專利名稱：一種環(huán)孢素a納米粒滴眼液的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬制藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液的制備方法。
背景技術(shù)：
環(huán)孢素A(CsA)作為一種強(qiáng)效的免疫抑制劑，可有效抑制角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)，但因難溶于水，不能配制成水溶性制劑用于眼局部。曾經(jīng)采取全身給藥的方法，如口服環(huán)孢素A，根據(jù)血液中環(huán)孢素A濃度的監(jiān)測，用藥后2小時(shí)及M小時(shí)均不能達(dá)到有效的藥物濃度。同時(shí)，該藥物對T細(xì)胞的活化有很強(qiáng)的抑制作用，可導(dǎo)致全身免疫力降低，還可以引起高血壓、肝腎毒性、或淋巴瘤等嚴(yán)重副作用。目前臨床上最常用的蓖麻油環(huán)孢素A滴眼液，因其油狀的性狀和外觀，以及長期放置后的凝固現(xiàn)象，使之不能成為臨床上的理想劑型。為了解決上述問題，研究不含蓖麻油并能提高環(huán)孢素A生物利用度的其它液體制劑成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)，其中包括合成環(huán)孢素A修飾后的前體藥物(Jonathan B. Rothbard1, Sarah Garlington1, Qun Lin2'3, etl, Conjugation of arginine oligomers to cyclosporin A facilitates topical delivery and inhibition of inflammation, Nature Medicine. 6(2000) 1253-1257.)以及利用脂質(zhì)體包載該藥物(Μ. K. Lee，L. Choi,Μ. H. Kim,C. K. Kim,Pharmacokinetics and organ distribution of cyclosporin A incorporated in liposomes and mixed micelles, Int. J. Pharm. 191 (1999)87-93.)等。理想的劑型應(yīng)具有劑量小、毒性小、副作用小、靶向緩釋等特點(diǎn)。人們?yōu)榇颂剿髁硕喾N環(huán)孢素A藥物輸送系統(tǒng)，如注射用乳劑、脂質(zhì)體、 環(huán)糊精絡(luò)合物、水溶性前藥，聚合物微米/納米粒子、膠囊等，其中聚合物納米粒子具有明顯的優(yōu)勢，比如顆粒小、容易進(jìn)入細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)高療效；比表面積大、鏈接或載帶的功能基團(tuán)或活性中心多，可以實(shí)現(xiàn)治療與療效跟蹤同步化；也可以制成靶向藥物，輸送到人體特定器官，減少藥物毒副作用對正常器官或組織的損害；因其具有多孔、中空、多層等結(jié)構(gòu)特性，易于藥物緩釋控制等，可以制成緩釋劑型，改變藥物在體內(nèi)的半衰期，延長藥物的作用時(shí)間。聚乙二醇-聚乳酸共聚物具有良好的生物相容性和生物可降解性，可增強(qiáng)穿透作用，因此被研制成為生物大分子藥物的運(yùn)送載體，以增強(qiáng)藥物在體內(nèi)的有效濃度，提高療效。而與其它種類的高分子藥物載體相比，聚乙二醇-聚乳酸共聚物不僅原料豐富，而且具有低成本，可生物降解，良好生物相容性和生物親和性、無毒、易于化學(xué)改性等優(yōu)點(diǎn)。發(fā)明人選用聚乙二醇-聚乳酸共聚物為原料，運(yùn)用載藥納米粒子可提高難溶藥物的溶解性和生物利用度的特點(diǎn)，運(yùn)用納米技術(shù)構(gòu)建可高效包載疏水藥物CsA的納米粒子載體的特點(diǎn)，制備納米粒滴眼液，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
所解決的技術(shù)問題
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種環(huán)孢素A納米滴眼液的制備方法，以克服現(xiàn)有的環(huán)孢素A水溶性差，生物利用度低，毒副作用大等缺陷。技術(shù)方案本發(fā)明的技術(shù)方案之一是提供一種載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液，通過如下制備方法獲得(1)將環(huán)孢素A溶于有機(jī)溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶于有機(jī)溶劑，作為油相；(2)將表面活性劑溶于水中，作為水相。將油相與水相混合后在恒溫下攪拌，制成乳液；(3)將乳液用高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)行混勻；(4)乳液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑，得到納米粒子懸液；(5)離心，生理鹽水回溶，得到載有環(huán)孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之一為，所述的載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子中聚乙二醇-聚乳酸共聚物與環(huán)孢素A的質(zhì)量比為 2.5 1-100 1。上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之二為，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子對環(huán)孢素A的包封率為32-97%，載藥量為0. 3-38. 8wt%。上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之三為，所述的表面活性劑、油相的質(zhì)量比為 O00-4000) (100-5000)。上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之四為，所述的環(huán)孢素A溶液為二氯甲烷溶液，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶液為二氯甲烷溶液。本發(fā)明的技術(shù)方案之二是提供一種載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子，依次包括如下步驟(1)將環(huán)孢素A溶于有機(jī)溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶于有機(jī)溶劑，作為油相；(2)將油相逐滴加入到機(jī)械攪拌的水中，攪拌；(3)乳液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑(也可不用懸蒸，直接通過攪拌過夜除去有機(jī)溶劑)；(4)離心，生理鹽水回溶，得到載有環(huán)孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之一為，所述的載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子中聚乙二醇-聚乳酸共聚物與環(huán)孢素A的質(zhì)量比為 2.5 1-100 1。上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之二為，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子對環(huán)孢素A的包封率為32-97%，載藥量為0. 3-38. 8wt%。上述的環(huán)孢素A納米粒子的優(yōu)選方案之三為，所述的環(huán)孢素A溶液為丙酮溶液，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶液為丙酮溶液。本發(fā)明的技術(shù)方案之三是提供一種免疫抑制劑，由權(quán)利要求1所述的載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子和藥學(xué)上可接受的載體組成。本發(fā)明所制備的聚乙二醇-聚乳酸共聚物/環(huán)孢素A納米粒子可簡稱為Polymer/ CsA NPs0有益效果本發(fā)明采用生物降解材料聚乙二醇-聚乳酸共聚物制備包裹環(huán)孢素A藥物的納米滴眼液，可避免蓖麻油引起的嚴(yán)重的過敏反應(yīng)以及產(chǎn)生高敏性、神經(jīng)毒性、腎毒性、心臟毒性等不良反應(yīng)問題，并且可利用納米粒子的特性，在一定程度上提高藥物在眼部組織的生物利用度，延長藥物的角膜滯留時(shí)間，減少用藥次數(shù)，降低藥物在眼部或全身的毒副作用。
本發(fā)明的載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液采用納米沉淀法及乳化溶劑蒸發(fā)法制備，可直接用聚乙二醇-聚乳酸共聚物作為環(huán)孢素A藥物的載體，避免了繁瑣和復(fù)雜的修飾步驟，操作過程方便，并降低了生產(chǎn)成本，利于推廣。且制備的載藥納米粒子為單分散的規(guī)則球體，粒徑控制在100-250nm，無團(tuán)聚現(xiàn)象。利用本發(fā)明的聚乙二醇-聚乳酸共聚物環(huán)孢素A納米滴眼液對白兔進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明所制備的載藥納米滴眼液可明顯提高環(huán)孢素A的水溶性，使用安全。


圖1為1 %環(huán)孢素A納米粒滴眼液的眼刺激性實(shí)驗(yàn)。圖2為環(huán)孢素A納米粒滴眼液的高效液相色譜圖。9-lOmin處的特征吸收峰為CsA藥物的最大吸收峰，用210nm( λ max)檢測。圖3為Polymer/CsA NPs溶于乙腈的高效液相色譜圖。在9-lOmin附近出現(xiàn)了 CsA的特征吸收峰，可知CsA被成功地包裹進(jìn)Polymer中。圖4為Polymer/CsA NPs透射電鏡圖。圖4表明，制成的Polymer/CsA NPs為球形粒子，這些粒子分散均勻，且無團(tuán)聚現(xiàn)象，粒徑范圍控制為四6. 9士32. 06nm。圖5為Polymer/CsA NPs粒徑分析儀圖。圖5表明，制成的Polymer/CsA NPs的粒徑分布較窄，分散性好，無團(tuán)聚現(xiàn)象。圖6為聚合物PEG-PLA的體外降解曲線。圖6表明，聚合物PEG-PLA經(jīng)過20天體外降解實(shí)驗(yàn)后，剩余重量為陽％，聚合物容易降解。圖7為Polymer/CsA NPs的體外釋放曲線。圖7表明，CsA從制成的Polymer/CsA NPs中緩慢釋放，20天左右釋放量達(dá)總CsA的90%。本發(fā)明的環(huán)孢素A納米粒滴眼液，使用方法是，滴入結(jié)膜囊內(nèi)，一次1滴，一日三次。本發(fā)明的環(huán)孢素A納米粒滴眼液，經(jīng)家兔單次、多次給藥眼刺激性試驗(yàn)、最大耐受量試驗(yàn)，對其毒性進(jìn)行觀察，結(jié)果表明1.環(huán)孢素A納米粒滴眼液以濃度單次滴入家兔結(jié)膜囊內(nèi)，連續(xù)觀察7天，不引起急性毒性反應(yīng)，對家兔結(jié)膜、角膜、虹膜均無刺激；2.環(huán)孢素A納米粒滴眼液以濃度每日3次，連續(xù)14天滴入家兔結(jié)膜囊內(nèi)，并繼續(xù)觀察7天，不引起急性毒性反應(yīng)，對家兔結(jié)膜、角膜、虹膜均無刺激結(jié)果見圖1 ；3. 1 %環(huán)孢素A納米粒滴眼液以家兔能耐受的最大體積的藥量，一日內(nèi)連續(xù)滴眼給藥14次，總給藥量為1. 4ml/kg(14mg/kg)，相當(dāng)于臨床用量的210倍，連續(xù)觀察7天，動(dòng)物未發(fā)生死亡，在行為、癥狀、體征等方面未見異常，體重均有增加。環(huán)孢素A納米粒滴眼液對家兔體重的影響
權(quán)利要求
1.載環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液，通過如下兩種方法獲得方法一(1)將環(huán)孢素A溶于有機(jī)溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶于有機(jī)溶劑，作為油相；(2)將表面活性劑溶于水中，作為水相。將油相與水相混合后在恒溫下攪拌，制成乳液；(3)將乳液用高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)行混勻；(4)乳液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑，得到納米粒子懸液；(5)離心，生理鹽水回溶，得到載有環(huán)孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；方法二 (1)將環(huán)孢素A溶于有機(jī)溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶于有機(jī)溶劑，作為油相；(2)將油相逐滴加入到機(jī)械攪拌的水中，攪拌；(3)乳液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑(也可不用懸蒸，直接通過攪拌過夜除去有機(jī)溶劑)；(4)離心，生理鹽水回溶，得到載有環(huán)孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物，其特征在于其數(shù)均分子量為 5000Da。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述，載有環(huán)孢素A的納米粒子，其特征在于，方法一中所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷，方法二中所述的有機(jī)溶劑為丙酮溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述，載有環(huán)孢素A的納米粒子，其特征在于，方法一中，所述的油相為聚乙二醇-聚乳酸共聚物和環(huán)孢素A二氯甲烷溶液，水相為不同濃度聚乙烯醇溶液；方法二中的所述的油相為聚乙二醇-聚乳酸共聚物和環(huán)孢素A丙酮溶液，水相水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述，載有環(huán)孢素A的納米粒子，其特征在于，所述的表面活性劑、油相的質(zhì)量比為 O00-4000) (100-5000)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述，載有環(huán)孢素A的納米粒子，其特征在于，所述的載有聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子中聚乙二醇-聚乳酸共聚物與環(huán)孢素A的質(zhì)量比為 2. 5 1-100 1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述，載有載有環(huán)孢素A的納米粒子，其特征在于，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子對環(huán)孢素A的包封率為32-97 %，載藥量為0. 3-38. Swt %。
8.—種納米滴眼液，其特征在于，所述的藥物組合由權(quán)利要求1中任何一項(xiàng)所述的方法制備得到。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種聚乙二醇-聚乳酸共聚物載有環(huán)孢素A的納米滴眼液，通過如下兩種方法獲得，方法一，將聚合物與環(huán)孢素A同溶于有機(jī)溶劑中，與含有表面活性劑的水溶液一同磁力攪拌，高壓勻質(zhì)機(jī)破碎，制成乳液，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑，離心，生理鹽水回溶，得到載有環(huán)孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；方法二；將聚合物與環(huán)孢素A同溶于有機(jī)溶劑，緩慢滴加到磁力攪拌的水中，制得載有環(huán)孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液。本方法所制備的載藥納米滴眼液可明顯提高環(huán)孢素A的水溶性。
文檔編號(hào)A61K38/13GK102210849SQ20111013968
公開日2011年10月12日 申請日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月27日
發(fā)明者吳雁, 張海娟, 徐清, 游玉霞, 韓東, 馬科 申請人:北京市眼科研究所