% ；或癥狀 >每周1次，但<每天1次，可能影響活動和睡眠，夜間哮喘癥狀 > 每個月2次，但<每周1 次，F(xiàn)EVl占預計值％彡80%或PEF彡80%個人最佳值，PEF或FEVl變異率20% 30% )1.2 年齡 18-70 歲；1. 3處于支氣管哮喘慢性持續(xù)期，近四周無呼吸道感染及急性發(fā)作；1.4中醫(yī)證屬肺腎不足者；治療方案一、干預藥物試驗組中藥仙靈平喘處方湯劑+西藥常規(guī)治療對照組中藥玉屏風散合七味都氣丸處方湯劑+西藥常規(guī)治療。二、用藥方式中藥材符合要求，采用統(tǒng)一要求的煎煮方式(SOP)、服用方法。西藥常規(guī)治療采用同一標準，舒弗美，0. Ig/片，早晚各一次。中藥仙靈平喘處方湯劑、中藥玉屏風散合七味都氣丸處方湯劑實行統(tǒng)一包裝，力 求外觀一致。對照措施試驗組西藥常規(guī)治療+中藥仙靈平喘處方湯劑。對照組西藥常規(guī)治療+中藥玉屏風散合七味都氣丸處方湯劑療效判定標準
一、癥狀、體征評分標準(一)、咳嗽0分無咳嗽；1分間斷咳嗽，不影響正常生活和工作。2分介于輕度及重度咳嗽之間。3分晝夜咳嗽頻繁，影響工作和睡眠。(二)、咯痰0 分無1分少(+)晝夜咯痰10 50ml，或夜間及清晨咯痰5 25ml。2分中(++)晝夜咯痰51 100ml，或夜間及清晨咯痰26 50ml。3分多(+++)晝夜咯痰IOOml以上，或夜間及清晨咯痰50ml以上。痰液性狀、顏色，應加以觀察記錄。(三)、喘息0 分無1分輕度⑴喘息偶有發(fā)作，程度輕，不影響睡眠或活動。
2分中度(+++)病情介于輕度⑴及重度(+++)之間。3分重度(+++)喘息明顯，不能平臥，影響睡眠及活動。(四)、哮鳴音0分無；1分少⑴偶聞，或在咳嗽、深呼吸后出現(xiàn)。2分中(++)散在；3分多(+++)滿布。二、療效判斷標準(一)、單項癥狀改善情況1臨床控制癥狀消失。2顯效癥狀由3分轉變?yōu)?分。3好轉癥狀由3分轉變?yōu)?分或由2分轉變?yōu)?分。4無效癥狀無好轉或加重。( 二)、綜合臨床療效的判斷根據(jù)咳嗽、咯痰、喘息，哮鳴音臨床癥狀體征評分的總計分的變化情況判斷。改善 率(％ )=(治療前總計分-治療后總計分)+治療前總計分X100%1臨床控制改善率> 85 % ；2顯效改善率60 % 84 % ;3好轉改善率 30% -59% ；4無效改善率< 30%。結果與分析一、臨床癥征結果分析(一 )、單項癥狀、體征療效表15單項癥狀、體征療效比較 表15提示治療組與對照組比較在止咳方面具有相似性，經(jīng)統(tǒng)計學處理(Ridit分 析)P>0. 05無顯著差異；在平喘及改善哮鳴音體征方面治療組優(yōu)于對照組，且顯控率高于 對照組，P <0. 05差異顯著。( 二)、多項癥狀、體征(咳、痰、喘、哮鳴音)綜合療效比較表16 多項癥狀、體征綜合療效比較 表16對治療組與對照組多項癥狀、體征(咳、痰、喘、哮鳴音)綜合療效進行比較， 結果提示治療組好于對照組。經(jīng)統(tǒng)計學處理P < 0. 05差異顯著。二、實驗室結果分析(一 )、治療組與對照組治療前后淋巴細胞轉化實驗及補體C3變化比較表17治療組與對照組治療前后淋巴細胞轉化實驗及補體C3變化比較(又士SD) 表17提示兩組患者經(jīng)治療后，淋巴細胞轉化實驗及補體C3含量均有不同程度的 增高，經(jīng)統(tǒng)計學(t檢驗)處理P<0. 05，呈現(xiàn)顯著意義，說明兩組治療皆有免疫防御增強作 用。兩組間比較無差異(P >0.05)，初步說明二者具有一定的一致性。( 二)、治療組與對照組治療前后PGE2、TXB2變化比較表18治療組與對照組治療前后PGE2、TXB2變化比較(又士SD) 表18治療組治療后PGE2含量增高，經(jīng)統(tǒng)計學(t檢驗)處理P < 0. 05有顯著差 異；對照組雖有增加，但P >0. 05無統(tǒng)計學意義。此初步說明治療組在緩解支氣管痙攣，降 低氣道阻力以平喘方面的作用好于對照組。兩組治療后，TXB2含量均有不同程度的下降， P < 0. 05差異顯著，組間P > 0. 05無差異。初步表明兩組在降低肺血管阻力，調節(jié)肺微循 環(huán)，進一步改善肺功能方面有一致性。
治療組對照組
(三)、治療組與對照組治療前后IgGIgA IgM(酶標法測定)比較表19治療組與對照組治療前后IgG IgA IgM(酶標法測定)比較(X 土SD) 表19提示兩組治療均對免疫球蛋白IgG含量有所影響，治療后呈不同程度降低， 兩組治療前后自身比較P < 0. 05，統(tǒng)計學上有顯著差異，初步說明兩組對氣道痙攣與阻塞 的相關因素有正性影響。(四)、治療組與對照組治療前后血IgEIgA，痰IgE IgA(放免法測定)比較表20治療組與對照組治療前后血IgE IgA,痰IgE IgA (放免法測定)比較又土SD 表20提示兩組治療后，痰、血IgA含量提高，痰、血IgE含量下降，經(jīng)統(tǒng)計學處理P < 0. 05，組間P > 0. 05。初步表明兩組在肺的免疫防御機制的調節(jié)方面具有積極作用。(五)、治療組與對照組治療前后肺功能變化比較表21治療組與對照組治療前后肺功能變化比較(X 士SD) 表21提示治療組與對照組對肺功能均有不同程度的改善，而且治療組更加明顯。 經(jīng)統(tǒng)計學處理兩組治療前后自身及組間比較經(jīng)統(tǒng)計學處理皆P < 0. 05有顯著性差異。實驗例3制劑研究1、基質的選擇本發(fā)明組合物中藥效成分多為分子量大、難溶性物質、熱不穩(wěn)定性成分，為了提高 藥物溶出，并最大程度提高藥物的載藥量，對于基質的選擇十分重要。滴丸的基質可分為脂溶性和水溶性兩大類常用的脂溶性基質有硬脂酸、單硬脂酸 甘油酯、蟲蠟、蜂蠟、石蠟、氫化植物油、十八醇等，常用的水溶性基質有聚乙二醇類、硬脂酸 鈉、尿素聚醚poloxamer等。經(jīng)預試驗表明，以PEG4000作基質時，滴丸的硬度、圓整度和耐熱性均較差。本試驗以滴丸的圓整度、硬度為指標，考察兩者不同比例的混合物為基質。圓整度 指滴丸最短徑與最長徑的比值，硬度通過指壓的方法獲得硬度的結果，結果分為四個等級 (一般、較好、好、很好)試驗結果見下表表22 基質比例的確定(η = 20) 實驗結果表明PEG4000 PEG6000比例的變化對滴丸硬度不明顯，但對圓整度有 影響，根據(jù)各項指標確定PEG4000 PEG6000比例為8 1。2.載藥量的確定2. 1載藥量的初步選擇選用聚乙二醇(PEG4000 PEG6000為8 1)為基質，考察載藥量為15%、20%、 25%、30%時滴丸的粒徑、圓整度(滴丸最短徑/最長徑)、丸重差異。結果見下表。表23 載藥量的確定(η = 20)
22 結果表明載藥量在35%時熔融物流動性差，不易成型，且粒徑、圓整度、丸重差異 大，在15%時各項指標差異也較大。因此在20%、25%、30%中選擇最優(yōu)比。2. 2滴制條件的優(yōu)化2. 2. 1熔融溫度的考察按以上確定處方，將基質置不同溫度的水浴上加熱，熔融，加入藥物攪勻，滴制。以丸型圓整度，滴出難易為指標，結果見下表。表24 熔融溫度考察(η = 20) 結果表明熔融溫度在75°C圓整度好，且易滴出。其主要原因是溫度升高，聚乙二醇 粘度降低，流動性增強，有利于藥物與基質混合均勻；但是溫度過高不利于成型。故選定熔 融溫度為75°C。2. 2. 2冷凝劑溫度的考察按以上確定方法，將基質置75°C的水浴上加熱，熔融，加入藥物，攪勻，75°C保溫滴 制，滴入不同溫度的冷卻劑中，以丸型圓整度為指標結果見下表。表25 冷凝劑溫度考察(η = 20) 結果表明冷凝溫度控制在2°C _6°C時，滴丸圓整度良好，且差異小。其主要原因是 溫度降低，冷凝劑粘度增大，滴丸移動速度隨之減小，減小了移動速度的影響，有利于提高 滴丸圓整度。但是冷凝液溫度過低，會使滴丸凝固加快，不利于滴丸收縮和排除氣泡，反而 降低圓整度。本試驗使冷凝液下段浸入IOcm深的冰水浴中，形成了溫度梯度，所得滴丸圓 整度良好，因此確定將冷凝液下部分浸入在2V _6°C的冰水浴中。2. 2. 3滴制溫度、滴距、冷卻柱長等條件的優(yōu)化滴丸質量評價的一個重要指標是丸重差異的衡量，丸重差異越小，含量分布越均 勻，劑量更準確。影響丸重差異的因素比較多，但主要有藥液溫度、滴距、冷卻柱長。以丸重 差異為指標，對藥液溫度(A)、滴距(B)、冷卻柱長(C)按表1-33設計正交L9 (34)表，作3因 素3水平試驗篩選。表26 正交設計因素水平表
以丸』■差異為指標，試驗結果及優(yōu)選的工藝如下
表27滴制條件正交試驗與結果
丸重差異指取供試品20丸，精密稱定每丸重量，計算丸重RSD值。表28 滴制條件正交試驗方差分析 注P值小于0. 05為差異顯著，小于0. 01為差異極顯著。方差分析結果表明藥液溫度(A)、滴距(B)、冷卻柱長(C)在試驗設計范圍內均無 顯著性影響。直觀分析的最佳工藝為A1B2C3,即滴制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm。2. 2. 4驗證試驗按處方比例稱取原料及輔料2份，按照優(yōu)選的工藝A1B2C3 (即滴制溫度70_75°C，滴 距4cm，冷卻柱長75cm)進行實驗，與正交表中最優(yōu)實驗A3B1C3進行比較。表 29D 結果按々此仏進行兩次試驗，丸重差異指標均優(yōu)于正交表中最優(yōu)實驗 A3B1C3 (1. 92)。故確定工藝為A2B2C2，即滴制溫度70_75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm。2. 3工藝驗證試驗按確定的處方及滴制條件制備3批滴丸，分別測定粒徑、圓整度、丸重差異，結果 見下表30。表30 3批樣品工藝驗證試驗 結果表明處方及滴制工藝穩(wěn)定可行。下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。實施例1 胡頹葉12g、淫羊藿9g、五味子6g ；胡頹子水煎煮提取，每次10倍量、1小時，提取3次；合并提取液濾過，濾液濃縮至 1 1(藥材濾液為g ml)；采用大孔樹脂富集有效成分，提取物的上樣液濃度為0. Ig 生藥/ml，2BV/h的速度上樣；4BV/h的水洗脫除雜，用60%乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫流速為 3BV/h、洗脫體積為4BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，為胡頹子葉 提取物I ；五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取 液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用；淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時；提取液濾過，合并濾 液，濃縮成1 1(藥材g 濾液ml)；選用大孔樹脂富有效成分，上樣液濃度為0.5g生藥/ ml ；上樣量為Ig生藥/ml樹脂；吸附速度為0. 5ml/min ；洗脫速度為1. Oml/min ；水洗脫體 積為IOBV ；洗脫溶劑為70%乙醇，用量為6BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細 粉備用；上述胡頹子葉提取物I與五味子提取物、淫羊藿提取物混合，以30%的載藥量加 入基質(PEG4000 PEG6000 = 8 1)中，混勻，冷凝溫度控制在2°C _6°C ；滴制條件為滴 制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm ；制備滴丸。劑量(一日用藥量)27g/生藥/每人/日功能平喘止咳、培元固本。主治病證(適應癥)主要應用于肺腎不足的中醫(yī)“哮病”(臨床主要表現(xiàn)為喘 息、氣急、胸悶、咳嗽，動則為甚；)；現(xiàn)代醫(yī)學所稱的支氣管哮喘(Bronchial athma)，其中 尤以支氣管哮喘慢性持續(xù)期，屬于此范疇，可按本病證辨證治療?！猜猿掷m(xù)期是指在相當 長的時間內，每周均不同頻度和(或)不同程度地出現(xiàn)癥狀(喘息、氣急、胸悶、咳嗽等))；用量用法每次20粒，每日3次，含服或飯后溫開水送服。療程兩周(14天)為一個療程。實施例2:胡頹葉12g、淫羊藿9g、五味子6g胡頹子、淫羊藿、五味子水煎煮提取，每次20倍量、1小時，提取3次，合并提取液濾 過，濾液濃縮，經(jīng)常規(guī)工藝制成軟膠囊。實施例3 胡頹葉12g、淫羊藿9g、五味子6g ；胡頹子、淫羊藿、五味子水煎煮提取，每次15倍量、1小時，提取3次，合并提取液濾 過，濾液濃縮干燥，以30%的載藥量加入基質(PEG4000 PEG6000 = 8 1)中，混勻，冷凝 溫度控制在2V _6°C ；滴制條件為滴制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm ；制備滴丸。實施例4 胡頹葉10g、淫羊藿9g、五味子5g ；胡頹子水煎煮提取，每次10倍量、1小時，提取3次；合并提取液濾過，濾液濃縮至 1 1(藥材濾液為g ml)；采用大孔樹脂富集有效成分，提取物的上樣液濃度為0. Ig 生藥/ml，2BV/h的速度上樣；4BV/h的水洗脫除雜，用60%乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫流速為 3BV/h、洗脫體積為4BV;洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，為胡頹子葉 提取物I ；五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取 液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用；淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時；提取液濾過，合并濾 液，濃縮成1 1(藥材g 濾液ml)；選用大孔樹脂富有效成分，上樣液濃度為0.5g生藥/ ml ；上樣量為Ig生藥/ml樹脂；吸附速度為0. 5ml/min ；洗脫速度為1. Oml/min ；水洗脫體 積為IOBV ；洗脫溶劑為70%乙醇，用量為6BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細 粉備用；上述胡頹子葉提取物I與五味子提取物、淫羊藿提取物混合，以30%的載藥量加 入基質(PEG4000 PEG6000 = 8 1)中，混勻，冷凝溫度控制在2°C _6°C ；滴制條件為滴 制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm ；制備滴丸。實施例5 胡頹葉14kg、淫羊藿9kg、五味子7kg ；胡頹子水煎煮提取，每次10倍量、1小時，提取3次；合并提取液濾過，濾液濃縮至 1 1(藥材濾液為g ml)；采用大孔樹脂富集有效成分，提取物的上樣液濃度為0. Ig 生藥/ml，2BV/h的速度上樣；4BV/h的水洗脫除雜，用60%乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫流速為 3BV/h、洗脫體積為4BV;洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，為胡頹子葉 提取物I ；五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取 液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用；淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時；提取液濾過，合并濾 液，濃縮成1 1(藥材g 濾液ml)；選用大孔樹脂富有效成分，上樣液濃度為0.5g生藥/ml ；上樣量為Ig生藥/ml樹脂；吸附速度為0. 5ml/min ；洗脫速度為1. Oml/min ；水洗脫體 積為IOBV ；洗脫溶劑為70%乙醇，用量為6BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細 粉備用；上述胡頹子葉提取物I與五味子提取物、淫羊藿提取物混合經(jīng)常規(guī)工藝制成片 劑。實施例6:胡頹葉12kg、淫羊藿9kg、五味子6kg ；8倍量的60%乙醇提取，分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取液，濾過，濾液減壓 回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1.25(50°C )，備用，為胡頹子葉提取物；五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取 液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用；淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時，濃縮干燥備用；上述胡頹子葉提取物與五味子提取物、淫羊藿提取物混合以30%的載藥量加入基 質(PEG4000 PEG6000 = 8 1)中，混勻，冷凝溫度控制在2 °C _6°C ；滴制條件為滴制溫 度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm ；制備滴丸。實施例7 胡頹葉12kg、淫羊藿9kg、五味子6kg ；胡頹子6kg水煎煮提取，每次10倍量、1小時，提取3次；合并提取液濾過，濾液濃 縮至1 1(藥材濾液為g ml)；采用大孔樹脂富集有效成分，提取物的上樣液濃度為 0. Ig生藥/ml，2BV/h的速度上樣；4BV/h的水洗脫除雜，用60%乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫流 速為3BV/h、洗脫體積為4BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，為胡頹 子葉提取物I ；胡頹子6kg8倍量的60%乙醇提取，分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取液，濾 過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25(50°C )，備用，為胡頹子葉提取物II。五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提取 液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用；淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時；提取液濾過，合并濾 液，濃縮成1 1(藥材g 濾液ml)；選用大孔樹脂富有效成分，上樣液濃度為0.5g生藥/ ml ；上樣量為Ig生藥/ml樹脂；吸附速度為0. 5ml/min ；洗脫速度為1. Oml/min ；水洗脫體 積為IOBV ；洗脫溶劑為70%乙醇，用量為6BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細 粉備用；上述胡頹子葉提取物I和II與五味子提取物、淫羊藿提取物混合，以30%的載藥 量加入基質(PEG4000 PEG6000 = 8 1)中，混勻，冷凝溫度控制在2°C _6°C ；滴制條件 為滴制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm ；制備滴丸。
權利要求
一種治療支氣管哮喘的中藥組合物，其特征在于原料藥組成為胡頹葉5-20重量份、淫羊藿4-18重量份、五味子2-12重量份。
2.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于原料藥組成為 胡頹葉9-15重量份、淫羊藿6-12重量份、五味子4-9重量份。
3.如權利要求2所述的中藥組合物，其特征在于原料藥組成為 胡頹葉12重量份、淫羊藿9重量份、五味子6重量份。
4.如權利要求1-3所述的任意一種中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法為胡 頹葉、淫羊藿、五味子經(jīng)常規(guī)工藝方法提取后加入藥學可接受的輔料制成膠囊劑、片劑、顆 粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑；所述常規(guī)工藝方法包括水提取或醇提取或先水提 取再醇提取或先醇提取后再水提取。
5.如權利要求1-3所述的任意一種中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法包括如 下步驟步驟A、胡頹子有效成分的提取胡頹子水煎煮提取，每次8-12倍量、0. 5-2小時，提取 2-4次；合并提取液濾過，濾液濃縮；采用大孔樹脂富集有效成分，水洗脫除雜，用50-70% 乙醇為洗脫劑洗脫；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，制得胡頹子葉提 取物I ；或胡頹子用7-10倍量的50-70%乙醇提取2-3次，分別提取1_3小時，合并提取液， 濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮備用，制得胡頹子葉提取物II ；步驟B、五味子有效成分的提取五味子7-10倍量40-60%乙醇提取2-3次，分別提取 1-3小時，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮備用；步驟C、淫羊藿有效成分的提取淫羊藿葉每次加水20-40倍水量，煎煮提取2-4次， 每次1-3小時；提取液濾過，合并濾液，濃縮；采用大孔樹脂富集有效成分，水洗脫體積為 6-12BV ；洗脫溶劑為60-80%乙醇；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用；步驟D、將上述胡頹子葉提取物I或II，或I和II與五味子提取物、淫羊藿提取物混合 均勻，加入藥學可接受的輔料制成藥劑學可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒 劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑。
6.如權利要求5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟 步驟A 胡頹子水煎煮提取，每次10倍量、1小時，提取3次；合并提取液濾過，濾液濃縮至1 1(藥材濾液為g ml)；采用大孔樹脂富集有效成分，提取物的上樣液濃度為 0. Ig生藥/ml，2BV/h的速度上樣；4BV/h的水洗脫除雜，用60%乙醇為洗脫劑洗脫，洗脫流 速為3BV/h、洗脫體積為4BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用，制得胡 頹子葉提取物I ；或胡頹子用8倍量的60%乙醇提取，分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提 取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至50°C相對密度為1. 15-1. 25，備用，制得胡頹子葉提 取物II ；步驟B、五味子破碎為粗顆粒后，8倍量50%乙醇、分別提取1. 5小時、1. 5小時，合并提 取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1. 15-1. 25 (500C )，備用；步驟C、淫羊藿葉每次加水30倍水量，煎煮提取3次，每次1. 5小時；提取液濾過，合并 濾液，濃縮成1 1(藥材g 濾液ml)；選用大孔樹脂富有效成分，上樣液濃度為0.5g生 藥/ml ；上樣量為Ig生藥/ml樹脂；吸附速度為0. 5ml/min ；洗脫速度為1. Oml/min ；水洗脫 體積為IOBV ；洗脫溶劑為70%乙醇，用量為6BV ；洗脫液減壓回收乙醇后，減壓干燥，粉碎為細粉備用。
7.如權利要求1-3所述任意一種的中藥組合物的滴丸劑，其特征在于其中的滴丸基質 重量百分比為 67%-80%，基質為 PEG4000 和 PEG6000，PEG4000 PEG6000 = 6-11 1。
8.如權利要求7所述的滴丸劑的制備方法，其特征在于該方法為以30%的載藥量加 Λ PEG4000 和 PEG6000 中，其中 PEG4000 PEG6000 = 6-11 1，混勻，冷凝溫度控制在 2V -60C ；滴制條件為滴制溫度70-75°C，滴距4cm，冷卻柱長75cm。
9.如權利要求1-3所述的任意一種中藥組合物在制備平喘、祛痰、止咳、抗炎或抑制金 黃色葡萄球菌、肺炎球菌藥物中的應用。
10.如權利要求1-3所述的任意一種中藥組合物在制備改善肺功能藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療支氣管哮喘的中藥組合物及制備方法，其原料藥為胡頹葉5-20重量份、淫羊藿4-18重量份、五味子2-12重量份；胡頹葉、淫羊藿、五味子經(jīng)常規(guī)工藝方法提取后加入藥學可接受的輔料制成膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑。本發(fā)明組合物具有極佳的平喘止咳、培元固本的功效。
文檔編號A61P11/06GK101879214SQ20091013630
公開日2010年11月10日 申請日期2009年5月8日 優(yōu)先權日2009年5月8日
發(fā)明者盧印英 申請人:北京嘉博弘康醫(yī)藥科技有限公司