專利名稱：一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑，及其制備方法，屬于動物用疫苗生產領域。
背景技術：
冷凍干燥技術是生物學的一個重要應用技術，常用于生物制品的科研和生產中，·以保持菌、毒種的生物學特性，穩(wěn)定生物原料和半成品的生物活性，延長成品的有效期。凍干保護劑是活疫苗生產中的關鍵技術，對于疫苗的保存、運輸和使用具有很大的影響。國外活疫苗凍干制品在2 8°C的保存期為15個月以上，但保護劑配方是嚴格保密的，在我國動物用疫苗中，活的凍干疫苗占相當大的比例，國內常用的保護劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單，對疫苗的保護功能差。如果在2°C 8°C條件下，保存期只有4 6月，多需要在_15°C以下保存。加上國內傳統(tǒng)的生物制品保護劑的研制相對滯后，使成品的長期保存和運輸受限。所以，耐熱凍干保護劑的研究是非常急需的，在20世紀80年代，發(fā)達國家就已開始進行耐熱凍干保護劑的研究。我國在耐熱凍干保護劑方面的研究起步較晚，加上中國市場巨大，國外生物制品涌入，市場競爭加劇。為了本國生物制品業(yè)的生存和發(fā)展，新型有效的耐熱凍干保護劑的研究和應用顯得尤為迫切。專利200410029581. 8中提出的一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑，用脫脂奶粉、蔗糖、糊精、VC、山梨醇、谷氨酸鈉、牛肉蛋白胨等為主要基質的凍干保護劑配方配制成的凍干耐熱保護劑，采用與之相適應的凍干曲線，在2 8°C條件下，可保存24個月以上。但是該耐熱凍干保護劑存在配制方法繁雜、生產成本高等缺陷。羧甲基纖維素鈉鈉(CMC)通常用作膠體和粘結劑，可作為安全的食品添加劑。上世紀七十年代我國開始采用，九十年代開始普遍使用。是當今世界上使用范圍最廣、用量最大的纖維素種類。CMC在食品應用中不僅是良好的乳化穩(wěn)定劑、增稠劑，而且具有優(yōu)異的凍結、熔化穩(wěn)定性，特別是對動、植物油、蛋白質與水溶液的乳化性能極為優(yōu)異，能使其形成性能穩(wěn)定的勻質乳狀液。在醫(yī)藥工業(yè)中可作針劑的乳化穩(wěn)定劑，片劑的粘結劑和成膜劑。有人經基礎及動物實驗證明CMC是安全可靠的抗癌藥載體。低聚木糖又稱木寡糖由2-7個木糖分子以￠-1, 4糖苷鍵結合而成的功能性聚合糖。酸、熱穩(wěn)定性好，難發(fā)酵，與其他低聚糖相比，低聚木糖的突出特點是穩(wěn)定性非常好。即使在酸性條件下(PH=2. 5-7)加熱至100°C也基本不分解，根據(jù)文獻，低聚木糖中的木三糖、木二糖和木糖都有還原性，木四糖以上沒有。亞硒酸鈉研究表明，硒顯著地影響免疫系統(tǒng)所包含的全部三種調節(jié)機制，即細胞免疫、體液免疫和非特異免疫。硒還能促進淋巴細胞產生抗體，使血液免疫球蛋白水平增高或維持正常，因此臨床中給腫瘤患者適量補硒，可有效提高患者機體免疫功能，增強機體防癌和抗癌能力。硒作為谷胱甘肽過氧化酶的成分，具有抗氧化作用；調節(jié)免疫、抗腫瘤作用。硒具有抗氧化作用，參與輔酶QlO的合成，保持細胞膜完整性，維持動物肌體的正常生長發(fā)育，缺硒可引發(fā)多種疾病和癌癥。硒是人體免疫調節(jié)營養(yǎng)素，既能激活細胞免疫中淋巴細胞，又能刺激免疫球蛋白及抗體產生。免疫調節(jié)作用是通過抗氧化劑輔酶Q、半胱氨酸、維生素E來完成，而這些都要在硒的參與下才能激活，缺硒必然導致免疫力下降，各類疾病相繼出現(xiàn)。硒不但能維持動物體正常的生長發(fā)育，與機體抗氧化機制密切相關，還能提高動物的體液免疫和細胞免疫功能，增強機體對傳染性疾病的抵抗能力，是加強機體免疫系統(tǒng)和抗感染能力必不可少的微量元素之一。補硒能增強體液免疫。給動物補硒能夠提高羊紅細胞抗原，還能提高免疫球蛋白(IgM、IgA)的含量。耐熱凍干保護劑的種類和配比是影響疫苗的質量和保存效果的重要因素。凍干保護劑可影響生物制品的質量、效價和穩(wěn)定性，改變生物制品的生產工藝，提高產品預測能力并增大產品批次間的穩(wěn)定性
發(fā)明內容
本發(fā)明提供了一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑，目的是將疫苗耐熱凍干保護劑與活疫苗混合，解決雞傳染性法氏囊病活疫苗僅不能在2°c 8°C下長期保存和運輸?shù)募夹g問題，并簡化配制方法，降低生產成本。本發(fā)明采用的具體技術方案如下
一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑，具體成分包括(質量百分比濃度):羧甲基纖維素鈉2 3%、低聚木糖3 6%、聚乙烯吡咯烷酮2 3 %、谷氨酰胺0 . 5
0.8%、亞硒酸鈉0. I 0. 5%，氯化鉀0. 0 1 0. 0 5%，余量為注射用水。上述雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑的配制方法包括如下步驟
1)將羧甲基纖維素鈉充分溶于注射用水作為A液；
2)將低聚木糖充分溶于注射用水，作為B液；
3)聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺、亞硒酸鈉、氯化鉀充分溶于注射用水，作為C液；
4)將上述A液、B液和C液，按I:1 :1的體積比配制成耐熱凍干保護劑。上述雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑的應用，將疫苗凍干保護劑按3 5 I的體積比與雞傳染性法氏囊病活疫苗病毒液混合，然后經分裝后進行冷凍干燥。本發(fā)明的保護劑保護的疫苗在2 8 °C保存2 4 3 6個月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過國家獸醫(yī)生物制品規(guī)程的標準。凍干前后病毒損失率低，凍干產品耐老化程度高，產品在2 8 °C保存2 4 3 6個月，病毒含量不發(fā)生改變，從而解決了雞傳染性法氏囊病活疫苗僅不能在2°C 8°C下長期保存和運輸?shù)募夹g問題。
具體實施例方式實施例I
雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度6 % (本發(fā)明所涉及的濃度除有特殊說明外，皆為質量百分比濃度)的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度9 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮，谷氨酸鈉，亞硒酸鈉，氯化鉀與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮6 %，谷氨酸鈉濃度2. 4 % ,亞硒酸鈉濃度1.2%，氯化鉀 0 0 3 %。4)將A液、B液和C液，按1:1 :1的體積比配制成疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按3:1的體積比與雞傳染性法氏囊病活疫苗病毒液混合。6)分裝后進行冷凍干燥。 7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存3 6個月。實施例2
雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度9%的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度12%。3)將聚乙烯吡咯烷酮，谷氨酸鈉，亞硒酸鈉，氯化鉀與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮6 %，谷氨酸鈉濃度2. 4%，亞硒酸鈉濃度I. 5%，氯化鉀Q . 1%。4)將A液、B液和C液，按1:1 :1的體積比配制成疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按4:1的體積比與雞傳染性法氏囊病活疫苗病毒液混合。6)分裝后進行冷凍干燥。7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存30個月。實施例3
雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度9%的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度18%。3)將聚乙烯吡咯烷酮，谷氨酸鈉，亞硒酸鈉，氯化鉀與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮6 %，谷氨酸鈉濃度I. 8%，亞硒酸鈉濃度I . 2%，氯化鉀
0.15%。4)將A液、B液和C液，按1:1 :1的體積比配制成疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按5:1的體積比與雞傳染性法氏囊病活疫苗病毒液混合。6)分裝后進行冷凍干燥。7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存36個月。
權利要求
1.一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑，具體成分包括羧甲基纖維素鈉2 .3%、低聚木糖3 6%、聚乙烯吡咯烷酮2 3 %、谷氨酰胺Q . 5 Q. 8 %、亞硒酸鈉.0. I 0. 5%，氯化鉀0. 0 1 0. 0 5%，余量為水。
2.權利要求I所述的雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑的配制方法，包括如下步驟 .1)將羧甲基纖維素鈉充分溶于水作為A液； .2)將低聚木糖充分溶于水,作為B液； .3)將PPV、谷氨酰胺、亞硒酸鈉、KCl充分溶于水，作為C液； .4)將上述A液、B液和C液，按I:1 :1配制成耐熱凍干保護劑。
3.權利要求I所述雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑的應用，將保護劑按3 .5 I的體積比與雞傳染性法氏囊病活疫苗病毒液混合，然后經分裝后進行冷凍干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法。本發(fā)明的雞傳染性法氏囊病活疫苗耐熱凍干保護劑,具體成分包括羧甲基纖維素鈉2～3％、低聚木糖3～6％、聚乙烯吡咯烷酮2～3％、谷氨酰胺０.５～０.８％、亞硒酸鈉0.１～0.５％，氯化鉀０.０１～０.０５％，余量為注射用水。本發(fā)明解決了雞傳染性法氏囊病活疫苗僅不能在2℃～8℃下長期保存和運輸?shù)募夹g問題，并且簡化了生產步驟，降低了生產成本。
文檔編號A61K47/04GK102671208SQ201210173060
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月30日 優(yōu)先權日2012年5月30日
發(fā)明者丁兆鵬, 曲寶涵, 楊芬芳, 苑國春, 郝智慧 申請人:青島農業(yè)大學