專利名稱：積雪草總苷及其相關(guān)成分在預(yù)防和/或治療白癜風(fēng)藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及積雪草總苷及其相關(guān)成分在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白癜風(fēng)(vitiligo)是一種常見的原發(fā)性、局限性或泛發(fā)性色素脫失性皮膚病，是由于皮膚和毛囊的黑素細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶系統(tǒng)的功能減退、喪失引起的，病理上則主要表現(xiàn)為黑素細(xì)胞的減少或消失。白癜風(fēng)的發(fā)病率隨地區(qū)和人種膚色而有不同，一般膚色越淺的人發(fā)病率越高，如丹麥人為O. 38%，美國白人約為I %，黃種人的發(fā)病率介于白種人與黑種人之間，國內(nèi)患病率為O. 09%-2. 7%。患病人群上千萬。受遺傳因素影響，大部分患者發(fā)病年齡小于30歲，且男女沒有顯著性差異。白癜風(fēng)的損害可發(fā)生于全身任何部位的皮膚、粘膜，包括口腔粘膜、鼻腔粘膜、生殖器及肛門部位的粘膜以及視網(wǎng)膜等，生長于白斑區(qū)的毛發(fā)通常也呈現(xiàn)為灰白色。由于白癜風(fēng)的皮損，特別是位于體表暴露部位的白斑，往往會(huì)影響到患者的容貌、形象及自我評(píng)價(jià)，進(jìn)而在很大程度上改變了患者正常的精神狀態(tài)、社會(huì)交往以及生活和學(xué)習(xí)。因此，開展對(duì)白癜·風(fēng)的研究，尋求有價(jià)值的治療手段和藥物，是醫(yī)學(xué)的一大難題。白癜風(fēng)發(fā)病原因復(fù)雜，目前存在幾種假說認(rèn)為主要與自身免疫有關(guān)，神經(jīng)化學(xué)因子作用，黑素細(xì)胞自身破壞，黑素細(xì)胞生長因子缺乏，遺傳因素等，但其真正的病因尚不清楚，治療方法多種多樣，療效亦不確切。而祖國醫(yī)學(xué)對(duì)此病有獨(dú)特認(rèn)識(shí)多數(shù)學(xué)者認(rèn)為白癜風(fēng)的發(fā)生是由于七情內(nèi)傷，肝氣郁結(jié)，氣血不暢，復(fù)感風(fēng)寒，風(fēng)邪搏于肌膚，氣血失和，血不養(yǎng)膚所致。近幾年采用中醫(yī)中藥治療也取得了一定進(jìn)展，但是機(jī)理不清，基礎(chǔ)研究的薄弱已成為制約中醫(yī)藥治療白癜風(fēng)研究發(fā)展的"瓶頸"，只有"瓶頸"突破，療效才能提高。同時(shí)，一些能夠有效治療白癜風(fēng)的單味中藥及有效單體方面的開發(fā)，也成為一條有價(jià)值的途徑，得到醫(yī)藥工作者的重視。白癜風(fēng)在臨床上分進(jìn)展期白癜風(fēng)和成熟期白癜風(fēng)兩大類來治療。進(jìn)展期白癜風(fēng)分為尋常型和節(jié)段型；其臨床治療也是按照不同的分型，采取不同的治療方法。尋常型①局限型主要是外用糖皮質(zhì)激素或其他免疫抑制劑，免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子，胸腺肽等)或者局部光療窄譜中波紫外線、準(zhǔn)分子激光、準(zhǔn)分子光等，中醫(yī)中藥。②散在型、泛發(fā)型和肢端型則主要采用中醫(yī)中藥，免疫調(diào)節(jié)劑(轉(zhuǎn)移因子，胸腺肽等)，系統(tǒng)用糖皮質(zhì)激素，光療窄譜中波紫外線、準(zhǔn)分子激光、準(zhǔn)分子光等，局部外用藥治療(參考進(jìn)展期局限型)。節(jié)段型白癜風(fēng)的治療方法也主要參考進(jìn)展期局限型治療。成熟期白癜風(fēng)也是按照尋常型和節(jié)段型來治療的，尋常型①局限型主要是外用補(bǔ)骨脂素類藥物、糖皮質(zhì)激素、氮芥等，自體表皮移植，局部光療或光化學(xué)療法窄譜中波紫外線、準(zhǔn)分子激光及準(zhǔn)分子光等，中醫(yī)中藥。②散在型、泛發(fā)型和肢端型中醫(yī)中藥，光療或光化學(xué)療法窄譜中波紫外線，準(zhǔn)分子激光、準(zhǔn)分子光、PUVA等.自體表皮移植(暴露部位或患者要求的部位)，局部外用藥治療(參考穩(wěn)定期局限型)。節(jié)段型自體表皮移植；其他參考穩(wěn)定期局限型治療。目前白癜風(fēng)的臨床治療方法雖很多，但臨床療效由于個(gè)體的不同存在很大的差異。西藥治療方法雖然簡單，多采用手術(shù)療法，但是由于不良反應(yīng)多見或者難于完全康復(fù)等；有些患者采用傳統(tǒng)療法，時(shí)間雖然長，但是藥物的不良反應(yīng)少。本專利所說的積雪草總苷或其相關(guān)各單體成分，如積雪草苷、羥基積雪草苷及積雪草苷B等為積雪草提取物，采用制藥領(lǐng)域中提取工藝方法制備。所說的積雪草，拉丁名Centella asiatica(L. )Urban,別名崩大碗、缺碗草、馬蹄草、連線草、地線草、崩口碗等，藥用部位干燥全草或帶根全草。積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B在現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料中，有記載其具有較好的抗氧化、創(chuàng)傷愈合功效。積雪草總苷有用作外科用藥，用于治療瘢痕及硬皮病。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種積雪草總苷或其相關(guān)各單體成分的新用途，同時(shí)克服了現(xiàn)有預(yù)防或治療白癜風(fēng)藥物的不足之處。積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷或積雪草苷B在制備預(yù)防或治療白癜風(fēng)藥物中的應(yīng)用。在制備預(yù)防和/或治療白癜風(fēng)的藥物時(shí)加入積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B或其任意混合物，對(duì)于治療尋常型白癜風(fēng)效果明顯。在制備預(yù)防和/或治療白癜風(fēng)的藥物時(shí)，積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B或其任意的組合物可與藥學(xué)上可接受的任何載體，以任意的重量比混合，制成任何一種藥學(xué)上可接受的 劑型。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、粘合劑、崩解劑、濕潤劑、潤滑劑、表面活性劑等，如淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、硬脂酸鎂、纖維素類及其衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆等。所述制劑，如乳膏、軟膏劑、乳液、凝膠、片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊、注射液、口服液等。也可制成注射劑，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等。本發(fā)明的有益效果積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B，在現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料中，有記載其具有較好的抗氧化、創(chuàng)傷愈合功效。本申請(qǐng)人在實(shí)際研究中發(fā)現(xiàn)，積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B對(duì)于白癜風(fēng)也有著獨(dú)特的功效，其有著良好的免疫抑制作用及促進(jìn)黑色素細(xì)胞修復(fù)、增殖、移行，對(duì)黑色素代謝調(diào)控系統(tǒng)如黑色素細(xì)胞刺激素、角朊細(xì)胞等細(xì)胞因子等作用有關(guān)。通過實(shí)際應(yīng)用，本申請(qǐng)人利用積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷或者積雪草苷B制作的積雪苷霜軟膏對(duì)白癜風(fēng)的治療中療效獨(dú)特，對(duì)白癜風(fēng)患者病情能夠得到控制或痊愈。本發(fā)明為日后的市場產(chǎn)品開發(fā)、制劑開發(fā)、臨床研究等奠定了基礎(chǔ)。突破了中醫(yī)藥治療白癜風(fēng)機(jī)理不清，基礎(chǔ)研究薄弱的“瓶頸”。
具體實(shí)施方式
為了更好證明本發(fā)明對(duì)預(yù)防和/或治療白癜風(fēng)的作用，下面通過體內(nèi)、體外藥效試驗(yàn)及臨床觀察實(shí)施例解釋和驗(yàn)證本發(fā)明的藥效機(jī)理及臨床治療作用。實(shí)施例1按照藥學(xué)常用方法，制備積雪苷霜軟膏劑(以積雪草總苷計(jì)，IOg O. 25g)和積雪苷凝膠(以積雪草總苷計(jì)，IOg O. 25g)。(一 )化學(xué)脫色劑制備豚鼠白癜風(fēng)模型制備白癜風(fēng)動(dòng)物模型取黑色或黑花毛(黑色皮膚)豚鼠70只，用硫化鈉脫去背部黑毛約4 X 4cm2。隨機(jī)分成7組，(I)正常對(duì)照組賦形劑(2)模型對(duì)照組賦形劑(3)陽性藥對(duì)照組(4)藥物高I劑量組(中劑量組的I倍)(5)藥物高2劑量組(中劑量組的1/2倍)

(6)藥物中劑量組(7)藥物低劑量組用8%的硫化鈉脫毛，每4天I次，除正常組涂蒸餾水外，其余各組在脫毛區(qū)每天涂5%的氫醌O. 5ml兩次，第Ild開始各組分別每天在涂抹氫醌過后I小時(shí)按劑量分別涂藥，其中(I)、⑵組涂相同劑量的賦形劑，每天一次，連續(xù)40d，共50d。末次藥后2h，取血，測酪氨酸酶、單胺氧化酶、膽堿酯酶。并采用組織病理學(xué)觀察，表皮基底細(xì)胞黑素分布及黑色素毛囊數(shù)等。試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明藥物對(duì)于白癜風(fēng)豚鼠表皮損傷區(qū)黑素細(xì)胞有明顯的修復(fù)作用，同時(shí)本發(fā)明藥物兩個(gè)高劑量組和中劑量組可使白癜風(fēng)豚鼠血液中酪氨酸酶含量增加，單胺氧化酶活力降低，與正常組豚鼠相比無顯著性差別。實(shí)施例2準(zhǔn)備積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B溶液。(一 )本發(fā)明藥物對(duì)于體外表皮黑色素細(xì)胞的遷移和粘附作用將傳代(第二代)人表皮黑色素細(xì)胞計(jì)數(shù)接種于培養(yǎng)瓶中，確保每瓶細(xì)胞數(shù)相同，藥物試驗(yàn)濃度分別為10、50、100、150、200μ g/ml、及空白對(duì)照組，培養(yǎng)3d。采用氫氧化鈉裂解法，測定黑素含量，黑素細(xì)胞增值率，微孔濾膜法測定細(xì)胞遷移情況，黑素細(xì)胞遷移率。試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物對(duì)于黑素細(xì)胞增殖沒有太大影響，但是其對(duì)于黑素細(xì)胞遷移率相對(duì)于對(duì)照組存在一定差異。藥物濃度在10、50μ g/ml時(shí),無顯著性差異,其余各組濃度下檢驗(yàn)，有顯著性差異。積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B在150 μ g/ml與200 μ g/ml組相比較，均有明顯的作用，但是也存在顯著性差異，表明藥物濃度越高對(duì)黑素細(xì)胞遷移促進(jìn)作用越明顯，有量效關(guān)系。(二)本發(fā)明藥物對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的作用購買人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株，復(fù)蘇后用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在37V,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)、傳代，選擇對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用不同濃度藥物作用后的角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)上清液，檢測角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子SCF、bFGF的分泌量，并檢測角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖情況。試驗(yàn)結(jié)果=ELISA法檢測不同濃度的本發(fā)明藥物對(duì)于角質(zhì)細(xì)胞增殖存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，且隨著劑量增加，角質(zhì)細(xì)胞增殖率也增加，同時(shí)相應(yīng)的細(xì)胞因子也增加，也說明本發(fā)明藥物對(duì)于角質(zhì)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子功能有明顯的促進(jìn)作用，可改善白癜風(fēng)患者皮膚微環(huán)境，從而間接改善黑素細(xì)胞的增殖和增加其黑素的轉(zhuǎn)運(yùn)功能。實(shí)施例3按照藥學(xué)常用方法，本發(fā)明藥物制備成常用外用制劑軟膏。本實(shí)施例中的軟膏分別采用積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷和積雪草苷B作為藥用成分。篩選泛發(fā)型進(jìn)行期白癜風(fēng)病例，隨機(jī)選取三部位(同時(shí)選取曝光或非曝光部位)，采用隨機(jī)、對(duì)照、雙盲法進(jìn)行60例的臨床觀察，分別使用本發(fā)明藥物積雪草總苷軟膏、積雪草苷軟膏、羥基積雪草苷軟膏和積雪草苷B軟膏、激素及基質(zhì)對(duì)照，平均2周觀察一次，每次照相，共觀察3個(gè)月。療效標(biāo)準(zhǔn)痊愈皮損完全消退。顯效白斑部分消退或縮小，恢復(fù)正常膚色的面積是原皮損面積的50%以上，含50%。好轉(zhuǎn)白斑部分消退或縮小。無效白斑元色素再生或范圍擴(kuò)大。統(tǒng)計(jì)方法有效率計(jì)算痊愈數(shù)+顯效數(shù)/治療數(shù)X 100%。治療效果本發(fā)明藥物積雪草總苷軟膏、積雪草苷軟膏、羥基積雪草苷軟膏、積雪草苷B軟膏激素顯示出較明顯的治療效果，無不良反應(yīng)出現(xiàn)。但激素對(duì)照組4例于皮損涂藥區(qū)出現(xiàn)輕度刺激癥狀，停藥后刺 激癥狀逐漸消失。3個(gè)月后隨訪無異常。本發(fā)明藥物對(duì)于損傷性黑素細(xì)胞存在一定的修復(fù)作用，另外其可增加角質(zhì)細(xì)胞的增殖和相關(guān)細(xì)胞因子的作用，說明其對(duì)于白癜風(fēng)患者體內(nèi)微環(huán)境等也有一定的調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明藥物能有效減輕白癜風(fēng)患者的痛苦甚至達(dá)到治愈的效果，對(duì)于傳統(tǒng)中醫(yī)藥的發(fā)展及頑癥白癜風(fēng)的治愈都是一大突破。
權(quán)利要求
1.積雪草總苷、積雪草苷、羥基積雪草苷或積雪草苷B在制備預(yù)防或治療白癜風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及積雪草提取物的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明所說的積雪草總苷或者積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B對(duì)于白癜風(fēng)的治療有著獨(dú)特的功效，其有著良好的免疫抑制作用及促進(jìn)黑色素細(xì)胞修復(fù)、增殖、移行，對(duì)黑色素代謝調(diào)控系統(tǒng)如黑色素細(xì)胞刺激素、角朊細(xì)胞等細(xì)胞因子等作用有關(guān)。本發(fā)明提供的新的白癜風(fēng)藥對(duì)白癜風(fēng)的治療療效獨(dú)特，使白癜風(fēng)患者病情能夠得到控制或痊愈。
文檔編號(hào)A61P17/00GK103040884SQ20111030690
公開日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2011年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月11日
發(fā)明者楊國紅, 王曙光, 楊婷婷, 陳解春, 林夢感 申請(qǐng)人:上?，F(xiàn)代制藥股份有限公司